CN116121310A - 一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法 - Google Patents

一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116121310A
CN116121310A CN202310297709.1A CN202310297709A CN116121310A CN 116121310 A CN116121310 A CN 116121310A CN 202310297709 A CN202310297709 A CN 202310297709A CN 116121310 A CN116121310 A CN 116121310A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amidase
dexketoprofen
synthesizing
enzyme
ketoprofen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310297709.1A
Other languages
English (en)
Inventor
罗积杏
壮晓健
童杰
贺志
叶美其
李永刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Jiuzhou Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Jiuzhou Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Jiuzhou Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Zhejiang Jiuzhou Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN202310297709.1A priority Critical patent/CN116121310A/zh
Publication of CN116121310A publication Critical patent/CN116121310A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/80—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/01—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in linear amides (3.5.1)
    • C12Y305/01004—Amidase (3.5.1.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • C12R2001/19—Escherichia coli

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法。利用酰胺酶催化酮洛芬酰胺选择性水解得到右旋酮洛芬，其中，所述酰胺酶来自Rhodococcus erythropolis CCM2595。所述酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中的酰胺酶对酮洛芬酰胺具有显著的催化活力、底物亲和力和区域选择性，且对底物和产物耐受性高，该酰胺酶反应的酶底比1/20、底物浓度100g/L、转化率43％以上、产物光学纯度﹥99.5％，显示出具有较好的工业化应用潜力。

Description

一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法
技术领域
本发明涉及酶水解技术领域，尤其涉及一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法。
背景技术
右旋酮洛芬，又称为(S)-(+)-酮洛芬、(S)-酮基布洛芬、右酮洛芬、(S)-(+)-2-(3-苯甲酰基苯基)丙酸，是2-芳基丙酸类非甾体抗炎药，其商品形式是右旋酮洛芬氨丁三醇。酮洛芬有一个手性中心，两个对映异构体，其中只有右旋酮洛芬具有抗炎抗风湿和镇痛作用，左旋酮洛芬几乎没有药理作用且有毒副作用。右旋酮洛芬于1996年由意大利Menarini公司开发并首次在西班牙上市，其消炎镇痛等作用是外消旋体的两倍，说明左旋酮洛芬是无药效的。故合成生产单一异构体右旋酮洛芬有很好的应用价值。
目前，右旋酮洛芬主要合成方法有化学非对称合成、化学拆分、酶法拆分(包括酯酶、脂肪酶、腈水解酶、腈水合酶、酰胺酶)。
化学不对称合成方法，需要用到重金属手性催化剂和高温高压条件，大部分催化剂毒性较高、会造成环境污染、另外手性催化剂成本较高；化学拆分均涉及重结晶，耗时且增加了成本、降低了产率，另外拆分剂用量大成本高，废水废溶剂多；脂肪酶或酯酶催化拆分，缺点是原料浓度太低、酶用量大、反应介质不环保、产物ee％值低、产物混合物不好分离；腈水解酶水解拆分，得到产品ee％值太低；腈水合酶和酰胺酶二步酶法水解拆分酮洛芬腈合成右旋酮洛芬，大都浓度低，产率低，二步酶法增加成本，后处理步骤繁琐。
