CN108938598A - 琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法。该方法是将玉米醇溶蛋白溶于二甲基亚砜或者乙醇水溶液中，调节溶液pH至10～11，再与琥珀酸酐混合，在40～45℃温度下反应1～2h，反应过程中保持溶液pH为碱性，得到琥珀酰化玉米醇溶蛋白液，反应结束后置于透析袋中透析、冷冻干燥成粉末状固体，将疏水性药物与冻干的琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶于乙醇水溶液；搅拌下注入盐酸水溶液中，稳定后离心去上清，得载药颗粒。本发明所制备的载药球形度高，分散性好，载药颗粒粒径分布窄，大小均一，在生理pH环境下稳定性较未改性玉米醇溶蛋白颗粒显著提升，缓释效果好，可用于口服、吸入式给药或制备成混悬剂供注射使用。

Description

琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白，及琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法。
背景技术
水溶性差是限制许多传统化疗小分子药物在临床应用的主要问题之一。近年来，以纳米技术为基础的药物输送系统为克服药物水溶性差，改善疏水性药物在生物体内的药代动力学提供了一个新的策略；纳米药物输送系统通过药物载体实现给药过程，具有缓释、控释和靶向释放等优点。作为药物输送系统的重要组成部分，药物载体材料的选择极其关键，要求载体材料具有良好的生物相容性和生物可降解性，且不影响药物的药理作用。姜黄素、吲哚美辛及羟基喜树碱这几类药物为疏水性药物，常用的给药方式为静脉注射，在治疗过程中，存在体内药物浓度过高、吸收性差会导致严重副反应的特点；目前这几类药物输送系统所用的材料主要是聚乳酸等合成高分子和亲水性天然大分子，前者不利于在生物体内的降解和吸收,后者不利于药物的持续释放。玉米醇溶蛋白(全称玉米醇溶贮藏蛋白)作为一种疏水性天然植物大分子，来源广泛，无毒，非免疫原性，且具有良好的生物相容性及生物可降解性，是少数被FDA允许口服的疏水性生物高分子(Irache J M,Gonzáleznavarro CJ.Zein nanoparticles as vehicles for oral delivery purposes.Nanomedicine,2017,12(11):1209‐1211.)。
玉米醇溶蛋白的氨基酸组成较为独特，非极性氨基酸的比例超过50％。在其组成的影响下，玉米醇溶蛋白能在一定条件下自组装形成稳定的内“疏”外“亲”的密实结构，包埋各种物质，如多糖、基因片段、蛋白质、金属纳米颗粒、量子点、疏水性药物等。再者，玉米醇溶蛋白分子链上带有大量可反应的官能团(如‐SH、‐COOH、‐NH2以及‐OH)。玉米醇溶蛋白可根据这些基团为化学反应位点有针对性地修饰改性，为其适应复杂多变的人体环境提供可能性。因此，无论从来源，成本，安全性，还是从其本身的理化性质、应用拓展性等方面进行考量，玉米醇溶蛋白都是一个优势的药物载体材料。
玉米醇溶蛋白作为一种醇溶性蛋白，可通过相分离法快速形成小球，该法得到的产品粒径较大，分布宽，且产品在生理条件下Zeta电位绝对值小，容易团聚沉淀，导致药物过早释放或释放不出来，影响药物在体内的释放和传递，在药物输送上的应用有很大局限性(Shukla R,Cheryan M.Zein:the industrial protein from corn.Industrial Crops&Products,2001,13(3):171‐192.)，研究人员经常使用分散剂来改善玉米蛋白的分散性，不仅影响了药物分子的理化性质和生物利用度，也存在着溶剂残留等问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的问题，有效避免玉米蛋白载药颗粒分散过程中易发生聚集，药物释放过快等问题，提供一种载药效率高，分散性好，大小均匀，在生理条件下，等电点位于pH 4.5～5，Zeta电位达到‐32.4～‐49.5mV，释放50％质量药物的时间大于48h，尤其适用于负载姜黄素、吲哚美辛或羟基喜树碱等疏水性药物的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白颗粒的制备方法。
本发明目的通过如下技术方案实现：
琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，包括如下步骤：
