CN116200290A - 一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌及其应用 - Google Patents

一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明是一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌及其应用，其为副干酪乳酪杆菌TG006，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：【CGMCC No.25452】，保藏时间为【2022年08月01日】。本发明可以显著抑制结直肠癌细胞的增殖。

Description

一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物的领域，特别涉及一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌及其应用。
背景技术
全球范围内，结直肠癌是第三位最常见的恶性肿瘤，也是第二位最常见的恶性肿瘤死亡原因。大肠癌的发病与年龄、地区和性别等因素有关。目前治疗结直肠癌的首选是手术切除，只有处于早期、中期或者部分晚期的病人，才可以选择进行手术切除治疗。
此外，通过益生菌进行治疗或辅助治疗结直肠癌均可获得一定的疗效。联合国粮农组织(FAO)与世界卫生组织(WHO)将益生菌定义为经适量服用后，有益于其宿主健康的活的微生物。其主要作用是调整宿主肠道与系统免疫功能，防治病原微生物、调整胃肠道健康、加强免疫应答和预防与治疗多种疾病。人体肠道益生菌的主要食物来源是含有益生元的相关保健品和益生菌发酵类产品。
副干酪乳杆菌是一种有益人体健康的益生菌，对人体的微生物群和酶的平衡具有促进作用。同时具有促进人体特异性和非特异性免疫的功效，增强人体免疫能力，预防疾病。副干酪乳杆菌有益于发育，增强人体的体质，延缓机体的衰老，延长人体的生命。副干酪乳杆菌能定居肠道，有效的调节肠道内的菌群，维持肠道内的内环境，防治菌群失调引起的便秘。副干酪乳酪杆菌是一种具有较强的加工性能，并且在调节人体免疫系统，及调节人体肠道环境和降解胆固醇等方面具有突出的功能，然而，未见副干酪乳酪杆菌应用在结直肠癌治疗领域的报道。
发明内容
为解决上述问题，本发明的首要目的是提供一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌及其应用，该副干酪乳酪杆菌为副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillusparacasei)TG006，可以显著抑制结直肠癌细胞的增殖。
本发明的另一个目的是提供一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌及其应用，该副干酪乳酪杆菌具有
高产胞外多糖的能力，副干酪乳酪杆菌TG006的代谢上清液和胞外多糖具有显著抑制结直肠癌细胞HCT-8增殖的效果。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌，其为副干酪乳酪杆菌TG006，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：【CGMCC No.25452】，保藏时间为【2022年08月01日】。
上述的一株副干酪乳酪杆菌是从国内健康人体粪便样中筛选获得，革兰氏阳性，菌落呈乳白色，不透明、圆形凸起、表面光滑和边缘整齐，最适生长环境条件为37℃、pH7和厌氧环境。该副干酪乳酪杆菌具有高产胞外多糖的能力，副干酪乳酪杆菌TG006的代谢上清液和胞外多糖具有显著抑制结直肠癌细胞HCT-8增殖的效果，实验发现：上述的一株副干酪乳酪杆菌TG006具有显著的抑制体外结直肠癌细胞HCT-8增殖的作用。
作为具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的应用，本发明还提供一种食品，所述食品包含有副干酪乳酪杆菌TG006，以副干酪乳酪杆菌TG006进行制备。
进一步，上述的食品由副干酪乳酪杆菌TG006作为发酵剂或食品补充剂。
更进一步，上述的食品中，还包含以下菌种的任意一种或任意组合：青春双歧杆菌BAC30、长双歧杆菌BL21、短双歧杆菌BBr60、罗伊氏乳杆菌LR08、两歧双歧杆菌BBi32和嗜酸乳杆菌UALa-01等。
