CN116103234A - 一种新型dc样细胞的制备方法及应用 - Google Patents

一种新型dc样细胞的制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种新型DC样细胞的制备方法及应用，涉及细胞免疫技术领域。具体包括以下步骤：（1）获取悬浮细胞；（2）分选CD19+细胞；（3）DC样细胞的诱导及抗原负载。肿瘤患者自体CD19+细胞已经接触过肿瘤细胞，但在发病的肿瘤微环境及患者身体内，其功能往往被抑制，如采用体外激活和负载特定肿瘤抗原，可有效进一步活化并形成肿瘤靶向记忆，回输体内后可持续稳定对肿瘤抗原呈递，这一对肿瘤的记忆，尤其在抗原呈递过程中的记忆，有机会治疗复发和转移的肿瘤。

Description

一种新型DC样细胞的制备方法及应用
技术领域
本发明涉及细胞免疫技术领域，更具体的说是一种新型DC样细胞的制备方法及应用。
背景技术
DC治疗疫苗是目前国内外免疫治疗领域的研究热点，这一技术往往通过采集受者外周血，分离贴壁的单个核细胞，与细胞因子和抗原进行联合培养，从而获得抗原靶向的DC细胞，再将这一诱导后的DC回输人体，激活效应T淋巴细胞，从而达到控制病患的目的。由于T细胞活化后，可形成抗原记忆性T细胞存留于体内，较长时间保持机体的免疫攻击能力，所以这一技术也可以称为DC疫苗。
DC疫苗比其他的免疫治疗技术更符合机体天然免疫反应过程，患者耐受性良好、很少引发细胞因子风暴等失控的免疫反应，而且可以成为其他免疫治疗（如PD-1阻断剂）的应用前题。目前的DC疫苗技术最突出的问题是DC细胞数量与功能不足：外周血单个核细胞数量有限（约占外周血白细胞1%），且不能有效增殖，而每次治疗能够采集到的受者的血液量不会超过200ml（约占人体总量的5%），这就造成了可以诱导成功的DC数量较少，临床应用效果受限。国内外大多数DC疫苗方案还处于临床研究阶段。
因此提供一种不受采血限制的新型DC样细胞的制备方法及应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种新型DC样细胞的制备方法及应用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种新型DC样细胞的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）获取悬浮细胞：
采集外周血，用PBS稀释，缓慢加至淋巴细胞分离液液面上方，保持分层状态并离心；抽取淋巴液和血清之间的细胞层，加入PBS洗涤并离心，收集细胞沉淀；制备悬浮细胞液，过夜培养，洗涤定容备用；
（2）分选CD19+细胞：
将抗体加入至步骤（1）制备的悬浮细胞液混匀，静置孵育；加入磁珠混匀，静置孵育；加入缓冲液混匀，在磁极中孵育；通过正负分选得到正选：CD19+细胞，洗涤定容备用；
（3）DC样细胞的诱导及抗原负载：
将DC样细胞诱导剂加入至步骤（2）获得的CD19+细胞，连续培养，得DC样细胞；将负载抗原与培养添加剂加入至DC样细胞，继续培养，得抗原负载的DC样细胞。
进一步的，步骤（1）中所述PBS稀释倍数为1倍；所述保持分层状态并离心的转速为1500rpm，离心30分钟；
所述加入PBS洗涤并离心的转速为2000rpm，离心20分钟，该步骤共重复三次；
所述制备悬浮细胞液：用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基悬浮所述细胞沉淀，定容至2×106个细胞/ml；所述洗涤定容备用：将所述悬浮细胞液于2000rpm离心20分钟，弃上清，加入含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基悬浮细胞，定容至5×106个细胞/ml。
进一步的，步骤（2）中所述抗体为100 μl/ml；所述孵育时间均为3min；所述加入磁珠前涡旋震动磁珠作用30s，使磁珠颗粒均匀分散；所述缓冲液为含EDTA的PBS buffer液，补充至2.5ml；所述洗涤定容：离心，在正选管中吸取分选buffer液，反复吹打管壁细胞，3-4ml液体量 2000rpm，离心10min 弃上清，分选出CD19+细胞，定容至2×106个细胞/ml。
进一步的，步骤（3）中所述DC样细胞诱导剂包括rhIL-4、rhGM-CSF，所述rhIL-4、rhGM-CSF的用量为10ng/ml。
进一步的，步骤（3）中所述DC样细胞诱导剂包括添加剂，所述添加剂为油酸，用量为10ng/ml。
进一步的，步骤（3）中所述连续培养为培养4天，每隔日半量换液；所述继续培养为培养72小时。
