CN116165321A - 鱼腥草药材的质量控制方法 - Google Patents
鱼腥草药材的质量控制方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116165321A CN116165321A CN202111417397.0A CN202111417397A CN116165321A CN 116165321 A CN116165321 A CN 116165321A CN 202111417397 A CN202111417397 A CN 202111417397A CN 116165321 A CN116165321 A CN 116165321A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- acid
- quality control
- sample
- methanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 240000000691 Houttuynia cordata Species 0.000 title claims abstract description 79
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 65
- 235000013719 Houttuynia cordata Nutrition 0.000 title claims abstract description 49
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 97
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 78
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 64
- FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N Hyperosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 58
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims abstract description 47
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 47
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims abstract description 47
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 47
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 47
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims abstract description 47
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 47
- OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N Hyperin Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N 0.000 claims abstract description 42
- OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N quercetin 3-O-beta-D-galactopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N 0.000 claims abstract description 42
- BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-o-galactoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims abstract description 39
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 claims abstract description 39
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 34
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 189
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 49
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 42
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 33
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 31
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 26
- UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M sodium;2-dodecoxy-2-oxoethanesulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOC(=O)CS([O-])(=O)=O UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 25
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 18
- NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N hyperoside Natural products OC[C@H]1O[C@@H](OC2=C(Oc3cc(O)cc(O)c3[C@H]2O)c4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N 0.000 claims description 17
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 17
- CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N trans-5-O-caffeoyl-D-quinic acid Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N 0.000 claims description 17
- GYFFKZTYYAFCTR-JUHZACGLSA-N 4-O-trans-caffeoylquinic acid Chemical compound O[C@@H]1C[C@](O)(C(O)=O)C[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 GYFFKZTYYAFCTR-JUHZACGLSA-N 0.000 claims description 16
- GYFFKZTYYAFCTR-UHFFFAOYSA-N 5-O-(6'-O-galloyl)-beta-D-glucopyranosylgentisic acid Natural products OC1CC(O)(C(O)=O)CC(O)C1OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 GYFFKZTYYAFCTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- OVSQVDMCBVZWGM-IDRAQACASA-N Hirsutrin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)C1=C(c2cc(O)c(O)cc2)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1=O OVSQVDMCBVZWGM-IDRAQACASA-N 0.000 claims description 16
- GYFFKZTYYAFCTR-LMRQPLJMSA-N cryptochlorogenic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)C(=O)O GYFFKZTYYAFCTR-LMRQPLJMSA-N 0.000 claims description 16
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N pseudochlorogenic acid Natural products C1C(O)C(O)C(O)CC1(C(O)=O)OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- OVSQVDMCBVZWGM-QSOFNFLRSA-N quercetin 3-O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-QSOFNFLRSA-N 0.000 claims description 16
