CN116194118A - 利用microRNA组合的诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物 - Google Patents
利用microRNA组合的诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116194118A CN116194118A CN202180059274.6A CN202180059274A CN116194118A CN 116194118 A CN116194118 A CN 116194118A CN 202180059274 A CN202180059274 A CN 202180059274A CN 116194118 A CN116194118 A CN 116194118A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mirna
- fatty liver
- expression level
- steatohepatitis
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 title claims abstract description 88
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 title claims abstract description 63
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 title description 54
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 claims abstract description 61
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 69
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 40
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 37
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 claims description 36
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 claims description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 14
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 9
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 4
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 abstract description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 12
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 7
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 108091057317 miR-151a stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108091086416 miR-192 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091062762 miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 108091029500 miR-183 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091058866 miR-183-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091045731 miR-183-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091043778 miR-183-3 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 108091023084 miR-126 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091065272 miR-126-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091081187 miR-126-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091030790 miR-126-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092317 miR-126-4 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091031326 miR-15b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091057475 miR-29b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091025088 miR-29b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091043946 miR-29b-4 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091080274 miR-29b3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091078356 miR-4449 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N nonanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCC(O)=O BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000023549 cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical class P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N lauric acid triglyceride Natural products CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCC VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 230000007863 steatosis Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- -1 witepsol Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及用作诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物的miRNA‑4449以及从由miRNA‑15、miRNA‑21、miRNA‑29、miRNA‑126、miRNA‑151、miRNA‑183以及miRNA‑192组成的群组中选择的任一种以上miRNA，非酒精性脂肪肝中脂肪性肝炎不同于单纯性脂肪肝，脂肪性肝炎的预后不良，本发明通过从患者的血清中测量所述miRNA的水平来准确诊断非酒精性脂肪性肝炎，相比现有侵入性检查方法无副作用且简单经济，可实现脂肪性肝炎的早期诊断与适当治疗。
Description
技术领域
本发明涉及用于非侵入性体外诊断的诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物组合物等，更具体地，涉及用作从非酒精性脂肪肝中区分与诊断单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的生物标志物的microRNA(miRNA)组合。
背景技术
当在放射诊断学检查或肝脏活组织检查中发现肝组织中沉积有脂肪，并且排除酒精、药物及其他因素时，则会诊断为非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liverdisease，NAFLD)。从病理机制的角度，会从单纯性脂肪肝(simple steatosis)发展为非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis，NASH)，再发展为非酒精性脂肪肝相关肝硬化，而非酒精性脂肪肝是这一系列疾病的统称。在韩国的研究中，非酒精性脂肪肝的患病率根据不同的诊断方法存在很大差异。有研究表明，通过肝活检确诊的非酒精性脂肪肝的患病率为51.4％，而通过超声检查诊断的患病率较低为16-33％。
由于肝活检费用高、需要专家解读、存在并发症风险，2018年美国肝脏协会指南不推荐通过肝活检筛查非酒精性脂肪肝，仅在怀疑是脂肪性肝炎或发展到肝纤维化需要排除其他疾病时才推荐进行肝活检。但非酒精性脂肪肝患病组的总体死亡率高于正常对照组，特别是在进展为脂肪性肝炎时，会增加心血管病死亡率。很多情况下，不饮酒人员会在体检中通过腹部影像学观察到脂肪肝、肝功能异常等情况，因此在诊断和治疗时有必要考虑到非酒精性脂肪肝的可能性。
由于非酒精性脂肪肝的组织学炎症或是否纤维化对预后有很大影响，因此，肝活检仍然是非酒精性脂肪肝的标准诊断检查。然而，由于肝活检成本高、有创伤并且存在并发症风险，将其用于初次医疗诊断并不合理。此外，少量肝组织可能无法反映整体肝脏状况，而且不同病理检查者之间的诊断一致性可能较低。因此，正在做出了许多努力来通过影像学和生化检查而不是肝活检来评估非酒精性脂肪肝的组织学严重程度。
虽然诊断非酒精性脂肪肝并区分严重程度的非侵入性方法受到了很大关注，但目前仍然缺乏利用miRNA的研究。出现过利用现有的PCR来分析miRNA，并将其用于诊断的尝试，但选择数千个miRNA中的一部分进行PCR分析的结果具有局限性。此外，韩国研究人员已经申请了诊断非酒精性脂肪性肝炎的专利，但均为动物实验结果，存在局限性。
为此，本发明的发明人通过深入研究，开发出可以在现场立即使用的从非酒精性脂肪肝患者中区分脂肪性肝炎患者的非侵入性诊断方法，由此完成了本发明。
发明内容
要解决的技术问题
本发明要解决的技术问题是提供用作从非酒精性脂肪肝中鉴别单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的生物标志物的miRNA-4449以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上的miRNA。
并且，本发明的目的在于提供可以从非酒精性脂肪肝中鉴别和诊断单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的组合物及试剂盒。
并且，本发明的目的在于提供用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物，该药物组合物包括抑制miRNA-4449的表达或活性的物质以及抑制从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达或活性的物质。
然而，本发明要解决的技术问题并不受限于上述言及课题，未言及的其他课题将通过下面的记载由本领域普通技术人员明确理解。
解决问题的技术方案
为解决上述问题，本发明提供一种用于鉴别及诊断非酒精性脂肪肝中单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的生物标志物，其包括miRNA-4449，还包括从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA。
所述生物标志物优选为miRNA-4449、miRNA-21、miRNA-151以及miRNA-192的组合，更优选为miRNA-4449、miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192的组合。
并且，本发明提供一种从非酒精性脂肪肝中鉴别及诊断单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的组合物，其包括测量miRNA-4449表达水平的制剂，以及还包括测量从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平的制剂。
本发明的用于鉴别诊断的组合物优选包括可以测量miRNA-4449、miRNA-21、miRNA-151以及miRNA-192的表达水平的制剂，更优选包括可以测量miRNA-4449、miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192的表达水平的制剂。
作为本发明的一实施例，所述miRNA-4449包括序列号1的碱基序列，或由序列号1的碱基序列构成。
作为本发明的另一实施例，所述miRNA-15可以是miRNA-15b-3p(序列号2)；所述miRNA-21可以是miRNA-21-5p(序列号3)；所述miRNA-29可以是miRNA-29b-3p(序列号4)；所述miRNA-126可以是miRNA-126-5p(序列号5)；所述miRNA-151可以是miRNA-151a-3p(序列号6)；所述miRNA-183可以是miRNA-183-5p(序列号7)；所述miRNA-192可以是miRNA-192-5p(序列号8)。
表1
| miRNA | miRNA序列 | 序列号 |
| miRNA-4449 | cgucccggggcugcgcgaggca | 序列号1 |
| miRNA-15b-3p | cgaaucauuauuugcugcucua | 序列号2 |
| miRNA-21-5p | uagcuuaucagacugauguuga | 序列号3 |
| miRNA-29b-3p | uagcaccauuugaaaucaguguu | 序列号4 |
| miRNA-126-5p | cauuauuacuuuugguacgcg | 序列号5 |
| miRNA-151a-3p | cuagacugaagcuccuugagg | 序列号6 |
| miRNA-183-5p | uauggcacugguagaauucacu | 序列号7 |
| miRNA-192-5p | cugaccuaugaauugacagcc | 序列号8 |
并且，本发明提供包括可以测量所述miRNA的表达水平的制剂的从非酒精性脂肪肝中鉴别及诊断单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的试剂盒。
作为本发明的一实施例，可以测量所述miRNA的表达水平的制剂可以是具有与所述miRNA互补序列的寡核苷酸、引物或探针。
并且，本发明提供一种用于鉴别与诊断单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎的信息提供方法或诊断方法，包括以下步骤：从需要鉴别与诊断单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎的患者的生物样本中测量miRNA-4449，以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平。
作为本发明的一实施例，所述患者是诊断为非酒精性脂肪肝的患者，所述生物样本是从由血液、血清以及血浆组成的群组中选择的一种以上。
作为本发明的另一实施例，所述方法还包括对通过所述步骤测量的miRNA表达水平与在单纯性脂肪肝患者中测量的相当于所述测量的miRNA的miRNA的表达水平进行比较，当所述测量的miRNA的表达水平比单纯性脂肪肝患者高时，判定为非酒精性脂肪性肝炎的步骤，为判定非酒精性脂肪性肝炎，miRNA的表达水平相比单纯性脂肪肝患者是1.5以上，优选为2倍以上。
并且，本发明提供一种用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物，包括抑制miRNA-4449的表达的制剂，以及还包括抑制从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达的制剂。
作为本发明的一实施例，所述制剂是从由siRNA、适体(aptamer)、反义寡核苷酸以及化合物组成的群组中选择的一种以上。
并且，本发明提供用于制备预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物的miRNA-4449以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的用途。
并且，本发明提供一种非酒精性脂肪性肝炎的预防或治疗方法，包括以下步骤：将抑制miRNA-4449的表达的制剂，以及抑制从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达的制剂进一步向个体给药。
并且，本发明提供一种用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物的筛选方法，包括以下步骤：
(1)在肝细胞中处理候选物质；(2)测量所述细胞的miRNA-4449表达水平；以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平；以及(3)当所述步骤2中测量的miRNA表达水平相比处理候选物质之前减小时，将所述候选物质选定为用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物。
发明效果
本发明涉及作为可以诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物的miRNA-4449以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA，非酒精性脂肪肝中的脂肪性肝炎不同于单纯性脂肪肝，其预后不好，本发明可以通过测量患者血清中所述miRNA的水平，准确诊断非酒精性脂肪性肝炎，由此排除现有侵入式检查方法的副作用，利用简单经济的方法实现脂肪性肝炎的初期诊断与适当治疗。
附图说明
图1A是显示非酒精性脂肪性肝炎中表达量增加的8种miRNA各自的非酒精性脂肪性肝炎的诊断能力的附图。
图1B是显示4种miRNA的组合(miRNA-4449、miRNA-21、miRNA-151以及miRNA-192)与8种miRNA的组合(miRNA-4449、miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192)的非酒精性脂肪性肝炎的诊断能力的附图。
具体实施方式
本发明人深入研究可以替代肝活检的诊断非酒精性脂肪性肝炎的非侵入性检查方法，发现相比单纯性脂肪肝患者，非酒精性脂肪性肝炎患者中miRNA-4449、miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192出现过表达，由此完成了本发明。
为此，本发明提供一种miRNA的组合，其包括可以用来从非酒精性脂肪肝患者中确认进展为脂肪性肝炎的生物标志物的miRNA-4449，并且进一步包括从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上的miRNA。
并且，本发明还包括可以从患者的生物样本中测量miRNA-4449的表达水平的制剂，以及可以测量从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平的制剂，由此提供可以从非酒精性脂肪肝患者中鉴别与诊断单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的组合物。
在本发明中，“诊断”包括判定个体对于特定疾病或病症的易感性(susceptibility)、判定个体当前是否患有特定疾病或病症、判定患有特定疾病或病症的个体的预后(prognosis)或治疗计量(therametrics)(例如，监测个体的状况来提供有关治疗效果的信息)。
在本发明中，“鉴别”是指诊断、判断或辨别特定疾病状态，本发明使用的术语“鉴别疾病”特别是指从具有临床上相似特征中部分特征的疾病中准确区分具体疾病。但在确定特定疾病方面，该术语可以与诊断、判断、辨别和识别等术语互换使用。
从本发明的目的出发，本发明中的鉴别是指从非酒精性脂肪肝中区分单纯性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎。单纯性脂肪肝是指肝脏中堆积有中性脂肪的单纯性良性疾病，而非酒精性脂肪性肝炎是指伴随脂肪肝发生炎症或纤维化的进行性肝病，由于两种疾病的预后与治疗方法不同，因此区分单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎十分重要。
更优选地，本发明中的鉴别是指确认患有非酒精性脂肪肝的患者是否保持单纯性脂肪肝状态，或者是发展为非酒精性脂肪性肝炎，也就是将非酒精性脂肪性肝炎与单纯性脂肪肝进行区分。
本发明的特征在于使用MicroRNA(miRNA)生物标志物作为非侵入性工具来区分非酒精性脂肪性肝炎与单纯性脂肪肝。
更具体地，本发明提供一种技术，其测量样本内的miRNA-4449以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平，当所述miRNA相对过表达时，将相应样本的患者鉴别为非酒精性脂肪性肝炎患者。在本发明中，所述miRNA相对过表达是以从单纯性脂肪肝患者中测量的相当于所述miRNA的miRNA的表达量为基准，当miRNA表达水平是单纯性脂肪肝患者的miRNA表达量的约1.5倍以上时，将相应样本的患者判定为非酒精性脂肪性肝炎，优选地，应达到约2倍以上的过表达。
为了测量样本内存在的miRNA-4449的表达水平与从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平，可以使用能检测出miRNA的各种制剂。
并且，本发明的用于鉴别和诊断单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎的试剂盒包括可以从生物样本中测量miRNA-4449的表达水平的制剂，还包括可以测量从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平的制剂，所述制剂是指可以通过确认miRNA的表达水平来检测本发明的生物标志物的分子。
在本发明中，可以使用与miRNA特异性结合的反义寡核苷酸、引物、探针和/或抗体作为测量miRNA表达水平的制剂，并可以使用测量基因表达水平的公知方法，例如，可以使用引物进行PCR或使用探针进行杂交反应来测量miRNA表达水平。此外，所述试剂盒中除了实施所述检测的制剂之外，还可以包括本领域已知的各种有助于检测的工具和试剂，例如合适的载体、产生可检测信号的标记物质、稳定剂等。
在本发明中，生物样品可以是非侵入性样本，所述非侵入性样本可以是血液、血清、尿液或唾液，优选可以是血液或血清，更优选可以是血清，但并非受限于此。
在本发明中，miRNA的概念中包括构成该miRNA的寡核苷酸的功能等价物，例如，包括变异体(variants)和模拟物(mimic)，这些变异体(variants)和模拟物(mimic)的所述miRNA寡核苷酸的部分碱基序列出现了缺失(deletion)、取代(substitution)或插入(insertion)等变形，但与所述miRNA核酸分子在功能上起到相同作用。
在本发明中，“反义寡核苷酸”是指与所述miRNA互补结合来抑制表达的碱基序列，包括但不限于反义RNA(antisenseRNA)和拮抗miRNA(antagonist miRNA)。
在本发明中，“引物”是指具有游离羟基的短核酸序列，是能够与互补模板形成碱基对，并用作复制模板链的起始点的短核酸序列。例如，可以使用固相亚磷酰胺法等本领域公知的方法化学合成本发明的引物。
在本发明中，“探针”是指由几个或几百个碱基组成的RNA或DNA等的核酸片段，通过对其进行标记来检测是否存在特定miRNA。探针可以制备成寡核苷酸探针、单链DNA探针、双链DNA探针和RNA探针等形式，可以用生物素、FITC、罗丹明、DIG等标记或用放射性同位素进行标记。
在本发明中，试剂盒可以是包括进行RT-PCR所需的必要元素的试剂盒，但并不受限于此。作为一示例，RT-PCR试剂盒除了对标记基因具有特异性的各个引物对外，还可以包括试管或其他合适的容器、反应缓冲液、脱氧核苷酸(dNTP)、Taq-聚合酶以及逆转录酶、DNase、RNase抑制剂、DEPC-水(DEPC-water)、无菌水等。
并且，本发明提供用于从非酒精性脂肪肝中鉴别及诊断单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的信息提供方法，包括从患者的生物样本中测量miRNA-4449的表达水平与从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平的步骤，所述信息提供方法还包括对所述测量的miRNA的表达水平与单纯性脂肪肝患者的表达水平进行比较，当所述测量的miRNA的表达水平更高时判断为脂肪性肝炎的步骤。
所述测量miRNA表达水平的方法有RT-PCR、竞争性RT-PCR(Competitive RT-PCR)、实时RT-PCR(Real-time RT-PCR)、定量聚合酶反应(quantitative RT-PCR)、RNA酶保护分析法(RPA；RNase protection assay)、Northern印迹法(Northern blotting)、基因芯片、DNA-银纳米簇(DNA-silver nanoclusters，DNA/AgNC)传感器，或通过直接结合来测量表达水平的试剂盒方法，但并不受限于此。
在本发明中，所述miRNA表达抑制剂使用所述miRNA特异性抑制剂，所述表达抑制剂通过降低所述miRNA的表达水平或促进其的分解来降低细胞中所述miRNA的水平，或者可以通过与所述miRNA特异性结合来降低其活性，是选自由siRNA、适体(aptamer)、反义寡核苷酸及化合物组成的群组。所述化合物可以是任何抑制miRNA表达的化合物，非限制性示例有抗氧化剂、影响细胞生长的物质以及细胞信号传递物质，只要是能够抑制所述miRNA表达的物质即可。
在本发明中，“siRNA”是指双链RNA被Dicer酶切割后产生的长21-25个核苷酸的小RNA片段，其与具有互补序列的miRNA特异性结合来抑制表达。基于本发明的目的，是指与miRNA-4449以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA特异性结合来抑制所述miRNA的表达。siRNA可以化学合成或酶促合成。对于siRNA的制备方法没有特别限制，可以使用本领域公知的方法。例如，直接化学合成siRNA的方法、利用体外(in vitro)转录合成siRNA的方法、利用酶来切割体外(in vitro)转录合成的长双链RNA的方法、将shRNA表达质粒或病毒载体转运到细胞内的表达方法、以及通过将聚合酶链反应(PCR，polymerase chain reaction)诱导的siRNA表达框架(cassette)转运到细胞内的表达方法，但并不受限于此。
在本发明中，可以采用显微注射法、磷酸钙共沉淀法、电穿孔法和利用脂质体的方法将miRNA抑制剂引入细胞内，但并不受限于此。
在本发明中，“预防”是指通过施用本发明的组合物来延缓肝组织的炎症和纤维化或随之而来的异常的全部行为；“治疗”是指通过施用本发明的药物组合物使得肝组织的炎症和纤维化以及随之而来的代谢异常症状得到改善或有效缓解的全部行为。另外，本发明的治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物的给药对象只要是哺乳动物即可，没有特别限制，但优选为人类，更具体为非酒精性脂肪肝患者。
在本发明中，药物组合物(pharmaceutical composition)还可以包括制备药物组合物常用的合适的载体、赋形剂以及稀释剂。
在本发明中，“载体(carrier)”也称为媒介(vehicle)，是指促进蛋白质或多肽进入细胞或组织内的化合物，例如，二甲基亚砜(DMSO)是可促进许多有机物进入生物的细胞或组织内的常用载体。
在本发明中，“稀释剂(diluent)”是指稀释在水中的化合物，其可以稳定目标蛋白质或肽的生物活性，同时溶解蛋白质或肽。溶解在缓冲溶液中的盐在本领域中用作稀释剂。磷酸盐缓冲盐水模拟人体中的盐状态，是一种常用的缓冲溶液。由于缓冲盐可以在低浓度下控制溶液的pH值，缓冲稀释剂很少改变化合物的生物活性。本文使用的含有壬二酸的化合物可以直接向人体患者给药，或者可以利用联合疗法与其他成分混合或与合适的载体或赋形剂混合制备成药物组合物进行给药。
此外，根据本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物可以通过通常的方法制备成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等外用制剂以及无菌注射液的形式进行使用，所述组合物中可包含的载体、赋形剂和稀释剂包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、低聚糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油等。在进行配制时，使用常用的填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、分解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂。用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂是通过在所述化合物中混合淀粉、碳酸钙(calcium carbonate)、蔗糖(sucrose)、乳糖(lactose)、明胶等至少一种赋形剂制成。除了简单的赋形剂外，还使用硬脂酸镁、滑石粉等润滑剂。口服液剂型包括混悬剂、口服溶液剂、乳剂和糖浆，除常用的作为简单稀释剂的水和液体石蜡外，还可以加入润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等各种赋形剂。用于肠胃外给药的制剂包括灭菌水溶液、非水溶剂、混悬剂、乳剂、冻干制剂和栓剂。作为非水溶剂和混悬剂可以使用丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇、橄榄油等植物油，油酸乙酯等可注射酯。作为栓剂的基质，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、月桂脂、甘油角蛋白等。
本发明的药物组合物可以口服或肠胃外给药，优选肠胃外给药，在肠胃外给药时可以通过肌肉注射、静脉注射、皮下注射、腹腔注射、局部给药、经皮给药等方式给药。
本发明的药物组合物的合适剂量根据配制方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病理状况、食物、给药时间、给药途径、排泄速度和反应敏感性等因素采用不同的处方。
本发明的药物组合物是使用本领域技术人员容易实施的方法，利用药学上允许的载体和/或赋形剂配来制成单位剂型或掺入大容量容器中。在这种情况下，剂型可以是在油或水介质中的溶液、混悬液或乳剂的形式，或者可以是提取物、散剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂的形式，并且还可以包括分散剂或稳定剂。
本发明可以进行多种变形，可以具有不同实施例，下面将通过附图详细说明特定实施例。应当理解，本发明并不受限于特定实施例，而是包括所有包括在本发明的精神和范围内的变换、等同物乃至其替换物。在描述本发明时，如果确定相关公知技术的详细描述可能模糊本发明的主旨时，则省略详细说明。
本发明的实施方式
实验方法
-针对非酒精性脂肪性肝炎的miRNA诊断能力分析
收集通过组织学检查诊断为非酒精性脂肪肝的24名患者的血清并进行分析。在这24名患者中12名患有单纯性脂肪肝，12名患有非酒精性脂肪性肝炎。从收集自这些患者的血清中分离出RNA并分析了miRNA表达。通过RNA测序(RNA sequencing)对miRNA进行表达分析，其结果如图1的ROC曲线所示。
实验结果
通过比较单纯性脂肪肝组和非酒精性脂肪性肝炎组的miRNA表达，两组的差异超过2倍以上，并且共有38个miRNA具有统计学意义。在非酒精性脂肪性肝炎组中，26个miRNA显著增加，12个miRNA显著降低。在非酒精性脂肪性肝炎中增加的miRNAs中，选择了8个表达充分的miRNAs，分别是miR-15b-3p、miR-21-5p、miR-29b-3p、miR-126-5p、miR-151a-3p、miR-183 -5p、miR-192-5p和miRNA-4449。表2显示了每种miRNA的非酒精性脂肪性肝炎诊断能力(AUROC)、统计显著性(p值)、敏感性(sensitivity)和特异性(specificity)。其中，AUROC有意义的miRNA是在两组中具有显著差异的miR-21-5p、miR-151a-3p、miR-192-5p、miR-4449。
表2
同时，将所述8种miRNA组合起来诊断非酒精性脂肪性肝炎的AUROC值为0.924，将miR-21-5p、miR-151a-3p、miR-192-5p、miR-4449这4种miRNA组合起来诊断非酒精性脂肪性肝炎的AUROC值为0.875，两组间无明显差异。
从以上结果可知，分析非酒精性脂肪肝患者的血清中的miR-15b-3p、miR-21-5p、miR-29b-3p、miR-126-5p、miR-151a-3p、miR-183-5p、miR-183-5p、miR-151a-3p、miR-183-5p、miR-192-5p以及miRNA-4449的表达并对它们进行组合可以诊断非酒精性脂肪性肝炎，所述miRNA是可以从非酒精性脂肪肝患者中区分单纯性脂肪肝患者与脂肪性肝炎患者的有用的生物标志物。
综上，对本发明的具体部分进行了详细的说明，对于本领域的技术人员而言应当理解，这些具体说明仅为优选实施例，并不因此而限制本发明的保护范围。因此，本发明的实质范围将由所附权利要求及其等同物限定。
工业实用性
本发明涉及用作诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物的miRNA-4449以及从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA，通过测量患者血清中miRNA的水平来准确区分和诊断非酒精性脂肪性肝炎，与单纯性脂肪肝不同，非酒精性脂肪性肝炎的预后不良，由此，可以有效用于非酒精性脂肪性肝炎的预防、治疗以及诊断领域。
序列表
<110> 高丽大学校产学协力团
<120> 利用microRNA组合的诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物
<130> FIC23210010P
<150> KR 10-2020-0093534
<151> 2020-07-28
<160> 8
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 1
cgucccgggg cugcgcgagg ca 22
<210> 2
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 2
cgaaucauua uuugcugcuc ua 22
<210> 3
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 3
uagcuuauca gacugauguu ga 22
<210> 4
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 4
uagcaccauu ugaaaucagu guu 23
<210> 5
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 5
cauuauuacu uuugguacgc g 21
<210> 6
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 6
cuagacugaa gcuccuugag g 21
<210> 7
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 7
uauggcacug guagaauuca cu 22
<210> 8
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 8
cugaccuaug aauugacagc c 21
Claims (15)
1.一种用于从非酒精性脂肪肝中鉴别及诊断单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的生物标志物组合物，其特征在于，
包括miRNA-4449，
还包括从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，
所述miRNA-4449是由序列号1的碱基序列构成。
3.一种用于从非酒精性脂肪肝中鉴别单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的组合物，其特征在于，
包括测量miRNA-4449表达水平的制剂，以及
还包括测量从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平的制剂。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，
可以测量所述miRNA的表达水平的制剂是具有所述miRNA的互补序列的寡核苷酸、引物或探针。
5.包括权利要求3所述的组合物的用于从非酒精性脂肪肝中鉴别单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎的试剂盒。
6.一种用于鉴别与诊断单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎的信息提供方法，其特征在于，
包括以下步骤：
从需要鉴别与诊断单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎的患者的生物样本中测量miRNA-4449，以及
从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平。
7.根据权利要求6所述的信息提供方法，其特征在于，
所述患者是诊断为非酒精性脂肪肝的患者，
所述生物样本是从由血液、血清以及血浆组成的群组中选择的一种以上。
8.根据权利要求6所述的信息提供方法，其特征在于，
包括以下步骤：
对通过所述步骤测量的miRNA表达水平与从单纯性脂肪肝患者中测量的对应于所述测量的miRNA的miRNA的表达水平进行比较。
9.根据权利要求8所述的信息提供方法，其特征在于，
包括以下步骤：
在所述进行比较的步骤之后，若需要鉴别诊断的患者的各miRNA表达水平是单纯性脂肪肝患者的1.5倍以上时，判断为非酒精性脂肪性肝炎。
10.一种鉴别与诊断单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎的诊断方法，其特征在于，
包括以下步骤：
从需要鉴别与诊断单纯性脂肪肝与非酒精性脂肪性肝炎的患者的生物样本中测量miRNA-4449，以及
从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平的步骤。
11.根据权利要求10所述的诊断方法，
包括以下步骤：
对通过所述步骤测量的miRNA表达水平与从单纯性脂肪肝患者中测量的对应于所述测量的miRNA的miRNA的表达水平进行比较。
12.一种用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物，其特征在于，
还包括抑制miRNA-4449的表达的制剂，以及
抑制从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达的制剂。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，
所述制剂是从由siRNA、适体、反义寡核苷酸以及化合物组成的群组中选择的一种以上。
14.一种非酒精性脂肪性肝炎的预防或治疗方法，其特征在于，
包括以下步骤：
将抑制miRNA-4449的表达的制剂，以及
抑制从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达的制剂进一步向个体给药。
15.一种用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物的筛选方法，其特征在于，
包括以下步骤：
(1)在肝细胞中处理候选物质；
(2)测量所述细胞的miRNA-4449表达水平；以及
从由miRNA-15、miRNA-21、miRNA-29、miRNA-126、miRNA-151、miRNA-183以及miRNA-192组成的群组中选择的任一种以上miRNA的表达水平；以及
(3)当所述步骤2中测量的miRNA表达水平相比处理候选物质之前降低时，将所述候选物质选定为用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200093534A KR102360963B1 (ko) | 2020-07-28 | 2020-07-28 | microRNA조합을 이용한 비알코올 지방간염 진단용 바이오마커 |
| KR10-2020-0093534 | 2020-07-28 | ||
| PCT/KR2021/004389 WO2022025387A1 (ko) | 2020-07-28 | 2021-04-08 | Microrna조합을 이용한 비알코올 지방간염 진단용 바이오마커 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116194118A true CN116194118A (zh) | 2023-05-30 |
Family
ID=80036492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202180059274.6A Pending CN116194118A (zh) | 2020-07-28 | 2021-04-08 | 利用microRNA组合的诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP4190915A4 (zh) |
| KR (2) | KR102360963B1 (zh) |
| CN (1) | CN116194118A (zh) |
| WO (1) | WO2022025387A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115814086B (zh) * | 2022-07-15 | 2024-05-14 | 四川大学华西医院 | circPI4KB在诊断和治疗非酒精性脂肪性肝病以及相关药物筛选中的应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9193971B2 (en) * | 2012-04-10 | 2015-11-24 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Methods for the treatment of nonalcoholic steatohepatitis |
| CN104254607B (zh) * | 2012-04-25 | 2020-10-27 | 赛诺菲 | 用于调节mir-21活性的微小rna化合物及方法 |
| KR101570269B1 (ko) * | 2013-06-19 | 2015-11-19 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 비알코올성 지방간염 감별용 바이오마커 ｍｉＲ-451 |
| KR101964743B1 (ko) * | 2017-01-19 | 2019-08-14 | 울산대학교 산학협력단 | Gnpat을 유효성분으로 포함하는 비알콜성 지방간염 진단용 또는 치료 예후 예측용 바이오마커 조성물 |
| JP6535357B2 (ja) | 2017-02-06 | 2019-06-26 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 非アルコール性脂肪肝治療用組成物、非アルコール性脂肪肝の治療剤の候補物質のスクリーニング方法及びｄｎａチップ |
| KR102110039B1 (ko) * | 2018-06-29 | 2020-05-12 | 순천향대학교 산학협력단 | 비만 진단을 위한 마이크로RNA-26b 또는 마이크로RNA-4449 바이오마커 및 이의 용도 |
-
2020
- 2020-07-28 KR KR1020200093534A patent/KR102360963B1/ko active IP Right Grant
- 2020-07-28 KR KR1020200093534D patent/KR20220014004A/ko unknown
-
2021
- 2021-04-08 EP EP21849165.2A patent/EP4190915A4/en active Pending
- 2021-04-08 WO PCT/KR2021/004389 patent/WO2022025387A1/ko active Application Filing
- 2021-04-08 CN CN202180059274.6A patent/CN116194118A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP4190915A1 (en) | 2023-06-07 |
| EP4190915A4 (en) | 2024-01-10 |
| KR102360963B1 (ko) | 2022-02-09 |
| WO2022025387A1 (ko) | 2022-02-03 |
| KR20220014004A (ko) | 2022-02-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102178922B1 (ko) | 당뇨병성 신증 진단을 위한 마이크로RNA let-7 또는 마이크로RNA-150 바이오마커 및 이의 용도 | |
| KR102242639B1 (ko) | 간 섬유화 진단용 바이오마커 miRNA4668-5p | |
| KR20200002241A (ko) | 비만 진단을 위한 마이크로RNA-26b 또는 마이크로RNA-4449 바이오마커 및 이의 용도 | |
| CN116194118A (zh) | 利用microRNA组合的诊断非酒精性脂肪性肝炎的生物标志物 | |
| CN104411834A (zh) | 子宫内膜异位的判定方法 | |
| KR102328770B1 (ko) | 비알코올 지방간염 진단용 바이오마커 miRNA-4449 | |
| KR102178919B1 (ko) | 당뇨병성 신증 진단을 위한 마이크로rna 바이오마커 및 이의 용도 | |
| CN112626207A (zh) | 一种用于区分非侵袭性和侵袭性无功能垂体腺瘤的基因组合 | |
| KR101381894B1 (ko) | 위암의 림프절 전이 진단 마커로서의 혈청 ｍｉＲＮＡ | |
| KR102165841B1 (ko) | 당뇨병 진단을 위한 마이크로RNA let-7b 또는 마이크로RNA-664a 바이오마커 및 이의 용도 | |
| KR102475257B1 (ko) | 당뇨병 치료제에 대한 약물반응성 예측용 마이크로 rna 바이오마커 및 이의 용도 | |
| JP5757032B2 (ja) | ｍｉＲＮＡを利用した慢性肝疾患の線維化の検査方法 | |
| KR102475261B1 (ko) | 당뇨병 치료제에 대한 약물반응성 예측용 마이크로 rna 바이오마커 및 이의 용도 | |
| CN111808961B (zh) | 一种用于检测肝癌的生物标志物组及其应用 | |
| US11328791B2 (en) | Method for determining the risk of developing acute kidney injury in a human subject with acute myocardial infarction and inhibiting such development | |
| CN114107487B (zh) | 一种可用于诊断脑卒中的产品 | |
| KR101871847B1 (ko) | Igbp1을 포함하는 루프스 신염 진단용 바이오 마커 조성물 | |
| KR102110050B1 (ko) | 당뇨병 진단을 위한 마이크로rna-423 또는 마이크로rna-424 바이오마커 및 이의 용도 | |
| EP4206334A1 (en) | Micro rna biomarker for predicting drug response to antidiabetics and use thereof | |
| KR102475259B1 (ko) | 당뇨병 치료제에 대한 약물반응성 예측용 마이크로 rna 바이오마커 및 이의 용도 | |
| US20230406913A1 (en) | Method for treating sars-cov-2 infectious disease | |
| KR20240006745A (ko) | 지방간 질환 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 용도 | |
| EP4015635A1 (en) | Colorectal cancer diagnostic marker, method for assisting diagnosis of colorectal cancer, method for collecting data for diagnosis of colorectal cancer, colorectal cancer diagnostic kit, therapeutic agent for colorectal cancer, method for treating colorectal cancer, and method for diagnosing colorectal cancer | |
| KR20230118040A (ko) | 비알코올 지방간염 환자에서 miR-4449 억제제를 유효성분으로 포함하는 간 섬유화의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| CN114350780A (zh) | 用于早期诊断急性心肌梗死的试剂及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |