CN116370364A - 迷迭香发酵物、含此的具控油及祛红功效的皮肤外用组成物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明是有关于一种迷迭香发酵物、含此的具控油及祛红功效的皮肤外用组成物及其用途，其中迷迭香发酵物利用酵母菌对迷迭香进行发酵步骤而制得。迷迭香发酵物富含迷迭香酸及谷胱甘肽，具控油及/或祛红等功效，可做为皮肤外用组成物的有效成分。
Description
技术领域
本发明是有关于一种迷迭香发酵物，特别是一种迷迭香发酵物、含此的具控油及祛红功效的皮肤外用组成物及其用途。
背景技术
皮肤分为真皮层及表皮层，其中表皮层位于真皮层外，是皮肤最外层的组织，因此表皮层的水分容易逸散到空气中。为了维持表皮层的水分，表皮层的细胞分泌天然保湿因子于细胞间，以抓住水分子，且真皮层中的皮脂腺会分泌皮脂至表皮层外，以防止表皮层水分大量散失。如果皮脂分泌过多，就容易导致皮肤变得油腻，甚至堵塞毛孔，导致皮肤发炎。
上述真皮层具许多皮肤附属器，包含皮脂腺及微血管。真皮层中的微血管负责皮肤的营养供应及废物移除，且可借由扩张或收缩协助调节体温。在正常的状况下，真皮层中的微血管不易观察，但如果微血管过度扩张、皮肤发炎及/或变薄，皮肤会出现红血丝症状，包含皮肤持续性的泛红(例如血红蛋白及/或表皮浮现微血管所致)，甚至伴随发热、搔痒及泡疹等症状。皮脂分泌过多及皮肤出现红血丝症状等问题都会对外观造成影响，甚至产生皮肤搔痒、疼痛等不适症状，是常见的皮肤问题。
迷迭香(Salvia rosmarinus)是一种木本多年生香料植物，原产于地中海盆地，其叶片为革质，可适应干燥的地中海气候。迷迭香除了可做为观赏植物、料理香料及花草茶的基底外，还可以提炼成精油，具抗菌及提神等功效。然而，迷迭香对于皮肤的功效则少有研究。
发明内容
因此，本发明的一态样是提供一种迷迭香发酵物，其利用酵母菌对含有迷迭香(Salvia rosmarinus)的发酵基质进行发酵步骤后制得。迷迭香发酵物含有丰富的迷迭香酸及/或谷胱甘肽，且对皮肤具控油及/或祛红等功效。
本发明的又一态样是提供一种具控油功效的皮肤外用组成物，可包含但不限于迷迭香发酵物做为有效成分。
本发明的再一态样是提供一种具祛红功效的皮肤外用组成物，可包含但不限于迷迭香发酵物做为有效成分。
本发明的另一态样是提供一种迷迭香发酵物用于制备控油及祛红的皮肤外用组成物的用途，其中皮肤外用组成物可包含但不限于迷迭香发酵物做为有效成分。
根据本发明的上述态样，提出一种迷迭香发酵物，可包含但不限于30μg/mL至50μg/mL的迷迭香酸及/或20μg/mL至40μg/mL的谷胱甘肽。此迷迭香发酵物可例如为对发酵基质进行发酵步骤而制得，其中发酵基质可例如为由迷迭香(Salvia rosmarinus)的叶部及/或茎部及水所组成。发酵步骤可例如为利用酵母菌于20℃至50℃的温度进行10小时至50小时。酵母菌可例如为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)C-LYE-6，其于2021年03月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，且保藏编号为CGMCCNo.22020。
根据本发明的一实施例，迷迭香发酵物可选择性包含1.0mg/mL至5.0mg/mL的蛋白质、0.5mg/mL至5.0mg/mL的粗多醣、1.0mg/mL至10.0mg/mL的总黄酮及/或1.0mg/mL至8.0mg/mL的总酚。迷迭香发酵物的pH值可例如为4.5至6.8，且迷迭香发酵物的粘度可例如为10厘泊(cP)至15cP。
根据本发明的一实施例，发酵基质的迷迭香及水的重量体积比(g:mL)可例如为2～10：100～300。根据本发明的一实施例，酵母菌的菌体浓度可例如为105菌落形成单位(colony forming unit，CFU)/mL至108CFU/mL。根据本发明的一实施例，发酵基质的迷迭香对酵母菌的重量体积比(g:mL)可例如为2～20：5～10。根据本发明的一实施例，迷迭香发酵物可例如为经发酵步骤及固液分离步骤而制得。根据本发明的一实施例，迷迭香发酵物可例如为经发酵步骤、固液分离步骤及灭菌步骤而制得。
根据本发明的另一态样，提出一种具控油功效的皮肤外用组成物，可包含但不限于迷迭香发酵物做为有效成分。根据本发明的再一态样，提出一种具祛红功效的皮肤外用组成物，可包含但不限于迷迭香发酵物做为有效成分。根据本发明的又一态样，提出一种迷迭香发酵物用于制备控油及祛红的皮肤外用组成物的用途，其中皮肤外用组成物可包含但不限于迷迭香发酵物做为有效成分。
应用本发明的迷迭香发酵物，其利用酵母菌对含迷迭香的发酵基质进行发酵步骤而制得，可包含但不限于丰富的迷迭香酸及/或谷胱甘肽，且对皮肤具控油及祛红功效，而可做为皮肤外用组成物的有效成分。
附图说明
为让本发明的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附附图的详细说明如下：
图1A至图1C分别为绘示根据本发明的一实施例的迷迭香酸标准品、实验样本及对照样本的色谱图。
图2A至图2C分别为绘示根据本发明的一实施例的谷胱甘肽标准品、实验样本及对照样本的色谱图。
图3为绘示根据本发明的一实施例的受试区域的皮肤涂抹迷迭香发酵物不同时间后的皮脂含量的柱形图。
图4A至图4J是分别显示根据本发明的一实施例的皮肤涂抹迷迭香发酵物不同天数后或皮肤未涂抹迷迭香发酵物的受试区域照片。
图5是绘示根据本发明的一实施例的受试者皮肤未涂抹迷迭香发酵物及涂抹迷迭香发酵物7天后的红血丝平均值的折线图。
具体实施方式
本发明所提到的单数形式“一”、“一个”和“所述”包含复数引用，除非上下文另有明确规定。数值范围(如10％～11％的A)若无特定说明都包含上、下限值(即10％≦A≦11％)；数值范围若未界定下限值(如低于0.2％的B，或0.2％以下的B)，则都指其下限值可能为0(即0％≦B≦0.2％)。上述用语是用以说明及理解本发明，而非用以限制本发明。
如前所述，本发明提供一种迷迭香发酵物、含此的具控油及祛红功效的皮肤外用组成物及其用途，其为利用酵母菌对含有迷迭香(Salvia rosmarinus)的发酵基质进行发酵步骤后获得，其中迷迭香发酵物含有丰富的迷迭香酸(rosmarinic acid)及谷胱甘肽(glutathione)，且对皮肤具控油及祛红等功效。
详细而言，上述发酵基质可例如为由迷迭香(Salvia rosmarinus)及水所组成。在一实施例中，迷迭香可例如为新鲜的迷迭香的叶部及/或茎部经干燥处理及研磨处理后所得的迷迭香粉末。上述干燥处理的方法不限，可利用现有方法进行，如：阴干法、热干燥法、冷冻干燥法、真空干燥法及喷雾干燥法等。在一具体例中，干燥方法可例如为在70℃至80℃进行烘干处理。上述研磨处理的方法不限，可例如利用任何现有方法进行，如：机械力研磨、滚筒式研磨及流动气体研磨等。在一实施例中，迷迭香粉末的粒径可例如为30目至80目，具体可例如为80目，以利后续操作(如：固液分离)的进行，并提供迷迭香粉末与酵母菌的发酵反应较佳的比表面积。
上述酵母菌可为任何酵母菌菌株。在一具体例中，酵母菌可例如为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)C-LYE-6，其于2021年03月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)(地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编号：100101)，且保藏编号为CGMCC No.22020。
在一实施例中，在进行发酵步骤前，可选择性先对酵母菌进行前处理，其中前处理可例如于20℃至50℃下，利用液态培养基进行第一液态培养，以使酵母菌活化，从而获得第一培养物。接着，将第一培养物涂布于固态培养基上，以于20℃至50℃下进行固态培养，从而获得单一菌落。然后，将单一菌落接种至液态培养基，并在20℃至50℃进行第二液态培养，以获得600nm下光密度(optical density，OD)为0.5至1.0的菌液，其中此菌液的酵母菌是在对数期，其菌液浓度相当于105菌落形成单位(colony forming unit，CFU)/mL至108CFU/mL。经由前处理，可获得活性佳的酵母菌，且可避免杂菌滋生。补充说明的是，上述液态培养基及固态培养基可例如为现有培养基。在一具体例中，液态培养基为马铃薯葡萄糖培养液(potato dextrose broth，PDB)。在一具体例中，固态培养基为马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar，PDA)。
在一实施例中，发酵步骤可例如于20℃至50℃下进行10小时至50小时。如果发酵步骤的温度是低于20℃，则酵母菌的活性不佳。如果发酵步骤是在高于50℃的温度下进行，则酵母菌可能会失去活性，甚至死亡。如果发酵步骤的时间是少于10小时，则制得的迷迭香发酵物所含的迷迭香酸及/或谷胱甘肽的含量将不足。相反地，如果发酵步骤的时间是多于50小时，则发酵环境将累积过多的酵母菌代谢物而酸化迷迭香发酵物及/或抑制酵母菌的活性，且有杂菌生成的疑虑。在一具体例中，发酵步骤是在30℃下进行约24小时。上述酵母菌的活性是指酵母菌的生长活性及/或产生迷迭香酸及谷胱甘肽的活性。如果酵母菌的活性不佳，则制得的迷迭香发酵物的迷迭香酸及/或谷胱甘肽的含量将不足，导致迷迭香发酵物的控油及/或祛红功效不佳。上述酵母菌代谢物可包含但不限于具有抑菌效果的迷迭香酸、谷胱甘肽及/或其他可酸化迷迭香发酵物的有机酸。
发酵基质及酵母菌的比例可视需求调整。在一实施例中，发酵基质的迷迭香及水的重量体积比(g:mL)可例如为2～10：100～300，使制得的迷迭香发酵物的粘度维持在较佳的范围。在一具体例中，发酵基质可例如由7g的迷迭香及300mL的水所组成。在一实施例中，发酵基质的迷迭香对酵母菌的重量体积比(g:mL)可例如为2～20：5～10，然以7：5为较佳，以使酵母菌具有较佳的活性。
在一实施例中，可选择性对迷迭香发酵物进行发酵步骤及固液分离步骤。上述固液分离步骤可例如以现有方法进行，如：过滤处理、离心处理及蒸馏处理等，以移除迷迭香发酵物的杂质。在一示例中，以4000rpm至12000rpm的转速进行离心处理达15分钟至30分钟。在一具体例中，离心是以4500rpm的转速进行20分钟。在一实施例中，可选择性对迷迭香发酵物进行发酵步骤、固液分离步骤及/或灭菌步骤。上述灭菌步骤可例如利用现有方法进行，如：压蒸汽处理、干热处理及紫外线处理等。在一具体例中，灭菌步骤是利用高压(1.0kg/cm2至1.5kg/cm2)高温(110℃至130℃)的水蒸气进行10分钟至20分钟。
利用上述方法制得的迷迭香发酵物为浅褐色的半透明液体。迷迭香发酵物可包含但不限于30μg/mL至50μg/mL的迷迭香酸及20μg/mL至40μg/mL的谷胱甘肽。在一实施例中，迷迭香发酵物含有30μg/mL至40μg/mL的迷迭香酸及20μg/mL至30μg/mL的谷胱甘肽。如果迷迭香发酵物的迷迭香酸含量是小于30μg/mL及/或谷胱甘肽是小于20μg/mL，则迷迭香发酵物的控油及/或祛红功效不佳。如果迷迭香酸含量大于50μg/mL及/或谷胱甘肽含量大于40μg/mL，则会抑制酵母菌的活性，使迷迭香发酵物中的迷迭香酸含量及谷胱甘肽含量无法再提升。