更进一步，所述食品中还可以包括有辅料，所述辅料包括：低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、水苏糖、菊粉、抗性糊精、乳糖醇等肠道膳元，以及乳糖、干燥淀粉、糊精、环糊精、羧甲基淀粉钠、羧基淀粉丙酸酯、微晶性纤维素、羧甲基纤维素、麦芽糊精和硬脂酸镁等辅料，所述辅料可以根据实际使用情况进行组合。
进一步，上述食品中副干酪乳酪杆菌TG006的活菌数不低于1×108CFU/mL或1×108CFU/g。
一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的固体饮料，所述固体饮料包括有副干酪乳酪杆菌TG006。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
(1)本发明的副干酪乳酪杆菌TG006从国内健康人体粪便样本中筛选获得，具有良好的应用安全性和功能适应性。
(2)本发明的副干酪乳酪杆菌TG006具有高产胞外多糖的能力，产量达7.64g/L。
(3)本发明的副干酪乳酪杆菌TG006的代谢上清液和胞外多糖具有显著抑制结直肠癌细胞HCT-8增殖的效果。
本发明所述的具有抑制结直肠癌细胞HCT-8增殖的副干酪乳酪杆菌命名为副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)TG006，该菌株已于2022年08月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.25452。
附图说明
图1为本发明实施例1中副干酪乳酪杆菌TG006的平板表型。
图2为本发明实施例1中副干酪乳酪杆菌TG006的革兰氏染色结果。
图3为本发明实施例1中副干酪乳酪杆菌TG006的系统发育树。
图4为本发明实施例2中副干酪乳酪杆菌TG006的生长曲线。
图5为本发明实施例2中副干酪乳酪杆菌TG006的最适温度曲线。
图6为本发明实施例2中副干酪乳酪杆菌TG006的最适pH曲线。
图7为本发明实施例3中副干酪乳酪杆菌TG006胞外多糖溶液的Molish鉴定结果。
图8为本发明实施例4中副干酪乳酪杆菌TG006菌液上清对HCT-8细胞生长的抑制作用曲线。
图9为本发明实施例5中副干酪乳酪杆菌TG006胞外多糖对结直肠癌细胞HCT-8的增殖抑制。
图10为本发明实施例6中副干酪乳酪杆菌TG006的冻干菌粉。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明所实现的具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌，其为副干酪乳酪杆菌TG006，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：【CGMCCNo.25452】，保藏时间为【2022年08月01日】。
所述副干酪乳酪杆菌的基因序列为：GTGTGTCTACTGATGGAAGTCGAACGAGTTCTCGTTGATGATCGGTGCTTGCACCGAGATTCAACATGGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAGATCCAAGAACCGCATGGTTCTTGGCTGAAAGATGGCGTAAGCTATCGCTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCA CATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGACGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAAGCGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTCGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAGACCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCTCTAAGGTGACAAGTGTATCACATG。
上述的一株副干酪乳酪杆菌是从国内健康人体粪便样中筛选获得，革兰氏阳性，菌落呈乳白色，不透明、圆形凸起、表面光滑和边缘整齐，最适生长环境条件为37℃、pH7和厌氧环境。该副干酪乳酪杆菌TG006具有高产胞外多糖的能力，副干酪乳酪杆菌TG006的代谢上清液和胞外多糖具有显著抑制结直肠癌细胞HCT-8增殖的效果，实验发现：副干酪乳酪杆菌TG006具有显著的抑制体外结直肠癌细胞HCT-8增殖的作用。
下面结合实施例对本发明的实施进行说明。
实例1：副干酪乳酪杆菌的筛选和鉴定。