酰胺酶水解拆分酮洛芬酰胺合成右旋酮洛芬有较多报道，如Appl.Microbiol.Biotechnol.,1994,42:1-7用Agrobacterium tumefaciens strain d3酰胺酶反应，转化率5％，ee％值97％。BIOTECHNOLOGY LETTERS,1995,17(2):187-192介绍了微生物酰胺酶，Rhodococcus sp.C3II菌体转化2mM原料，20.5h转化率53％，右旋酮洛芬ee％值97％；Rhodococcus erythropolis MP 50菌体转化0.2mM原料，转化率49％，右旋酮洛芬ee％值99％。Protein&Peptide Letters,2008,15,617-623报道Sulfolobussolfataricus酰胺酶反应，1.5g酮洛芬酰胺100mL甲醇溶解，500mLTris-HCl缓冲液，12mg纯化酶，70℃反应24h，光学纯度99.6％ee。CN111363736用Klebsiella酰胺酶制备右旋酮洛芬，如实施例6中，0.8g酶粉，用100mL磷酸钠缓冲液重悬，4g酰胺酮洛芬溶于10mL甲苯流加入反应瓶，保温反应10h，产物ee％值为100％，转化率50.85％。CN111378637用Agrobacterium酰胺酶制备右旋酮洛芬，如实施例6中，1g酶粉，用100mL磷酸钠缓冲液重悬，4g酰胺酮洛芬溶于10mL甲苯流加入反应瓶，保温反应10h，产物ee％值为99.8％，转化率50.75％。CN114134132对Rhodococcus erythropolis MP50酰胺酶进行突变，最高活力突变体反应，如实施例9中，AMD03-38酶粉0.37g，100mL磷酸钠缓冲液，6g酰胺酮洛芬溶于10mL乙酸乙酯滴加入反应瓶，保温反应24h，转化率49％，产物ee％值为99.5％。
上述这些不同来源的酰胺酶催化合成右旋酮洛芬，除去酶活力偏低、反应浓度低以及产物光学纯度偏低的报道，只有CN111363736的Klebsiella酰胺酶、CN111378637的Agrobacterium酰胺酶、以及CN114134132的Rhodococcus erythropolis MP50最佳突变体酰胺酶，反应达到产物ee％值﹥99.5％和投料浓度40-60g/L，但是还是不够理想，工业化酶工艺，希望更高的投料浓度，更低的酶底比(酶和原料的质量比)，这样可以降低废水排放、提高时空产率、降低成本，因此有必要开发新的酰胺酶应用于右旋酮洛芬的酶法生产。
Rhodococcus erythropolis CCM2595是一种红平红球菌，该菌株已被证明可降解苯酚、羟基苯甲酸、对氯苯酚、苯胺等芳香族化合物(Cejkova et al.2005)。研究发现该菌株可催化腈类化合物的降解，尤其对己二腈具有高的催化区域选择性和底物亲和力(刘胜先，2019)。但对该菌株中酰胺酶对酮洛芬酰胺的水解拆分性能尚未见报道。
发明内容
针对现有技术中所存在的不足，本发明提供了一种应用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其解决了现有技术中存在的酶底比高、投料浓度低、成本高、不适合工业化生产的问题。
本发明一方面，提供一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，利用酰胺酶催化酮洛芬酰胺选择性水解得到右旋酮洛芬，其中，所述酰胺酶来自Rhodococcus erythropolisCCM2595。
进一步地，所述酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
进一步地，所述酰胺酶采用如下方法制备：
(1)合成编码所述酰胺酶的核苷酸序列，构建工程菌；
(2)诱导培养工程菌，离心收集菌体，将菌体破碎，制备酶制剂；
其中，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
进一步地，所述酶制剂包括酶液、酶粉、菌体、固定化酶中的一种。
进一步地，包括在反应介质中，加入助溶剂、酮洛芬酰胺，再加入酰胺酶进行选择性水解，得到右旋酮洛芬，反应过程如下所示：
Figure BDA0004143738480000031
进一步地，所述助溶剂为二甲基亚砜，所述反应介质为水、Tris-HCl缓冲液中的一种。
进一步地，所述选择性水解的温度为20-60℃，优选为40℃。
进一步地，所述选择性水解的pH值为6-10，优选为8.0。
进一步地，所述酮洛芬酰胺的浓度为20-150g/L，优选为100g/L。
进一步地，所述酰胺酶与酮洛芬酰胺的质量比为1/1-1/50，优选为1/20。
本发明的技术原理为：现有技术中，来自Rhodococcus erythropolis MP50、Agrobacterium.、Klebsiella的酰胺酶可实现酮洛芬酰胺的不对称水解得到右旋酮洛芬。但由于不同来源的酰胺酶具有不同的分子结构，在氨基酸序列上存在一定差异，而这种差异很可能是它们具有不同底物特异性的原因，并导致催化性能不同。本发明考察了来自Rhodococcus erythropolis CCM2595的酰胺酶水解拆分酮洛芬酰胺合成右旋酮洛芬，发现该酰胺酶催化反应时原料酮洛芬酰胺的投料浓度最高可达150g/L，高于其它几种来源酰胺酶(投料浓度最高60g/L，文献CN114134132)；并且酶底比为1/20，低于其它几种来源酰胺酶(酶底比最低1/16.3，文献CN114134132)，说明该酶对酮洛芬酰胺底物具有更强的催化活性，且能够承受高浓度底物产物的抑制作用。这可能与该酶与底物有更强的亲和力有关，从而为实现酶催化制备右旋酮洛芬的大规模工业化生产提供了可能。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明首先构建含有Rhodococcus erythropolis CCM2595酰胺酶基因的基因工程大肠杆菌，然后培养诱导表达酰胺酶，再制备各种形式酶制剂，最后应用于催化水解酮洛芬酰胺合成右旋酮洛芬。该酰胺酶催化水解反应原料投料浓度100g/L，酶底比1/20，原料转化率﹥43％，产物光学纯度﹥99.5％。
(2)本发明中的酰胺酶对酮洛芬酰胺具有显著的催化活力、底物亲和力和区域选择性，且对底物和产物耐受性高，催化反应投料浓度高，酶用量少，时空产率高，三废少，成本低，显示出具有较好的工业化潜力。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明中的技术方案进一步说明。
实施例1Rhodococcus erythropolis CCM2595酰胺酶的制备
1、构建产酰胺酶工程菌
根据NCBI网站上公布的Rhodococcus erythropolis CCM2595酰胺酶氨基酸序列，如SEQ ID NO.1所示，核酸序列通过密码子优化后，人工设计并全基因合成酰胺酶基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)，在基因的两端分别引入NdeI和EcoRI位点，并克隆到pET21a载体上。构建好的重组质粒经过化学转化方法，转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，涂布于含有50μg/ml氨苄青霉素抗性的LB平板，37℃下培养8-12h，挑取单克隆细胞，获得可以诱导表达酰胺酶的基因工程菌株。
2、发酵罐培养
将含有酰胺酶基因的BL21(DE3)细胞接种到含有50μg/mL氨苄青霉素抗性的LB液体培养基中，于37℃培养过夜，得到种子培养液。将种子培养液按照3％的接种量转接到含有50μg/mL氨苄青霉素抗性的发酵培养基中，于37℃下，起始搅拌转速300rpm，通过转速控制溶氧30％以上，全程流加补料液，流速20mL/h(10L发酵罐)，发酵培养3h左右,测OD达到0.8-1.0时，降温至25℃，加入IPTG，浓度控制在0.2mM，诱导表达20h。培养结束，发酵液通过4800rpm离心10min后，收集沉淀，获得酰胺酶菌体，置于-70℃长期保存。
发酵培养基配方：葡萄糖10g/L，酵母膏30g/L，磷酸氢二钠5.08g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁2g/L，氯化钙1g/L，柠檬酸钠0.23g/L，0.7g/L消泡剂，pH7.0。
补料液配方：酵母膏50g/L，葡萄糖300g/L，硫酸镁10g/L；
3、酰胺酶的制备
3.1酶液的制备
发酵液离心后获得的酰胺酶菌体，用0.1M pH7.0 Tris-HCl(使用量为菌体质量的5倍，V/W)悬浮均匀后，在超声波破碎仪或高压均质机中进行破碎细胞，获得细胞破碎液，即为酶液，于-70℃长期保存。
3.2酶粉的制备
取3.1制备的酶液，置于真空冷冻干燥机中，进行真空冷冻干燥，最终获得酶粉，酶粉置于4℃保存。
3.3固定化酶的制备
取3.1制备的酶液离心或陶瓷膜过滤后，获得酶清液，在酶清液中加入树脂固定化，过滤，真空冷冻干燥，获得固定化酶，置于4℃保存。
实施例2不同形式酰胺酶催化合成右旋酮洛芬
Figure BDA0004143738480000051
500ml反应瓶中，加入100mL pH7.5的0.1M Tris-HCl缓冲液，原料酮洛芬酰胺5g用20mL DMSO溶解后加入反应瓶中，再加入不同形式酰胺酶，用氢氧化钠水溶液调节至pH7.5，35℃搅拌反应24h，取样分析，测定转化率和产物右旋酮洛芬ee％值，不同形式酰胺酶测试结果如表1所示：
表1不同形式酰胺酶反应的转化率和ee值
酰胺酶 酶量 转化率 产物ee％值
菌体 0.90g 33.82％ 99.75％
酶液 5.0g 43.61％ 99.78％
酶粉 250mg 42.35％ 99.71％
固定化酶 1.0g 35.41％ 99.73％
由表1可知：不同形式酰胺酶制剂，活力有所差异，选择性不变。
实施例3不同温度下酰胺酶催化合成右旋酮洛芬
在500mL反应瓶中加入100mLpH 7.5的0.1MTris-HCl缓冲液，原料酮洛芬酰胺5g用20mL DMSO溶解后加入反应瓶中，再加入酰胺酶粉0.25g，用氢氧化钠水溶液调节至pH7.5，不同温度下搅拌反应24h，取样分析，测定转化率和产物右旋酮洛芬ee％值，不同温度下酰胺酶反应结果如表2所示：
表2不同温度下酰胺酶反应的转化率和ee值
反应温度 转化率 产物ee％值
20℃ 25.34％ 99.77％
30℃ 37.49％ 99.71％
40℃ 43.74％ 99.73％
50℃ 41.43％ 99.77％
60℃ 33.47％ 99.63％
由表2可知，反应温度40℃时，转化率最高。
实施例4不同初始pH下酰胺酶催化合成右旋酮洛芬
在500mL反应瓶中加入100mL不同pH的0.1M Tris-HCl缓冲液，原料酮洛芬酰胺5g用20mL DMSO溶解后加入反应瓶中，再加入酰胺酶粉0.25g，用氢氧化钠水溶液调节至设定pH，40℃下搅拌反应24h，取样分析，测定转化率和产物右旋酮洛芬ee％值，不同初始pH下酰胺酶反应结果如表3所示：
表3不同初始pH下酰胺酶的转化率和ee值
反应初始pH 转化率 产物ee％值
6.0 27.37％ 99.75％
7.0 39.37％ 99.72％
8.0 44.64％ 99.76％
9.0 42.71％ 99.76％
10.0 39.81％ 99.74％
由表3可知，反应pH为8.0时，转化率最高。
实施例5不同投料浓度时酰胺酶催化合成右旋酮洛芬
在500mL反应瓶中加入100mL不同pH8.0的0.1MTris-HCl缓冲液，原料酮洛芬酰胺用20mL DMSO溶解后加入反应瓶中，再加入酰胺酶粉，用氢氧化钠水溶液调节至设定pH，40℃下搅拌反应24h，取样分析，测定转化率和产物右旋酮洛芬ee％值，不同投料浓度下酰胺酶反应结果如表4所示：
表4不同投料浓度时酰胺酶反应的转化率和产物ee值
原料浓度 酶粉 原料 转化率 产物ee％值
20g/L 0.1g 2g 49.77％ 99.73％
50g/L 0.25g 5g 45.37％ 99.77％
80g/L 0.4g 8g 43.72％ 99.76％
100g/L 0.5g 10g 42.81％ 99.76％
150g/L 0.75g 15g 35.59％ 99.71％
由表4可知：投料浓度100g/L，转化率超过40％。
实施例6不同酶底比时酰胺酶催化合成右旋酮洛芬
在500mL反应瓶中加入100mL pH8.0的0.1M Tris-HCl缓冲液，10g原料酮洛芬酰胺用20mL DMSO溶解后加入反应瓶中，再按不同酶底比(酶和原料的质量比)加入酰胺酶粉，用氢氧化钠水溶液调节至设定pH，40℃下搅拌反应24h，取样分析，测定转化率和产物右旋酮洛芬ee％值，不同投料浓度下酰胺酶反应结果如表5所示：
表5不同酶底比时酰胺酶反应的转化率和产物ee值
酶底比 酶粉 原料 转化率 产物ee％值
1/50 0.2g 10g 18.33％ 99.75％
1/20 0.5g 10g 43.15％ 99.77％
1/10 1g 10g 49.67％ 99.76％
1/5 2g 10g 50.07％ 99.73％
1/1 10g 10g 50.17％ 99.67％
由表5可知：综合酶使用成本和反应效率，确定酶底比为1/20。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：利用酰胺酶催化酮洛芬酰胺选择性水解得到右旋酮洛芬，其中，所述酰胺酶来自Rhodococcus erythropolis CCM2595。
2.如权利要求1所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求1或2所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述酰胺酶采用如下方法制备：
(1)合成编码所述酰胺酶的核苷酸序列，构建工程菌；
(2)诱导培养工程菌，离心收集菌体，将菌体破碎，制备酶制剂；
其中，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.如权利要求3所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述酶制剂包括酶液、酶粉、菌体、固定化酶中的一种。
5.如权利要求1或2所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：包括在反应介质中，加入助溶剂、酮洛芬酰胺，再加入酰胺酶进行选择性水解，得到右旋酮洛芬，反应过程如下所示：
Figure FDA0004143738470000011
6.如权利要求5所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述助溶剂为二甲基亚砜，所述反应介质为水、Tris-HCl缓冲液中的一种。
7.如权利要求5所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述选择性水解的温度为20-60℃，优选为40℃。
8.如权利要求5所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述选择性水解的pH值为6-10，优选为8.0。
9.如权利要求5所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述酮洛芬酰胺的浓度为20-150g/L，优选为100g/L。
10.如权利要求5所述的一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法，其特征在于：所述酰胺酶与酮洛芬酰胺的质量比为1/1-1/50，优选为1/20。
CN202310297709.1A 2023-03-24 2023-03-24 一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法 Pending CN116121310A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310297709.1A CN116121310A (zh) 2023-03-24 2023-03-24 一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310297709.1A CN116121310A (zh) 2023-03-24 2023-03-24 一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116121310A true CN116121310A (zh) 2023-05-16

Family

ID=86304786