进一步的，一种新型DC样细胞在制备治疗癌症的药物中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明有益效果如下：
1）本申请制备的DC样细胞由外周血半悬浮细胞诱导而来，而DC细胞是外周血贴壁的单个核细胞诱导而来。本申请制备的DC样细胞不受外周血贴壁单个核细胞的数量限制；
2）理论上DC样细胞具有一定增殖能力，一旦抗原靶向活化后，可以通过分裂增殖，来弥补DC数量不足的问题；
3）DC样细胞本身具有记忆性，突破了原有的DC细胞不具有记忆性的特点；
4）DC样细胞具有DC细胞类似的安全性，在提高DC疫苗的同时，依旧保持了DC疫苗技术患者的可耐受性，动物实验显示，应用到小鼠体重的0.5‰，依然耐受良好；
5）肿瘤治疗的临床应用：肿瘤患者自体CD19+细胞已经接触过肿瘤细胞，但在发病的肿瘤微环境及患者身体内，其功能往往被抑制，如采用体外激活和负载特定肿瘤抗原，可有效进一步活化并形成肿瘤靶向记忆，回输体内后可持续稳定对肿瘤抗原呈递，这一对肿瘤的记忆，尤其在抗原呈递过程中的记忆，有机会治疗复发和转移的肿瘤。本申请动物实验表明DC样细胞治疗的小鼠肿瘤结节显著少于未治疗组，为本申请进一步在治疗肿瘤的临床应用方向打下坚实基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本发明CD86空白组检测结果；
图2为本发明CD86诱导组检测结果；
图3为本发明HLA-DR空白组检测结果；
图4为本发明HLA-DR诱导组检测结果；
图5为本发明小鼠腹腔观察瘤结节生长情况拍照及数量统计。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实验原料及器材：
主要试剂：Hanks缓冲液、RPMI-1640培养液、青霉素链霉素混合液、胎牛血清（FBS）、GM-CSF、rhIL-4、DMEM培养基、胰酶、人淋巴细胞分离液，抗人CD19单克隆抗体，Protein G磁珠；
主要仪器设备：CO2 恒温培养箱、倒置显微镜、荧光显微镜、压力电热蒸汽灭菌锅、电热恒温水浴箱、超净水系统、精准分析天平、生物安全柜、台式大容量低温离心机、医用型超净操作台、－80℃超低温冰箱、涡旋混匀器、高速冷冻离心机（4℃）、流式细胞仪；
动物实验主要材料及来源：鼠卵巢癌细胞系ID8细胞（堪萨斯大学医疗生殖中心惠赠）；C57BL/6遗传背景的野生型（WT）小鼠（购自中国军事医学科学院实验动物中心）；DMEM培养基、RPMI-1640培养基（购自中国南京凯基生物科技发展有限公司）；胎牛血清（购自DcellBiologics公司）；重组人IL-4、GM-SCF（购自美国PeproTech公司）；抗小鼠CD19单克隆抗体；小鼠CD19阳选试剂盒（购自PrecisionBioMedicals公司）。
实施例1：
悬浮细胞的分离：采集人外周血，用灭菌的PBS稀释1倍，随后利用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，1500rpm，离心30分钟；洗涤分离后调整浓度为1×106个细胞/ml，培养瓶培养24小时后，收集培养上清，离心收集细胞，1640培养基定容1×106个细胞/ml。
CD19+细胞的分选：利用抗CD19单抗的磁珠分选。
①加入抗体：加入100 μl/ml抗体混匀，盖盖儿室温静置3min；②加磁珠：涡旋震动磁珠作用30s，磁珠颗粒均匀分散，用100 μl/ml加样枪加到抗体标记的细胞悬液中，混匀盖盖儿作用3min；③加缓冲液：加入含EDTA的PBS buffer液到2.5ml，轻轻移液混合2次，将无盖试管放置在磁极中并孵育3min；④正负分选：将负选细胞倾倒至新的试管中。正选：CD19+细胞 负选：悬浮细胞；⑤洗涤定容：离心，在正选管中吸取分选buffer液，反复吹打管壁细胞，3-4ml液体量 1500rpm/10min 弃上清，分选出CD19+细胞，计数细胞2×106个细胞/ml。
DC样细胞的体外培养和诱导：分选所得CD19+细胞于250ml细胞培养瓶培养，10ml/瓶。加入rhIL-4、rhGM-CSF及添加剂油酸培养，用量为10ng/ml每隔日半量换液，连续培养4天，得DC样细胞。
抗原靶向DC样细胞的诱导：于上述步骤获得的DC样细胞中加入IL-4、GM-CSF与添加剂油酸培养，用量为10ng/ml继续培养72小时，获得抗原负载的DC样细胞。
DC样细胞功能检测：
收集实施例1中诱导后的DC样细胞，洗涤2次后，悬浮细胞，转移到流式管中，将CD19+细胞分为4组，CD86空白组、CD86诱导组、HLA-DR空白组、HLA-DR诱导组。
CD86空白组：1×106个细胞/ml，不添加细胞因子及诱导剂和负载抗原；
CD86诱导组：1×106个细胞/ml，rhIL-4、rhGM-CSF的用量均为10ng/ml，添加剂（油酸）用量10nmol/ml，负载抗原量终浓度为100ng/ml；
HLA-DR空白组：1×106个细胞/ml，不添加细胞因子及诱导剂和负载抗原；
HLA-DR诱导组：1×106个细胞/ml，rhIL-4、rhGM-CSF的用量均为10ng/ml，添加剂（油酸）用量10nmol/ml，负载抗原量终浓度为100ng/ml；
荧光标记抗体孵化后上机检测，每组应用5×105cell/500ul/管上机，收集1×104个细胞的数据形成散点图。
表1：DC样细胞功能检测结果
结果见图1-图4；CD86空白组（图1）、CD86诱导组（图2）、HLA-DR空白组（图3）、HLA-DR诱导组（图4）；
结果显示：CD19+细胞经诱导后，高表达CD86、HLA-DR，说明具有DC样细胞功能特点。
动物实验：
ID8细胞培养：用含有10%FBS的DMEM培养基培养，置于5%CO2、37℃培养箱中培养，每2～3天更换培养基并消化传代。待细胞生长至对数生长期，消化处理后进行后续实验。
肿瘤抗原肽制备：抗原肽收集ID8细胞制备细胞悬液，先放入43℃水浴箱中水浴30min，而后液氮冷冻20min，重复三次后，10000rpm离心30min取上清即获得抗原肽溶液，之后转入-80冰箱保存。
DC样细胞培养及抗原负载：参照实施例1方法及使用说明，使用CD19阳选试剂盒从同品系供体小鼠脾脏中分离并制备细胞，然后在完全RPMI-1640培养基中按抗原肽：细胞=5：1加入抗原肽冲击24h，之后收集细胞用于后续实验。
DC细胞培养及抗原负载：采用常规技术手段制备小鼠DC细胞（参考文献：①肿瘤抗原冲击的树突状细胞对小鼠肾细胞癌的治疗作用研究，医学研究生学报 2010年 5月 第23卷 第 5期；②Promoting the accumulation of tumor-specific T cells in tumortissues by dendritic cell vaccines and chemokine-modulating agents. NatureProtocols volume 13, pages335–357 (2018)），抗原负载同上，之后收集细胞用于后续实验。
DC样细胞肿瘤治疗观测：
小鼠卵巢癌模型构建：将18只8-10周雌性C57BL/6小鼠随机分为3组、每组6只；分别为对照组、传统DC组（肿瘤抗原冲击的DC细胞）、DC样组（肿瘤抗原冲击的DC样细胞）。将ID8细胞以5×106/200μl注射于小鼠腹腔，构建卵巢癌模型。
在荷瘤第2天，按照不同组别脾内注射50ul生理盐水经、抗原肽冲击的DC细胞（5×105/50μl/只）、经抗原肽冲击的DC样细胞（3×106/50μl/只），照组注射等量生理盐水。荷瘤42天颈椎脱臼处死小鼠，观察腹水，打开腹腔观察瘤结节生长情况，计数并拍照，结果见图5。
结果显示，DC样细胞治疗的小鼠肿瘤结节显著少于未治疗组与传统DC组。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (7)

1.一种新型DC样细胞的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
（1）获取悬浮细胞：
采集外周血，用PBS稀释，缓慢加至淋巴细胞分离液液面上方，保持分层状态并离心；抽取淋巴液和血清之间的细胞层，加入PBS洗涤并离心，收集细胞沉淀；制备悬浮细胞液，过夜培养，洗涤定容备用；
（2）分选CD19+细胞：
将抗体加入至步骤（1）制备的悬浮细胞液混匀，静置孵育；加入磁珠混匀，静置孵育；加入缓冲液混匀，在磁极中孵育；通过正负分选得到正选：CD19+细胞，洗涤定容备用；
（3）DC样细胞的诱导及抗原负载：
将DC样细胞诱导剂加入至步骤（2）获得的CD19+细胞，连续培养，得DC样细胞；将负载抗原与培养添加剂加入至DC样细胞，继续培养，得抗原负载的DC样细胞。
2.根据权利要求1所述的一种新型DC样细胞的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述PBS稀释倍数为1倍；所述保持分层状态并离心的转速为1500rpm，离心30分钟；
所述加入PBS洗涤并离心的转速为2000rpm，离心20分钟，该步骤共重复三次；
所述制备悬浮细胞液：用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基悬浮所述细胞沉淀，定容至2×106个细胞/ml；所述洗涤定容备用：将所述悬浮细胞液于2000rpm离心20分钟，弃上清，加入含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基悬浮细胞，定容至5×106个细胞/ml。
3.根据权利要求1所述的一种新型DC样细胞的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述抗体与悬浮细胞液的体积比为1:10，所述抗体为抗CD19单抗，所述抗体浓度为1μg/ml；所述孵育时间均为3min；
所述磁珠与悬浮细胞液的体积比为1:10，加入磁珠前先涡旋震动磁珠作用30s，使磁珠颗粒均匀分散；
所述缓冲液为含EDTA的PBS buffer液，添加量为将分选CD19+细胞体系补充至2.5ml；
所述洗涤定容：离心，在正选管中吸取分选buffer液，反复吹打管壁细胞，3-4ml液体量2000rpm，离心10min 弃上清，分选出CD19+细胞，定容至2×106个细胞/ml。
4.根据权利要求1所述的一种新型DC样细胞的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述DC样细胞诱导剂包括rhIL-4、rhGM-CSF，所述rhIL-4、rhGM-CSF的用量为10ng/ml。
5.根据权利要求4所述的一种新型DC样细胞的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述DC样细胞诱导剂包括添加剂，所述添加剂为油酸，用量为10ng/ml。
6.根据权利要求1所述的一种新型DC样细胞的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述连续培养为培养4天，每隔日半量换液；所述继续培养为培养72小时。
7.权利要求1所述一种新型DC样细胞在制备治疗癌症的药物中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001027245A2 (en) * 1999-10-08 2001-04-19 Dendreon Corporation Generation and characterization of a dendritic cell isolated from human peripheral blood mononuclear cells
US20050112762A1 (en) * 2002-11-26 2005-05-26 The Corporation Of The Trustees Of The Sisters Of Mercy In Queensland Method for culturing dendritic cells
CN105349489A (zh) * 2015-12-07 2016-02-24 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种cik细胞的培养方法
CN111500537A (zh) * 2020-05-06 2020-08-07 天津纽赛生物技术有限公司 一种脂肪酸促进树突状细胞成熟及增强其功能方法及应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001027245A2 (en) * 1999-10-08 2001-04-19 Dendreon Corporation Generation and characterization of a dendritic cell isolated from human peripheral blood mononuclear cells
US20050112762A1 (en) * 2002-11-26 2005-05-26 The Corporation Of The Trustees Of The Sisters Of Mercy In Queensland Method for culturing dendritic cells
CN105349489A (zh) * 2015-12-07 2016-02-24 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种cik细胞的培养方法
CN111500537A (zh) * 2020-05-06 2020-08-07 天津纽赛生物技术有限公司 一种脂肪酸促进树突状细胞成熟及增强其功能方法及应用

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