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 claims description 16
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims description 16
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims description 16
- GXMWXESSGGEWEM-UHFFFAOYSA-N isoquercitrin Natural products OCC(O)C1OC(OC2C(Oc3cc(O)cc(O)c3C2=O)c4ccc(O)c(O)c4)C(O)C1O GXMWXESSGGEWEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- -1 diphenyl amino ethyl Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 8
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 7
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 5
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 4
- 239000006001 Methyl nonyl ketone Substances 0.000 claims description 3
- KMPQYAYAQWNLME-UHFFFAOYSA-N Undecanal Natural products CCCCCCCCCCC=O KMPQYAYAQWNLME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 3
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 3
- KYWIYKKSMDLRDC-UHFFFAOYSA-N undecan-2-one Chemical compound CCCCCCCCCC(C)=O KYWIYKKSMDLRDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims description 2
- 235000013717 Houttuynia Nutrition 0.000 abstract description 31
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- XJLDYKIEURAVBW-UHFFFAOYSA-N 3-decanone Chemical compound CCCCCCCC(=O)CC XJLDYKIEURAVBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 2
- 241000758769 Houttuynia Species 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 100
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 32
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 31
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 25
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 25
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 24
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 19
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 17
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 15
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 8
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 6
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 4
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 4
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 4
- RUVLSPPXPGECPV-UHFFFAOYSA-N O.OC=O.CC(O)=O.CCOC(C)=O Chemical compound O.OC=O.CC(O)=O.CCOC(C)=O RUVLSPPXPGECPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000212749 Zesius chrysomallus Species 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 3
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100028292 Aladin Human genes 0.000 description 2
- 101710065039 Aladin Proteins 0.000 description 2
- 101100087414 Arabidopsis thaliana RH20 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100248236 Arabidopsis thaliana RH33 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100301840 Arabidopsis thaliana RH47 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100033939 Arabidopsis thaliana RH55 gene Proteins 0.000 description 2
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WVVOBOZHTQJXPB-UHFFFAOYSA-N N-anilino-N-nitronitramide Chemical compound [N+](=O)([O-])N(NC1=CC=CC=C1)[N+](=O)[O-] WVVOBOZHTQJXPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 5-Caffeoyl quinic acid Natural products O[C@H]1C[C@](O)(C[C@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 241001391944 Commicarpus scandens Species 0.000 description 1
- 241000662429 Fenerbahce Species 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 101150042711 adc2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L calcium oxalate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C([O-])=O QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- YKNMBTZOEVIJCM-UHFFFAOYSA-N dec-2-ene Chemical compound CCCCCCCC=CC YKNMBTZOEVIJCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- OVSQVDMCBVZWGM-QCKGUQPXSA-N isoquercetin Natural products OC[C@@H]1O[C@@H](OC2=C(Oc3cc(O)cc(O)c3C2=O)c4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O OVSQVDMCBVZWGM-QCKGUQPXSA-N 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- WCYAALZQFZMMOM-UHFFFAOYSA-N methanol;sulfuric acid Chemical compound OC.OS(O)(=O)=O WCYAALZQFZMMOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZMJDSHXVKJFKW-UHFFFAOYSA-N methyl sulfate Chemical compound COS(O)(=O)=O JZMJDSHXVKJFKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本发明关于中药材质量控制技术领域，尤其涉及鱼腥草药材的质量控制方法。该质量控制方法包括鱼腥草的理化鉴别、指纹图谱、含量测定等检测项目，其中理化鉴别以甲基壬正酮、槲皮苷、金丝桃苷和绿原酸为质量控制指标，并优化了薄层色谱鉴别方法，在操作快捷的同时还能使上述化合物均能在薄层板上清楚地显示出来，专属性和耐用性均良好。本发明还优化了指纹图谱和含量测定方法中的供试品溶液制备方法以及色谱条件，使指纹图谱以及含量测定在精密度、专属性、稳定性、耐用性等方面均良好，从而有利于对鱼腥草药材的质量进行检测。
Description
技术领域
本发明关于中药材质量控制技术领域，尤其涉及鱼腥草药材的质量控制方法。
背景技术
鱼腥草药材为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分。鲜品全年均可采割；干品夏季茎叶茂盛花穗多时采割，除去杂质，晒干。
鱼腥草地上部分包括茎、叶和花，经研究发现，不同部位所含成分并不相同，由不同比例的茎、叶和花制成的鱼腥草药材，起有效成分的含量也会不同，由此影响含有鱼腥草药材的成方制剂的质量稳定性以及临床效果的稳定性。此外，鱼腥草药材产地、采集时间、加工方式、储存条件对质量产生的影响
目前《中国药典》所记载的鱼腥草药材的质量标准比较简单，难以准确判断其来源的具体部位以及质量。当其被微粉化处理后，则几乎无法判断。
因此，对于中成药生产企业来说，提高鱼腥草药材的质量控制标准，严格把控其购入鱼腥草的质量，对于保持含鱼腥草药材的成方制剂的质量稳定性、临床效果稳定性，提高临床用药有效性具有非常重要的意义。
发明内容
针对以上技术问题，本发明提供一种鱼腥草药材的质量控制方法，该质量控制方法包括鱼腥草的鉴别、指纹图谱、含量测定等检测项目，与现有技术相比，能够更准确地检测鱼腥草药材的质量。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一种鱼腥草药材的质量控制方法，包括以甲基壬正酮、槲皮苷、金丝桃苷和绿原酸作为理化鉴别的质量控制指标进行薄层色谱鉴别；
所述薄层色谱鉴别中供试品溶液的制备方法为：取待测样品粉末，以 70％～100％v/v甲醇超声提取25～35min，固液分离，取液相部分，即得供试品溶液；
展开剂为体积比为11:11:27:100的乙酸：甲酸：水：乙酸乙酯；
薄层板为GF254硅胶板；
检视方法：薄层板展开后，取出，烘干，依次喷以5mg/ml二苯基氨基乙酯甲醇溶液和50mg/ml聚乙二醇400甲醇溶液，置366nm下检视。
目前《中国药典》中对于鱼腥草的理化鉴别以甲基正壬酮为质量控制指标，制备供试品溶液时需要加乙酸乙酯缓缓加热至沸，并保持微沸4小时，放置半小时，然后取乙酸乙酯液，非常耗时，且乙酸乙酯易燃，操作具有一定的不安全性。另一方面，鱼腥草各部位均含有甲基正壬酮，单以甲基正壬酮作为理化鉴别的质量控制指标不足以准确判断鱼腥草的部位。本发明筛选出的上述作为质量控制指标的化合物在鱼腥草不同部位的含量有明显不同，故能够有效判断鱼腥草的来源部位。
为了缩短供试品溶液制备时间、提高操作的安全性，并同时使甲基壬正酮、槲皮苷、金丝桃苷和绿原酸被分离并显示出来，本发明对鱼腥草理化鉴别的供试品溶液制备方法和薄层色谱条件进行了试验研究，并最终选择了上述供试品溶液的制备方法和薄层色谱条件，所得供试品溶液在上述薄层色谱条件下能够清楚地显示出甲基壬正酮、槲皮苷、金丝桃苷和绿原酸的斑点，可有效鉴别鱼腥草的部位，专属性好，且耐用性良好。
优选地，以甲醇超声提取，每克所述样品粉末以8～12毫升甲醇超声提取。样品粉末和甲醇的比例进一步优选为1:10(g:mL)。使用甲醇作为溶剂能够简化溶剂配制，操作更便捷。
优选地，超声时间为30min。
优选地，固液分离方式为离心。
优选地，所述烘干的方式采用在95～105℃加热2～5min，以实现迅速烘干，便于显色剂更好的显色。
优选地，所述质量控制方法还包括指纹图谱质量控制方法，所述指纹图谱质量控制方法为高效液相色谱法，指标成分包括新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮苷和阿福豆苷；
供试品溶液的制备方法为：将待测样品粉末以50％v/v甲醇水溶液超声提取25～35min，固液分离后即得；
所述高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相A为乙腈，流动相B为0.035～0.065％磷酸溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～42 | 5→23 | 95→77 |
| 42～60 | 23→59 | 77→41 |
流速：0.8～1.2mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长为254nm。
上述线性梯度洗脱程序表示流动相比例在不同时间节点之间线性变化，如，流动相A的体积比在0～42min内由5％线性升至23％。
本发明对于供试品溶液的制备方法和色谱条件进行了考察，所得上述供试品溶液的制备方法能够提取获得较多的待测物，在上述色谱条件下，指标成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮苷和阿福豆苷的保留时间、峰面积、峰形、分离度等均较为理想。
优选地，磷酸溶液为0.05％磷酸溶液；流速为1.0mL/min；柱温为30℃。
以新绿原酸峰为标准峰，绿原酸的规定相对保留时间为1.49，隐绿原酸的规定相对保留时间为1.58；以槲皮苷峰为标准峰，芦丁的规定相对保留时间为 0.83，金丝桃苷的规定相对保留时间为0.85，异槲皮苷的规定相对保留时间为0.87，阿福豆苷的规定相对保留时间为1.14。
优选地，所述质量控制方法还包括含量测定，以新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷及阿福豆苷为含量测定指标；用高效液相色谱法检测待测样品中的有机酸和黄酮类化合物；
供试品溶液的制备方法为：将待测样品粉末以50％v/v甲醇水溶液超声提取25～35min，固液分离后即得；
所述高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相A为乙腈，流动相B为0.035～0.065％磷酸溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～42 | 5→23 | 95→77 |
| 42～60 | 23→59 | 77→41 |
流速：0.8～1.2mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长为254nm。
本发明对于供试品溶液的制备方法和色谱条件进行了考察，所得上述供试品溶液的制备方法能够提取获得较多的待测物，在上述色谱条件下，指标成分保留时间、峰面积、峰形、分离度等均较为理想。
优选地，磷酸溶液为0.05％磷酸溶液；流速为1.0mL/min；柱温为30℃。
优选地，所述测样品粉末与50％v/v甲醇水溶液的质量比体积为1:100(g： mL)。
优选地，所述芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和阿福豆苷的含量以槲皮苷的峰面积为对照，分别乘以校正因子计算得到，芦丁的校正因子为1.53，金丝桃苷的校正因子为1.04，异槲皮苷的校正因子为1.03，阿福豆苷的校正因子为1.26。
鱼腥草药材中的黄酮类化合物在干燥品中的含量应不小于0.08％，槲皮苷在干燥品中的含量应不小于0.05％，新绿原酸在干燥品中的含量应不小于0.028％或新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的总量不小于0.1％。
优选地，所述质量控制方法还包括性状鉴别和显微鉴别。
上述性状鉴别、显微鉴别应均符合《中国药典》2015年版中鱼腥草项下的鉴别要求。
优选地，干鱼腥草的所述质量控制方法还包括水分检查和酸不溶性灰分检查。按《中国药典》2015年版通则检查，干鱼腥草的水分应不超过15.0％，酸不溶性灰分应不超过2.5％。
本发明的有益效果在于：本发明提供的鱼腥草药材的质量控制方法能够准确鉴别鱼腥草药材的来源部位并检测其质量，对于中成药生产企业把控其购入鱼腥草的质量，提高其含鱼腥草的成方制剂产品的质量稳定性以及临床稳定性和有效性具有积极作用。
附图说明
下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：
图1是本发明实施例3中用实施例1的展开剂得到的薄层色谱图；
图2是本发明实施例4中0h的薄层色谱图；
图3是本发明实施例4中12h的薄层色谱图；
图4是本发明实施例4中24h的薄层色谱图；
图5是本发明实施例4中在默克薄层板上展开得到的薄层色谱图；
图6是本发明实施例4中在MN薄层板上展开得到的薄层色谱图；
图7是本发明实施例4中20.5℃，RH33％条件下得到的薄层色谱图；
图8是本发明实施例4中25.5℃，RH55％条件下得到的薄层色谱图；
图9是本发明实施例4中27.9℃，RH20％条件下得到的薄层色谱图；
图10是本发明实施例4中20.5℃，RH47％条件下得到的薄层色谱图；
图11是本发明实施例4中22.5℃，RH79％条件下得到的薄层色谱图；
