CN116392518B - 东紫苏及其提取物在制备慢性压力脑区病变药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了东紫苏及其提取物在制备慢性压力脑区病变药物中的应用，属于生物医药技术领域，本发明的东紫苏或其提取物制备防治慢性压力脑区病变的药物，通过不规律的长期的刺激诱导小鼠压力应激模型证实东紫苏提取物可以有效的改善慢性压力动物模型的压力行为能力，减轻慢性压力模型小鼠脑部的病理损伤和核聚集，显著抑制小鼠脑部炎症和氧化应激相关因子的表达水平；本发明还拓宽了东紫苏的应用领域，为防治慢性压力相关脑区病变提供了新的选择和思路。

Description

东紫苏及其提取物在制备慢性压力脑区病变药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及东紫苏或其提取物在制备慢性压力脑区病变药物中的应用。

背景技术

慢性压力(Chronic stress)通常是指“不正常地”持续很长时间的压力，经常反复出现，或者是由长期不容易适应或克服的严重威胁造成的。机体长期在压力应激状态，应激系统长期、高频、反复的激活而缺乏休息，会使机体处于慢性强负荷中，影响大脑活动、神经内分泌、营养和免疫系统，从而引发疾病。研究表明，慢性压力是通过下丘脑-垂体-肾上腺轴对散发性阿尔茨海默病发挥致病作用的，其中一种机制是通过炎症驱动神经退行性病变。

东紫苏(Elsholtizia bodinieri Vaniot)是唇形科香薷属草本植物，通常生长于云南省、四川省、甘肃省等地。东紫苏为我国传统的民间用药，全草入药，味辛，性平，有发散解表、清热利湿、理气和胃的功能，用于外感风寒、感冒发热、头疼身痛、咽喉痛、虚火牙痛、消化不良、急性结膜炎、尿闭及肝炎等症。近年来，国内学者已经从东紫苏根、茎、叶中分离得到了多种黄酮、三萜和酚类成分，并证实其有一定的抗氧化、降血脂、抗疲劳、抗病毒和抑菌活性。然而关于东紫苏改善小鼠慢性压力脑区病变的研究还鲜有报道。

发明内容

本发明的主要目的在于提供东紫苏或其提取物在制备慢性压力脑区病变药物中的新应用，旨在用于改善慢性压力动物模型的行为学、减轻脑部炎症反应造成的病理损伤以及抑制脑部中炎症和氧化应激相关因子表达的作用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

东紫苏或其提取物在制备慢性压力脑区病变药物中的应用。

所述东紫苏提取物制备的药物防治慢性压力脑区病变包括(1)-(4)中的至少一种：

(1)改善慢性压力动物模型的压力行为能力；

(2)减轻慢性压力模型小鼠脑部的病理损伤和核聚集；

(3)显著抑制小鼠脑部炎症和氧化应激相关因子的表达水平；

(4)减少发生慢性压力脑区病变的危险性。

本发明对东紫苏或其提取物防治慢性压力脑区病变进行了系列研究，证实了东紫苏提取物可以显著改善慢性压力模型小鼠行为学能力；减轻小鼠慢性压力造成的脑部病理损伤；抑制慢性压力模型小鼠脑组织和血浆中相关炎症和氧化应激相关因子的表达。总体来说有效的改善了慢性压力模型小鼠诱导的脑区病变，对于改善慢性压力的效果明显。本发明提供的东紫苏或其提取物对防治慢性压力有显著的作用，且东紫苏植物分布广泛，安全性高，价格低廉，原料易得；东紫苏或其提取物在制备防治慢性压力相关脑区病变药物中拥有良好的开发应用前景。

优选地，所述东紫苏提取物为东紫苏的甲醇提取物。

优选地，所述东紫苏的甲醇提取物的提取方法为：将干燥的东紫苏全草研磨成粉，获得东紫苏粉末；将东紫苏粉末超声辅助浸提，获得浸提液；将所述浸提液进行抽滤后旋转蒸发成呈浓稠状，获得浓稠状浸提物；将所述浓稠状浸提物进行真空冷冻干燥后研磨成粉，即获得粉末状东紫苏醇提取物；将所述粉末状东紫苏醇提取物于低温保存待用。

优选地，所述超声辅助浸提为：用70-90％甲醇超声辅助浸提1-1.5h；所述低温保存为于4-5℃进行保存。

优选地，所述东紫苏醇提取物的用剂量为200-600mg/天/kg。本发明对药物的剂型、药物的辅料和药物的制备方法无特殊要求，采用本领域技术人员熟知的即可。

优选地，所述药物包含东紫苏的甲醇提取物。

本发明预防和/或治疗慢性压力脑区病变的新药物是以东紫苏提取物为活性成分，用于制备防治慢性压力脑区病变的药物，还可以加入一种或多种药物制剂上可接受的辅料，或者与其他活性成分复配发挥协同抗慢性压力脑区病变的作用。所述药物为口服制剂，所述口服制剂为颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂、散剂。

优选地，所述药物摄入哺乳动物胃肠道中。所述哺乳动物包括但不限于人类。

本发明的有益效果在于：

1、本发明开发了东紫苏提取物的新用途，用于制备慢性压力脑区病变药物；本发明的东紫苏原料来自于天然产物，不仅采集方便且安全性高。

2、本发明通过实验验证，证明了东紫苏提取物可有效改善慢性压力模型小鼠行为学能力；有效减轻小鼠慢性压力造成的脑部病理损伤；抑制慢性压力模型小鼠脑部和血浆中相关炎症和氧化应激相关因子的表达；且在较低剂量下也具有较好的效果。

附图说明

图1为本发明东紫苏醇提取物主要成分分析结果图；

图2为本发明东紫苏醇提取物显著改善慢性压力模型小鼠行为学能力图；

图3为本发明东紫苏醇提取物减轻小鼠慢性压力造成的脑部病理损伤结果切片图；

图4为本发明东紫苏醇提取物抑制慢性压力模型小鼠脑组织和血浆中相关炎症和氧化应激相关因子的表达结果图。

具体实施方式

下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

本申请中的术语“第一”“第二”“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”“第二”“第三”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。本申请的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。本申请实施例中所有方向性指示(诸如上、下、左、右、前、后……)仅用于解释在某一特定姿态(如附图所示)下各部件之间的相对位置关系、运动情况等，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。此外，术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备没有限定于已列出的步骤或单元，而是可选地还包括没有列出的步骤或单元，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其他实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其他实施例相结合。

本发明以下实施例中采用的C57BL/6J小鼠购买于北京斯贝福实验动物有限公司。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1东紫苏提取物的制备

(1)东紫苏醇提物的提取：

将干燥的东紫苏全草用高速研磨机研磨成粉，过80目筛，得到东紫苏粉末。用80％甲醇水超声辅助浸提东紫苏粉末1小时，将浸提的溶液进行抽滤。将浸提液旋转蒸发成浓稠状，然后进行真空冷冻干燥。得到的样品用研钵研磨成粉，得到东紫苏醇提物，保存至4℃以待后续使用。

(2)东紫苏醇提物的UPLC-MS/MS主成分分析：

使用UPLC-MS/MS对东紫苏醇提物进行主成分定性分析。使用Agilent SB-C18色谱柱(1.8μm，2.1mm×100mm)；流动相A相为超纯水(含0.1％的甲酸)，流动相B为乙腈(含0.1％的甲酸)；洗脱程序：0min，5％B；9min，95％B；10min，95％B；11min，5％B。柱温40℃；进样量4μL，流速0.35mL/min。

分析结果如图1所示，由图1可看出，东紫苏醇提物主要包括黄酮类、三萜类和酚酸类物质。

实施例2东紫苏提取物对防治慢性压力脑区病变的活性评价

本实施例使用的东紫苏提取物由实施例1制备获得。

(1)实验动物分组：

将上述购买的C57BL/6J小鼠随机分配，分组为：空白组(C)、模型组(M)、东紫苏醇提物高剂量组(H)、东紫苏醇提物低剂量组(L)、阳性药物氟西汀组(Y)。其中东紫苏醇提物高剂量组(H)每天给小鼠灌胃600mg/kg，东紫苏醇提物低剂量组(L)每天给小鼠灌胃200mg/kg，阳性药物组(Y)氟西汀每天给小鼠灌胃10mg/kg。以上各组小鼠，每组10只，连续灌胃7天。

(2)慢性压力动物模型的建立

取雄性8周龄C57BL/6J小鼠，模型组(M)小鼠每次接受两种不同的压力刺激，且不会连续给予相同的刺激，因此动物不会预测到刺激方式。压力刺激方式如下：A)不规律的昼夜颠倒生活；B)在潮湿的笼子里每周生活24小时；C)在45度倾斜的笼子里每周生活24小时；D)每周禁食24小时；E)每周强光照射24小时；F)在通风良好的环境(50ml离心管)束缚但不压迫3小时。连续给予三周不规律的刺激建立慢性压力动物模型，牺牲前12小时禁食不禁水后脱颈处置。脱颈处置后快速取新鲜血液和脑组织等样品。

(3)东紫苏显著改善慢性压力模型小鼠行为能力：

慢性压力会改变模型小鼠运动行为能力、认知行为能力。分别通过旷场实验、强迫游泳实验和高架十字迷宫实验检测小鼠慢性压力行为学改善情况。

实验结果如图2所示，其中图A表示旷场行为学实验；图B表示强迫游泳行为学实验；图C表示高架十字迷宫行为学实验。**P＜0.01，***P＜0.001具有统计学意义。