以来源于福建厦门地区的健康人体粪便为样本，将样本接种于人体肠道菌群血清培养瓶中富集培养，于1、3、6天吸取富集培养液，使用生理盐水梯度稀释涂布MRS琼脂平板(MRS培养基配方：酪蛋白酶消化物10g/L；牛肉膏粉10g/L；柠檬酸三铵4g/L；乙酸钠5g/L；七水合硫酸镁0.2g/L；四水合硫酸锰0.05g/L；磷酸氢二钾2g/L；葡萄糖20g/L；吐温-801.08g/L；最终pH 5.7±0.2，115℃灭菌25min)，于37℃厌氧培养箱中培养48h后，挑取单菌落在MRS琼脂平板上进行3轮划线纯化。将纯化后的单菌落接种至MRS液体培养基中，于37℃，200rpm摇床培养24-48h后，利用细菌基因组DNA快速抽提试剂盒提取基因组DNA。
以提取获得的基因组DNA为模板，使用16S rDNA全长引物对，27F：5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 3'；1492R：5’TACGGCTACCTTGTTACGACTT 3'，进行PCR扩增，将扩增获得的PCR产物送样测序，将测序获得的序列经NCBI网站Blast比对，结果显示该菌为一株(Lacticaseibacillus paracasei)，其16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示，且该菌株的平板形态如图1所示，菌落呈乳白色、不透明、圆形凸起、表面光滑和边缘整齐。
该菌株经革兰氏染色后呈现蓝紫色，表明该菌株为革兰氏阳性菌。革兰氏染色结果如图2所示。
该菌株与市面上已有的副干酪乳酪杆菌株的亲缘关系如图3系统发育树图所示，该株副干酪乳酪杆菌命名为副干酪乳酪杆菌TG006。
实施例2：副干酪乳酪杆菌TG006的生理特征。
生长曲线测定方法：菌种活化：将副干酪乳酪杆菌TG006从-80℃冰箱取出，在MRS琼脂平板上划线活化，于37℃厌氧培养箱中培养至生长出单菌落。接种子液：利用接种环蘸取MRS琼脂板上的单菌落，接入MRS液体培养基中，摇晃均匀，放入37℃，200rpm摇床培养至OD600达到0.6-1.0的范围。接培养液：按照1-5％的接种量，接入不同时间点的MRS液体培养基中。接种完成后放入37℃，200rpm摇床进行培养，每隔2h取出一组进行测定OD600，直到完成24h实验组的测定。副干酪乳酪杆菌TG006的生长曲线如图4所示。
最适温度测定：菌种活化：将副干酪乳酪杆菌TG006从-80℃冰箱取出，在MRS琼脂平板上划线活化，于37℃厌氧培养箱培养至生长出单菌落。接种子液：利用接种环蘸取MRS琼脂上的单菌落，接入MRS液体培养基中，摇晃均匀，放入37℃，200rpm摇床培养至OD600达到0.6-1.0的范围。接培养液：按照1-5％的接种量，接入MRS液体培养基中，放入不同温度梯度(27、32、37、42、47℃)摇床，进行厌氧培养，并于合适时间点取出测定OD600，副干酪乳酪杆菌TG006的最适温度如图5所示。
最适pH测定：菌种活化：将副干酪乳酪杆菌TG006从-80℃冰箱取出，在MRS琼脂平板上划线活化，于37℃厌氧培养箱培养至生长出单菌落。接种子液：利用接种环蘸取MRS琼脂上的单菌落，接入MRS液体培养基中，摇晃均匀，放入37℃，200rpm摇床培养至OD600达到0.6-1.0的范围。接培养液：按照1-5％的接种量，接入不同pH梯度(pH5、6、7、8、9)的MRS液体培养基中，放入摇床，37℃，200rpm厌氧培养，并于合适时间点取出测定OD600，副干酪乳酪杆菌TG006的最适pH如图6所示。
实施例3：副干酪乳酪杆菌TG006胞外多糖的分离与提纯。
活化：将副干酪乳酪杆菌TG006从-80℃冰箱取出，在MRS琼脂平板上划线活化，于37℃厌氧培养箱培养至生长出单菌落。发酵培养：将MRS琼脂平板上生长的副干酪乳酪杆菌TG006单菌落接种至MRS发酵培养基中，37℃，200rpm/min摇床培养适宜时间。去除菌体及芽孢：室温离心去除菌体，吸取上清液，使用滤膜过滤去除菌体，获得无菌的胞外多糖培养液。巴氏法灭活菌体和游离酶：60-80℃保温10-40min，急速冷却至4-16℃。多糖浓缩：使用旋转蒸发仪，37-70℃加热，十倍浓缩胞外多糖培养液至合适体积。去蛋白：向浓缩液中加入终浓度10-25％的三氯乙酸(TCA)，混匀后4℃放置过夜以沉淀蛋白，离心收集上清。或使用Sevage法除蛋白，将浓缩液置于分液漏斗中，按照浓缩液V：氯仿V：正丁醇V＝25:5:1～36:6:1加入等体积比的氯仿和正丁醇。振摇5min，4000r/min离心5min，收集上清液，上清液重复脱蛋白直至中间蛋白消失。多糖醇提：向浓缩液中添加无水乙醇，使无水乙醇终浓度为80％，过夜沉淀胞外多糖，10000xg离心1-5min，弃上清，收集胞外多糖沉淀，使用75％乙醇洗涤沉淀2次。冷冻干燥：将沉淀置于-80℃冰箱冷藏2-5小时，真空冷冻干燥得副干酪乳酪杆菌粗多糖。溶解：加入少量蒸馏水溶解沉淀，制备浓度为200mg/ml的胞外多糖母液。鉴定：利用Molish反应鉴定粗胞外多糖溶液中是否存在糖类物质。
副干酪乳酪杆菌TG006胞外多糖的最终得率为7.64g/L，加水复溶后，经Molish鉴定结果如图7所示。其中，从左往右分别为1％葡萄糖、生理盐水和副干酪乳酪杆菌TG006胞外多糖溶液，副干酪乳酪杆菌TG006胞外多糖溶液在Molish反应下，产生明显紫环。
实施例4：副干酪乳酪杆菌TG006代谢上清液对结直肠癌细胞HCT-8的生长抑制。
菌株培养：将培养的副干酪乳杆菌TG006，取500μl接种于,10mL BHIS液体培养基中，置于厌氧箱中培养24-48h后，测OD600值，取OD600值在1.5-2.5左右的1mL菌株混悬液进行离心(4℃，5000rpm,8min)后，小心将上清液转移至无菌的EP管中；上清液过滤：将离心的上清液和BHIS通过0.22μm除菌过滤器转移到新的EP管中；按0、0.3％、0.6％、1.2％、2.5％、5％、10％、20％、30％和40％的比例用细胞培养基稀释细菌上清液/BHIS液体培养基，PBS缓冲液稀释FBS-1640培养基，配好，备用。观察：镜下观察HCT-8细胞生长状态，细胞状态良好后，吸掉旧培养液，用PBS或平衡盐溶液洗涤细胞一至二次；向T25培养皿中加入胰酶溶液2mL，37℃作用1-2min，于倒置显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量含血清的新鲜培养基终止胰酶作用，离心后再吸掉上清液；制备细胞悬液：加入适量的新鲜培养基，用移液管上下吸放数次以打散细胞团块，混合均匀；接种细胞：接种至96孔板中，铺板时调整待测细胞密度调至1×104-105个/孔，每孔加入细胞悬液100μL，边缘孔用无菌PBS填充(保湿)，每组做3个重复；接种后置于37℃，5％ CO2培养箱中培养6h使细胞贴壁，向其中一96孔板每孔加入10μL的CCK8溶液，孵育2h后测OD450值；另一96孔板将旧的培养基弃掉，加入不同浓度的待测上清液；将培养板在培养箱中孵育48h；再向板中每孔加入10μL的CCK8溶液；将培养板置于37℃、5％ CO2培养箱中孵育2h；用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
副干酪乳杆菌TG006菌液上清对结直肠癌细胞HCT-8生长的抑制作用如图8所示，副干酪乳杆菌TG006菌液上清液对结直肠癌细胞HCT-8细胞具有抑制作用，随着菌液上清浓度越高，对结直肠癌细胞HCT-8的生长抑制效果更强。在菌液上清添加量为40％时，对结直肠癌细胞HCT细胞的生长抑制率为29.6％。
实施例5：副干酪乳酪杆菌TG006的胞外多糖对结直肠癌细胞HCT-8的生长抑制。
将副干酪乳酪杆菌TG006胞外多糖溶液(200mg/ml)按0、0.3％、0.6％、1.2％、2.5％、5％、10％、20％、30％、40％的比例用细胞培养基稀释细菌上清液/BHIS液体培养基，使副干酪乳酪杆菌TG006的胞外多糖在细胞培养基中的浓度为0、0.6、1.2、2.4、5、10、20、40、60和80mg/mL，PBS缓冲液稀释FBS-1640培养基，配好备用。观察：镜下观察结直肠癌细胞HCT-8的生长状态，细胞状态良好后，吸掉旧培养液，用PBS或平衡盐溶液洗涤细胞一至二次；向T25培养皿中加入胰酶溶液2mL，37℃作用1-2min，于倒置显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量含血清的新鲜培养基终止胰酶作用，离心后再吸掉上清液；制备细胞悬液：加入适量的新鲜培养基，用移液管上下吹打数次以打散细胞团块，混合均匀；接种细胞：接种至96孔板中，铺板时调整待测细胞密度调至1×104-105个/孔，每孔加入细胞悬液100μL，边缘孔用无菌PBS填充(保湿)，每组做3个复孔；接种后置于37℃，5％ CO2培养箱中培养6h使细胞贴壁，向其中一96孔板每孔加入10μL的CCK8溶液，孵育2h后测OD450值；另一96孔板将旧的培养基弃掉，加入不同浓度的待测上清液；将培养板在37℃、5％ CO2培养箱中孵育48h；再向板中每孔加入10μL的CCK8溶液；将培养板置于37℃、5％ CO2培养箱中孵育2h；用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
副干酪乳杆菌TG006胞外多糖对结直肠癌细胞HCT-8的生长的抑制作用如图9所示，副干酪乳杆菌TG006胞外多糖对结直肠癌细胞HCT-8具有抑制作用，副干酪乳酪杆菌IC50值为18mg/mL。
实施例6：副干酪乳酪杆菌TG006应用于固体饮料的制备。
将副干酪乳酪杆菌TG006按照总质量0.5-5％的接种量接种至5L MRS液体培养基的厌氧发酵罐中，于37℃培养24h；将培养液离心收集菌体，并使用生理盐水洗涤菌体；使用20-120g/L的海藻糖或脱脂乳粉溶液作为冻干保护剂，按照5:1～2:1的比例混合20g菌体；真空冻干混合的菌液制备副干酪乳酪杆菌TG006菌粉，菌粉如图10所示。
将含有1×108CFU/g的副干酪乳酪杆菌TG006菌粉与低聚半乳糖、麦芽糊精进行混合，每份总质量为2g，得到包含副干酪乳酪杆菌TG006的固体饮料。通常情况下，固体饮料中，副干酪乳酪杆菌TG006的活菌数不低于1×108CFU/mL或1×108CFU/g。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌，其特征在于所述副干酪乳酪杆菌为副干酪乳酪杆菌TG006，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：【CGMCC No.25452】，保藏时间为【2022年08月01日】。
2.根据权利要求1所述的具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌，其特征在于所述副干酪乳酪杆菌的基因序列为：
GTGTGTCTACTGATGGAAGTCGAACGAGTTCTCGTTGATGATCGGTGCTTGCACCGAGATTCAACATGGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAGATCCAAGAACCGCATGGTTCTTGGCTGAAAGATGGCGTAAGCTATCGCTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGACGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAAGCGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTCGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAGACCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCTCTAAGGTGACAAGTGTATCACATG。
3.根据权利要求1所述的具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的应用，其特征在于所述副干酪乳酪杆菌应用于食品。
4.根据权利要求3所述的具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的应用，其特征在于食品由副干酪乳酪杆菌TG006作为发酵剂或食品补充剂。
5.根据权利要求4所述的具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的应用，其特征在于上述食品中副干酪乳酪杆菌TG006的活菌数不低于1×108CFU/mL或1×108CFU/g。
6.根据权利要求5所述的具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的应用，其特征在于上述的食品中，还包含以下菌种的任意一种或任意组合：青春双歧杆菌BAC30、长双歧杆菌BL21、短双歧杆菌BBr60、罗伊氏乳杆菌LR08、两歧双歧杆菌BBi32和嗜酸乳杆菌UALa-01。
7.根据权利要求6所述的具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的应用，其特征在于所述食品中还可以包括有辅料，所述辅料包括：低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、水苏糖、菊粉、抗性糊精、乳糖醇等肠道膳元，以及乳糖、干燥淀粉、糊精、环糊精、羧甲基淀粉钠、羧基淀粉丙酸酯、微晶性纤维素、羧甲基纤维素、麦芽糊精和硬脂酸镁。
8.一种具有抑制结直肠癌细胞增殖的副干酪乳酪杆菌的固体饮料，其特征在于，所述固体饮料包括有副干酪乳酪杆菌TG006。
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CN117305162A (zh) * 2023-09-25 2023-12-29 广东行海生物科技有限公司 一种CMU-Pb-L5及其在制备治疗结直肠癌药物中的应用

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