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310297709.1A Pending CN116121310A (zh) 2023-03-24 2023-03-24 一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116121310A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2459871C2 (ru) Способ ферментативного получения 2-гидрокси-2-метилкарбоновых кислот
CN106957850B (zh) 一株产磷脂酶d的基因工程菌及其构建方法与应用
CN109777763B (zh) 一株用于l-茶氨酸生产的基因工程菌及其构建与应用
WO2005093081A1 (en) Process for preparing optically active amino acids using a whole-cell catalyst
Zhu et al. Removal of L-alanine from the production of L-2-aminobutyric acid by introduction of alanine racemase and D-amino acid oxidase
CN113355299B (zh) 酮酸还原酶、基因、工程菌及在合成手性芳香2-羟酸中的应用
RU2546239C1 (ru) РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli, ОБЛАДАЮЩИЙ КОНСТИТУТИВНОЙ АСПАРТАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СПОСОБ СИНТЕЗА L-АСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭТОГО ШТАММА В КАЧЕСТВЕ БИОКАТАЛИЗАТОРА
CN116121310A (zh) 一种利用酰胺酶合成右旋酮洛芬的方法
CN112779233B (zh) 重组草铵膦脱氢酶、基因工程菌及其在制备l-草铵膦中的应用
CN112143725B (zh) 一种重组酯酶、编码基因、工程菌及在拆分甲霜灵中的应用
CN108060186B (zh) 一种对硝基苄醇丙二酸单酯的生物制备方法
CN109517778B (zh) 一种枯草芽孢杆菌全细胞转化苯丙氨酸生产苯乳酸的方法
Brandão et al. Bioconversion of D, L‐tert‐leucine Nitrile to D‐tert‐leucine by Recombinant Cells expressing Nitrile Hydratase and D‐selective Amidase
Guo et al. A bi-enzymatic cascade to yield pyruvate as co-substrate for l-tyrosine production
CN114958703B (zh) 一种利用油脂合成丁二酸的重组菌及其构建方法与应用
RU2731289C2 (ru) Способ конструирования на основе бактерий рода Rhodococcus штамма-биокатализатора, обладающего нитрилазной активностью и повышенной операционной стабильностью, рекомбинантный штамм бактерий Rhodococcus rhodochrous, полученный таким способом, способ синтеза акриловой кислоты с использованием этого штамма в качестве биокатализатора
CN115247144B (zh) 生产l-苏式-3-羟基天冬氨酸的基因工程菌及其应用
Cánovas et al. Factors affecting the biotransformation of trimethylammonium compounds into l-carnitine by Escherichia coli
CN112011523B (zh) 一种提高乙酰丙酮合成效率的乙酰丙酮裂解酶突变体、其基因、表达载体、细胞及应用
Yu et al. Efficient biocatalytic production of D-4-hydroxyphenylglycine by whole cells of recombinant Ralstonia pickettii
CN116334151A (zh) 一种合成右旋酮洛芬的方法
CN113755539A (zh) 一种二氢嘧啶氨基水解酶及其应用
CN116218802A (zh) 一种l-泛解酸内酯脱氢酶及其突变体、编码基因及应用
CN116536292A (zh) 磷酸葡萄糖酸脱水酶突变体及其应用
CN116064447A (zh) 转氨酶及其突变体在手性胺合成中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination