CN116217659A - 一种大球盖菇菌丝体风味肽及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于菌菇活性肽制备技术领域，具体涉及一种大球盖菇菌丝体风味肽及其制备方法和应用。所述大球盖菇菌丝体风味肽包括ESPERPFL和/或SLPIKPRVPF。包括ESPERPFL的风味肽具有咸味和浓厚感，可与咸味受体TRPV1有效结合；包括SLPIKPRVPF的风味肽具有鲜味和浓厚感，可与鲜味受体T1R1/T1R3有效结合。两种风味肽的分子量低，易被人体感官味蕾受体细胞感知，且具有安全无毒和水溶性好的特点，可用于调味品和植物肉等风味食品的制备。
Description
技术领域
本发明属于菌菇活性肽制备技术领域，具体涉及一种大球盖菇菌丝体风味肽及其制备方法和应用。
背景技术
近几年，为了加速食源性风味肽的应用研究，学者们逐步对风味肽基料制备及应用方面进行了一定的探索。液体发酵技术可缩短菌菇的制种及培养时间，在菌菇的发酵和培养中得到了广泛应用，大球盖菇菌丝体所含风味活性物质，在营养健康产品和天然风味基料开发上具有子实体无可比拟的优势。其发酵菌丝体中肽含量占菌丝体中蛋白含量的60％～70％，发酵菌丝体整体呈现浓厚味和满口感以及愉悦的咸鲜味呈味特性，促使其在菌菇肉开发方面具有较大应用前景。从发酵菌丝体中获得菌物源天然风味肽，也符合健康功能风味食品发展趋势。
近年来，肽组学在食品科学中的重要性与日俱增，现有技术中已有较多的应用肽组学分析方法鉴定菌菇中肽段，借助在线多肽数据库筛选具有愉悦呈味特性肽段的方法，鉴定得到一些菌菇风味肽段并开发为呈味基料，但是总体种类较少，尤其以大球盖菇为原料的呈味肽更是稀少。因而，进一步研发具有咸味和鲜味的大球盖菇风味肽仍然十分必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种大球盖菇菌丝体风味肽，所述大球盖菇风味肽具有咸味和浓厚感或者鲜味和浓厚感，分子量低，易被人体感官味蕾受体细胞感知，且水溶性好，安全无毒。
本发明提供了一种大球盖菇菌丝体风味肽，所述大球盖菇菌丝体风味肽包括ESPERPFL和/或SLPIKPRVPF。
本发明还提供了上述技术方案所述的大球盖菇菌丝体风味肽的制备方法，包括如下步骤：
以LC-MS/MS对大球盖菇菌丝体中的肽段进行检测，采用PEAKS软件对得到的LC-MS/MS检测数据进行检索，得到大球盖菇多肽候选肽段；
分别采用BIOPEP-UWM肽谱库、INNOVAGEN和admetSAR肽组学网站对所述大球盖菇多肽候选肽段的呈味特性和水溶性进行预测，得到大球盖菇菌丝体风味肽。
优选的，所述大球盖菇菌丝体通过液体发酵获得。
优选的，所述液体发酵的步骤包括：
将大球盖菇菌种接种于PDB培养基中，发酵5～10d后，离心，得到所述大球盖菇菌丝体。
优选的，所述大球盖菇菌种的接种量为所述PDB培养基体积的8～12％。
优选的，所述发酵的温度为24～28℃，通气量为24～26L/min；所述发酵过程中还伴随搅拌，所述搅拌的转速为80～120r/min。
优选的，进行所述LC-MS/MS检测前，还包括对所述大球盖菇菌丝体进行脱盐和溶解，得到大球盖菇上清液；
用于所述脱盐的层析柱为ZipTip C18微量层析柱；
用于所述溶解的溶解液包括0.1％甲酸和5％乙腈。
优选的，所述LC-MS/MS检测的流动相A为0.1％甲酸，流动相B为0.1％甲酸，80％乙腈。
本发明还提供了上述技术方案所述的大球盖菇菌丝体风味肽或所述制备方法制备得到的大球盖菇菌丝体风味肽在制备调味品和/或植物肉中的应用。
本发明还提供了一种风味食品，所述风味食品的活性成分包括上述技术方案所述的大球盖菇菌丝体风味肽；所述风味食品包括调味品和/或植物肉。
有益效果：
本发明提供了一种大球盖菇菌丝体风味肽，所述大球盖菇菌丝体风味肽包括ESPERPFL和/或SLPIKPRVPF。包括ESPERPFL的风味肽具有咸味和浓厚感，可与咸味受体TRPV1有效结合；包括SLPIKPRVPF的风味肽具有鲜味和浓厚感，可与鲜味受体T1R1/T1R3有效结合。两种风味肽的分子量低，易被人体感官味蕾受体细胞感知，且具有安全无毒和水溶性好的特点，可用于调味品和植物肉等风味食品的制备。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1～2分别为大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL和SLPIKPRVPF的质谱检测结果；
图3～4分别为大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL和SLPIKPRVPF的质谱分析结果；
图5～6分别为大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL和SLPIKPRVPF的电子舌呈味特性评价结果；
图7～8为大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL与TRPV1受体的分子对接结果，其中图7为ESPERPFL与TRPV1受体A链结合的情况，图8为ESPERPFL与TRPV1受体B链结合的情况；
图9～10为大球盖菇菌丝体风味肽SLPIKPRVPF与T1R1/T1R3受体分子对接结果，其中图9为SLPIKPRVPF与受体A链T1R1结合的情况，图10为SLPIKPRVPF与受体B链T1R3结合的情况。
具体实施方式
本发明提供了一种大球盖菇菌丝体风味肽，所述大球盖菇菌丝体风味肽包括ESPERPFL和/或SLPIKPRVPF。
本发明所述大球盖菇菌丝体风味肽优选为ESPERPFL(SEQ ID NO.1)和/或SLPIKPRVPF(SEQ ID NO.2)，更优选为ESPERPFL或SLPIKPRVPF。本发明包括所述ESPERPFL的风味肽具有咸味和浓厚感，可与咸味受体TRPV1有效结合；包括所述SLPIKPRVPF的风味肽具有鲜味和浓厚感，可与鲜味受体T1R1/T1R3有效结合。
本发明还提供了上述技术方案所述的大球盖菇菌丝体风味肽的制备方法，包括如下步骤：
以LC-MS/MS对大球盖菇菌丝体中的肽段进行检测，采用PEAKS软件对得到的LC-MS/MS检测数据进行检索，得到大球盖菇多肽候选肽段；
分别采用BIOPEP-UWM肽谱库、INNOVAGEN和admetSAR肽组学网站对所述大球盖菇多肽候选肽段的呈味特性和水溶性进行预测，得到大球盖菇菌丝体风味肽。
本发明所述大球盖菇菌丝体优选通过液体发酵获得；所述液体发酵的步骤优选包括将大球盖菇菌种接种于PDB培养基中，发酵5～10d后，离心，得到所述大球盖菇菌丝体。
本发明优选将大球盖菇菌种接种于PDB培养基中，发酵5～10d后，得到大球盖菇发酵样品。本发明所述大球盖菇菌种的接种量优选为所述PDB培养基体积的8～12％，更优选为10％。本发明所述发酵时间优选为7d。本发明所述发酵温度优选为24～28℃，更优选为26℃。本发明所述发酵时的通气量优选为24～26L/min，更优选为25L/min。本发明所述发酵过程中还伴有搅拌，所述搅拌的转速优选为80～120r/min，更优选为100r/min。本发明在进行所述发酵时，所述装液量与发酵罐的体积比优选为3～27：5～30，更优选为5：6；所述装液量优选为PDB培养基的体积量。本发明对所述大球盖菇菌种的类型和来源没有特殊限定，本领域常规类型和来源的菌种均可，如在本发明的具体实施方式中，采用的是在NCBI中释放号为SRR14469700的大球盖菇菌种。
得到所述大球盖菇发酵样品后，本发明优选对所述大球盖菇发酵样品离心，收集菌丝体，得到所述大球盖菇菌丝体。本发明所述离心的转速优选为3500～4500r/min，更优选为4000r/min；时间优选为5～15min，更优选为10min。
得到所述大球盖菇菌丝体后，本发明优选还包括冲洗所述大球盖菇菌丝体后，冷冻干燥，得到大球盖菇冻干菌丝体。本发明优选采用纯净水进行所述冲洗。本发明对所述冲洗的次数和具体过程没有特殊限定，去除残留在菌丝体表面的培养基即可。本发明所述冷冻干燥的温度优选为-50～-70℃，更优选为-70℃；所述冷冻干燥的时间优选为24～72h，更优选为48h。
得到所述大球盖菇冻干菌丝体后，本发明以LC-MS/MS对大球盖菇菌丝体中的肽段进行检测，采用PEAKS软件对得到的LC-MS/MS检测数据进行检索，得到大球盖菇多肽候选肽段。
进行所述LC-MS/MS检测前，本发明优选还包括对所述大球盖菇冻干菌丝体进行脱盐和溶解，得到大球盖菇上清液。本发明所述脱盐用的层析柱优选为ZipTip C18微量层析柱。本发明对所述脱盐的具体步骤没有特殊限定，采用本领域中常规操作过程即可。完成所述脱盐后，本发明优选对脱盐后的大球盖菇菌丝体样本进行溶解，得到大球盖菇上清液。本发明所述溶解的水溶液优选包括0.1％甲酸和5％乙腈。本发明在完成所述溶解后，优选还包括对溶解后的混合物进行震荡涡旋和第二次离心，取上清液，得到所述大球盖菇上清液。本发明对所述震荡涡旋的具体参数没有特殊限定，采用本领域中常规震荡涡旋的步骤即可。本发明所述第二次离心的转速优选为12000～15000r/min，更优选为13500r/min；所述第二次离心的时间优选为15～30min，更优选为20min；所述第二次离心的温度优选为2～10℃，更优选为4℃。
得到所述大球盖菇上清液后，本发明对所述大球盖菇上清液进行LC-MS/MS检测，得到LC-MS/MS检测数据。本发明所述LC-MS/MS检测的流动相A优选为0.1％甲酸，流动相B优选为0.1％甲酸，80％乙腈。本发明所述流动相参数优选如表1所示：
表1流动相参数
得到所述LC-MS/MS检测数据后，本发明采用PEAKS软件对所述LC-MS/MS检测数据进行检索，得到大球盖菇多肽候选肽段。本发明所述检索的参数优选如表2所示：
表2 PEAKS软件检索参数
得到所述大球盖菇多肽候选肽段后，本发明分别采用BIOPEP-UWM肽谱库、NNOVAGEN和admetSAR肽组学网站对所述大球盖菇多肽候选肽段的呈味特性、水溶性和毒性进行预测，得到大球盖菇菌丝体风味肽。本发明优选采用BIOPEP-UWM肽谱库预测所述大球盖菇多肽候选肽段的呈味特性；采用INNOVAGEN和admetSAR肽组学网站预测所述大球盖菇多肽筛选肽段的水溶性和毒性。本发明优选以水溶性良好、安全无毒副作用，同时具备咸味和/或鲜味为筛选标准，获得所述大球盖菇菌丝体风味肽。
本发明还提供了上述技术方案所述的大球盖菇菌丝体风味肽或所述制备方法制备得到的大球盖菇菌丝体风味肽在制备调味品和/或植物肉中的应用。本发明所述大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL具有咸味和浓厚味，可与咸味受体TRPV1紧密结合，可以作为增咸基料制作调味品；同浓度(1.0mg/mL)大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL的呈咸度是NaCl呈咸度的4.20倍。本发明所述大球盖菇菌丝体风味肽SLPIKPRVPF具有鲜味和浓厚味，可与鲜味受体T1R1/T1T3紧密结合，可以作为增鲜基料来制作调味品，同浓度(1.0mg/mL)SLPIKPRVPF大球盖菇菌丝体风味肽的呈鲜强度是同浓度谷氨酸钠(MSG)呈鲜强度的2.06倍。同时，所述大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL和SLPIKPRVPF的分子量分别为974.06和1153.42，属于小分子量寡肽，更易于被人体感官味蕾受体感知。因而，本发明所述大球盖菇菌丝体风味肽可以作为调味品和植物肉的制备原料。
本发明还提供了一种风味食品，所述风味食品的活性成分包括上述技术方案所述的大球盖菇菌丝体风味肽；所述风味食品包括调味品和/或植物肉。本发明所述风味食品中优选还包括辅料和/或其他活性成分。本发明对所述辅料和其他活性成分的具体类型、用量及来源均没有特殊限定，依据制备风味食品的要求常规调整即可。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
如无特殊限定，本发明所述的试验方法均为本领域中常规试验方法，所使用的试剂均可通过常规市售渠道获得。
实施例1
一种大球盖菇菌丝体风味肽的制备方法，由以下步骤组成：
1、大球盖菇液体发酵菌丝体的制备：
大球盖菇菌种(NCBI菌种释放号SRR14469700)相对于培养基体积10％的接种量，在30L发酵罐(装液量：25L PDB培养基；培养温度26℃；搅拌转速100r/min；通气量25L/min；pH自然)中进行液态发酵7天，发酵样品4000r/min离心10min，收集菌丝体。菌丝体经蒸馏水充分冲洗后，-70℃冷冻干燥48h收集冻干菌丝体。
2、大球盖菇发酵菌丝体中风味肽鉴定：
采用LC-MS/MS进行大球盖菇发酵菌丝体中肽段序列进行鉴定。
(1)菌丝体样品经Millipore ZipTip C18微量层析柱脱盐处理，具体步骤如下：
1)称取10mg冻干菌丝体，加入30μL 0.1％的三氟乙酸(TFA)，超声溶解；2)利用50μL 60％的乙腈(ACN)/0.1％的三氟乙酸(TFA)润洗Tip 10次；3)用10μL 0.1％TFA清洗Tip10次。4)将样本吸入并排出Tip 20次，排出液体；5)用10μL 0.1％TFA清洗Tip 5次；6)用10μL 60％ACN、0.1％TFA洗脱肽段至新的EP管，真空干燥。
(2)完成脱盐处理后，采用20μL溶解液(0.1％甲酸、5％乙腈)溶解肽段，振荡涡旋，4℃，13500r/min离心20min，取8μL上清液进行LC-MS/MS质谱肽序列鉴定，液相色谱流动相A，0.1％甲酸；流动相B，0.1％甲酸，80％乙腈。流动相参数如表1(已在上文进行列举，不再赘述)。采用PEAKS软件对LC-MS/MS检测后的数据进行肽序列数据库检索，检索参数如表2(已在上文进行列举，不再赘述)，获得大球盖菇多肽候选肽段，包括ESPERPFL和SLPIKPRVPF，LC-MS/MS鉴定结果如图1～2所示。
3、大球盖菇发酵菌丝体中风味肽筛选
采用BIOPEP-UWM肽谱库、INNOVAGEN和admetSAR肽组学网站，对LC-MS/MS鉴定得到的大球盖菇多肽候选肽段进行呈味特性、水溶性及毒性预测，筛选获得水溶性好且无毒、具有咸味的大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL；和具有鲜味的大球盖菇菌丝体风味肽SLPIKPRVPF。
呈味特性预测：在BIOPEP-UWM肽谱库Sensory peptide and amino acid模块下，分别输入步骤2中得到的候选肽段ESPERPFL和SLPIKPRVPF，得出候选肽段ESPERPFL具有ES(呈鲜肽片段)、PE(鲜味提升肽片段)和RP(呈咸肽片段)的特征；候选肽段SLPIKPRVPF具有RV(咸味提升肽片段)的特征，进而预测候选肽段ESPERPFL具有呈咸鲜特性，候选肽段SLPIKPRVPF具有呈咸特性。
水溶性预测：在INNOVAGEN肽组学网站Peptide Property Calculator模块下，分别输入步骤2中得到的候选肽段ESPERPFL和SLPIKPRVPF，得到候选肽段ESPERPFL和SLPIKPRVPF分别具有疏水性的算术平均值-1.11和0.13的结果(疏水性的算术平均值，负值代表亲水，越小越亲水)，进而预测上述两个候选肽段均具有良好水溶性。
毒性预测：在admetSAR肽组学网站Predict下，分别输入步骤2中得到的候选肽段ESPERPFL和SLPIKPRVPF的Smile信息，ESPERPFL预测AMES毒性(AMES Toxicity)为无毒性(Non AMES toxic，)，预测数值为0.7471；SLPIKPRVPF预测AMES毒性(AMES Toxicity)为无毒性(NonAMES toxic)，预测数值为0.7318。
1、大球盖菇风味肽呈味特性的验证
(1)采用电子舌验证其呈味特性
采用固相合成(委托吉尔生化(上海)有限公司合成)大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL和SLPIKPRVPF，合成肽纯度大于98％。合成肽经质谱分析确定为目标风味肽，其中肽质谱分析结果如图3～4所示。
分别准确称取0.1g ESPERPFL和SLPIKPRVPF合成肽纯品，分别加入100mL纯水溶解，逐级稀释为浓度为0.25，0.375，0.5，0.75和1.0g/L的大球盖菇菌丝体风味肽溶液，通过电子舌对不同浓度梯度的大球盖菇菌丝体风味肽溶液的呈咸、呈鲜强度进行测定。电子舌的测定方法具体为：移取25mL溶液加入电子舌专用样品杯中，每个浓度梯度重复4次，测试时间30s，结果如表3～4和图5～6所示。
表3大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL电子舌呈味特性评价
表4大球盖菇菌丝体风味肽SLPIKPRVPF电子舌呈味特性评价
由表3～4及图5～6中电子舌评价结果可以得出，大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL具有咸味和浓厚感呈味特性，大球盖菇菌丝体风味肽SLPIKPRVPF具有鲜味和浓厚感呈味特性。
(2)分子对接技术验证其呈味特性
从PDB数据库选择咸味受体TRPV1(PDB id：Q8NER1)的晶体结构作为咸味受体。从PDB数据库选择受体T1R2a-T1R3(PDB id：5X2M)作为模板构建人源鲜味受体hT1R1-T1R3VFD晶体结构，具体构建方法为：
1)基于目标蛋白质的一级氨基酸序列，通过SMTL搜索、选择受体T1R2a-T1R3(PDBid：5X2M)作为模板。
2)通过NCBI中blast模块对这些数据进行比对，然后使用ESPript 3.0进行序列调整。
3)利用pymol软件可对同源建模结果hT1R1-T1R3进行结构可视化，按照已有配体和受体结合结构特征，对hT1R1，hT1R3的结构域进行标注。
4)以hT1R1-T1R3的Cα碳原子作为参考，将构建受体与模板受体进行结构叠合，均方根RMSD为
构建受体可采用。
分别将筛选的大球盖菇咸味肽ESPERPFL与TRPV1、鲜味肽SLPIKPRVPF与T1R1/T1R3进行分子对接。依据配体受体对接得分、形成键的数目、风味肽氨基酸残基结合能(数值越低，受体配体结合效果越好，肽段氨基酸残基对受体配体结合复合物贡献越大)，验证大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL和SLPIKPRVPF的呈咸或呈鲜风味特性。
结果可知，筛选得到的大球盖菇咸味肽ESPERPFL，可与TRPV1紧密结合，与A链形成7个不同键长的氢键及6个离子键，结合关键氨基酸残基为GLU513，ASP707，SER404，TYR495，ARG557，ARG575，GLU405；与B链形成10个不同键长的氢键及8个离子键，结合关键氨基酸残基为GLU513，ASP707，ASP509，ARG491，THR704，ARG557，LYS571(图7～8，表5～6)。
筛选得到的大球盖菇鲜味肽SLPIKPRVPF，可与T1R1/T1R3紧密结合，与A链形成9个不同键长的氢键及3个离子键，结合关键氨基酸残基为ASP219，SER217，CYS50，CYS106，ASP108，LEU51，ARG277；与B链形成8个不同键长的氢键，结合关键氨基酸残基为HIS281，LEU308，GLU45，ALA302，HIS278，SER104(图9～10，表7～8)。
表5 ESPERPFL与TRPV1 A链对接结果
表6 ESPERPFL与TRPV1 B链对接结果
表7 SLPIKPRVPF与T1R1(A链)对接结果
表8 SLPIKPRVPF与T1R3(B链)对接结果
由以上结果可以得出，本发明所述大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL具有呈咸风味特性，SLPIKPRVPF具有呈鲜风味特性。
(3)大球盖菇菌丝体风味肽和咸鲜标品呈味强度电子舌分析
以食盐(NaCl)作为对照，将ESPERPFL和NaCl配置成0.2～1.0mg/mL溶液，采用Insent SA-402B味觉分析系统对样品呈味特性进行检测。结果表明，1.0mg/mL的ESPERPFL风味肽的呈咸强度是同浓度NaCl呈咸强度的4.20倍，0.75mg/mL的ESPERPFL风味肽的呈咸强度是同浓度NaCl呈咸强度的1.63倍，可见大球盖菇菌丝体风味肽ESPERPFL具有咸味和浓厚味，可以作为增咸基料来制作调味品。
以谷氨酸钠(MSG)作为对照，将SLPIKPRVPF和MSG配置成0.2～1.0mg/mL溶液，选用采用Insent SA-402B味觉分析系统对样品呈味特性进行检测。结果表明，1.0mg/mL的SLPIKPRVPF风味肽的呈鲜强度是同浓度MSG呈鲜强度的2.06倍，0.25mg/mL的SLPIKPRVPF风味肽的呈鲜强度是同浓度MSG呈鲜强度的4.38倍，且风味肽SLPIKPRVPF与谷氨酸钠(MSG)呈鲜机制不同，相较于MSG呈鲜-剂量依赖性(一定使用剂量下，使用剂量越高，呈鲜度越高)，风味肽SLPIKPRVPF则是在低浓度下呈鲜度即可达到较好的效果，肽成本较低。可见大球盖菇菌丝体风味肽SLPIKPRVPF具有鲜味和浓厚味，可以作为增鲜基料来制作调味品。
由以上实施例可以得出，本发明提供了大球盖菇发酵菌丝体来源的具有咸味和浓厚感风味肽ESPERPFL、鲜味和浓厚感风味肽SLPIKPRVPF；ESPERPFL，呈咸强度高，可以替代食盐使用，SLPIKPRVPF，呈鲜强度高，可以替代谷氨酸钠使用。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种大球盖菇菌丝体风味肽，其特征在于，所述大球盖菇菌丝体风味肽包括ESPERPFL和/或SLPIKPRVPF。
2.权利要求1所述的大球盖菇菌丝体风味肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
以LC-MS/MS对大球盖菇菌丝体中的肽段进行检测，采用PEAKS软件对得到的LC-MS/MS检测数据进行检索，得到大球盖菇多肽候选肽段；
分别采用BIOPEP-UWM肽谱库、INNOVAGEN和admetSAR肽组学网站对所述大球盖菇多肽候选肽段的呈味特性和水溶性进行预测，得到大球盖菇菌丝体风味肽。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述大球盖菇菌丝体通过液体发酵获得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述液体发酵的步骤包括：
将大球盖菇菌种接种于PDB培养基中，发酵5～10d后，离心，得到所述大球盖菇菌丝体。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述大球盖菇菌种的接种量为所述PDB培养基体积的8～12％。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为24～28℃，通气量为24～26L/min；所述发酵过程中还伴随搅拌，所述搅拌的转速为80～120r/min。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进行所述LC-MS/MS检测前，还包括对所述大球盖菇菌丝体进行脱盐和溶解，得到大球盖菇上清液；
用于所述脱盐的层析柱为ZipTip C18微量层析柱；
用于所述溶解的溶解液包括0.1％甲酸和5％乙腈。
8.根据权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于，所述LC-MS/MS检测的流动相A为0.1％甲酸，流动相B为0.1％甲酸和80％乙腈。
9.权利要求1所述的大球盖菇菌丝体风味肽或权利要求2～8任一项所述的制备方法制备得到的大球盖菇菌丝体风味肽在制备调味品和/或植物肉中的应用。
10.一种风味食品，其特征在于，所述风味食品的活性成分包括权利要求1所述的大球盖菇菌丝体风味肽或权利要求2～8任一项所述的制备方法制备得到的大球盖菇菌丝体风味肽；所述风味食品包括调味品和/或植物肉。
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| 邓莉;郝学财;刘娜;: "呈味肽的制备、纯化与鉴定", 中国酿造, no. 04, 31 December 2017 (2017-12-31) * |
| 韩富亮;郭安鹊;王华;张予林;袁春龙;李运奎;: "食源性鲜味肽和浓厚感肽的研究进展", 食品科学, no. 23, 31 December 2015 (2015-12-31) * |
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|---|---|
| CN116217659B (zh) | 2024-02-27 |
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