CN116333079B - 一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用。所述方法包括：S1、将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇‑水溶液中，得到玉米醇溶蛋白溶液；S2、将叶酸加入所述玉米醇溶蛋白溶液中得到混合液，调节所述混合液的pH值至7‑8，进行偶联反应，得到叶酸‑玉米醇溶蛋白溶液；S3、将所述叶酸‑玉米醇溶蛋白溶液进行纯化处理，得到叶酸‑玉米醇溶蛋白。该方法原材料绿色环保，且该方法制备的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白具有显著靶向递送作用。

Description

一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用
技术领域
本公开涉及食品材料技术领域，具体地，涉及一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用。
背景技术
玉米蛋白是一种醇溶蛋白，占玉米总蛋白的35-60％，可作为食品来源的递送载体。玉米醇溶蛋白有α-、β-、γ-和δ-玉米醇溶蛋白四个亚类，其分子量和溶解度不同，α-玉米醇溶蛋白占整个玉米醇溶蛋白的75-85％。由于丙氨酸、亮氨酸和脯氨酸等非极性氨基酸含量高，玉米醇溶蛋白不溶于水，除非使用高浓度的尿素、十二烷基硫酸钠等阴离子表面活性剂或极端碱性条件。玉米蛋白在食品和制药领域具有广泛的应用，从生产用于保鲜的功能性薄膜、用于体内支架的生物相容性材料，到递送不稳定的生物活性物质。疏水分子可以使用简单的去溶剂化过程封装在玉米醇溶蛋白颗粒中。
用配体修饰玉米醇溶蛋白颗粒以达到靶向递送是一种快速发展的策略。叶酸是一种稳定形式的维生素B9，它是蛋白质和核酸合成所必需的必需营养素。叶酸已成为一种有前途的靶向配体，用于将显像剂或治疗剂选择性递送至癌症组织和炎症部位。叶酸受体在许多肿瘤细胞和被激活的巨噬细胞表面过表达，使得叶酸受体经常被作为细胞内靶向递送的目标靶点。与以物理键结合叶酸的玉米醇溶蛋白颗粒相比，叶酸与玉米醇溶蛋白的共价结合增加了过表达叶酸受体的细胞对蛋白颗粒的吸收。虽然大多数细菌不具有叶酸受体，但据报道病原菌对叶酸修饰颗粒的吸收增强，导致颗粒的抗菌效果更好。
叶酸的谷氨酸侧链上的两个羧基和蝶呤部分的氨基可用于修饰载体材料或生物活性物质。玉米醇溶蛋白和叶酸之间的结合通常是通过不同碳二亚胺介导的酰胺化反应来实现的。然而，碳二亚胺是食品中必须避免的危险化学品。因此，亟需一种无毒无害的方法来制备靶向载体。
发明内容
本公开的目的是提供一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用，该方法制备的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白对活性物质进入细菌内部具有显著靶向递送作用。
为了实现上述目的，本公开一方面提供一种用叶酸修饰玉米醇溶蛋白的制备方法，所述方法包括：
S1、将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇-水溶液中，得到玉米醇溶蛋白溶液；
S2、将叶酸加入所述玉米醇溶蛋白溶液中得到混合液，调节所述混合液的pH值至7-8，进行偶联反应，得到叶酸-玉米醇溶蛋白溶液；
S3、将所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液进行纯化处理，得到叶酸-玉米醇溶蛋白。
可选地，步骤S1中，所述乙醇-水溶液的浓度为60-90％；所述玉米醇溶蛋白溶液的浓度为10～30g/L；步骤S2中，相对于每10mL玉米醇溶蛋白溶液，所述叶酸的用量为1～298mg。
可选地，步骤S2中，所述偶联反应包括搅拌处理；所述搅拌处理的条件包括：速率为200～1000r/min，优选为400～600r/min；温度为40～90℃，优选为50～70℃；时间为3～24h，优选为8～12h。
可选地，所述纯化处理包括：S31、向所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液中加入饱和食盐水，析出第一叶酸-玉米醇溶蛋白；S32、将所述第一叶酸-玉米醇溶蛋白进行离心处理得到析出物，对所述析出物进行清洗处理。
可选地，所述离心处理的条件包括速度为3000～11000r/min，优选为7000～10000r/min；温度为0～30℃，优选为0～4℃；时间为0.1～1h，优选为0.1～0.5h；所述清洗处理包括使用第一中性缓冲液或第一碱性缓冲液进行第一冲洗后使用去离子水进行第二冲洗；可选地，所述第一中性缓冲液选自磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液中的至少一种，所述第一碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠-碳酸氢钠中的至少一种。
可选地，所述纯化处理包括：将所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液放入透析袋中与透析液接触；可选地，所述透析使用的透析袋的分子量小于19kDa；所述透析液包括第二中性缓冲液或第二碱性缓冲液。
可选地，所述第二中性缓冲液选自磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾-磷酸氢二钾中的至少一种；所述第二碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠-碳酸氢钠中的至少一种。
本公开另一方面提供根据第一方面所述的方法制备的叶酸-玉米醇溶蛋白。
可选地，其中，所述叶酸的含量为0.66～66.52wt％，优选为52.53～66.52wt％；玉米醇溶蛋白的含量为33.48～99.34wt％，优选为33.48～47.47wt％；所述叶酸-玉米醇溶蛋白中一级氨基的含量为11.0～13.9μM/g，优选为11.0～12.6μM/g。
本公开再一方面提供前述的方法制备的叶酸-玉米醇溶蛋白或前述的叶酸-玉米醇溶蛋白在递送活性物质进入细菌内部中的应用。
通过上述技术方案，本公开提供一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用，本公开的方法和由本公开的方法制备得到的用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白具备以下优点：(1)本公开的方法简单，实验条件宽泛，且在制备过程中涉及的原材料绿色安全且经济易得，可以作为食品级材料直接使用；(2)本公开的用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白对活性物质在大肠杆菌中的递送效果较好。
本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
图1是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白中叶酸含量的情况图。
图2是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白中一级氨基含量情况图。
图3是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白的红外光谱图。
图4是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白的核磁氢谱图。
图5是图4的局部放大图。
图6是图4的局部放大图。
图7是图4的局部放大图。
图8是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白颗粒进入大肠杆菌中的比率。
图9是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白颗粒递送活性物质柑橘精油的数量和效率。
具体实施方式
以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
本公开一方面提供一种用叶酸修饰玉米醇溶蛋白的制备方法，所述方法包括：
S1、将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇-水溶液中，得到玉米醇溶蛋白溶液；
S2、将叶酸加入所述玉米醇溶蛋白溶液中得到混合液，调节所述混合液的pH值至7-8，进行偶联反应，得到叶酸-玉米醇溶蛋白溶液；
S3、将所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液进行纯化处理，得到叶酸-玉米醇溶蛋白。
本公开中，使用具有多个羧基残基的无毒化合物进行植物蛋白的碱催化湿法交联是一种安全的食品级交联技术。该方法可以用于交联几种类型的蛋白质，包括玉米醇溶蛋白。它能够提高玉米醇溶蛋白纤维的强度和玉米醇溶蛋白薄膜的机械性能，解决了在去溶剂化之前通过柠檬酸(该柠檬酸为一种三元羧酸)对玉米醇溶蛋白分子的交联会影响随后去溶剂化的玉米醇溶蛋白颗粒的包封效率和玻璃化转变温度的问题。本公开采用碱催化湿法交联，该方法中采用的原材料绿色环保且经济易得，这一方面降低了用叶酸修饰玉米醇溶蛋白的制备成本；另一方面该方法制得的用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白是一种无毒无害的靶向载体，可以作为食品级材料直接使用。且利用本公开的制备方法得到的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白对活性物质进入细菌内部具有靶向递送作用。
在本公开的一种具体实施方式中，步骤S1中，所述乙醇-水溶液的浓度为60-90％；所述玉米醇溶蛋白溶液的浓度为10～30g/L；步骤S2中，相对于每10mL玉米醇溶蛋白溶液，所述叶酸的用量为1～298mg，优选为166～298mg；例如，相对于每10mL玉米醇溶蛋白溶液，所述叶酸的用量可以为1mg、2mg、3mg、7mg、33mg、66mg、166mg或298mg，或者为它们之间任意的数值。
在上述实施方式中，通过控制叶酸的用量在上述实施方式的范围内，得到的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白对活性物质进入细菌内部具有更显著靶向递送作用。
在本公开的一种具体实施方式中，所述乙醇水溶液的浓度为60-90％；所述玉米醇溶蛋白溶液的浓度为10～30g/L。
在本公开的一种具体实施方式中，步骤S2中，所述偶联反应包括搅拌处理；所述搅拌处理的条件包括：速率为200～1000r/min，优选为400～600r/min；温度为40～90℃，优选为50～70℃；时间为3～24h，优选为8～12h。
本公开中，通过优选搅拌速率、搅拌温度和搅拌时间，能够进一步促进偶联反应的进行，提高叶酸的偶联度。“搅拌处理”可以采用本领域常规的装置和方法，在此不再赘述。
根据本公开，所述纯化的方法可以包括析出法或透析法，也可以为本公开中常规的纯化方法。在本公开的一种优选具体是实施方式中，所述纯化处理可以包括析出法，具体包括：S31、向所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液中加入饱和食盐水，析出第一叶酸-玉米醇溶蛋白；S32、将所述第一叶酸-玉米醇溶蛋白进行离心处理得到析出物，对所述析出物进行清洗处理。
在本公开的一种具体是实施方式中，所述离心处理的条件包括速度为3000～11000r/min，优选为7000～10000r/min；温度为0～30℃，优选为0～4℃；时间为0.1～1h，优选为0.1～0.5h；“离心处理”可以采用本领域常规的装置和方法，在此不再赘述。所述清洗处理包括使用第一中性缓冲液或第一碱性缓冲液进行第一冲洗后使用去离子水进行第二冲洗；可选地，所述第一中性缓冲液选自磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液中的至少一种，所述第一碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠-碳酸氢钠中的至少一种。
在本公开的一种优选具体是实施方式中，所述纯化处理可以包括透析法，具体包括：将所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液放入透析袋中与透析液接触；可选地，所述透析使用的透析袋的分子量小于19kDa；所述透析液包括第二中性缓冲液或第二碱性缓冲液。
在上述实施方式中，所述第二中性缓冲液选自磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾-磷酸氢二钾中的至少一种；所述第二碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠-碳酸氢钠中的至少一种。
本公开另一方面提供根据第一方面所述的方法制备的叶酸-玉米醇溶蛋白。
可选地，其中，所述叶酸的含量为0.66～66.52wt％，优选为52.53～66.52wt％；玉米醇溶蛋白的含量为33.48～99.34wt％，优选为33.48～47.47wt％；所述叶酸-玉米醇溶蛋白中一级氨基的含量为11.0～13.9μM/g，优选为11.0～12.6μM/g。
本公开中，所述的叶酸-玉米醇溶蛋白的偶联度较高；玉米醇溶蛋白的氨基与叶酸的羧基发生了酰胺化反应，其中的一级氨基含量较低。
本公开再一方面提供前述的方法制备的叶酸-玉米醇溶蛋白或前述的叶酸-玉米醇溶蛋白在递送活性物质进入细菌内部中的应用。
在本公开中，将叶酸-玉米醇溶蛋白制备成蛋白纳米颗粒，该颗粒能够在大肠杆菌中较好的递送活性物质。该活性物质可以为柑橘精油、牛至精油、百里香精油和肉桂精油，优选为柑橘精油。
下面通过实施例来进一步说明本公开，但是本公开并不因此而受到任何限制。
以下实施例中，如无特殊说明，所使用的原料均为商购产品。
本公开中离心处理采用常规的离心机。
实施例1
本实施例用于说明叶酸修饰的玉米醇溶蛋白的制备。
1.5g的玉米醇溶蛋白溶解在100mL、85％乙醇-水溶液中，得到玉米醇溶蛋白溶液，该玉米醇溶蛋白溶液准备8份，每份取10mL，分别向10mL的该溶液中加入1、2、3、7、33、66、166或298mg的叶酸，用浓度为1mol/L的NaOH调节溶液的pH至7.5左右，该溶液在60℃下以400r/min的速率搅拌9h。向上述与叶酸加热搅拌后的玉米醇溶蛋白溶液加入500mL饱和食盐水，使玉米醇溶蛋白从溶液中析出，析出的玉米醇溶蛋白在0℃以10000r/min的速率离心0.1h，再先后经pH为7.5的浓度为10mmol/L的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液和去离子水清洗，将清洗后的蛋白经过冷冻干燥除去水分待用，得到8份冷冻干燥的样品蛋白。
实施例2
本实施例用于说明将实施例1中的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白制备成纳米颗粒。
1.5g的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白溶解在100mL、85％乙醇-水溶液中，在搅拌过程中加入400mL、pH为7.5的10mM磷酸盐缓冲液，蛋白析出溶液自组装形成纳米颗粒分散液；分散液在4L、pH为7.5的10mM磷酸盐缓冲液中透析20小时除去乙醇，得到8份叶酸修饰的玉米醇溶蛋白纳米颗粒分散液。
实施例3
本实施例用于说明将实施例1中的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白制备成包埋活性物质的纳米颗粒(本实施例中活性物质为柑橘精油)。
1.5g的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白和300mg柑橘精油溶解在100mL、85％乙醇-水溶液中，在搅拌过程中加入400mL、pH为7.5的10mM磷酸盐缓冲液，蛋白析出溶液自组装形成纳米颗粒分散液，柑橘精油被包埋进纳米颗粒中；分散液在4L、pH为7.5的10mM磷酸盐缓冲液中透析20小时除去乙醇和未包埋的柑橘精油，得到8份包埋柑橘精油的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白纳米颗粒分散液。
测试例1
本测试例用于说明叶酸成功修饰玉米醇溶蛋白。
将8份(每份0.005g)实施例1中的样品蛋白分别溶解于1mL、50％乙腈-水溶液，用紫外分光光度计测定该溶液在358nm处的吸收度，叶酸在358nm处具有特征紫外吸收，根据叶酸在358nm处的特征紫外吸收系数计算出叶酸在样品蛋白中的含量，具体结果见图1。
由图1可知本公开实施例1中样品蛋白中偶联的叶酸最高占样品蛋白总量的9.1％(摩尔比)。
测试例2
本测试例用于说明样品蛋白中的一级氨基的含量。
将8份(每份0.01g)实施例1中的样品蛋白分别溶解于1mL、85％乙醇-水溶液，用OPA(邻苯二甲醛)方法测定样品蛋白中一级氨基含量，具体结果见图2。
由图2可知本发明实施例1中样品蛋白中随着叶酸的添加量增高，一级氨基含量明显下降，这是由于玉米醇溶蛋白的氨基与叶酸的羧基发生了酰胺化反应。
测试例3
本测试例为样品蛋白的红外表征。
将8份(每份0.01g)实施例1中的样品蛋白分别与0.3g溴化钾混合并压制成片。使用傅里叶变换红外光谱仪收集样品的红外光谱。
由图3可知本发明实施例1中样品蛋白随叶酸的偶联度增加，在1362cm-1处的吸收增加，该处是叶酸喋呤环上羟基的特征吸收峰。
测试例4
本测试例为样品蛋白的核磁表征。
称取叶酸添加量为7mg和298mg的实施例1中的样品蛋白0.05g，分别溶解于1mL、53％氘代乙腈/重水中，在400MHz Bruker AV400光谱仪上获得光；其中，叶酸添加量为0mg为空白对照。
由图4-7可知本发明实施例1中样品蛋白随叶酸的偶联度增加，在化学位移为4.20ppm、1.95ppm和1.12ppm附近都有峰形的改变。
测试例5
本测试例用于说明叶酸修饰的玉米醇溶蛋白颗粒进入细菌的能力。
通过荧光标记评估叶酸修饰对玉米醇溶蛋白颗粒进入细菌能力的影响。本测试例中香豆素-6用于标记玉米醇溶蛋白。
将8份(每份0.15g)实施例2中的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白纳米颗粒分散液与0.001g香豆素-6共溶解在10mL85％乙醇水溶液中，然后将pH为7.5的10mM磷酸盐缓冲液加入溶液中以得到香豆素-6标记的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白颗粒；香豆素-6标记的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白颗粒经透析除去未参与标记的香豆素-6；随后，将大肠杆菌在Luria-Bertani肉汤中与香豆素-6标记的玉米醇溶蛋白颗粒在37℃共同培养1小时；然后将大肠杆菌悬浮液离心并用10mM磷酸盐缓冲盐水(pH 7.2-7.4)洗涤3次；使用酶标仪在457nm的激发波长和501nm的发射波长下测量大肠杆菌的荧光强度。根据大肠杆菌的荧光强度计算大肠杆菌对纳米颗粒的吸收率。
由图8可知本发明实施例2中使用叶酸修饰后的玉米醇溶蛋白制备的纳米颗粒进入细菌内部的能力具有显著的提升。
测试例6
本测试例用于说明叶酸修饰的玉米醇溶蛋白颗粒向细菌的递送活性物质的能力。
将实施例3中的包埋柑橘精油的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白纳米颗粒分散液与大肠杆菌一起培养1.5小时；然后将大肠杆菌悬浮液离心并用磷酸盐缓冲盐水(10mM，pH 7.2-7.4)洗涤3次；将收集的大肠杆菌细胞与乙酸乙酯混合并超声处理10分钟；通过气相色谱法测量乙酸乙酯提取物中柑橘精油的含量，并根据加载到玉米醇溶蛋白颗粒中的初始活性物质含量计算柑橘精油被递送到细菌细胞中的比例。
由图9可知本发明实施例3中使用叶酸修饰后的玉米醇溶蛋白制备的纳米颗粒递送柑橘精油进入细菌内部的能力明显增强。
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (12)

1.一种用叶酸修饰玉米醇溶蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
S1、将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇-水溶液中，得到玉米醇溶蛋白溶液；
S2、将叶酸加入所述玉米醇溶蛋白溶液中得到混合液，调节所述混合液的pH值至7-8，进行偶联反应，得到叶酸-玉米醇溶蛋白溶液；
S3、将所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液进行纯化处理，得到叶酸-玉米醇溶蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S1中，所述乙醇-水溶液的浓度为60-90%；所述玉米醇溶蛋白溶液的浓度为10~30g/L；
步骤S2中，相对于每10mL玉米醇溶蛋白溶液，所述叶酸的用量为1~298mg。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S2中，所述偶联反应包括搅拌处理；所述搅拌处理的条件包括：速率为200~1000 r/min；温度为40~90 ℃；时间为3~24 h。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述搅拌处理的条件包括：速率为400~600 r/min；温度为50~70 ℃；时间为8~12 h。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述纯化处理包括：
S31、向所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液中加入饱和食盐水，析出第一叶酸-玉米醇溶蛋白；
S32、将所述第一叶酸-玉米醇溶蛋白进行离心处理得到析出物，对所述析出物进行清洗处理。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述离心处理的条件包括速度为3000~11000 r/min；温度为0~30 ℃；时间为0.1~1 h；
所述清洗处理包括使用第一中性缓冲液或第一碱性缓冲液进行第一冲洗后使用去离子水进行第二冲洗；
所述第一中性缓冲液选自磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液中的至少一种，所述第一碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠-碳酸氢钠中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述离心处理的条件包括速度为7000~10000 r/min；温度为0~4 ℃；时间为0.1~0.5 h。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述纯化处理包括：将所述叶酸-玉米醇溶蛋白溶液放入透析袋中与透析液接触；
所述透析使用的透析袋的分子量小于19kDa；所述透析液包括第二中性缓冲液或第二碱性缓冲液；
所述第二中性缓冲液选自磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾-磷酸氢二钾中的至少一种；
所述第二碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠-碳酸氢钠中的至少一种。
9.根据权利要求1~8中任意一项所述的方法制备的叶酸-玉米醇溶蛋白。
10.根据权利要求9所述的叶酸-玉米醇溶蛋白，其中，所述叶酸的含量为0.66~66.52wt%；玉米醇溶蛋白的含量为33.48~99.34 wt%；
所述叶酸-玉米醇溶蛋白中一级氨基的含量为11.0~13.9 μM/g。
11.根据权利要求10所述的叶酸-玉米醇溶蛋白，其中，所述叶酸的含量为52.53~66.52wt%；玉米醇溶蛋白的含量为33.48~47.47 wt%；
所述叶酸-玉米醇溶蛋白中一级氨基的含量为11.0~12.6 μM/g。
12.权利要求1~8中任意一项所述的方法制备的叶酸-玉米醇溶蛋白或权利要求9~11中任意一项所述的叶酸-玉米醇溶蛋白在递送活性物质进入大肠杆菌内部中的应用。
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