图12是本发明实施例4中在ADC2-170409展开仪中得到的薄层色谱图；
图13是本发明实施例4中在ADC2-230010展开仪中得到的薄层色谱图；
图14是本发明实施例4中不同点样量的薄层色谱图；
图15是本发明实施例5中各批次(ZS-YXC-01，ZS-YXC-08，ZS-YXC-09， ZS-YXC-10，ZS-YXC-14，ZS-YXC-27，ZS-YXC-31，ZS-YXC-33，ZS-YXC-34， ZS-YXC-37，ZS-YXC-38，ZS-YXC-47，ZS-YXC-48)鱼腥草的薄层色谱图；
图16是本发明实施例5中各批次(FB-YXC-01，FB-YXC-02，FB-YXC-03， FB-YXC-04，FB-YXC-19，FB-YXC-25，FB-YXC-49，FB-YXC-50)鱼腥草的薄层色谱图；
图17是本发明实施例6中考察指纹图谱的高效液相色谱条件的重复性试验结果；
图18是本发明实施例6中考察指纹图谱的高效液相色谱条件的中间精密度 (不同日期)结果；
图19是本发明实施例6中考察指纹图谱的高效液相色谱条件的中间精密度 (不同人员)试验结果；
图20是本发明实施例6中考察指纹图谱的高效液相色谱条件的中间精密度 (不同仪器)试验结果；
图21是本发明实施例6中考察指纹图谱的高效液相色谱条件的稳定性试验结果；
图22是本发明实施例7中鱼腥草对照指纹图谱；
图23是本发明实施例7中15批鱼腥草药材指纹图谱测定结果；
图24-1是本发明实施例8中专属性试验结果的空白溶剂；
图24-2是本发明实施例8中专属性试验结果的新绿原酸；
图24-3是本发明实施例8中专属性试验结果的绿原酸；
图24-4是本发明实施例8中专属性试验结果的隐原酸；
图24-5是本发明实施例8中专属性试验结果的芦丁；
图24-6是本发明实施例8中专属性试验结果的金丝桃苷；
图24-7是本发明实施例8中专属性试验结果的异槲皮苷；
图24-8是本发明实施例8中专属性试验结果的槲皮苷；
图24-9是本发明实施例8中专属性试验结果的阿福豆苷；
图24-10是本发明实施例8中专属性试验结果的供试品溶液；
图25是本发明实施例8中线性考察试验结果(有机酸)；
图26是本发明实施例8中线性考察试验结果(黄酮类)；
图27是本发明对比例1中以显色剂1显色后的薄层色谱图；
图28是本发明对比例1中以显色剂2显色后的薄层色谱图；
图29是本发明对比例2中用展开剂1得到的薄层色谱图；
图30是本发明对比例3中用展开剂2得到的薄层色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
目前《中国药典》对于鱼腥草的理化鉴别以甲基正壬酮为质量控制指标，但检测甲基正壬酮时，供试品溶液的制备过程非常耗时且具有一定的不安全性。并且，单以甲基正壬酮作为理化鉴别的质量控制指标不足以准确鉴定鱼腥草药材的部位。为了提高鉴定的准确度，本发明以甲基壬正酮、槲皮苷、金丝桃苷和绿原酸共同作为理化鉴别的质量控制指标，并对鱼腥草理化鉴别的供试品溶液制备方法和薄层色谱条件进行了试验研究，最终选择了供试品溶液的制备方法为：取待测样品粉末，以70％～100％v/v甲醇超声提取25～35min，固液分离，取液相部分，即得供试品溶液；薄层色谱条件中的展开剂为乙酸:甲酸:水:乙酸乙酯(11:11:27:100)，薄层板为GF254硅胶板，检视方法为烘干(可选在95～105℃加热2～5min)依次喷以5mg/ml二苯基氨基乙酯甲醇溶液和50mg/ml聚乙二醇 400甲醇溶液，置366nm下检视。所得供试品溶液在上述薄层色谱条件下能够清楚地显示出甲基壬正酮、槲皮苷、金丝桃苷和绿原酸的斑点，可有效鉴别鱼腥草的部位，专属性好，且耐用性良好。
本发明还增加了药材指纹图谱和含量测定方法，并对供试品溶液的制备方法进行了实验研究，考察了不同的提取溶剂和提取方法，提取试剂例如水，甲醇-水(1：2)，甲醇-水(1：1)，甲醇-水(2：1)，甲醇-水(3：1)，甲醇等。结合上述不同提取试剂，本发明考察的提取方法包括超声、回流等，对不同溶剂在不同提取方式、提取时间、提取体积及提取次数下的提取效果进行了实验设计和验证，最终确定的供试品溶液制备方法为：将待测样品粉末以50％v/v甲醇水溶液超声提取25～35min，固液分离后即得。具体实施时可采用以下过程：取待测样品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％v/v甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率1130W，频率37kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％v/v甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，离心(每分钟4000转)10min，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
本发明还对指纹图谱测定以及含量测定的液相色谱条件进行了实验研究，考察了不同色谱柱、流动相系统、水相改性剂种类、水相酸度、流动相程序、流速、柱温以及进样量等色谱条件对于指标成分保留时间、峰面积、峰形、分离度等的影响。例如，在含量测定的液相色谱条件中考察了不同色谱柱(Agilent ZORBAX SB C18，Agilent Eclipse Plus C18，Waters XBridge C18等)、流动相系统(乙腈-水，乙腈-0.05％磷酸，甲醇-0.05％磷酸等)、水相改性剂种类(0.05％甲酸水溶液，0.05％乙酸水溶液，0.05％磷酸溶液等)、水相酸度(0.05％磷酸， 0.1％磷酸等)，流动相程序，流速(0.8mL/min，1.0mL/min，1.2mL/min等)，柱温(25℃，30℃和35℃)以及进样量(5μl，10μl和20μl)，确定了本发明中指纹图谱测定和含量测定的最佳色谱条件。经方法学验证，本发明中指纹图谱测定和含量测定方法专属性、精密度、稳定性、耐用性等均良好，可满足鱼腥草药材指纹图谱测定和含量测定的要求。
上述鉴别、药材指纹图谱以及含量测定方法提高了鱼腥草的质量标准，能够准确考察鱼腥草药材的部位、质量，对于中成药生产企业把控其购入的鱼腥草的质量，提高其含鱼腥草的成方制剂产品的质量以及临床安全性和有效性具有积极作用。
以下实施例中所采用的鱼腥草药材匀来自湖北，批号和具体产地如表1所示。
表1鱼腥草药材产品信息
以下实施例中薄层色谱鉴别所采用的对照品：
甲基壬正酮(中国食品药品检定研究院，批号110834-201603)，槲皮苷(中国食品药品检定研究院，批号111538-200403)，金丝桃苷(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号6415)，绿原酸(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号2772)，鱼腥草对照药材(中国食品药品检定研究院，批号121046-201406)。
以下实施例中薄层色谱鉴别所采用的仪器与试剂：
自动点样仪ATS4(瑞士卡玛公司)，成像仪VISUALIZER(瑞士卡玛公司)，自动展开仪ADC2(瑞士卡玛公司)，薄层自动浸渍器III(瑞士卡玛公司)，薄层加热器III,230V(瑞士卡玛公司)，电子天平CPA224S(赛多利斯北京有限公司)，超声仪(上海科导超声仪器有限公司)；
高效硅胶G 60F254玻璃板20×10cm(默克)，高效硅胶G 60F254玻璃板20×10cmNano-Durasil-20UV254(德国MN)；
甲苯(国药集团，分析纯，批号20180209)，环己烷(国药集团，分析纯，批号20180412)，甲醇(国药集团，分析纯，批号20181011)，乙酸乙酯(国药集团，分析纯，批号20180426)，无水甲酸(Aladdin，分析纯，批号G1826035)，无水乙醇(国药集团，分析纯，批号20180822)，2-丁酮(国药集团，分析纯，批号20140604)，二苯基氨基乙酯(Aladdin，分析纯，批号1503001)，聚乙二醇400(国药集团，分析纯，批号20150626)。
以下实施例中指纹图谱和含量测定所采用的仪器与试剂：
Milli-Q Synthesis A10超纯水仪(MILLIPORE，Bedford，MA，USA)； Elma超声仪(Elma p180H，Germany，Serial 101561035)；安捷伦1260液相色谱系统(AgilentTechnologies，Agilent Technologies 1260Infinity，USA)：四元溶剂输送系统、在线脱气机，自动进样器，控温模块，柱温箱，二极管阵列检测器和色谱工作站(Chem Station ForLC 3D Systems A10.02(1757))，各模块详细信息见表2。
表2仪器信息
甲醇(分析纯，国药集团(上海)化学试剂有限公司，批号20180119)；磷酸(色谱纯，Tedia，USA，批号911254)；乙腈(色谱级，阿达玛斯(上海) 试剂有限公司，批号P1855094)。
以下实施例中指纹图谱和含量测定所采用的对照品：
新绿原酸(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号4974)，绿原酸(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号2772)，隐绿原酸(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号3208)，芦丁(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号5718)，金丝桃苷(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号5067)，异槲皮苷(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号5650)，槲皮苷(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号5634)，阿福豆苷(上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号6106)。
实施例1
本发明实施例提供了鱼腥草药材的质量控制方法。
1、鉴别
1.1性状鉴别
待测样品茎呈扁圆柱形，扭曲，表面黄棕色，具纵棱数条；质脆，易断。叶片卷折皱缩，展平后呈心形，上表面暗黄绿色至暗棕色，下表面灰绿色或灰棕色。穗状花序黄棕色。
1.2显微鉴别
待测样品横切面在NIKON NI-U正置偏光显微镜下具有如下特征：油细胞类圆形或椭圆形，直径28～104μm，内含黄色油滴。非腺毛1～16细胞，基部直径12～104μm，表面具线状纹理。腺毛头部2～5细胞，内含淡棕色物，直径9～34μm。叶表皮细胞表面具波状条纹，气孔不定式。草酸钙簇晶直径可达57μm。
1.3理化鉴别
供试品溶液：取待测样品粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液。取鱼腥草对照药材同法制成对照药材溶液。
对照品溶液：取金丝桃苷对照品加甲醇溶液制成每1ml含0.2mg的对照品溶液。
展开剂：乙酸-甲酸-水-乙酸乙酯(11:11:27:100)；
薄层板：高效硅胶G60 F254玻璃板20×10cm；
展距：6cm；
点样量：3μl；
显色剂：二苯基氨基乙酯甲醇溶液(1g→200ml)和聚乙二醇400甲醇溶液 (10g→200ml)；
检视方法：薄层板展开后，取出，在100℃加热3min，依次喷以二苯基氨基乙酯甲醇溶液和聚乙二醇400甲醇溶液，置366nm下检视。
2、指纹图谱
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％v/v甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率1130W，频率37kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％v/v甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，离心(每分钟4000转)10min，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备：取新绿原酸、槲皮苷对照品适量，精密称定，加50％v/v 甲醇水溶液制成每1ml含新绿原酸20μg、槲皮苷80μg的混合溶液，即得。
指纹图谱质量控制方法为高效液相色谱法，色谱条件为：
色谱柱：Agilent ZORBAX SB C18(规格：4.6mm×25cm；5μm)；
进样量：10μl；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
理论板数按槲皮苷峰计算，应不低于10000；
流动相：流动相A：乙腈，流动相B：0.05％磷酸溶液，进行线性梯度洗脱，线性梯度洗脱的程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～42 | 5→23 | 95→77 |
| 42～60 | 23→59 | 77→41 |
精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
以新绿原酸峰为标准峰，绿原酸的规定相对保留时间为1.49，隐绿原酸的规定相对保留时间为1.58；以槲皮苷峰为标准峰，芦丁的规定相对保留时间为 0.83，金丝桃苷的规定相对保留时间为0.85，异槲皮苷的规定相对保留时间为 0.87，阿福豆苷的规定相对保留时间为1.14。
按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，5分钟后的色谱峰，其相似度不得低于0.90。
3、含量测定
用高效液相色谱法检测待测样品中的新绿原酸、槲皮苷：
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％v/v甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率1130W，频率37kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％v/v甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，离心(每分钟4000转)10min，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备：取新绿原酸、槲皮苷对照品适量，精密称定，加50％v/v 甲醇水溶液制成每1ml含新绿原酸20μg、槲皮苷80μg的混合溶液，即得。
高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：Agilent ZORBAX SB C18(4.6×250mm，5μm)；
进样量：10μl；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
理论板数按槲皮苷峰计算，应不低于10000；
流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～42 | 5→23 | 95→77 |
| 42～60 | 23→59 | 77→41 |
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
采用一测多评法：咖啡酰奎宁酸类成分的含量以新绿原酸对照品为参照，以其相应的峰为S峰，利用相对保留时间和校正因子计算绿原酸、隐绿原酸的含量；以槲皮苷对照品为参照，以其相应的峰为S峰，利用相对保留时间和校正因子计算芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、阿福豆苷的含量。
各指标成分的相对保留时间规定值及校正因子见下表3。各指标成分的相对保留时间应在规定值的±5％范围之内。
表3校正因子及相对保留时间
上述校正因子已经过验证，两次所得校正因子RSD<2％，不同仪器及色谱柱校正因子RSD<1％，符合规定；对相对保留时间进行不同日期、人员、日期的验证，RSD<2％，符合规定。
限度为：按干燥品计算，含槲皮苷(C21H20O11)应不少于0.05％，黄酮类总量应不少于0.08％，新绿原酸应不小于0.028％或新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的总量不小于0.1％。
4、水分检查(干鱼腥草)：按《中国药典》2015年版通则0832第二法检查，干燥药材的水分应不超过15.0％。
5、酸不溶性灰分(干鱼腥草)：按《中国药典》2015年版通则2302检查，干燥药材的酸不溶性灰分应不超过2.5％。
实施例2
本发明实施例提供了鱼腥草药材的质量控制方法中的另一种理化鉴别方法。
供试品溶液：取待测样品粉末0.2g，加70％v/v甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液。取鱼腥草对照药材同法制成对照药材溶液。
对照品溶液：取金丝桃苷对照品加甲醇溶液制成每1ml含0.2mg的对照品溶液。
展开剂：乙酸-甲酸-水-乙酸乙酯(11:11:27:100)；
薄层板：高效硅胶G60 F254玻璃板20×10cm；
展距：6cm；
点样量：3μl；
显色剂：二苯基氨基乙酯甲醇溶液(1g→200ml)和聚乙二醇400甲醇溶液 (10g→200ml)；
检视方法：薄层板展开后，取出，在100℃加热3min，依次喷以二苯基氨基乙酯甲醇溶液和聚乙二醇400甲醇溶液，置366nm下检视。
实施例3
本实施例提供了上述质量控制方法中金丝桃苷的理化鉴定方法的专属性考察。
供试品溶液1：取批号FB-YXC-01的鱼腥草叶粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液1；
供试品溶液2：取批号FB-YXC-01的鱼腥草茎秆粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液2。
供试品溶液3：取批号FB-YXC-1的鱼腥草花粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液3。
供试品溶液4：取批号FB-YXC-1的鱼腥草全草(不带花)粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液4。
供试品溶液5：取批号FB-YXC-1的鱼腥草全草(已达开花期的带花全草) 粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液5。
供试品溶液6：取批号FB-YXC-1的鱼腥草全草(包括已开花的带花全草和未开花的全草)粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液6。
供试品溶液7：取批号ZS-YXC-48的鱼腥草叶粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液1；
供试品溶液8：取批号ZS-YXC-48的鱼腥草茎秆粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液2。
供试品溶液9：取批号ZS-YXC-48的鱼腥草花粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液3。
供试品溶液10：取批号ZS-YXC-48的鱼腥草全草(不带花)粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液4。
供试品溶液11：取批号ZS-YXC-48的鱼腥草全草(已达开花期的带花全草)粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液5。
供试品溶液12：取批号ZS-YXC-48的鱼腥草全草(包括已开花的带花全草和未开花的全草)粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液6。
对照药材溶液：取鱼腥草对照药材粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理30min，离心，取上清液，即得对照药材溶液。
对照品溶液：取金丝桃苷对照品加甲醇溶液制成每1ml含0.2mg的对照品溶液。
按实施例1的展开剂、薄层板、显色剂、检视方法得到的薄层色谱结果如图1所示。
根据图1的彩色薄层色谱图显示，鱼腥草叶和花制备的供试品中各斑点颜色较深，以金丝桃苷成分为例，提示其含量较茎秆中高。结果显示，该方法具有较好的专属性，可以区别不同的鱼腥草部位。
FB-YXC-01批的茎秆供试品(供试品溶液2)与鱼腥草对照药材在相同位置有相同颜色斑点——金丝桃苷斑点(RF值0.58)以下，第2个强度较弱的浅蓝色斑点(RF值0.49)(绿原酸)。提示甲醇可提取得到鱼腥草中的绿原酸成分，但供试品中该成分含量较低，并且在考察中发现，绿原酸在FB-YXC-01 及FB-YXC-48批次鱼腥草叶、花及全草中荧光斑点并不清晰、稳定，故绿原酸不作为对照斑点。该实验结果为供试品制备中优选以甲醇为提取溶剂，以及放弃将绿原酸作为对照提供了依据。
实施例4
本实施例提供了上述质量控制方法中理化鉴定方法的耐用性考察。
1、稳定性试验
按实施例1中供试品溶液的制备方法配制供试品溶液和对照药材溶液，以甲醇为溶剂配制金丝桃苷对照品溶液(0.2mg/mL)。取药材供试品溶液和对照品溶液、对照药材溶液分别在0h，12h和24h用实施例1的薄层色谱条件展开剂展开，按照上述薄层色谱方法进行检视。0h、12h、24h得到的薄层色谱图分别如图2、3、4所示。
图2～图4的彩色图显示，供试品溶液和对照品溶液、对照药材溶液在放置24h内色谱轮廓和斑点强度均无明显差异，显示该理化鉴定方法稳定性较好。
2、不同薄层板
按实施例1中供试品溶液的制备方法配制供试品溶液和对照药材溶液，以甲醇为溶剂配制金丝桃苷对照品溶液(0.2mg/mL)。取药材供试品溶液和对照品溶液、对照药材溶液分别在默克和MN两种高效薄层板展开，考察不同品牌薄层板对薄层分离效果的影响。展开剂同实施例1。在默克薄层板上展开得到的薄层色谱图如图5所示，在MN薄层板上展开得到的薄层色谱图如图6所示。
结果显示，不同薄层板显示相似薄层色谱轮廓斑点，具有较好的重现性，且默克薄层板分离效果略优于MN薄层板。
1.3温湿度影响
按实施例1中供试品溶液的制备方法配制供试品溶液和对照药材溶液，以甲醇为溶剂配制金丝桃苷对照品溶液(0.2mg/mL)。取药材供试品溶液和对照品溶液、对照药材溶液分别在不同实验室温湿度进行薄层色谱系统考察。薄层色谱条件同实施例1。20.5℃，RH33％条件下得到的薄层色谱图如图7所示， 25.5℃，RH55％条件下得到的薄层色谱图如图8所示，27.9℃，RH20％条件下得到的薄层色谱图如图9所示，20.5℃，RH47％条件下得到的薄层色谱图如图 10所示,22.5℃，RH79％条件下得到的薄层色谱图如图11所示。
结果显示，对照品溶液和供试品溶液在不同实验室温湿度条件下展开，薄层色谱图轮廓无明显差异。显示该理化鉴定方法在实验室条件下基本不受温湿度影响。
4、不同展开仪
按实施例1中供试品溶液的制备方法配制供试品溶液和对照药材溶液，以甲醇为溶剂配制金丝桃苷对照品溶液(0.2mg/mL)。取药材供试品溶液和对照品溶液、对照药材溶液分别在不同展开仪中展开，考察不同展开仪对薄层分离效果的影响。在ADC2-170409展开仪中得到的薄层色谱图如图12所示，在 ADC2-230010展开仪中得到的薄层色谱图如图13所示。
图12和图13的彩色图显示，对照品溶液和供试品溶液在不同展开仪展开，薄层色谱图轮廓无明显差异。显示展开仪对该理化鉴定方法的鉴别结果无明显影响。
5、不同点样量
按实施例1中供试品溶液的制备方法配制供试品溶液和对照药材溶液，以甲醇为溶剂配制金丝桃苷对照品溶液(0.2mg/mL)。取药材供试品溶液和对照品溶液、对照药材溶液分别采用不同的点样量，考察不同点样量对薄层分离效果的影响。结果如图14所示，在供试品色谱中，随着点样量的升高，RF值0.5 以下的斑点有所变形，且点样量越大，变形越严重，基于3μl与5μl鉴别结果基本一致，且点样5μl时，RF值0.1处的斑点条带已有所变样，故选择3μl作为最优点样量。
实施例5
本实施例提供了不同批次鱼腥草药材的理化鉴定结果。
取待测样品粉末0.5g，加甲醇5mL，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液；
对照药材溶液：取鱼腥草对照药材，同法制成对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取金丝桃苷对照品加50％v/v甲醇溶液制成每1ml含 0.5mg的对照品溶液；
展开剂：乙酸-甲酸-水-乙酸乙酯(11:11:27:100)；
薄层板：高效硅胶G60 F254玻璃板20×10cm(默克)；
展距：6cm；
点样量：3μl；
显色剂：二苯基氨基乙酯甲醇溶液(1g→200ml)和聚乙二醇400甲醇溶液 (10g→200ml)；
检视方法：薄层板展开后，取出，在100℃加热3min，依次喷以二苯基氨基乙酯甲醇溶液和聚乙二醇400甲醇溶液，置366nm下检视。
各批次鱼腥草所得高效薄层色谱图如图15和图16所示。由图15和图16 的彩色图显示，在紫外灯366nm下，金丝桃苷在RF0.48～0.5呈橙色斑点。鱼腥草对照药材在RF0.1呈现一个白色斑点，RF0.15处隐约有一个橙黄色斑点， RF0.18位置有一个灰绿色斑点，RF0.29,0.45,0.6位置呈现一黄色斑点，在RF0.4 附近有两个紧挨的蓝色斑点，在RF0.7～0.8有一个强度较弱的蓝色斑点和灰色斑点，最后有一个蓝色斑点和两个较强的红色斑点。鱼腥草对照药材在相同位置显示与对照品颜色一致的薄层斑点。鱼腥草，ZS-YXC-01，ZS-YXC-08， ZS-YXC-09，ZS-YXC-10，ZS-YXC-14，ZS-YXC-27，ZS-YXC-33，ZS-YXC-34， ZS-YXC-37，ZS-YXC-38，ZS-YXC-47，ZS-YXC-48，ZS-YXC-49，ZS-YXC-50， FB-YXC-01，FB-YXC-19显示与对照药材基本一致的薄层色谱轮廓； ZS-YXC-31，FB-YXC-02，FB-YXC-03批次在与金丝桃苷对照品相同位置有一强度极弱的斑点，其余斑点强度也较弱；FB-YXC-04，FB-YXC-25批次在RF0.5 位置处不显示与对照品和对照药材一致的橙色斑点，除最顶上两个红色斑点，其余斑点颜色都较弱，甚至不可见。该方法可大致判断出各批鱼腥草药材中诸多成分的含量高低情况。
实施例6
本实施例提供了实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件的方法学验证结果。以下供试品溶液的制备方法同实施例1。
1、重复性
按实施例1中指纹图谱测定的供试品溶液的制备方法制备六份供试品溶液，用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件测定，并将结果导入指纹图谱相似度评价系统进行比较。结果见图17。
结果表明，六份样品相似度为1.000，说明该方法的重复性符合要求。
2、中间精密度考察
在三个不同日期，每天制备三份样品，用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件进行测定，并将结果导入指纹图谱相似度评价系统进行比较。结果见图18。
由不同人员，每人分别制备三份供试品溶液，用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件进行测定，并将结果导入指纹图谱相似度评价系统进行比较。结果见图19。
以两台不同色谱仪器用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件测定三份供试品溶液，并将结果导入指纹图谱相似度评价系统进行比较。结果见图 20。
结果表明，不同日期、人员、仪器所得样品的相似度均为1.000。该方法的精密度结果符合规定。
3、专属性
用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件分别测定空白溶剂，对照品溶液和供试品溶液。结果表明，样品中各指标成分保留时间与对照品溶液对应，空白溶剂无干扰。方法专属性符合要求。
4、稳定性
用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件测定对照品溶液及供试品溶液在室温下测定24h的稳定性。结果见图21。
结果表明，供试品室温放置24h所得指纹图谱的相似度为1.000。稳定性符合要求。
4、耐用性
对实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件的检测波长，有机相比例，流速进行微小变动，并更改色谱柱类型，对供试品溶液剂型测定。结果见表4。