基于迷迭香发酵物为100重量百分比(wt％)，迷迭香发酵物含有0.9wt％至2.0wt％的可溶性固形物。在一实施例中，迷迭香发酵物可选择性包含1.0mg/mL至5.0mg/mL的蛋白质、0.5mg/mL至5.0mg/mL的粗多醣、1.0mg/mL至10.0mg/mL的总黄酮及/或1.0mg/mL至8.0mg/mL的总酚。蛋白质、粗多醣、总黄酮及/或总酚的含量在上述范围中，可使迷迭香发酵物对皮肤具有较佳的控油及/或祛红功效。
在一实施例中，上述迷迭香发酵物的pH值可例如为4.5至6.8，接近皮肤表面的pH值，可维持皮肤表面的正常菌相的平衡，对皮肤温和不刺激。在一实施例中，迷迭香发酵物的粘度可例如为10cP至15cP，以避免迷迭香发酵物起屑或析出沉淀物，且使迷迭香发酵物的触感清爽不粘腻。
经管柱层析分析，相对于未经发酵步骤的迷迭香萃取物，经发酵步骤制得的迷迭香发酵物的迷迭香酸含量增加75％，且谷胱甘肽增加80％，证实发酵步骤可提高迷迭香酸及谷胱甘肽含量。其次，经皮肤实验证实，皮肤持续涂抹迷迭香发酵物7天后，皮脂含量下降，且红血丝症状改善，证实迷迭香发酵物对皮肤具控油及祛红功效。
上述“控油”功效是指降低皮脂分泌量，可利用皮肤每单位面积的皮脂含量评估。上述“祛红”功效是指改善皮肤表面红血丝症状，其中红血丝症状包含皮肤持续性的泛红(例如血红蛋白及/或表皮浮现微血管所致)，且红血丝症状的严重程度可由红血丝平均值量化。具体而言，利用不同波长的光照射皮肤的受试区域所得的影像，可分析血红素(hemoglobin)的吸收光谱，并以受试区域的红血素的浓度平均值定义红血丝平均值(任意单位)，其中红血丝平均值越大，表示受试区域的红血丝症状越严重。
再者，经皮肤斑贴实验证实，迷迭香发酵物对皮肤具低致敏性。上述“低致敏性”是指迷迭香发酵物涂抹皮肤经一段时间后，不引起皮肤的红斑、浸润、水肿、丘疹及疱疹等发炎及/或过敏等症状。
由此可知，迷迭香以酵母菌进行发酵步骤后，获得的迷迭香发酵物对皮肤具控油及祛红功效，意味着发酵步骤可自迷迭香保留及/或产生皮肤可吸收并利用的成分。值得注意的是，上述制造步骤排除使用有机溶剂，因此没有有机溶剂残留的疑虑。其次，迷迭香发酵物不需经长时间(如：半小时以上)的高温(如：100℃以上)处理，可避免上述皮肤可吸收并利用的成分遭高温破坏。
在一实施例中，迷迭香发酵物可做为具控油及/或祛红功效的皮肤外用组成物的有效成分。在一实施例中，上述皮肤外用组成物的剂型可例如为溶液、乳液、乳霜、悬浮液、粉剂、凝胶或浴盐。在一实施例中，上述皮肤外用组成物可例如乳液、化妆水、精华液、隔离霜、洗面奶、面膜或防晒乳，惟本发明不限于此处所举。
以下利用数个实施例以说明本发明的应用，然其并非用以限定本发明，本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。
实施例一、制备迷迭香发酵物
首先，于37℃在PDB中对酿酒酵母C-LYE-6(保藏编号为CGMCC No.22020)进行第一液态培养，以获得第一菌液。接着，将第一菌液涂布于PDA上进行培养，以获得单一菌落。然后，将单一菌落接种于PDB中，并于37℃进行第二液态培养，以获得酿酒酵母C-LYE-6的第二菌液，其中第二菌液的600nm下光密度为0.5至1.0，相当于含有105至108CFU/mL的酿酒酵母C-LYE-6之活菌。补充说明的是，酿酒酵母C-LYE-6的菌落为点状，表面边缘光滑，且颜色呈乳白色而不透明。上述酿酒酵母C-LYE-6以是细胞形式单独存在。
将新鲜的迷迭香的茎部及叶部于75℃±5℃烘干后，研磨成80目的迷迭香粉末。接着，将7g的迷迭香粉末及300mL的水混合成基质后，加入5mL的酿酒酵母C-LYE-6的第二菌液，再于30℃下进行发酵步骤24小时，从而获得迷迭香发酵物。接下来，以121℃、1.1kg/cm2的水蒸气对迷迭香发酵物进行灭菌达15分钟，再以4500rpm的离心速率进行离心20分钟，确保迷迭香发酵物无致病菌检出，且活菌数小于50CFU/mL，符合化妆品对于生物安全性的规定。
上述迷迭香发酵物为浅褐色的半透明液体。利用现有方法(如：利用旋转粘度测定计及酸碱度计定法)测量上述迷迭香发酵物的粘度及pH值，迷迭香发酵物的粘度为10cP至15cP，且迷迭香发酵物的pH值为4.5至6.8。其次，基于上述迷迭香发酵物为100wt％，迷迭香发酵物包含1.5wt％的可溶性固形物。再者，迷迭香发酵物含有1.0mg/mL至5.0mg/mL的蛋白质、0.5mg/mL至5.0mg/mL的粗多醣、1.0mg/mL至10.0mg/mL的总黄酮及/或1.0mg/mL至8.0mg/mL的总酚。值得说明的是，不同株迷迭香具个体差异，因此不同批次的迷迭香发酵物的粘度、pH值和蛋白质、粗多醣、总黄酮及总酚的含量略有不同，但是在上述范围内。
实施例二、评估迷迭香发酵物的迷迭香酸含量
以上述迷迭香发酵物做为实验样本，并以未发酵的基质(7g的迷迭香粉末及300mL的水的混合)经灭菌(以121℃、1.1kg/cm2达15分钟)及离心(4500rpm、20分钟)后制得的迷迭香萃取物做为对照样本。将实验样本及对照样本以甲醇配制为10重量％的溶液，进行超音波处理后，再利用0.45μm滤膜过滤。
关于迷迭香酸含量的检测，请参阅哈丽娅·吐尔逊麦麦提、热娜古丽·艾则孜、米热阿依·亚力昆及买吾拉尼江·依孜布拉于2020年发表在《食品安全质量检测学报》第11卷第4期第1215页至第1219页的〈高效液相色谱法测定山茱萸果实水提液中迷迭香酸的含量〉一文，简述如下：利用市售的硅胶层析管柱(商品名：Shim-pack GIST C18，货号：227-30017-08，生产商：岛津科学仪器股份有限公司，日本京都)进行高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography，HPLC)，其中高效液相色谱法的条件为：流动相A为1.5％醋酸水溶液，流动相B为甲醇，流动相A与流动相B的体积比为60：40，流速为1mL/分钟，检测波长为330nm，且进样量为10μL。
图1A至图1C分别为绘示根据本发明的一实施例的迷迭香酸标准品(图1A)、实验样本(图1B)及对照样本(图1C)的色谱图，其中横轴表示滞留时间，且纵轴表示信号强度。如图1A所示，依照高效液相色谱法的条件，迷迭香酸的滞留时间为15.530分钟，检测极限为大于或等于3.516ng，且标准曲线方程式如式I所示：
Y＝29806X+4431.5，R2＝0.9992 (I)，
其中X为迷迭香酸含量，且Y为波峰面积(peak area)。
如图1B所示，实验样本的迷迭香酸的滞留时间为15.875分钟，且经式I的换算，实验样本的迷迭香酸含量为35.879μg/mL。如图1C所示，对照样本的迷迭香酸的滞留时间为15.822分钟，且经式I的换算，对照样本的迷迭香酸含量为20.564μg/mL。由此可知，实验样本的迷迭香酸含量比对照样本多75％，证明迷迭香经酿酒酵母C-LYE-6的发酵步骤后，可提高迷迭香酸含量。
实施例三、检测迷迭香发酵物的谷胱甘肽含量
分别取25mL的实验样本及对照样本，加入25mL的甲醇后，进行超音波萃取处理、离心处理及过滤处理，以获得谷胱甘肽萃取液，其中离心处理的条件为3000rpm、20分钟，且过滤处理是以孔洞为0.45μm的薄膜进行。
关于谷胱甘肽的检测，请参阅沈庆钦、刘军、张长军、贾可、刘杰及苏芳发表于2014年发表在《食品安全质量检测学报》第5期第50页至第53页的〈高效液相色谱法测定注射用法罗培南钠中还原型谷胱甘肽的含量〉一文，简述如下：利用市售的硅胶层析管柱(商品名：Shim-pack GIST C18，货号：227-30017-08，生产商：岛津科学仪器股份有限公司，日本京都)进行高效液相色谱法，其中高效液相色谱法的条件为：流动相A为含有2g/L辛烷磺酸钠及5.4g/L磷酸二氢钾的水溶液，流动相B为甲醇，流动相A与流动相B的体积比为90：10，流速为1mL/分钟，检测波长为210nm，且进样量为10μL。