由图2可看出，三个实验结果(图2A，图2B，图2C)均显示，慢性压力模型小鼠较空白对照组小鼠表现出显著的运动行为能力、认知行为能力改变，而东紫苏醇提物组和阳性药物组均显著改善模型小鼠运动行为能力、认知行为能力。可见，东紫苏提取物可改善慢性压力模型小鼠行为。

(4)东紫苏显著减轻小鼠慢性压力造成的脑部病理损伤

慢性压力发生会增加脑部细胞密度。采用脑部切片HE染色方法，将空白组(C)、模型组(M)、东紫苏高剂量组(H)脑组织经固定、脱水、染色、脱蜡、透明和封片等过程，观察脑组织的组织完整性和细胞核聚集情况。东紫苏提取物减轻小鼠慢性压力造成的脑部病理损伤切片结果如图3所示。

由图3可看出：从脑组织病理学切片观察到，与空白对照组(C)相比，慢性压力模型组(M)小鼠脑部前额叶皮层体积较小的小胶质细胞细胞核密度显著增多，细胞周围间隙增宽，呈局部空泡变性；东紫苏高剂量处理组(H)显著降低脑部前额叶皮层小胶质细胞密度。可见，东紫苏提取物有效减轻小鼠慢性压力造成的脑部病理损伤。

(5)东紫苏显著抑制慢性压力模型小鼠脑组织中炎症和氧化应激相关因子的表达

采用生物化学反应试剂盒检测模型小鼠脑组织中炎症和氧化应激相关因子LDH、MDA、NO、GSH、MPO和ROS的表达。结果如图4所示，图4A表示小鼠脑组织中LDH的表达变化情况；图4B表示脑组织中MDA的表达变化情况；图4C表示脑组织中NO的表达变化情况；图4D表示脑组织中GSH的表达变化情况；图4E表示脑组织中MPO的表达变化情况；图4F表示脑组织中ROS的表达变化情况。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001具有统计学意义。

由图4可看出，上述指标LDH、MDA、NO、MPO和ROS的表达量在慢性压力模型组(M)小鼠脑组织中较空白组(C)均显著升高，与模型组相比较东紫苏提取物高处理组(H)均显著抑制。GSH表达量在慢性压力模型组(M)小鼠脑组织中较空白组(C)均显著降低，与模型组相比较东紫苏提取物高处理组(H)均显著增加。可见，东紫苏提取物可抑制慢性压力模型小鼠脑组织中炎症和氧化应激相关因子的表达。

实施例3

东紫苏醇提物的提取：将干燥的东紫苏全草采用高速研磨机研磨成粉，过90目筛，得到东紫苏粉末。用70％甲醇水超声辅助浸提东紫苏粉末1.5小时，将浸提的溶液进行抽滤。将浸提液旋转蒸发成浓稠状，然后进行真空冷冻干燥。得到的样品用研钵研磨成粉，得到东紫苏醇提物，保存至5℃以待后续使用。

实施例4

东紫苏醇提物的提取：将干燥的东紫苏全草采用高速研磨机研磨成粉，过70目筛，得到东紫苏粉末。用90％甲醇水超声辅助浸提东紫苏粉末1.3小时，将浸提的溶液进行抽滤。将浸提液旋转蒸发成浓稠状，然后进行真空冷冻干燥。得到的样品用研钵研磨成粉，得到东紫苏醇提物，保存至4℃以待后续使用。

综上所述，东紫苏提取物能显著改善慢性压力模型小鼠行为学能力；减轻小鼠慢性压力造成的脑部病理损伤；抑制慢性压力模型小鼠脑组织和血浆中相关炎症和氧化应激相关因子的表达。本发明提供的东紫苏提取物对防治慢性压力脑区病变有显著的作用，且原料来自于天然产物，安全性高，成本低廉，适用于工业化生产和市场推广应用。

以上对发明的具体实施方式进行了详细说明，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施方式。对于本领域的技术人员而言，任何对该发明进行的等同修改或替代也都在本发明的范畴之中，因此，在不脱离本发明的精神和原则范围下所作的均等变换和修改、改进等，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (7)

1.东紫苏醇提物在制备治疗慢性压力导致的脑部病理损伤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述东紫苏醇提物为东紫苏的甲醇提取物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述东紫苏醇提物的提取方法为：将干燥的东紫苏全草研磨成粉，获得东紫苏粉末；将东紫苏粉末超声辅助浸提，获得浸提液；将所述浸提液进行抽滤后旋转蒸发成呈浓稠状，获得浓稠状浸提物；将所述浓稠状浸提物进行真空冷冻干燥后研磨成粉，即获得粉末状东紫苏醇提物；将所述粉末状东紫苏醇提物于低温保存待用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述超声辅助浸提为：用70-90%甲醇超声辅助浸提1-1.5h；所述低温保存为于4-5℃进行保存。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述东紫苏醇提物的用剂量为200-600mg/天/kg。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物包含东紫苏醇提物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物摄入哺乳动物胃肠道中。