CN116392575A - 一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及干细胞技术领域,尤其涉及一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,包含以下组分:干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;其中,所述干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子‑β及成纤维细胞生长因子。本发明的制剂可稳定缓慢释放制剂中的生长因子、趋化因子,促进血管内皮细胞和成纤维细胞增殖和迁移,从而促进血管再生、胶原合成,进而修复损伤的组织。产品成分简单,作用靶向性强,可降低治疗剂量,有效治疗痤疮,去除暗疮、痤疮,并防止或去除基于痤疮产生的印痕。
Description
技术领域
本发明涉及干细胞技术领域,尤其涉及一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂。
背景技术
痤疮俗称“痘痘”,是多发于11~30岁人群的一种疾病。痤疮是由于毛囊与皮脂腺堵塞和皮脂不能正常外流导致的一种毛囊皮脂腺的慢性炎症,常出现于皮脂腺密集部位。痘印的表现有皮肤局部屏障受损、炎症性色素沉着,严重的可导致痤疮瘢痕等。其停留于皮肤上的时间长短因人而异,也与痤疮持续的时间长短有关。如果不能减少痤疮的产生并且减少炎症症状,那么痘印也很难彻底清除。
目前治疗痤疮后印迹的医美方法有强脉冲光照射、红蓝光照射、点阵激光、果酸焕肤、微针治疗等。但这些技术均需到专业的医美机构进行,且会对健康皮肤造成一定的损伤,维持时间短,不能从根源解决问题。目前常规外敷的痤疮治疗产品,虽能对患者面部痤疮起到一定的效果,但由于作用周期长、见效慢、副作用大,甚至还有耐药性等特点,让患者难以接受。
细胞生长因子是一类干细胞分泌的能刺激靶细胞产生某些生物效应(如有丝分裂等)的生物活性多肤或蛋白。近年来,已有报道将干细胞分泌体作为细胞生长因子外源物应用到美容护肤领域。然而,一方面,目前关于干细胞分泌体作为细胞生长因子外源物应用到美容护肤领域的相关研究,多集中在抗老化、抗皱功效上,而抗老化、抗皱的机理与治疗痤疮的机理之间存在较大差异;另一方面,干细胞分泌的细胞生长因子高达上百种,现有的干细胞分泌体产品内含成分繁多,靶向性差,需要添加高剂量的干细胞分泌体才能起效。因此,现有的干细胞分泌体产品直接应用到痤疮的治疗中,作用不明显,难以起到较好的痤疮治疗效果。
发明内容
本发明的目的在于针对已有的技术现状,提供一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂。本发明的制剂通过与伤口创面接触后,稳定缓慢释放制剂中的生长因子、趋化因子,促进血管内皮细胞和成纤维细胞增殖和迁移,从而促进血管再生、胶原合成,进而修复损伤的组织,透明质酸具有很好的保湿效果、增稠效果和活性成分缓释效果,产品成分简单,作用靶向性强,可降低治疗剂量,有效治疗痤疮,去除暗疮、痤疮,并防止或去除基于痤疮产生的印痕。
为达到上述目的,本发明采用如下技术方案:
本发明提供一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,包含以下组分:
干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;
其中,所述干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子。
作为一种优选的实施例,所述干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为(40~60):(50~70):(0.1~0.3)。
作为一种优选的实施例,所述干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为50:55:0.2。
作为一种优选的实施例,所述血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为(2~5):(1~4):(1~4):(3~7);(2~5)。
作为一种优选的实施例,所述透明质酸钠为水溶性交联透明质酸。
作为一种优选的实施例,所述干细胞分泌液还包含趋化因子。
作为一种优选的实施例,所述趋化因子包括CXCL1、CXCL8及CXCL12。
作为一种优选的实施例,所述干细胞裂解滤液包括胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白、血小板反应素、整合素及多肽。
作为一种优选的实施例,所述干细胞分泌液及干细胞裂解滤液的干细胞为人脐带间充质干细胞、人脐血间充质干细胞、人羊膜间充质干细胞或脂肪间充质干细胞中的任意一种或多种组合。
本发明的有益效果在于:
本发明的制剂结合了干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸,与现有的常规外敷的痤疮治疗产品相比,本制剂通过与伤口创面接触后,稳定缓慢释放制剂中的生长因子、趋化因子,促进血管内皮细胞和成纤维细胞增殖和迁移,从而促进血管再生、胶原合成,进而修复损伤的组织,透明质酸具有很好的保湿效果、增稠效果和活性成分缓释效果,产品成分简单,作用靶向性强,可降低治疗剂量,有效治疗痤疮,去除暗疮、痤疮,并防止或去除基于痤疮产生的印痕。
附图说明
图1为皮肤红度a*值测试的测试结果。
图2为本发明实施例1治疗痤疮的患者面部示意图,其中,自上而下为分别为0周、2周、4周使用本制剂后的效果。
图3为本发明实施例1治疗脓疱性痘痘的患者面部示意图,其中,左上角图及右上角图分别为患者治疗前的面部两颊示意图,左下角图及右下角图分别为患者治疗后的面部两颊示意图。
图4为本发明实施例1治疗痤疮的患者面部示意图,其中,左侧图为患者治疗前的面部示意图,右侧图为患者治疗后的面部示意图。
图5为本发明实施例1治疗痤疮的患者面部示意图,其中,左侧图为患者治疗前的面部示意图,右侧图为患者治疗后的面部示意图。
图6为本发明实施例1治疗痤疮的患者面部示意图,其中,左侧图为患者治疗前的面部示意图,右侧图为患者治疗后的面部示意图。
图7为本发明实施例1治疗痤疮的患者面部示意图,其中,左侧图为患者治疗前的面部示意图,右侧图为患者治疗后的面部示意图。
图8为本发明实施例1治疗痤疮的患者面部示意图,其中,左侧图为患者治疗前的面部示意图,右侧图为患者治疗后的面部示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面对本发明作进一步地详细描述。
本发明公开一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,包含以
下组分:
干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;
其中,干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子。
本发明中,干细胞分泌液中的细胞生长因子由血小板衍生因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、转化生长因子-
β(TGF-β)及成纤维细胞生长因子(FGF)构成,其中,EGF可强力促进细胞的有丝分裂和趋化吸引毛细血管内皮细胞,有效刺激新血管形成和最终的胶原合成,加速伤口愈合;PDGF能刺激成纤维细胞和单核细胞的增殖和趋化,在皮肤伤口局部使用能促进肉芽组织的形成;TGF-β涉及到多种细胞的趋化、增殖和分化,参与创伤后上皮再生、间质增生和血管形成等过程;VEGF能刺激血管内皮细胞,加速血管形成,利于尽早恢复创伤部的血液供应,从而促进伤口的愈合;FGF对成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞等均具有促进其增殖分裂的作用,并趋化和促迁移成纤维细胞等聚集在受损部位周围,促进纤溶酶激活物的生成,促进血管新生及组织修复。
PDGF、VEGF、EGF、TGF-β及FGF可直接与上皮细胞膜表面特异性受体结合刺激血管上皮游走和有丝分裂,也可间接通过巨噬细胞介导分泌活性物质促进内皮细胞复制和趋化游走,诱导血管增生,由此通过直接及间接的方式在体内诱导血管形成。
本发明中,干细胞裂解滤液是通过培养、扩增干细胞后,超声粉碎,离心提取上清液,并对上清液进行过滤、浓缩获得的,干细胞裂解滤液一方面为细胞生长因子的表达提供外源性原料,另一方面与细胞生长因子协同作用,进而提升整体功效。
透明质酸是一种直链高分子粘多糖,由N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖酸组成,无种属差异性,无免疫原性,具有很高的安全性,具有较好的保湿、营养、修复、增稠效果和活性成分缓释效果。
本发明的制剂结合了干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸,且干细胞分泌液中的细胞生长因子由PDGF、VEGF、EGF、TGF-β及FGF组成,与现有的常规外敷的痤疮治疗产品相比,本制剂通过与伤口创面接触后,稳定缓慢释放制剂中的生长因子、趋化因子,促进血管内皮细胞和成纤维细胞增殖和迁移,从而促进血管再生、胶原合成,进而修复损伤的组织,透明质酸具有很好的保湿效果、增稠效果和活性成分缓释效果,产品成分简单,作用靶向性强,可降低治疗剂量,有效治疗痤疮,去除暗疮、痤疮,并防止或去除基于痤疮产生的印痕。
其中,干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为(40~60):(50~70):(0.1~0.3),采用高含量的干细胞分泌液及干细胞裂解滤液,达到较好的痤疮治疗效果,此外,若干细胞裂解滤液含量过低,会影响干细胞分泌液中细胞生长因子的表达。
其中,干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为50:55:0.2,在此配比中,制剂的痤疮治疗效果最佳。
其中,血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为(2~5):(1~4):(1~4):(3~7);(2~5),在此配比范围内,血管诱导形成效果更明显,更优选的,血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为4:2:3:6:4。
其中,透明质酸钠为水溶性交联透明质酸,水溶性交联透明质酸拥有致密网结构,可结合更多水分子,生物相容性好,安全性高,适用于轻度到重度渗液性皮肤创伤的吸液、护创和修复,溶于水且在缓冲溶液中呈现均一相,可根据需要配制各种浓度,且用量小,可大大降低成本与使用风险,操作简单,适合大量工业化生产,过程染菌几率小。
其中,干细胞分泌液还包含趋化因子,通过趋化因子,诱导成纤维细胞等聚集在受损部位周围,协同PDGF、VEGF、EGF、TGF-β及FGF,促进血管新生及组织修复。
其中,趋化因子包括CXCL1、CXCL8及CXCL12。
CXCL1(趋化因子配体1)与CXCL8(趋化因子配体8)具有潜在相似的作用,可作为多种免疫细胞的趋化剂,可趋化中性粒细胞或其他非造血细胞到达损伤或感染部位,在炎症反应期间有较高的表达,从而促进炎症过程,同时也参与伤口愈合。CXCL8对中性粒细胞有细胞趋化作用而实现其对炎症反应的调节,同时,还有很强的促血管生成作用。CXCL12在血管生成中起重要作用。本发明通过CXCL1、CXCL8及CXCL12组成的趋化因子,协同促进伤口愈合及血管再生,进一步提升痤疮治疗效果。
其中,干细胞裂解滤液包括胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白、血小板反应素、整合素及多肽。
其中,胶原蛋白可引导上皮细胞迁入缺损处,诱导产生趋化因子,继而促进成纤维细胞合成胶原;弹性蛋白可以激活成纤维细胞;血小板反应素可与纤维蛋白原、粘连蛋白、V型胶原和整合素α-V/β-1结合,对血小板聚集、血管生成发挥作用。
其中,干细胞分泌液及干细胞裂解滤液的干细胞为人脐带间充质干细胞、人脐血间充质干细胞、人羊膜间充质干细胞或脂肪间充质干细胞中的任意一种或多种组合。
下面以具体实施例对本发明进行进一步说明:
实施例1
本实施例公开一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,包含以下组分:
干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;
其中,干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子;
其中,干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为50:55:0.2;
血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为4:2:3:6:4;
透明质酸钠为水溶性交联透明质酸;
干细胞分泌液还包含趋化因子,趋化因子包括CXCL1、CXCL8及CXCL12;
干细胞裂解滤液包括胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白、血小板反应素、整合素及多肽。
实施例2
本实施例公开一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,包含以下组分:
干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;
其中,干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子;
其中,干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为40:50:0.1;
血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为4:2:3:6:4;
透明质酸钠为水溶性交联透明质酸;
干细胞分泌液还包含趋化因子,趋化因子包括CXCL1、CXCL8及CXCL12;
干细胞裂解滤液包括胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白、血小板反应素、整合素及多肽。
实施例3
本实施例公开一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,包含以下组分:
干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;
其中,干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子;
其中,干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为60:70:0.3;
血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为4:2:3:6:4;
透明质酸钠为水溶性交联透明质酸;
干细胞分泌液还包含趋化因子,趋化因子包括CXCL1、CXCL8及CXCL12;
干细胞裂解滤液包括胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白、血小板反应素、整合素及多肽。
实施例4
本实施例公开一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,包含以下组分:
干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;
其中,干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子;
其中,干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为50:55:0.2;
血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为4:1:2:6:3;
透明质酸钠为水溶性交联透明质酸;
干细胞分泌液还包含趋化因子,趋化因子包括CXCL1、CXCL8及CXCL12;
干细胞裂解滤液包括胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白、血小板反应素、整合素及多肽。
对比例1
本实施例与实施例1的不同之处在于,本实施例的制剂不含有干细胞裂解滤液。
对比例2
本实施例与实施例1的不同之处在于,本实施例的制剂不含有干细胞分泌液。
对比例3
本实施例与实施例1的不同之处在于,本实施例的制剂不含有透明质酸。
对比例4
本实施例与实施例1的不同之处在于,本实施例中的干细胞分泌液采用现有的全组分干细胞分泌液,其中,全组分干细胞分泌液为通过饥饿培养后收集的上层培养液。
一、效果验证:
受试者在使用样品前(0周),使用样品2周、4周时均随访1次,共计3次,3次测试均采集皮肤各参数的测量值和面部图像。测试环境温度恒定为(20±2)℃,相对湿度55%±5%,测试前受试者使用同种洁面乳清洗测试部位后,在此环境下静坐25~30min。
1.经皮水分流失TEWL值测试:
TEWL值可用来评价皮肤屏障功能,是考察使用本发明制剂后皮肤修复的重要参数,其数值越小代表皮肤屏障越好,修复越好。
实验测试结果如下:
表1经皮水分流失TEWL值测试结果
由表1可知,在测试4周内,志愿者使用实施例1~4的制剂组合涂抹治疗后,TWEL值均呈降低趋势,且实施例1~4组在第2和4周时,显著低于对比例1~4组(P<0.05)。其中,实施例1组制剂组合效果最显著,与第0周比较,志愿者在使用产品第4周后TWEL值降低了41.05%,有极显著性差异(P<0.001)。此实验结果说明实施例1~4制得的制剂均能减缓皮肤经皮失水的效果,从而对皮肤屏障有一定的保护作用,而实施例1组制剂治疗效果最显著。
2.皮肤红度a*值测试:
皮肤红度a*值表征皮肤红度值,a*值的下降代表皮肤颜色红度下降,痘印修复越好。
实验测试结果如下:
表2皮肤红度a*值测试
由表2可知,在测试4周内,志愿者使用实施例1~4制得的细胞因子涂抹治疗后,皮肤红度a*值均呈降低趋势,且实施例1~4组在第2和4周时,显著低于对比例1~4组(P<0.05)。其中,实施例1效果最显著,与第0周比较,志愿者在使用产品4周后皮肤红度a*值降低了34.77%,有极显著性差异(P<0.001)。此实验说明实施例1~4组制剂组合均能降低痘痘肌皮肤红度的效果,有一定的淡化痘印功效,而实施例1组制剂组合效果最显著。
3.面部卟啉值
通过VISIA-CR面部成像仪拍摄受试者面部图像,利用分析软件ImageProPlus分析面部卟啉值。面部卟啉值表征面部微生物的代谢活跃程度,卟啉值越高,则微生物越活跃;卟啉值越低,则微生物越不活跃。卟啉值有一定的下降趋势,代表产品有一定的抑菌作用。
实验测试结果如图1所示,在测试4周内,志愿者使用实施例1~4制得的制剂组合涂抹治疗后,皮肤卟啉值均呈降低趋势,且实施例1~4组在第2和4周时,显著低于对比例1~4组,说明实施例1组制剂组合效果最显著,抑菌效果最好。
二、痤疮治疗效果测试
1.入组条件:选取健康受试者若干名。受试者纳入标准:①男性或女性,年龄20~40岁;根据中国痤疮治疗指南分级法,痤疮分级在I至II型,皮肤有粉刺、炎性丘疹者;②身体健康,认真使用样品,能真实表述使用后的感受;③自愿参加,并签署知情同意书,按照研究方案的要求使用产品以及完成随访。
2.受试者排除标准:①受试者有皮肤病未愈;②对受试样品过敏者;③哺乳期或妊娠期的妇女;④近三个月使用过抗组胺药或三个月内使用免疫抑制药物者;⑤近3个月内参加其他面部临床测试或治疗者;⑥长期暴露于阳光者。
3.使用方法:受试者早晚清洁脸部后,取适量样品均匀涂抹于全脸,按摩至吸收。每日2次,共使用4周。测试期间志愿者不改变日常使用洗面奶的品牌。按此方案连续使用4周,受试者在使用样品前(0周),使用样品2、4周时均随访1次,共计3次,3次测试均采集皮肤各参数的测量值和面部图像。
4.测试样品:实施例1制得的制剂
5.测试结果:
结果图2~图8所示,受试者在连续使用4周后皮肤改善明显,其中,图2自上而下分别为0周、2周、4周使用本制剂后的效果,可看到使用四周后皮肤痘印效果去除明显,图3患者为脓疱性痘痘、痘印,在使用本发明制剂4周后,皮肤状态明显改善,具有降低痘痘肌皮肤红度的效果,从而有一定的淡化痘印功效;图4~图8分别为使用本制剂前后的面部图像,可见,在使用本发明制剂4周后,患者的痤疮及痘印去除明显。
当然,以上图示仅为本发明较佳实施方式,并非以此限定本发明的使用范围,故,凡是在本发明原理上做等效改变均应包含在本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,包含以下组分:
干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸;
其中,所述干细胞分泌液包含血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为(40~60):(50~70):(0.1~0.3)。
3.根据权利要求2所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述干细胞分泌液、干细胞裂解滤液及透明质酸之间的体积比为50:55:0.2。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述血小板衍生因子、血管内皮生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β及成纤维细胞生长因子之间的体积比为(2~5):(1~4):(1~4):(3~7);(2~5)。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述透明质酸钠为水溶性交联透明质酸。
6.根据权利要求1所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述干细胞分泌液还包含趋化因子。
7.根据权利要求6所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述趋化因子包括CXCL1、CXCL8及CXCL12。
8.根据权利要求1所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述干细胞裂解滤液包括胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白、血小板反应素、整合素及多肽。
9.根据权利要求1至8所述的一种干细胞活性成分联合透明质酸治疗痤疮的制剂,其特征在于,所述干细胞分泌液及干细胞裂解滤液的干细胞为人脐带间充质干细胞、人脐血间充质干细胞、人羊膜间充质干细胞或脂肪间充质干细胞中的任意一种或多种组合。
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