1)琥珀酸酐与玉米醇溶蛋白的酰化反应：将玉米醇溶蛋白溶于二甲基亚砜或者乙醇水溶液中，调节溶液pH至10～11，再与琥珀酸酐混合，在40～45℃温度下反应1～2h，反应过程中保持溶液pH为碱性，得到琥珀酰化玉米醇溶蛋白液；所述的玉米醇溶蛋白与琥珀酸酐质量比为1:1～1:5；
2)琥珀酰化玉米醇溶蛋白的纯化：调节琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶液的pH至6.5～7.0，转移至透析袋中透析，将透析袋中的保留液离心洗涤，冻干，得琥珀酰化玉米醇溶蛋白；
3)载药颗粒的制备：将疏水性药物与冻干的琥珀酰化玉米醇溶蛋白按质量比1:1～1:10，溶于乙醇水溶液；搅拌下注入盐酸水溶液中，稳定后离心去上清，得载药颗粒；所述疏水性药物为姜黄素、吲哚美辛或羟基喜树碱。
为进一步实现本发明目的，优选地，步骤1)中，所述的玉米醇溶蛋白的蛋白纯度≥97％。
优选地，步骤1)中，所述的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为50～95％。
优选地，步骤1)和步骤2)中pH值都采用HCl溶液或NaOH溶液调节。
优选地，所述的HCl溶液的浓度为0.1mol/L；所述的NaOH溶液是浓度为0.1mol/L。
优选地，步骤2)中，所述透析的时间为1～2天；所述透析袋的截留分子量为8000～14000KD。
优选地，步骤2)中，所述离心洗涤的次数为3次以上。
优选地，步骤3)中，所述的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70～80％。
优选地，步骤3)中，所述的盐酸水溶液的pH为2.5～4.5；用量为疏水性药物、冻干的琥珀酰化玉米醇溶蛋白以及乙醇水溶液质量和的5～20倍。
优选地，步骤3)中，所述的搅拌为磁力搅拌，所述的稳定的时间为1～2h。
本发明中溶液皆用去离子水配置。
相对于现有技术，本发明具有如下优点：
(1)本发明成功将琥珀酸酐与玉米醇溶蛋白的氨基发生亲核取代反应，显著改善了玉米醇溶蛋白的理化性质，在原蛋白分子中引入了琥珀酰基，增加了颗粒之间的静电排斥力及空间位阻，改性玉米醇溶蛋白载药颗粒在生理条件下(pH＝7)的Zeta电势远高于玉米醇溶蛋白载药颗粒，稳定性显著提高，避免了载体材料外分散剂的使用对药物载体物理性质和生物利用度的影响。
(2)本发明制备琥珀酰化玉米醇溶蛋白颗粒，具有载药效率高、大小均匀、分散性好等优势，琥珀酸基团的引入增强了疏水性药物分子与蛋白载材之间的作用力，使得载材释放50％质量疏水药物的时间大于48h。
附图说明
图1为实施例1的琥珀酰化玉米醇溶蛋白的核磁共振氢谱。
图2为实施例1的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒SEM图。
图3为实施例1～3的载药颗粒不同pH下的Zeta电位图。
图4为实施例1的载药颗粒不同pH下的粒径图。
图5为实施例1的载药颗粒的体外药物释放图。
具体实施方式
为更好理解本发明，下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述，但需要说明的是，本发明所要求的保护的范围并不局限于下面实施例所表述的范围。
实施例1
琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，包括如下步骤：
(1)琥珀酸酐与玉米醇溶蛋白的酰化反应：将1g纯度为97％的玉米醇溶蛋白溶于75mL体积分数为70％的乙醇水溶液中，用0.1mol/L的NaOH溶液调节溶液pH至10～11，再加入琥珀酸酐0.2g，在40℃下反应2h，反应过程中保持溶液pH为10～11，得到琥珀酰化玉米醇溶蛋白液；
(2)琥珀酰化玉米醇溶蛋白的纯化：调节琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶液的pH至6.5～7.0，转移至截留分子量为8000～14000KD的透析袋中透析，透析2天，共计换水10次，将透析袋中的保留液以5000转/分的速度离心洗涤3次，冻干，即获得琥珀酰化玉米醇溶蛋白。
(3)载药颗粒的制备：将4mg姜黄素与20mg琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶于1mL 70％乙醇水溶液，在室温下搅拌20min，保证药物与琥珀酰化玉米醇溶蛋白完全溶解；在速度为1000转/分的磁力搅拌下，迅速将其注入19mL pH 4.5的盐酸水溶液中，反应2h，以12000转/分的速度离心20min，去上清，获得载药颗粒。
对实施例1制备的琥珀酰化玉米醇溶蛋白进行核磁共振氢谱分析：分别将琥珀酰化玉米醇溶蛋白(Suc‐Zein)、玉米醇溶蛋白(Zein)与琥珀酸酐(Suc)溶于氘代二甲基亚砜后测量其氢谱(见图1)，发现琥珀酰化玉米醇溶蛋白在化学位移4.00处出现了新峰，该峰为酰胺键上的氢，表明琥珀酸酐成功偶联玉米醇溶蛋白。
对实施例1得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行扫描电子显微镜(SEM)表征，其形貌如图2所示，发现颗粒的球形度较好，基本不黏连、大小均一，平均粒径为597.3±70.12nm；水溶性差、生物利用率差导致姜黄素、吲哚美辛及羟基喜树碱这几类疏水性药物药效低的主要原因，粒径的减小可增大药物的比表面积，增强药物的水溶性和药效。而且，人体内最小的毛细血管内径为4μm，纳米颗粒很容易通过人体的毛细血管，特别是通过非胃肠道途径给药后可以达到在特定组织或靶位释药的目的；实施例1制备得到的纳米载药颗粒可用于制备口服或者作为静脉注射的混悬液纳米载药系统。
对实施例1得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行稳定性(ZetaPotentials)分析如图3所示，琥珀酸酐与玉米蛋白偶联后，琥珀酰基使蛋白颗粒表面的静电作用力增强，琥珀酰化玉米蛋白的等电点较玉米醇溶蛋白往酸性方向移动，从pH 6～7偏移到在pH 4.5～5左右；Zeta电位的数值反映了胶体的稳定性，琥珀酰化玉米醇溶蛋白在生理pH下的Zeta电位为‐32.4mV，与未改性玉米蛋白相比，Zeta电位提高了一倍，说明改性后蛋白质载药颗粒能在生理pH下能稳定存在。
对实施例1得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行不同pH下颗粒稳定性分析如图4所示。与未改性的玉米醇溶蛋白载药颗粒(Zein‐Indo)相比，在pH1～9的区间，琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒粒径基本不发生变化，而未改性的玉米醇溶蛋白载药颗粒在pH6～7的区间粒径明显增大，蛋白颗粒发生团聚粘连。目前疏水性药物输送系统所用的材料主要是聚乳酸等合成高分子和亲水性天然大分子，前者不利于在生物体内的降解和吸收，后者不利于药物的持续释放。在人体生理环境下(pH值处于玉米醇溶蛋白的等电点)，未改性的玉米蛋白颗粒容易团聚沉淀(如图4)，形成几微米的大颗粒，导致负载药物的药效降低，而琥珀酸酐酰化玉米蛋白后，蛋白表面电荷提高及空间位阻增大，避免了颗粒在输送过程中的团聚；载药颗粒粒径在生理pH下基本不发生变化也有利于这几类药物的输送和吸收。
对实施例1得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行载药效率及载药量的测定：载药效率＝(颗粒包封的药物量/添加的药物总量)×100％，载药量＝(颗粒包封的药物量/称取颗粒质量)×100％，其测定方法如下：配制药物姜黄素浓度为0.002～0.01mg/mL等一系列70％乙醇水溶液，采用紫外分光光度计测其在420nm处的最大吸光度，然后经线性拟合后的回归方程为Y＝0.0067X‐0.00006(R2＝0.9995，Y是指吸光值，X是指姜黄素的浓度，mg/mL)，再准确称量实施例1的玉米蛋白颗粒并溶解在70％乙醇水溶液中，超声5min后测量其吸光度，并计算出姜黄素的含量，重复3次，取其平均值；计算出实施例1的姜黄素载药效率为89.1±1.4％，载药量为10.3±0.6％；而未改性的玉米醇溶蛋白载药颗粒的载药效率为80.1±1.2％，载药量为6.26±0.2％；琥珀酰化玉米醇溶蛋白后，琥珀酰化玉米醇溶蛋白负载姜黄素的效率提高了近10％，载药量提高了4％；改性前后的蛋白对药物的载药效率及载药量均有所提高，这可能是因为琥珀酰化玉米蛋白中引入了琥珀酰基，琥珀酰基中的C＝O、N‐H与姜黄素、吲哚美辛及羟基喜树碱中的‐OH、C＝O形成分子间氢键C＝O…H‐O和N‐H…O＝C，增加了药物分子与琥珀酰化玉米蛋白的相互作用；蛋白载体载药量的提高能减少服药次数，如普通制剂服药次数为3天一次，缓释制剂的服药次数为4天或5天一次，可以提高病人服药的顺应性，使用方便。
对实施例1得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行体外药物释放率测定如图5所示。姜黄素原药在12h内的释放量已经达到了80％，经过玉米蛋白包载后的药物具有明显的缓释作用，未改性的玉米蛋白载药颗粒在12h的释放量为59.4％，48h内的释放量为66％，琥珀酰化玉米蛋白载药颗粒在12h的释放量为40.8％，48h内的释放量为45.1％；姜黄素的体外及动物试验表明，姜黄素稳定性差，在体内容易被代谢。口服给药后，最终被吸收的药量仅仅为实际给药量的25％；在静脉注射后，5h内50％以上的药物从胆汁排泄(AnandP,Kunnumakkara A B,Newman R A,et al.Bioavailability of curcumin:problems andpromises.Mol Pharm,2007,4(6):807‐818.)。目前，姜黄素、羟基喜树碱这几类药物制剂主要是通过静脉注射或口服来给药，静脉注射可以让注射药剂在体内达到一个10～48h的长效循环，使药物在血液能维持稳定的浓度；口服药物是要让口服制剂在到达肠道前药物尽量减少释放，一般制剂从口服到肠道的时间为9～12h。由图5可知，未改性玉米蛋白载药颗粒在0～6h存在一定的突释效应，药物释放率超过了50％，这可能会导致静脉注射后体内局部药物浓度在短时间内迅速升高，加快了药物代谢或口服药物后药物未到达治疗部位，药物大部分已经释放出来，使得药物效期缩短。而本实施例改性蛋白载药颗粒在0～48h的释放更加平稳，对药物的延缓释放更加明显，相比于未改性蛋白载药颗粒能有效解决药物代谢过快的问题。
实施例2
琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，包括如下步骤：
(1)琥珀酸酐与玉米醇溶蛋白的酰化反应：将1g纯度为97％的玉米醇溶蛋白溶于75mL体积分数为70％的乙醇水溶液中，用0.1mol/L的NaOH溶液调节溶液pH至10～11，再加入琥珀酸酐0.4g，在40℃下反应2h，反应过程中保持溶液pH为10～11，得到琥珀酰化玉米醇溶蛋白液；
(2)琥珀酰化玉米醇溶蛋白的纯化：调节琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶液的pH至6.5～7.0，转移至截留分子量为8000～14000KD的透析袋中透析，透析2天，共计换水10次，将透析袋中的保留液以5000转/分的速度离心洗涤3次，冻干，即获得琥珀酰化玉米醇溶蛋白。
(3)载药颗粒的制备：将4mg吲哚美辛与20mg琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶于1mL 70％乙醇水溶液，在室温下搅拌20min，保证药物与琥珀酰化玉米醇溶蛋白完全溶解；在速度为1000转/分的磁力搅拌下，迅速将其注入19mL pH 4.5的盐酸水溶液中，反应2h，以12000转/分的速度离心20min，去上清，获得载药颗粒；
对实施例2得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行稳定性(ZetaPotentials)分析如图3所示，发现改性蛋白的等电点较玉米醇溶蛋白往酸性方向移动，从pH 6～7偏移到在pH 4.5～5左右。再者，琥珀酰化玉米醇溶蛋白在生理条件下的Zeta电位为‐48.5mV，说明改性后蛋白质载药颗粒能在生理pH下能稳定存在。
对实施例2得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行载药效率的测定。其中吲哚美辛的标准曲线为Y＝19.85X+0.0018(R2＝0.9995，Y是指吸光值，X是指吲哚美辛的浓度，mg/mL)，最终测得实施例2的吲哚美辛平均载药效率为88.36±1.10％，载药量为9.8±0.7％；未改性蛋白载体的平均载药效率为81.01±1.10％，载药量为7.15±0.1％。
实施例3
琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，包括如下步骤：
(1)琥珀酸酐与玉米醇溶蛋白的酰化反应：将1g纯度为97％的玉米醇溶蛋白溶于75mL体积分数为70％的乙醇水溶液中，用0.1mol/L的NaOH溶液调节溶液pH至10～11，再加入琥珀酸酐1g，在40℃下反应2h，反应过程中保持溶液pH为10～11，得到琥珀酰化玉米醇溶蛋白液；
(2)琥珀酰化玉米醇溶蛋白的纯化：调节琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶液的pH至6.5～7.0，转移至截留分子量为8000～14000KD的透析袋中透析，透析2天，共计换水10次，将透析袋中的保留液以5000转/分的速度离心洗涤3次，冻干，即获得琥珀酰化玉米醇溶蛋白。
(3)载药颗粒的制备：将4mg羟基喜树碱与20mg琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶于1mL70％乙醇水溶液，在室温下搅拌20min，保证药物与琥珀酰化玉米醇溶蛋白完全溶解；在速度为1000转/分的磁力搅拌下，迅速将其注入19mL pH 4.5的盐酸水溶液中，反应2h，以12000转/分的速度离心20min，去上清，获得载药颗粒；
对实施例3得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行稳定性(ZetaPotentials)分析如图3所示，发现改性蛋白的等电点较玉米醇溶蛋白往酸性方向移动，从pH 6～7偏移到在pH 3.5～4左右。再者，琥珀酰化玉米醇溶蛋白在生理条件下的Zeta电位为‐49.5mV，说明改性后蛋白质载药颗粒能在生理pH下能稳定存在。
对实施例3得到的琥珀酰化玉米醇溶蛋白载药颗粒进行载药效率的测定。其中羟基喜树碱的标准曲线为Y＝0.00224X+0.358(R2＝0.999，Y是指吸光值，X是指羟基喜树碱的浓度，ng/mL)。最终测得实施例3的羟基喜树碱平均载药效率为86.01±1.21％，载药量为10.1±0.07％；未改性蛋白载体的平均载药效率为80.3±2.05％，载药量为5.98±0.7％。
实施例2、3的体外药物释放结果与实施例1相似，改性后的蛋白载药颗粒具有更好的缓释药物性能。吲哚美辛的口服制剂在服用存在较强的毒副作用，当血药浓度超过6μg/mL时，胃肠道的毒副反应发生率高达50％；羟基喜树碱作为一种广谱抗癌药，同样存在血药浓度过高时，毒副作用大，体内会发生严重副反应，因此本发明琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒对延长药效，保持血药浓度稳定具有重要的意义。
本行业技术人员应该了解，本发明不受实施例的限制。凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改，等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
1)琥珀酸酐与玉米醇溶蛋白的酰化反应：将玉米醇溶蛋白溶于二甲基亚砜或者乙醇水溶液中，调节溶液pH至10～11，再与琥珀酸酐混合，在40～45℃温度下反应1～2h，反应过程中保持溶液pH为碱性，得到琥珀酰化玉米醇溶蛋白液；所述的玉米醇溶蛋白与琥珀酸酐质量比为1:1～1:5；
2)琥珀酰化玉米醇溶蛋白的纯化：调节琥珀酰化玉米醇溶蛋白溶液的pH至6.5～7.0，转移至透析袋中透析，将透析袋中的保留液离心洗涤，冻干，得琥珀酰化玉米醇溶蛋白；
3)载药颗粒的制备：将疏水性药物与冻干的琥珀酰化玉米醇溶蛋白按质量比1:1～1:10，溶于乙醇水溶液；搅拌下注入盐酸水溶液中，稳定后离心去上清，得载药颗粒；所述疏水性药物为姜黄素、吲哚美辛或羟基喜树碱。
2.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述的玉米醇溶蛋白的蛋白纯度≥97％。
3.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为50～95％。
4.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤1)和步骤2)中pH值都采用HCl溶液或NaOH溶液调节。
5.根据权利要求4所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：所述的HCl溶液的浓度为0.1mol/L；所述的NaOH溶液是浓度为0.1mol/L。
6.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤2)中，所述透析的时间为1～2天；所述透析袋的截留分子量为8000～14000KD。
7.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤2)中，所述离心洗涤的次数为3次以上。
8.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤3)中，所述的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70～80％。
9.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤3)中，所述的盐酸水溶液的pH为2.5～4.5；用量为疏水性药物、冻干的琥珀酰化玉米醇溶蛋白以及乙醇水溶液质量和的5～20倍。
10.根据权利要求1所述的琥珀酸酐改性玉米醇溶蛋白载药颗粒的制备方法，其特征在于：步骤3)中，所述的搅拌为磁力搅拌，所述的稳定的时间为1～2h。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111317135A (zh) * 2020-02-17 2020-06-23 天津科技大学 多酚改性的玉米醇溶蛋白纳米粒子包埋缓释姜黄素的方法
CN113498782A (zh) * 2021-08-03 2021-10-15 惠州市银农科技股份有限公司 基于玉米醇溶蛋白的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐纳米制剂及其制备方法
CN114767653A (zh) * 2022-05-16 2022-07-22 泉州师范学院 一种纤维素-玉米醇溶蛋白基药物传递系统的制备方法
CN114870029A (zh) * 2022-06-02 2022-08-09 平顶山学院 一种羟基喜树碱恶性肿瘤靶向微球及其制备方法与应用
CN115124607A (zh) * 2022-06-27 2022-09-30 上海理工大学 含有氨基酸结构pfp的自组装肽及其制备方法和应用
CN116333079A (zh) * 2023-03-07 2023-06-27 中国农业科学院农产品加工研究所 一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108403662A (zh) * 2018-05-08 2018-08-17 华南理工大学 三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球及制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108403662A (zh) * 2018-05-08 2018-08-17 华南理工大学 三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球及制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALBERTO BERARDI等: "Zein as a Pharmaceutical Excipient in Oral Solid Dosage Forms State of the Art and Future Perspectives", 《AAPS PHARMSCITECH》 *
吴景等: "琥珀酰化对玉米醇溶蛋白消化率的影响", 《食品工业科技》 *
杨敏等: "食品蛋白质的琥珀酰化修饰研究进展", 《食品工业科技》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111317135A (zh) * 2020-02-17 2020-06-23 天津科技大学 多酚改性的玉米醇溶蛋白纳米粒子包埋缓释姜黄素的方法
CN113498782A (zh) * 2021-08-03 2021-10-15 惠州市银农科技股份有限公司 基于玉米醇溶蛋白的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐纳米制剂及其制备方法
CN114767653A (zh) * 2022-05-16 2022-07-22 泉州师范学院 一种纤维素-玉米醇溶蛋白基药物传递系统的制备方法
CN114767653B (zh) * 2022-05-16 2023-12-19 泉州师范学院 一种纤维素-玉米醇溶蛋白基药物传递系统的制备方法
CN114870029A (zh) * 2022-06-02 2022-08-09 平顶山学院 一种羟基喜树碱恶性肿瘤靶向微球及其制备方法与应用
CN115124607A (zh) * 2022-06-27 2022-09-30 上海理工大学 含有氨基酸结构pfp的自组装肽及其制备方法和应用
CN115124607B (zh) * 2022-06-27 2024-02-27 上海理工大学 含有氨基酸结构pfp的自组装肽及其制备方法和应用
CN116333079A (zh) * 2023-03-07 2023-06-27 中国农业科学院农产品加工研究所 一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用
CN116333079B (zh) * 2023-03-07 2023-09-15 中国农业科学院农产品加工研究所 一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用

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