CN116124916A - 一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，主要涉及对甲氧基苯乙酮检测技术领域，包括以下步骤，使用对甲氧基苯乙酮制备标准工作液，然后使用高效液相色谱仪对标准工作液进行检测得到标准曲线；使用高效液相色谱仪对待测样品进行定性检测；色谱条件：色谱柱：Sepax GP‑C18(150mm×4.6mm，5um)；流动相：庚烷磺酸钠‑乙腈溶液；流速：0.5‑1.2mL/min；检测波长：214nm；色谱柱温度：45±1℃。不需要进行梯度洗脱，10分钟内可完成检测，大大缩短了检测时间，提高检测效率的同时节约流动相带来的检测成本。

Description

一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法

技术领域

本发明主要涉及对甲氧基苯乙酮检测技术领域，具体涉及一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法。

背景技术

对甲氧基苯乙酮，又叫4-甲基苯乙酮，山楂花酮，英文名称:4'-Methylacetophenone，中文别名:4'-甲基苯乙酮；4-甲基苯乙酮，英文别名:4-Acetyltoluene；4-Methylacetophenone；4-Methylacetophenone(p-)；1-Acetyl-4-methylbenzene；1-Methyl-4-acetylbenzen；methyl p-tolyl ketone；4-MethylAcetophenone；Photoinitiator-4MAP；1-(4-methylphenyl)ethanone；1-(o-tolyl)ethanone；CAS号：100-06-1分子式：C9H10O2分子量：150.18；熔点：白色晶体，溶于乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。有刺激性。熔点：37-40℃，几乎不溶于水和甘油；有山楂花和类似茴香醛的香气；有蜂蜜和香豆素的香味，且香气较苯乙酮为柔和，极度稀释后有及草莓似的甜香味。GB2760-2014规定为允许使用的食用香料。在饲料香味剂领域，对甲氧基苯乙酮主要用以配制果香香精；也常用于烘烤食品、糖果、布丁等食用香精，日化香精和烟用香精的配方中；也常用于高级化妆品和皂用香精中，在肥皂中有很高的稳定性。在香精配方中的用量在5％以内。IFRA没有限制规定。

目前对甲氧基苯乙酮合成方法主要采用乙酰化法。以甲苯和醋酸酐为原料、在无水三氯化铝催化剂(或三氯化铁、氯化锌、酸性白土)存在下，进行乙酰化反应，然后经水解、中和、水洗、分离、蒸馏而得。可直接从巴西檀香木、玫瑰木等天然原料中经精馏提取而得；还可以由苯甲醚和乙酸在三氟化硼存在下反应而得；或由苯甲醚和乙酰氯在氯化铝和二硫化碳存在下反应而得。对甲氧基苯乙酮也可用于有机合成，可用于生产对甲氧基苯乙酸，用作葛根素的中间体。

中国专利CN103304395B-一种对甲氧基苯乙酮的合成方法，CN103772177B-一种对甲氧基苯乙酮的制备方法，CN108727172B-一种对甲氧基苯乙酮的催化合成方法，CN110590518A-一种制备对甲氧基苯乙酮的绿色新工艺，CN112358385A-一种对甲氧基苯乙酮连续化生产设备及生产方法等大致内容都是说的对甲氧基苯乙酮的生产工艺和合成方法，没有涉及到对甲氧基苯乙酮的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，解决现有技术中没有针对对甲氧基苯乙酮进行液相检测方法的技术问题。

本发明公开了一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，包括以下步骤，使用对甲氧基苯乙酮制备标准工作液，然后使用高效液相色谱仪对标准工作液进行检测得到标准曲线；

使用高效液相色谱仪对待测样品进行检测；

色谱条件：色谱柱：Sepax GP-C18(150mm×4.6mm，5um)；

流动相：庚烷磺酸钠-乙腈溶液；

流速：0.5-1.2mL/min；

检测波长：214nm；

色谱柱温度：45±1℃。

进一步的，流动相A：庚烷磺酸钠溶液：流动相B：乙腈＝70-90：30-10。

进一步的，所述庚烷磺酸钠-乙腈溶液中还加有三乙胺。

进一步的，所述流动相制备方法为将庚烷磺酸钠溶于水中，加入三乙胺，用磷酸调整溶液pH至3.5，然后加水稀释，再加入乙腈，用磷酸调整溶液pH至3.7，即得。

进一步的，所述对甲氧基苯乙酮对应的线性回归方程为Y＝152425X-8531.9，方程中Y即为对甲氧基苯乙酮对应的峰面积，X即为对甲氧基苯乙酮的质量浓度。

通过建立线性回归方程，能够实现对甲氧基苯乙酮的定量检测。

进一步的，所述线性回归方程检出限为0.34ug/mL。

进一步的，所述线性回归方程相关系数r为0.9973。

进一步的，使用高效液相色谱仪进样体积为10uL。

进一步的，所述标准工作液过程中加50％乙醇蒸馏水溶液溶解。

进一步的，所述标准工作液使用标准储备液进行制备。

进一步的，所述标准储备液制备方法为50％乙醇蒸馏水溶液溶解对甲氧基苯乙酮。

进一步的，所述标准储备液储藏温度为2-8℃。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

1.建立了一种高效液相色谱仪检测饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮含量的方法，能够对饲料香味剂中的对甲氧基苯乙酮进行定性和定量，为饲料香味剂成分和含量的准确判断和快速检测提供科学依据；弥补饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮高效液相检测的空白；

2.流动相为庚烷磺酸钠-乙腈溶液，并用磷酸调节PH＝3.7，独特的流动相让对甲氧基苯乙酮分离效果优异；

3.不需要进行梯度洗脱，10分钟内可完成检测，大大缩短了检测时间，提高检测效率的同时节约流动相带来的检测成本。

附图说明

图1为对甲氧基苯乙酮标准品色谱图；

图2为对甲氧基苯乙酮样品1；

图3为对甲氧基苯乙酮样品2。

具体实施方式

为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。

实施例1

一种高效液相色谱仪检测饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮含量的方法，具体包括以下步骤：

1.试剂和材料除非有特殊说明，本测定方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的二级水。

1.1庚烷磺酸钠：色谱纯

1.2磷酸：色谱纯

1.3三乙胺：色谱纯

1.4乙腈：色谱纯

1.5对甲氧基苯乙酮标准品：(CAS号：100-06-1，纯度>98％)，珠海香利莱有限公司提供

1.6标准储备液：分别称取0.1克对甲氧基苯乙酮于100mL容量瓶中，加50％乙醇蒸馏水溶液溶解，此样品为标准储备液，此溶液2-8℃下储藏，保存期1个月。

1.7标准工作液：分别准确量取0.5mL、1.0mL、2.0mL、5mL、10mL混合标准储备液(1.6)至100mL容量瓶中，50％乙醇蒸馏水定容，混匀，溶液浓度分别为0.005mg/mL，0.01mg/mL，0.020mg/mL，0.050mg/mL，0.100mg/mL此为标准工作液。此溶液现配现用。

2.仪器和设备

2.1实验室常用仪器设备

2.2分析天平：感量0.0001g

2.3有机滤膜：孔径0.45um

2.4高效液相色谱仪，配VWD检测器

2.5超声波清洗器

3.方法

3.1色谱条件

3.1.1色谱柱：Sepax GP-C18(150mm×4.6mm，5um)

3.1.2流动相：将3.0g庚烷磺酸钠溶于740mL水中，加入3.8mL三乙胺，用磷酸调整溶液pH至3.5，然后加水稀释至750mL。再加入250mL乙腈，用磷酸调整溶液pH至3.7，过滤后备用。

3.1.3流速：1.0mL/min

3.1.4检测波长：214nm

3.1.5色谱柱温度：45±1℃

3.1.6进样体积：10uL

3.2绘制标准曲线

分别取标准工作液(1.7)，按照3.1的色谱条件进行色谱分析测定。以对甲氧基苯乙酮的峰面积对其所相应的质量浓度进行线性回归，各线性回归方程所对应的曲线即为对甲氧基苯乙酮的标准曲线。对甲氧基苯乙酮对应的线性回归方程及相关系数r见表1，方程中Y即为对甲氧基苯乙酮对应的峰面积，X即为对甲氧基苯乙酮的质量浓度。

表1.对甲氧基苯乙酮的线性回归方程、相关系数、检出限

精密量取溶液为0.005mg/mL的对甲氧基苯乙酮溶液10uL注入液相色谱仪，连续进样6次，根据标准曲线计算对甲氧基苯乙酮的测得浓度，再计算6次测得浓度的标准偏差，三倍标准偏差即为对甲氧基苯乙酮在该方法的检出限。

3.3样品测定及结果计算

3.3.1待测样品的配制

准确称取0.5-2.0g(精确至0.0001g)样品于100mL容量瓶中，加入30-40mL 50％乙醇蒸馏水，超声10分钟，取出冷却后50％乙醇蒸馏水定容至100mL,摇匀，经0.45um有机滤膜过滤，等待上机。

3.3.2待测样品的测定

在相同的色谱条件下，分别精密量取样品溶液10uL注入液相色谱仪，以表1中的混合标准工作液做多点校正，根据保留时间和峰面积定性和定量。

3.3.3结果计算和表述

试样中对甲氧基苯乙酮的含量X，以质量分数表示，按照下式计算：

式中C—由标准曲线得出的试样中对甲氧基苯乙酮的浓度,mg/mL。

V—试样液总体积，mL。

m—试样的质量，g。

标准工作液的色谱图见图1，对甲氧基苯乙酮样品1，对甲氧基苯乙酮样品2色谱图分别见图2，图3，2个饲料香味剂样品的检测结果见表2。

表2.样品中对甲氧基苯乙酮的含量(％)

4.方法的重复性

连续检测6次样品2，计算对甲氧基苯乙酮测得含量的相对标准偏差(RSD)。结果见表3。

表3.样品中对甲氧基苯乙酮含量的相对标准偏差

5.准确度试验

在空白基质中分别加入不同量的对甲氧基苯乙酮标样，配成6个已知样，在相同的色谱操作条件下，定量分析，计算，测得对甲氧基苯乙酮的回收率如表4。

表4.空白基质中对甲氧基苯乙酮的加标回收试验

对比例1

作为本发明的一对比例，其实施方式与实施例1相同，改变仅为流动相分别使用甲醇：水＝90：10、甲醇：水＝80：20、甲醇：水＝70：30、甲醇：水＝60：40，不同的比例进行检测，对甲氧基苯乙酮没有响应，失败告终。

对比例2

作为本发明的一对比例，其实施方式与实施例1相同，改变仅为流动相使用0.02mol/L磷酸二氢钾水溶液，分别使用磷酸调节PH为3、4和5，对甲氧基苯乙酮没有响应，失败告终。

对比例3

作为本发明的一对比例，其实施方式与实施例1相同，改变仅为流动相使用乙酸铵：甲醇＝95:5，对甲氧基苯乙酮有响应但峰形不好。

对比例4

作为本发明的一对比例，其实施方式与实施例1相同，改变仅为流速选择1.5ml/min时，出峰时间在4分钟以内，时间太短且峰形不好。

以上即为本实施例列举的实施方式，但本实施例不局限于上述可选的实施方式，本领域技术人员可根据上述方式相互任意组合得到其他多种实施方式，任何人在本实施例的启示下都可得出其他各种形式的实施方式。上述具体实施方式不应理解成对本实施例的保护范围的限制，本实施例的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。

Claims (10)

1.一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，使用对甲氧基苯乙酮制备标准工作液，然后使用高效液相色谱仪对标准工作液进行检测得到标准曲线；

使用高效液相色谱仪对待测样品进行检测；

色谱条件：色谱柱：Sepax GP-C18(150mm×4.6mm，5um)；

流动相：庚烷磺酸钠-乙腈溶液；

流速：0.5-1.2mL/min；

检测波长：214nm；

色谱柱温度：45±1℃。

2.根据权利要求1所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于，所述流动相中流动相A：庚烷磺酸钠溶液：流动相B：乙腈＝70-90：30-10。

3.根据权利要求1所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于，所述庚烷磺酸钠-乙腈溶液中还加有三乙胺。

4.根据权利要求1所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于：所述流动相制备方法为将庚烷磺酸钠溶于水中，加入三乙胺，用磷酸调整溶液pH至3.5，然后加水稀释，再加入乙腈，用磷酸调整溶液pH至3.7，即得。

5.根据权利要求1所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于：所述对甲氧基苯乙酮对应的线性回归方程为Y＝152425X-8531.9，方程中Y即为对甲氧基苯乙酮对应的峰面积，X即为对甲氧基苯乙酮的质量浓度。

6.根据权利要求5所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于：所述线性回归方程检出限为0.34ug/mL。

7.根据权利要求5所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于：所述线性回归方程相关系数r为0.9973。

8.根据权利要求1所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于：使用高效液相色谱仪进样体积为10uL。

9.根据权利要求1所述的一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法，其特征在于：所述标准工作液过程中加50％乙醇蒸馏水溶液溶解。

10.根据权利要求1-9任一项所述一种饲料香味剂中对甲氧基苯乙酮的检测方法的应用，其特征在于，用于对甲氧基苯乙酮的检测。

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