表4耐用性测定结果
结果表明，改变以上参数，相似度为0.998-1.000。方法耐用性符合要求。
实施例7
本实施例提供了21批鱼腥草药材的指纹图谱测定。
选择符合中国药典标准的21批样品，按实施例1中的制备方法制备指纹图谱测定的供试品溶液，用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件生成对照指纹图谱。对照指纹图谱见图22。图22中有8个共有峰：峰1为新绿原酸，峰2为绿原酸，峰3为隐绿原酸，峰4为芦丁，峰5为金丝桃苷，峰6为异槲皮苷，峰7为槲皮苷，峰8为阿福豆苷。
参照物溶液的制备：取新绿原酸、槲皮苷对照品适量，精密称定，加50％v/v 甲醇水溶液制成每1ml含新绿原酸20μg、槲皮苷80μg的混合溶液，即得。
取对照药材和21批待测的鱼腥草药材，按实施例1中的制备方法制备指纹图谱测定所用的对照药材溶液和供试品溶液，用实施例1中考察指纹图谱的高效液相色谱条件测定参照物溶液、对照药材溶液及21批药材对上述对照指纹图谱的相似度，结果见表5和图23。
表5各批药材相似度
各批供试品指纹图谱中分别呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。对照药材指纹图谱与对照指纹图谱比对，相似度为0.988，21批样品与对照指纹图谱的相似度0.576～0.999，其中十批相似度＞0.99。该相似度趋势大致与含量测定结果的趋势是一致的，例如编号13的样品(ZS-YXC-04批)相似度低，其各成分总含量也低)。
实施例8
本实施例提供了实施例1中含量测定的高效液相色谱条件的方法学考察结果。
1、准确度
称取0.1g鱼腥草粉末，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，分别精密加入相当于供试品溶液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、阿福豆苷含量50％，100％和150％相应的混合对照品溶液50ml，按供试品溶液制备方法制备并测定，每个浓度制备三份，共九份供试品溶液。测定结果见表6。
表6准确度考察结果
结果表明，该方法准确度符合要求。同时，外标一点法回收率与一测多评计算的回收率RSD<3％，满足要求。
2、重复性：
按实施例1中含量测定项下供试品溶液制备方法制备六份供试品溶液。用实施例1中含量测定的高效液相色谱条件进行测定，测定结果见表7。
表7重复性考察结果
结果表明，该方法重复性符合要求。同时外标一点法与一测多评法所得含量RSD<2％。
3、中间精密度：
在三个不同日期，三个人员分别按实施例1中含量测定项下供试品溶液制备方法制备三份供试品溶液，以三台用不同色谱仪器用实施例1中含量测定的高效液相色谱条件进行测定。测定结果见表8。
表8中间精密度结果
结果表明，各指标在各条件下含量RSD符合规定，阿福豆苷的不同仪器 RSD>3％，但总含量RSD<2％，该方法的中间精密度结果仍符合规定。同时，外标一点法与一测多评法所得总含量RSD<1％。
4、专属性
按实施例1中含量测定项下对照品溶液和供试品溶液制备方法制备对照品溶液和供试品溶液，用实施例1中含量测定的高效液相色谱条件分别测定空白溶剂，对照品溶液和供试品溶液。结果见图24-1～图24-10。
结果表明，样品中各指标成分保留时间与对照品溶液对应，空白溶剂无干扰。说明该方法专属性符合要求。
5、线性和范围
配制对照品贮备液，浓度分别为：新绿原酸0.0528mg/ml，绿原酸0.0088 mg/ml，隐绿原酸0.0430mg/ml，芦丁0.0175mg/ml，金丝桃苷0.0521mg/ml，异槲皮素0.0195mg/ml，槲皮素0.2268mg/ml，阿福豆苷0.0089mg/ml。分别吸取 0.2ml、0.6ml、1.2ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml至5ml容量瓶，以甲醇：水(1:1) 稀释并定容，配制标准曲线溶液，并以贮备液为最高浓度点。用实施例1中含量测定的高效液相色谱条件进行测定，以峰面积对浓度建立标准曲线。结果见表9及图25、图26。
表9标准曲线
结果表明，线性及范围符合要求。
6、稳定性
用实施例1中含量测定的高效液相色谱条件测定对照品溶液及供试品溶液在室温下的24h稳定性。结果表明，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷，阿福豆苷对照品溶液峰面积RSD分别为0.14％， 0.83％，0.25％，0.24％，0.09％，0.16％，0.12％，1.32％，样品峰面积RSD分别为0.35％，1.14％，0.29％，0.54％，0.66％，1.32％，0.07％，0.63％。该方法稳定性符合规定。
7、耐用性
对实施例1中含量测定的高效液相色谱条件的检测波长，有机相比例进行微小变动，并更改色谱柱类型。含量测定结果见表10。
表10耐用性考察结果(一测多评法)
柱1：Agilent ZORBAX SB C18(4.6×250mm，4.6μm)
柱2：Agilent Eclipse Plus C18(4.6×250mm，4.6μm)
柱3：Waters XBridge C18(4.6×250mm，4.6μm)
外标一点法与一测多评法所得总含量RSD<2％。结果表明，改变色谱柱时，多种成分含量及总含量RSD>3％；比例改变时，波长波动时的阿福豆苷及比例波动时的绿原酸含量RSD>3％，但总含量RSD<2％；其余参数未出现显著差异。耐用性结果提示应固定色谱柱，其余参数可进行微小变动。
实施例9
本实施例提供了不同批次鱼腥草药材的含量测定结果。
按实施例1中含量测定的方法对31批鱼腥草中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸进行含量测定。
测定结果如下：
表11各批鱼腥草药材含量(有机酸类，一测多评法，n＝2)
表12各批鱼腥草药材含量(黄酮类，一测多评法，n＝2)
表13各批鱼腥草药材含量(总含量，一测多评法)
外标一点法与一测多评法所得总含量RSD<3％。
对比例1
本对比例提供了以不同提取溶剂制备的供试品溶液，不同展开剂和显色方法进行薄层色谱鉴别的结果。
待测样品粉末均为FB-YXC-04批样品。
供试品溶液1：取批号FB-YXC-04的干鱼腥草25g剪碎，照挥发油测定法 (通则2204)加乙酸乙酯2ml，缓缓加热至沸，并保持微沸4小时，放置半小时，取乙酸乙酯液作为供试品溶液1。(同中国药典)
供试品溶液2：取批号FB-YXC-04粉末0.5g，加甲醇5mL，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液2；(即实施例1)
供试品溶液3：取批号FB-YXC-04粉末0.5g，加70％v/v甲醇5mL，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液3；(即实施例2)
供试品溶液4：取批号FB-YXC-04粉末0.5g，加乙醇5mL，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液4；
供试品溶液5：取批号FB-YXC-04粉末0.5g，加乙酸乙酯5mL，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液5；
供试品溶液6：取批号FB-YXC-04粉末0.5g，加甲苯5mL，超声处理30min，离心，取上清液，即得供试品溶液6；
甲基正壬酮对照品以甲醇溶解，得甲基正壬酮对照品溶液。
展开剂为：环己烷：乙酸乙酯(9:1)(中国药典)。
显色剂1为二硝基苯肼试液，检视方法为：薄层板展开后，取出，在100℃加热3min，喷以二硝基苯肼试液，置白光下检视。
显色剂2为10％硫酸甲醇，检视方法为：薄层板展开后，取出，在100℃加热3min，喷以10％硫酸甲醇，置366nm下检视。
薄层板同实施例1。
各样品以显色剂1显色的色谱图如图27所示；以显色剂2显色的,色谱图如图28所示。
以显色剂1显色的薄层板在白光下检视，在图27的彩色图中，仅供试品溶液1在与甲基正壬酮对照品相同位置显相同颜色的斑点，且斑点分离度稍差，供试品溶液2、4、5、6在RF值0.05，0.15处各有一个灰色斑点，RF值0.25，0.45，0.6处各有一个橙色斑点，RF值0.7处有一较强黄色斑点，样品3供试品溶液则无斑点。
以显色剂2显色的薄层板在紫外灯366nm下检视，在图28的彩色图中，各供试品在与对照品相同位置无对应斑点。各供试品的鉴别图谱中，供试品溶液1展开斑点较少，且有拖尾现象。供试品溶液3仅在RF值0.1，0.15和0.5 处有三个强度稍弱的斑点。供试品溶液2、4、5、6在RF值0.05，0.15处各有一红色斑点，0.25附近有一个灰绿色和灰色条带，0.45，0.58处各有一个蓝色斑点，0.78处有一个白色斑点，且供试品溶液2在RF值0.5处有一个强度稍弱的蓝色斑点。
各供试品溶液经显色剂2显色后在366nm下观察，较显色剂1显色后白光下观察斑点清晰，且供试品溶液1的斑点数量最多。
对比例2
本对比例提供了用不同展开剂进行薄层色谱鉴别的结果。
槲皮苷对照品、金丝桃苷对照品和绿原酸对照品分别以甲醇溶解，得各对照品溶液。取上述对照品溶液以及对比例1中的供试品溶液1～6和甲基正壬酮对照品溶液。
展开剂1为乙酸乙酯:2-丁酮:甲酸：水(24:3.6:1.5:0.9)(中国香港标准)；
展开剂2为乙酸:甲酸:水:乙酸乙酯(11:11:27:100)(同实施例1)。
薄层板、显色剂、检视方法均同实施例1。
以展开剂1展开得到的薄层色谱图如图29所示，以展开剂2展开得到的薄层色谱图如图30所示。在图29和图30中，1为甲基壬正酮对照品，2为槲皮苷对照品，3为金丝桃苷对照品，4为绿原酸对照品，5～10分别为供试品溶液 1～6。
图29和图30的彩色图显示：二者呈现相似轮廓薄层图谱，图29的斑点清晰度与分离度均低于图30，且图29中金丝桃苷和绿原酸没有分离。由图30显示，供试品溶液2和供试品溶液3的色谱清晰度明显高于供试品溶液4～6，并且供试品溶液4～6并未显示出槲皮苷、金丝桃苷的特征性斑点；供试品溶液2 和供试品溶液3依次在RF值0.1～0.2呈现三个浅清灰色斑点，在RF值0.4处有一强度稍弱的橙色斑点，在RF值0.45，0.75，0.9处均有一青灰色斑点，在 RF值0.5(金丝桃苷)和0.7(槲皮苷)处均有一个较强的橙色斑点。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，包括以甲基壬正酮、槲皮苷、金丝桃苷和绿原酸作为理化鉴别的质量控制指标进行薄层色谱鉴别；
所述薄层色谱鉴别中供试品溶液的制备方法为：取待测样品粉末，以70％～100％v/v甲醇超声提取25～35min，固液分离，取液相部分，即得供试品溶液；
展开剂为体积比为11:11:27:100的乙酸：甲酸：水：乙酸乙酯；
薄层板为GF254硅胶板；
检视方法：薄层板展开后，取出，烘干，依次喷以5mg/ml二苯基氨基乙酯甲醇溶液和50mg/ml聚乙二醇400甲醇溶液，置366nm下检视。
2.根据权利要求1所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，以甲醇超声提取，每克所述样品粉末以8～12毫升甲醇超声提取。
3.根据权利要求2所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，超声时间为30min。
4.根据权利要求1所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法还包括指纹图谱质量控制方法，所述指纹图谱质量控制方法为高效液相色谱法，指标成分包括新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮苷和阿福豆苷；所述高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相A为乙腈，流动相B为0.035～0.065％磷酸溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：
流速：0.8～1.2mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长为254nm。
5.根据权利要求4所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，磷酸溶液为0.05％磷酸溶液；和/或
流速为1.0mL/min；和/或
柱温为30℃。
6.根据权利要求1所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，以新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷及阿福豆苷为含量测定指标；用高效液相色谱法检测待测样品中的有机酸和黄酮类化合物；供试品溶液的制备方法为：将待测样品粉末以50％v/v甲醇水溶液超声提取25～35min，固液分离后即得；
所述高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相A为乙腈，流动相B为0.035～0.065％磷酸溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：
流速：0.8～1.2mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长为254nm。
7.根据权利要求6所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，磷酸溶液为0.05％磷酸溶液；和/或
流速为1.0mL/min；和/或
柱温为30℃。
8.根据权利要求6所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，鱼腥草药材中的黄酮类化合物在干燥品中的含量应不小于0.08％，槲皮苷在干燥品中的含量应不小于0.05％，新绿原酸在干燥品中的含量应不小于0.028％或新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的总量不小于0.1％。
9.根据权利要求1～8任一项所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法还包括性状鉴别和显微鉴别。
10.根据权利要求1～8任一项所述的鱼腥草药材的质量控制方法，其特征在于，干鱼腥草的所述质量控制方法还包括干鱼腥草的水分检查和酸不溶性灰分检查。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111417397.0A CN116165321A (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 鱼腥草药材的质量控制方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111417397.0A CN116165321A (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 鱼腥草药材的质量控制方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116165321A true CN116165321A (zh) | 2023-05-26 |
Family
ID=86415128
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111417397.0A Pending CN116165321A (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 鱼腥草药材的质量控制方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116165321A (zh) |
-
2021
- 2021-11-25 CN CN202111417397.0A patent/CN116165321A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114778731B (zh) | 鸡内金、炒鸡内金、醋鸡内金饮片及其标汤、颗粒剂的uplc特征图谱构建方法及应用 | |
| CN114778739B (zh) | 一种炒鸡内金标准汤剂质量检测方法 | |
| CN110297045B (zh) | 一种前胡配方颗粒的特征图谱检测方法 | |
| CN112763618B (zh) | 一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法 | |
| CN116879416A (zh) | 一种北刘寄奴药物制剂的特征图谱与薄层色谱的构建方法 | |
| CN101979027B (zh) | 金泽冠心胶囊的检测方法 | |
| CN115728409B (zh) | 一种夏桑菊颗粒定性和定量检测方法 | |
| CN114216980B (zh) | 一种银柴胡hplc-elsd指纹图谱建立方法 | |
| CN116165321A (zh) | 鱼腥草药材的质量控制方法 | |
| CN115524424A (zh) | 一种荠菜样品质量控制方法 | |
| CN105301138A (zh) | 一种藏茵陈的检测方法及其hplc指纹图谱 | |
| CN109856254B (zh) | 龙眼叶乙酸乙酯部位hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN111505156A (zh) | 一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法 | |
| CN116068120A (zh) | 金银花药材的质量控制方法 | |
| CN115586279B (zh) | 一种竹叶柴胡或其制剂的检测方法及其指纹图谱的构建方法 | |
| CN115452964B (zh) | 锦灯笼的uplc特征图谱构建方法及质量控制方法 | |
| CN116203180A (zh) | 麻黄药材的质量控制方法 | |
| CN118169275A (zh) | 一种丝瓜络配方颗粒质量检测方法 | |
| CN109917055B (zh) | 一种王不留行与炒王不留行饮片、标准汤剂、配方颗粒的质量检测及鉴别方法 | |
| CN116165322A (zh) | 甘草药材的质量控制方法 | |
| CN102854283A (zh) | 一种小金牛草的检测方法 | |
| CN115266982B (zh) | 一种全面控制落花生枝叶质量的检测方法 | |
| CN113917001B (zh) | 清肺排毒颗粒中黄芩有效成分的检测方法 | |
| CN116879445A (zh) | 地榆和长叶地榆配方颗粒特征图谱构建方法和鉴别方法 | |
| CN114660199B (zh) | 一种莲子标准汤剂质量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication |