CN116272702A - 一种生物纳米微球及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种生物纳米微球及其制备方法和应用，本发明的生物纳米微球表面基团丰富、微球磁核稳定、粒径小而均一、核酸吸附效率高、微球磁性强、对PCR反应无抑制，且可以实现大规模量产。利用该生物纳米微球进行核酸提取可以获得高纯度和丰度的待测核酸，在洗脱前还可以直接用于PCR扩增。
Description
技术领域
本发明属于生物纳米微球技术领域，尤其涉及一种生物纳米微球及其制备方法和应用。
背景技术
核酸提取是在各种样品中通过一系列裂解、洗涤、洗脱等过程提取到待测核酸的过程。核酸提取是分子实验中最基础的实验，后续的克隆、PCR、qPCR、建库测序等都建立在核酸提取的实验基础之上。核酸提取的浓度和纯度决定了后续实验的准确性。实践中核酸提取方式主要分为三类：溶液型提取、吸附柱式提取和微球法提取。溶液型提取是比较经典的提取方法，一般是使用去污剂(如SDS)和盐(如盐酸胍、Tris、NaCl等)进行提取，盐的作用除了提供一个合适的裂解环境外，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。吸附柱式提取是使用裂解液、抽提液、沉淀剂、去蛋白液、漂洗液、洗脱液和核酸吸附柱等，利用核酸与吸附柱的吸附作用，经过一系列操作获得高纯度的核酸。微球法提取是一种采用生物纳米微球和缓冲液系统，样品在磁力架或者自动核酸提取仪上进行核酸提取，该方法的核心材料为一种可以结合核酸的生物纳米微球。
生物纳米微球是一种可以和核酸结合的生物材料，有的微球甚至可以和药物、蛋白质、酶和抗体等结合。最开始的微球被广泛应用于多种体内实验的药物传递、成像造影等实验。但是因为微球材料本身的生物相容性和细胞毒性等等因素，限制了微球在体内实验的应用，反而体外实验应用得到更广泛的发展。早在上个世纪六十年代初就有科学家尝试使用生物微球来分离细胞，利用的是细胞表面抗原和特异性抗体的结合性质原理，使用生物微球分离细胞。上世纪七十年代年科学家Guesdon和Avramea开始研究磁性的生物微球和抗原/抗体的连接反应，并在1977年成功开发磁性固相酶免疫分析技术，为将来使用微球来分离细胞以及更广阔的分子生物学研究应用打下基础。彼时所用微球结构为4％的聚丙烯酰胺、4％的琼脂糖和7％包裹在微球里面的氧化铁，微球表面有醋酸基团，粒径范围为50μm～160μm，属于羧基微球。这种生物微球磁性较弱，分离速度教慢，效率较低，且成本高昂。经过不断摸索，逐渐对微球表面的标记进行优化，产生了可以跟核酸高效率结合的生物纳米微球，该类微球表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对DNA/RNA具有很强的富集能力，当条件改变时有可以可逆的释放DNA/RNA，从而达到快速分离纯化DNA/RNA的目的，并可去除蛋白质等杂质。提取所得的高质量核酸可用于PCR、RT-PCR、基因测序等系列实验。
现有技术的缺点在于，生物微球的制作方法工艺繁琐，量产困难，制备的微球磁性较弱，核酸结合效率低，制作且成本高昂，更为重要的是现有微球对于一些微量和珍贵样品不能实现对微球与核酸结合物的直接扩增检测。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明第一个方面提出一种生物纳米微球，该生物纳米微球表面基团丰富、微球磁核稳定、粒径小而均一、核酸吸附效率高、微球磁性强、对PCR反应无抑制，且可以实现大规模量产。利用该生物纳米微球进行核酸提取可以获得高纯度和丰度的待测核酸，在洗脱前还可以直接用于PCR扩增。
本发明的第二个方面提出了一种所述生物纳米微球的制备方法。
本发明的第三个方面提出了一种包括所述生物纳米微球的核酸提取试剂盒。
本发明的第四个方面提出了一种采用所述生物纳米微球进行核酸提取的方法。
根据本发明的第一个方面，提出了一种生物纳米微球制备方法，包括以下步骤：
S1：惰性氛围下，二价铁盐、三价铁盐与其他二价可溶性盐溶于水，加入有机溶剂后再加入辅助试剂，溶剂热反应后加入碱性添加剂，搅拌，收集沉淀得纳米磁性微球；
S2：向所述纳米磁性微球加入有机溶剂，调节pH至碱性，惰性氛围下加热后加入包被试剂和氨水，搅拌，收集沉淀得所述生物纳米微球。
在本发明的一些实施方式中，所述二价铁盐、所述三价铁盐与所述其他二价可溶性盐的质量比为(5～10)：(10～15)：(3～10)。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述二价铁盐包括FeCl2、FeSO4或Fe(NO3)2的至少一种。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述三价铁盐包括Fe2Cl3、Fe2(SO4)3或Fe(NO3)3的至少一种。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述其他二价可溶性盐包括ZnCl2、MgCl2或CuCl2的至少一种。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述有机溶剂选自异丙醇或甘油和乙醇。
在本发明的一些更优选的实施方式中，S1中，所述有机溶剂与所述水的体积比为(4～8)：3。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述辅助试剂的质量浓度为5.0g/L～8.0g/L。在该质量浓度范围内，能够很好调节微球成核。浓度过大会导致结晶过度微球磁核悬浮和不稳定；浓度过小会导致结晶不足微球磁核呈弥散状和磁性不足。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述辅助试剂包括KCl、NaCl、SDS(十二烷基磺酸钠)或CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)中的至少一种；优选的，所述辅助试剂包括KCl、NaCl和CTAB；进一步优选的，所述辅助试剂包括KCl、NaCl和CTAB按照质量比为(4～6):(3～5)：(5～7)混合而成。辅助试剂在微球磁核行程的过程中起到桥联作用，一定比例的上述试剂的混合溶液可以控制微球磁核的粒径、密度、磁性和沉降性起到重要作用，优化的比例浓度可以筛选出不同粒径和磁性的微球磁核，可以适用于不同的应用场景。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述溶剂热反应的温度为25℃～45℃，时间为10h～16h。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述碱性添加剂为NaOH和氨水；优选的，所述碱性添加剂的添加顺序为先添加NaOH再添加氨水；更优选的，所述NaOH和所述氨水的体积比为(3～7)：(2～4)；进一步优选的，所述NaOH的浓度为52％，氨水的质量分数为25％，所述NaOH溶液的添使用量为100～300ml/1000mLS1的混合物，所述氨水的添使用量为150～200ml/1000mLS1的混合物。
在本发明的一些更优选的实施方式中，S1中所述搅拌的转速为800rpm～1200rpm，时间为12h～20h。
在本发明的一些更优选的实施方式中，S1还包括对所述纳米磁性微球进行纯化的步骤，所述纯化包括采用水和所述有机溶剂洗涤3～5次，充分去除可溶性盐离子。
在本发明的一些更优选的实施方式中，S2中，加入NaOH和氨水调节pH至碱性；优选的，S2中，加入NaOH和氨水调节pH至10.0～11.0；进一步优选的，S2中，先加入NaOH再加入氨水调节pH至10.0～11.0；更进一步优选的，所述NaOH和所述氨水的体积比为(3～5)：(2～4)。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述包被试剂包括盐酸多巴胺或油酸的至少一种；优选的，所述包被试剂与所述纳米磁性微球的质量比为5％～15％。
在本发明的一些更优选的实施方式中，S2中，所述加热为加热至温度为50℃～60℃。
在本发明的一些更优选的实施方式中，S2中，所述搅拌的转速为800rpm～1200rpm，时间为10h～16h。
在本发明的一些更优选的实施方式中，S2还包括对所述生物纳米微球进行纯化的步骤，所述纯化包括采用水和所述有机溶剂洗涤3～5次。
根据本发明的第二个方面，提出了一种由所述生物纳米微球制备方法制得的生物纳米微球。
在本发明的一些实施方式中，所述生物纳米微球的粒径为50nm～150nm。
根据本发明的第三个方面，提出了一种病毒核酸提取试剂盒，包括所述生物纳米微球和有机溶剂。
在本发明的一些实施方式中，所述有机溶剂选自异丙醇或甘油和乙醇。
根据本发明的第四个方面，提出了一种核酸提取的方法，包括以下步骤：用包括所述生物纳米微球的重悬液进行核酸提取，得到生物纳米微球-核酸复合体。
在本发明的一些实施方式中，所述核酸提取的方法还包括：将所述生物纳米微球-核酸复合体进行PCR扩增。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述生物纳米微球的重悬液包括采用有机溶剂将所述生物纳米微球进行重悬制得。
在本发明的一些更优选的实施方式中，所述有机溶剂选自异丙醇或甘油和乙醇。
本发明的有益效果为：
1.本发明生物纳米微球的制备方法流程简单，操作方便，需要设备少，提高了产品的性能，降低了原料成本进一步降低了生产成本。
2.本发明制得的生物纳米微球表面基团丰富、微球磁核稳定、粒径小而均一、核酸吸附效率高、微球磁性强、对PCR反应无抑制，在提取核酸后可直接应用于PCR扩增，无需洗脱。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
图1为本发明实施例4中微球M1提取的核酸的PCR扩增CT值。
图2为本发明实施例4中微球M2提取的核酸的PCR扩增CT值。
图3为本发明实施例4中微球M3提取的核酸的PCR扩增CT值。
图4为本发明实施例4中对比例微球提取的核酸的PCR扩增CT值。
图5为本发明实施例4中对照微球提取的核酸的PCR扩增CT值。
图6为本发明实施例5中微球M1提取的微球和核酸复合物的PCR扩增CT值。
图7为本发明实施例5中微球M2提取的微球和核酸复合物的PCR扩增CT值。
图8为本发明实施例5中微球M3提取的微球和核酸复合物的PCR扩增CT值。
图9为本发明实施例5中对比例微球提取的微球和核酸复合物的PCR扩增CT值。
图10为本发明实施例5中对照微球提取的微球和核酸复合物的PCR扩增CT值。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例制备了一种生物纳米微球，具体过程为：
准确称取7.0g FeCl2、12.0g Fe2Cl3、6.8g ZnCl2盐混合物溶于300mL水制成混合盐溶液，再加入700mL异丙醇至溶液总体积为1000mL，再向该溶液加入2.5g KCl、1.5g NaCl和3.0g CTAB，制得混合溶液。将混合溶液置于反应釜中，40℃低温加热缓慢反应，再向反应釜中加入300mL 15％NaOH溶液和150mL氨水，1000rpm搅拌16h，收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到纳米磁性微球。
向上述纳米磁性微球加入700mL异丙醇，再加入52％的NaOH溶液200mL和氨水150mL，总体积为1050mL，混合溶液的pH是10.0～11.0。将混合溶液转移至持续氮气条件的反应釜中，反应釜预热至55℃，匀速滴加盐酸多巴胺(C8H12ClNO2，20mg/mL)100mL，反应釜的加热温度是55℃温度，波动不超过2℃，续氮气条件下1000rpm搅拌12h。收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到生物纳米微球，用300mL异丙醇重悬为微球悬液，记为微球M1。
实施例2
本实施例制备了一种生物纳米微球，具体过程为：
准确称取8.0g FeSO4、13.0g Fe2(SO4)3、4.5g MgCl2盐混合物溶于300mL水制成混合盐溶液，再加入700mL异丙醇至溶液总体积为1000mL，再向该溶液加入2.5g KCl、1.5gNaCl和3.0g CTAB，制得混合溶液。将混合溶液置于反应釜中，40℃低温加热缓慢反应，再向反应釜中加入300mL 15％NaOH溶液和150mL氨水，1000rpm搅拌16h，收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到纳米磁性微球。
向上述纳米磁性微球加入700mL异丙醇，再加入52％的NaOH溶液200mL和氨水150mL，总体积为1050mL，混合溶液的pH是10.0～11.0。将混合溶液转移至持续氮气条件的反应釜中，反应釜预热至55℃，匀速滴加盐酸多巴胺(C8H12ClNO2，20mg/mL)100mL，反应釜的加热温度是55℃，温度波动不超过2℃，续氮气条件下1000rpm搅拌12h。收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到生物纳米微球，用300mL异丙醇重悬为微球悬液，记为微球M2。
实施例3
本实施例制备了一种生物纳米微球，具体过程为：
准确称取9.0g Fe(NO3)2、14.5g Fe(NO3)3、7.2g CuCl2盐混合物溶于300mL水制成混合盐溶液，再加入700mL异丙醇至溶液总体积为1000mL，再向该溶液加入2.5g KCl、1.5gNaCl和3.0g CTAB，制得混合溶液。将混合溶液置于反应釜中，40℃低温加热缓慢反应，再向反应釜中加入300mL 15％NaOH溶液和150mL氨水，1000rpm搅拌16h，收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到纳米磁性微球。
向上述纳米磁性微球加入700mL异丙醇，再加入52％的NaOH溶液200mL和氨水150mL，总体积为1050mL，混合溶液的pH是10.0～11.0。将混合溶液转移至持续氮气条件的反应釜中，反应釜预热至55℃，匀速滴加盐酸多巴胺(C8H12ClNO2，20mg/mL)100mL，反应釜的加热温度是55℃，温度波动不超过2℃，续氮气条件下1000rpm搅拌12h。收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到生物纳米微球，用300mL异丙醇重悬为微球悬液，记为微球M3。
对比例
本对比例制备了一种只有CTAB作为辅助试剂的生物纳米微球，具体过程为：
准确称取7.0g FeCl2、12.0g Fe2Cl3、6.8g ZnCl2盐混合物溶于300mL水制成混合盐溶液，再加入700mL异丙醇至溶液总体积为1000mL，再向该溶液加入3.0g CTAB，制得混合溶液。将混合溶液置于反应釜中，40℃低温加热缓慢反应，再向反应釜中加入300mL 15％NaOH溶液和150mL氨水，1000rpm搅拌16h，收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到纳米磁性微球。
向上述纳米磁性微球加入700mL异丙醇，再加入52％的NaOH溶液200mL和氨水150mL，总体积为1050mL，混合溶液的pH是10.0～11.0。将混合溶液转移至持续氮气条件的反应釜中，反应釜预热至55℃，匀速滴加盐酸多巴胺(C8H12ClNO2，20mg/mL)100mL，反应釜的加热温度是55℃，温度波动不超过2℃，续氮气条件下1000rpm搅拌12h。收集搅拌后的混合物，自然沉淀后弃去上清，沉淀每次用不少于2000mL双蒸水洗涤3～5次，然后再用异丙醇洗涤分别同样洗涤3～5次，直至充分去除可溶性盐离子，再弃上清保留沉淀即得到生物纳米微球，用300mL异丙醇重悬为微球悬液，记为对比例微球。
实施例4
本实施例采用实施例1～3制得的微球M1、M2、M3、对比例微球和对照微球(用于新型冠状病毒核酸提取的粒径在500nm的羟基磁性核酸提取微球)进行核酸提取，具体过程为：
1核酸提取
1.1按照广州蔚捷生物医药科技有限公司核酸提取试剂盒生产方案制备预分装提取试剂盒，M1、M2、M3、对比例微球与对照微球的使用方法按照公司生产工艺。取出预分装深孔板，去掉封膜，向深孔板的孔1和孔7中加入200μL采集于咽拭子采样管的拭子样品。将深孔板放入全自动核酸提取仪中，试剂板的缺口朝外，装上八联磁棒套。关上试验舱。
1.2打开核酸提取仪电源，设置如下表1程序：
表1
1.3移除磁棒套，取出深孔板。
采用生物纳米微球M1、M2、M3、对比例微球与对照微球提取的核酸即在第6、12孔，直接用于下游实验。
2核酸提取效率验证
2.1精密度
上述生物纳米微球M1、M2、M3、对比例微球与对照微球提取核酸重复10次，使用紫外分光光度计检测提取的核酸的吸光度值并计算OD260/OD280值，考察提取的重复性误差变异CV。经实验证实微球M1、M2、M3、对比例微球与对照微球核酸提的纯度符合要求，OD260/OD280值分别为1.84、1.87、1.80、1.79和1.81，满足OD260/OD280在1.7～1.9之间。进一步经实验证实M1、M2、M3、对比例微球与对照微球核酸提取的效率均达到95％以上，分别为97.1％、97.5％、96.4％、94.5％和95.5％。
3核酸提取的PCR扩增验证
3.1对上述核酸使用新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)按照说明书进行实验，PCR反应管中加入表2对应物质：
表2
| 类型 | 加样说明 |
| 待检样本 | 取5μL已提取的核酸加入管中，盖上盖子 |
| 阳性对照 | 溶解后，取5μL放入每根试管中，盖上盖子 |
| 阴性对照 | 提取的5μL阴性对照模板，盖上盖子 |
反应液的总容量为25μL。加样后，PCR反应管在涡旋振荡器混匀10秒，掌上离心机离心10s，传递至核酸扩增区。将反应管置于荧光PCR仪槽中，根据仪器操作说明书设置RT-PCR反应的阴性/阳性对照及样品参数。记录样本摆放顺序和位置。按下表进行反应程序参数设定：
表3
在步骤4中60℃时收集荧光。检测通道设置为FAM、VIC、ROX、CY5。
注:PCR仪不选用ROX校正。对于“淬灭基团”，选择“无”。FAM通道：人体内参基因RNaseP基因检测；VIC通道：(新型冠状病毒)S基因检测；ROX通道：2019-nCoV ORF1a/b基因检测；CY5通道：(2019-nCoV)N基因检测。
3.2实验结束后自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值(用户可根据实际情况自行调整，建议基线起点设置为7，基线终点设置为本次实验中包括阳性对照在内的最强阳性的Ct值。阈值(Threshold)的设定原则以阈值线刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。对实验结果进行分析证实，微球M1、M2和M3提取的核酸用于PCR实验其CT值优于对照微球提取的核酸，，比对比例微球和对照微球提前1CT值，实验结果对应如图1～5所示。
实施例5
本实施例采用生物纳米微球M1、M2、M3、对比例微球和对照微球提取核酸后微球和核酸复合物直接进行PCR扩增
1核酸提取
1.1按照广州蔚捷生物医药科技有限公司核酸提取试剂盒生产方案制备预分装提取试剂盒，微球M1、M2、M3、对比例微球和对照微球的使用方法按照公司生产工艺。取出预分装深孔板，去掉封膜，向深孔板的孔1和孔7中加入200μL采集于咽拭子采样管的拭子样品。将深孔板放入全自动核酸提取仪中，试剂板的缺口朝外，装上八联磁棒套。关上试验舱。
1.2打开核酸提取仪电源，设置如下表4程序：
表4
1.3移除磁棒套，取出深孔板。
采用优势生物纳米微球M1、M2、M3、对比例微球和对照微球提取的微球和核酸复合物即在第6、12孔，直接用于下游实验。
对照微球仍按照实施例4提取核酸后与上述微球M1、M2、M3、对比例微球和对照微球提取的微球和核酸复合物进行比对实验验证。
2微球和核酸复合物的PCR扩增验证
2.1对上述核酸使用新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)按照说明书进行实验，PCR反应管中加入对应物质：
表5
反应液的总容量为25μL。加样后，PCR反应管在涡旋振荡器混匀10秒，掌上离心机离心10秒，传递至核酸扩增区。将反应管置于荧光PCR仪槽中，根据仪器操作说明书设置RT-PCR反应的阴性/阳性对照及样品参数。记录样本摆放顺序和位置。按下表进行反应程序参数设定：
表6
在步骤4中60℃时收集荧光。检测通道设置为FAM、VIC、ROX、CY5。
注:PCR仪不选用ROX校正。对于“淬灭基团”，选择“无”。FAM通道：人体内参基因RNaseP基因检测；VIC通道：(新型冠状病毒)S基因检测；ROX通道：2019-nCoV ORF1a/b基因检测；CY5通道：(2019-nCoV)N基因检测。
3.2实验结束后自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值(用户可根据实际情况自行调整，建议基线起点设置为7，基线终点设置为本次实验中包括阳性对照在内的最强阳性的Ct值。阈值(Threshold)的设定原则以阈值线刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。对实验结果进行分析证实，微球M1、M2和M3提取的微球和核酸复合物用于PCR实验其CT值优于对比例微球和对照微球提取的核酸，比对比例微球和对照微球提前3CT值，微球M1、M2和M3微球对PCR无明显的抑制，实验结果对应如图6～10所示。
上面对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
Claims (10)
1.一种生物纳米微球制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：惰性氛围下，二价铁盐、三价铁盐与其他二价可溶性盐溶于水，加入有机溶剂后再加入辅助试剂，溶剂热反应后加入碱性添加剂，搅拌，收集沉淀得纳米磁性微球；
S2：向所述纳米磁性微球加入有机溶剂，调节pH至碱性，惰性氛围下加热后加入包被试剂和氨水，搅拌，收集沉淀得所述生物纳米微球。
2.根据权利要求1所述的生物纳米微球制备方法，其特征在于：所述二价铁盐、所述三价铁盐与所述其他二价可溶性盐的质量比为(5～10)：(10～15)：(3～10)。
3.根据权利要求1所述的生物纳米微球制备方法，其特征在于：所述辅助试剂的质量浓度为5.0g/L～8.0g/L。
4.根据权利要求3所述的生物纳米微球制备方法，其特征在于：所述辅助试剂包括KCl、NaCl、SDS或CTAB中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的生物纳米微球制备方法，其特征在于：所述包被试剂包括盐酸多巴胺或油酸的至少一种。
6.一种由权利要求1～5任一项所述的生物纳米微球制备方法制得的生物纳米微球。
7.根据权利要求6所述的生物纳米微球，其特征在于：所述生物纳米微球的粒径为50nm～150nm。
8.一种病毒核酸提取试剂盒，其特征在于：包括权利要求6或7所述的生物纳米微球和有机溶剂。
9.一种核酸提取的方法，其特征在于：包括以下步骤：用包括权利要求6或7所述的生物纳米微球的重悬液进行核酸提取，得到生物纳米微球-核酸复合体。
10.根据权利要求9所述的核酸提取的方法，其特征在于：所述核酸提取的方法还包括：将所述生物纳米微球-核酸复合体进行PCR扩增。
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2022
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