图2A至图2C分别为绘示根据本发明的一实施例的谷胱甘肽标准品(图2A)、实验样本(图2B)及对照样本(图2C)的色谱图，其中横轴表示滞留时间，且纵轴表示信号强度。如图2A所示，依照上述条件进行高效液相色谱法，谷胱甘肽的滞留时间为2.159分钟，检测极限为大于或等于3.860ng，且标准曲线方程式如式II所示：
Y＝12153X+46884，R2＝0.9992 (II)，
其中X为谷胱甘肽含量，且Y为波峰面积。
如图2B所示，实验样本的滞留时间为2.209分钟，且经式II的换算，谷胱甘肽含量为25.661μg/mL。如图2C所示，对照样本的滞留时间为2.195分钟，且经式II的换算，谷胱甘肽含量为14.277μg/mL。由此可知，实验样本的谷胱甘肽含量比对照样本多80％，证明迷迭香经酿酒酵母C-LYE-6的发酵步骤后，可提高谷胱甘肽含量。
实施例四、评估迷迭香发酵物的控油功效
在受试者(3人)的额头上分别设定3cm×3cm的受试区域及对照区域，并利用市售的皮脂检测仪器(型号：Sebumeter SM815，生产商：德国Courage+Khazaka electronicGmbH公司)检测受试区域及对照区域每单位面积的皮脂含量(单位为μg/cm2)。接着，将迷迭香发酵物每日涂抹于受试区域的皮肤上(使用量：2.0±0.1mg/cm2)达7天，但不在对照区域的皮肤进行任何处理。经3天、6天及7天后，再次检测对照区域及受试区域的皮脂含量。
图3是绘示根据本发明的一实施例的受试区域的皮肤涂抹迷迭香发酵物不同时间后的皮脂含量的柱形图，其中横轴表示检测的时间，纵轴表示皮脂含量(单位为μg/cm2)，且直条301及直条303分别表示受试区域及对照区域。如图3所示，受试区域的皮肤涂抹迷迭香发酵物后，皮脂含量随时间下降；反之，对照区域的皮肤的皮脂含量随时间上升。详细而言，在第3天，受试者的受试区域的皮脂含量(实际数值为447，见直条301)与对照区域的皮脂含量(实际数值为446，见直条303)差异不大，但在第7天，受试区域的皮脂含量(实际数值为402，见直条301)为低于对照区域的皮脂含量(实际数值为460，见直条303)，证明迷迭香发酵物对皮肤具控油的功效。
实施例五、评估迷迭香发酵物的祛红功效
在受试者具有红血丝症状的患部皮肤上设定受试区域(3cm×3cm)，并利用市售皮肤光学检测仪器(品名：智慧3D肌肤检测仪Antera 3D；制造商：都柏林爱尔兰Miravex)对受试区域的皮肤表面进行影像分析，以获得红血丝平均值。接着，将迷迭香发酵物每日涂抹一次于受试区域的皮肤上(使用量为2.0±1.0mg/cm2)达7天，并于迷迭香发酵物涂抹7天后，再次检测受试区域的皮肤的平均红血丝值。
图4A至图4J是分别显示根据本发明的一实施例的皮肤涂抹迷迭香发酵物不同天数后或皮肤未涂抹迷迭香发酵物的受试区域照片，其中圆圈401、圆圈403、圆圈405、圆圈407、圆圈409、圆圈411、圆圈413、圆圈415、圆圈417及圆圈419代表实际测量区域。
图4A及图4B分别为受试者1皮肤在涂抹迷迭香发酵物7天后(图4A)及未涂抹迷迭香发酵物(图4B)的受试区域照片，其中图4A的圆圈401内皮肤的红血丝平均值为1.322，且图4B的圆圈403内皮肤的红血丝平均值为1.465。图4C及图4D分别为受试者2皮肤在涂抹迷迭香发酵物7天后(图4C)及未涂抹迷迭香发酵物(图4D)的受试区域照片，其中图4C的圆圈405内皮肤的红血丝平均值为1.220，且图4D的圆圈407内皮肤的红血丝平均值为1.430。图4E及图4F分别为受试者3皮肤在涂抹迷迭香发酵物7天后(图4E)及未涂抹迷迭香发酵物(图4F)的受试区域照片，其中图4E的圆圈409内皮肤的红血丝平均值为1.167，且图4F的圆圈411内皮肤的红血丝平均值为1.283。图4G及图4H分别为受试者4皮肤在涂抹迷迭香发酵物7天后(图4G)及未涂抹迷迭香发酵物(图4H)的受试区域照片，其中图4G的圆圈413内皮肤的红血丝平均值为0.933，且图4H的圆圈415内皮肤的红血丝平均值为1.023。图4I及图4J分别为受试者5皮肤在涂抹迷迭香发酵物7天后(图4I)及未涂抹迷迭香发酵物(图4J)的受试区域照片，其中图4I的圆圈417内皮肤的红血丝平均值为1.298，且图4J的圆圈419内皮肤的红血丝平均值为1.372。由此可知，迷迭香发酵物持续涂抹皮肤7天后，可改善红血丝症状。
图5是绘示根据本发明一的实施例的受试者皮肤未涂抹迷迭香发酵物及涂抹迷迭香发酵物7天后的红血丝平均值的折线图，其中横轴由左至右分别表示皮肤未涂抹及涂抹后7天，且纵轴表示红血丝平均值。如图5所示，皮肤涂抹迷迭香发酵物7天后，受试区域的红血丝平均值下降9.54％，证实皮肤持续使用迷迭香发酵物7天可有效改善红血丝症状，即迷迭香发酵物对皮肤具祛红的功效。
实施例六、评估迷迭香发酵物的低致敏性
在皮肤上进行密封式贴片试验(closed patch test)，评估迷迭香发酵物的低致敏性。选择适合的受试者30人，其中受试者年龄是在18岁至60岁间随机选择。首先，利用无刺激性的胶带于每位受试者的背部固定2个斑试器达24小时，使斑试器的鳍状室(fin-chamber)中的滤纸片贴附于受试者的背部皮肤上，期间不移除斑试器，也避免斑试器碰到水。以滤纸片含有0.20mL至0.25mL的迷迭香发酵物做为实验组，以滤纸片含有0.20mL至0.25mL的蒸馏水做为控制组。经24小时后，取下斑试器，并分别于0.5小时、24小时及48小时后观察斑试器下的皮肤(以下称为受试区域)及受试区域周围的皮肤是否出现红斑、浸润、水肿、丘疹及/或疱疹等症状。
将结果记录于表1中，其中图号“-”表示皮肤为阴性，即皮肤没有出现红斑、浸润、水肿、丘疹及/或疱疹等症状，“±”表示可疑反应，即受试区域的皮肤出现轻微的红斑，“+”表示弱阳性反应(也称为红斑反应)，即受试区域的皮肤出现红斑、浸润、水肿及/或丘疹，“++”表示强阳性反应(也称为疱疹反应)，即受试区域的皮肤出现红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹，且受试区域周围的皮肤也出现上述疱疹反应的症状，“+++”表示皮肤出现极强阳性反应(也称为融合性疱疹反应)，即受试区域的皮肤出现明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹，且受试区域周围的皮肤也出现上述融合性疱疹反应(n＝30)。
表1
如表1所示，在取下斑试器后0.5小时、24小时或48小时后，受试者在受试区域及其周围的皮肤都呈阴性，表示无红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹及融合性疱疹等反应，显示迷迭香发酵物对皮肤具低致敏性。
综言之，上述特定部位的迷迭香、特定菌株的酵母菌、特定的混合比例、特定的工艺或特定的评估方法仅用于例示说明本发明的迷迭香发酵物、含此的具控油及祛红功效的皮肤外用组成物及其用途。然而，本领域技术人员应可理解，在不脱离本发明的精神及范围内，其他的迷迭香部位、其他的酵母菌菌株、其他混合比例以及其他的工艺或其他的评估方法也可用于迷迭香发酵物、含此的具控油及祛红功效的皮肤外用组成物及其用途，并不限于上述。举例而言，在不影响迷迭香发酵物的控油及祛红功效的前提下，也可使用其他的迷迭香部位、其他的酵母菌菌株或其他混合比例，以获得迷迭香发酵物。
由上述实施例可知，本发明迷迭香发酵物、含此的具控油及祛红功效的皮肤外用组成物及其用途，其优点在使用酵母菌对迷迭香进行发酵步骤，不仅可保留及/或产生皮肤可吸收且对皮肤有益的成分(如：迷迭香酸及谷胱甘肽)，且迷迭香发酵物对皮肤具控油及祛红功效，而可应用于皮肤外用组成物。
虽然本发明已以数个特定实施例揭露如上，但可对前述揭露内容进行各种润饰、各种更动及替换，而且应可理解的是，在不脱离本发明的精神和范围内，某些情况将采用本发明实施例的某些特征但不对应使用其他特征。因此，本发明的精神和权利要求书不应限于以上例示实施例所述。
【符号说明】
301,303:直条
401,403,405,407,409,411,413,415,417,419:圆圈。
【生物材料保藏】
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)C-LYE-6是于2021年03月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)(地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编号：100101)，且保藏编号为CGMCC No.22020。
Claims (10)
1.一种迷迭香发酵物，其特征在于，包含30μg/mL至50μg/mL的迷迭香酸及/或20μg/mL至40μg/mL的谷胱甘肽，其中该迷迭香发酵物对发酵基质进行发酵步骤而制得，该发酵基质由迷迭香(Salvia rosmarinus)的叶部及/或茎部及水所组成，该发酵步骤利用酵母菌于20℃至50℃的温度进行10小时至50小时，且该酵母菌是于2021年03月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，且保藏编号为CGMCC No.22020的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)C-LYE-6。
2.根据权利要求1所述的迷迭香发酵物，其特征在于，还包含1.0mg/mL至5.0mg/mL的蛋白质、0.5mg/mL至5.0mg/mL的粗多醣、1.0mg/mL至10.0mg/mL的总黄酮及/或1.0mg/mL至8.0mg/mL的总酚，该迷迭香发酵物的pH值为4.5至6.8，且该迷迭香发酵物的粘度为10厘泊(cP)至15cP。
3.根据权利要求1所述的迷迭香发酵物，其特征在于，其中该发酵基质的该迷迭香及该水的重量体积比(g:mL)为2～10：100～300。
4.根据权利要求1所述的迷迭香发酵物，其特征在于，其中该酵母菌的菌体浓度为105CFU/mL至108CFU/mL。
5.根据权利要求1所述的迷迭香发酵物，其特征在于，其中该发酵基质的该迷迭香对该酵母菌的重量体积比(g:mL)为2～20：5～10。
6.根据权利要求1所述的迷迭香发酵物，其特征在于，其中该迷迭香发酵物经该发酵步骤及固液分离步骤而制得。
7.根据权利要求6所述的迷迭香发酵物，其特征在于，其中该迷迭香发酵物经该发酵步骤、该固液分离步骤及灭菌步骤而制得。
8.一种具控油功效的皮肤外用组成物，其特征在于，包含根据权利要求1至权利要求7任一项所述的该迷迭香发酵物做为有效成分。
9.一种具祛红功效的皮肤外用组成物，其特征在于，包含根据权利要求1至权利要求7任一项所述的迷迭香发酵物做为有效成分。
10.一种迷迭香发酵物用于制备控油及祛红功效的皮肤外用组成物的用途，其特征在于，其中该皮肤外用组成物包含根据权利要求1至权利要求7任一项所述的迷迭香发酵物做为有效成分。
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2021
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