CN116096382A - 用于治疗糖尿病和肥胖症的KLF11 siRNA - Google Patents

Abstract

本发明涉及方法和包含KLF11信号传导的抑制剂的组合物，其用于治疗胃肠动力障碍、肥胖症和糖尿病。

Description

用于治疗糖尿病和肥胖症的KLF11 siRNA

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C.§119(e)享有2020年8月13日提交的美国临时专利申请号63/065,242的优先权，其全部内容特此通过引用并入本文。

背景技术

根据来自世界卫生组织的数据，全世界有超过4.25亿糖尿病患者，而且随着肥胖症患病率的增加，这一数字还在迅速增加。大约90％的糖尿病患者肥胖，这表明肥胖症和糖尿病在很大程度上同时发生。2型糖尿病(T2D)是一种复杂且异质性的多基因疾病，由于其主要发生在40岁以上的成年人中而被称为成人糖尿病。T2D占所有糖尿病诊断病例的上至95％。遗憾的是，开发针对T2D的有效治疗一直很困难，因为该疾病背后的病理生理机制仍然难以捉摸。有趣的是，大约一半的糖尿病患者也有胃肠(GI)并发症，包括胃轻瘫。已知异常高的血糖水平(高血糖)是糖尿病的标志性征兆，会导致胃轻瘫。

KLF11或kruppel样因子11属于锌指转录调节基因家族。KLF11通常与富含GC的DNA序列结合，并充当转录阻遏物。最近的研究已经确定KLF11能够与胰岛素启动子相互作用，其中它结合GC盒和CACCC盒两者(Niu 2007；Neve 2005)并抑制靶基因的转录激活(Niu2007)。因此，KLF11在血糖调节和其它代谢过程中起着关键作用。对KLF11调节胰岛素表达能力的确定也提示了其在调节其它代谢相关基因中的作用，特别是INS相互作用的基因如INSR、IRS1、IRS2、KIT、NEUROG3、SLC2A4和GLP1R；其启动子含有富含GC的CpG岛，是潜在的KLF11靶标。

仍然非常需要改进的方法和组合物通过抑制KLF11表达来治疗和预防2型糖尿病和相关障碍，包括肥胖症、糖尿病性脂肪肝病和GI并发症。本发明解决了这种需要。

发明内容

如本文所述，本发明涉及方法和组合物，其用于在有需要的对象中抑制基因Krüppel样因子11(KLF11)的表达以减少体脂和体重、恢复葡萄糖稳态和胰岛素敏感性并改善胃肠(GI)功能。

因此，一方面，本发明包括治疗有需要的对象的糖尿病的方法，包括向所述对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗糖尿病。

在某些实施方式中，所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

在某些实施方式中，所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

在某些实施方式中，所述小的非编码RNA分子是siRNA。

在某些优选的实施方式中，所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

在某些实施方式中，所述糖尿病是2型糖尿病。

在某些实施方式中，所述KLF11信号传导的抑制剂还包含药学上可接受的载剂(carrier)或佐剂。

另一方面，本发明包括减轻有需要的对象的体重的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而减轻所述对象的体重。

另一方面，本发明包括降低有需要的对象的血糖的方法，所述方法包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而降低所述对象的血糖。

另一方面，本发明包括用于增加有需要的对象的胰岛素敏感性的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而增加胰岛素敏感性。

在某些实施方式中，所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

在某些实施方式中，所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

在某些实施方式中，所述小的非编码RNA分子是siRNA。

在某些优选的实施方式中，所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

在某些实施方式中，所述KLF11信号传导的抑制剂还包含药学上可接受的载剂或佐剂。

另一方面，本发明包括治疗有需要的对象的胃肠疾病的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗所述对象的胃肠疾病。

在某些实施方式中，所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

在某些实施方式中，所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

在某些实施方式中，所述小的非编码RNA分子是siRNA。

在某些优选的实施方式中，所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

在某些实施方式中，所述胃肠疾病选自胃轻瘫、功能性胃肠障碍、功能性胃肠动力障碍和假肠梗阻。

在某些实施方式中，所述功能性胃肠障碍选自肠易激综合征、功能性便秘和非特异性功能性肠障碍(unspecified functional bowel disorder)。

另一方面，本发明包括组合物，其包含KLF11信号传导的抑制剂和药学上可接受的载剂或佐剂。

在某些实施方式中，所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

在某些实施方式中，所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

在某些优选的实施方式中，所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

附图说明

当结合所附附图阅读时，将更好地理解本发明的优选实施方式的以下详细描述。为了说明本发明的目的，在附图中显示了目前优选的实施方式。然而，应当理解，本发明不限于附图中所示的实施方式的精确布置和手段(instrumentality)。

图1A-1B图示了本发明中使用的小鼠和人KLF11 siRNA的序列。

图2图示了siKlf11挽救喂食HFHSD的小鼠的肥胖表型。

图3图示了siKlf11挽救喂食HFHSD的小鼠的糖尿病表型。

图4A-4B图示了在HFHSD诱导的糖尿病小鼠中，siKlf11通过恢复基础胰岛素水平和降低A1C水平来降低葡萄糖水平。

图5图示了siKlf11在HFHSD诱导的糖尿病小鼠中恢复餐后胰岛素敏感性。

图6图示了siKlf11防止HFHSD诱导的糖尿病小鼠中GLP-1的丧失。

图7描绘了siKlf11在HFHSD诱导的糖尿病小鼠中维持瘦蛋白水平。

图8A-8B描绘了siKlf11显著改善HFHSD诱导的糖尿病小鼠的葡萄糖耐量。

图9A-9B描绘了siKlf11显著改善HFHSD诱导的糖尿病小鼠的胰岛素耐量。

图10A-10F证明了siKlf11改善GI功能。

图11A-11B描绘了siKlf11使喂食HFHSD或ND的小鼠防止肥胖症和/或糖尿病的发展。

图12A-12C图示了与指示的抗糖尿病和促动力药物相比，siKlf11对降低体重和血糖具有深远和持久的作用。

图13A-13B图示了与GLP-1激动剂相比，siKlf11对HFHSD诱导的糖尿病小鼠中GLP-1和瘦蛋白的恢复具有延长的作用。

图14图示了与指示的抗糖尿病和促动力药物相比，siKlf11治疗导致HFHSD诱导的糖尿病小鼠的胰岛素水平增加。

图15图示了在PI 4周时用siKlf11处理或未注射siKlf11的喂食HFHSD(糖尿病)小鼠的胰岛素水平。

具体实施方式

定义

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。尽管与本文所述的方法和物质相似或等效的任何方法和物质可用于测试本发明的实践中，本文描述了优选的物质和方法。在描述和要求保护本发明时，将使用以下术语。

还应理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实施方式的目的，并不旨在进行限制。

冠词“一(a)”和“一个(an)”在本文中用于指代冠词的语法对象中的一个或多于一个(即，至少一个)。举例来说，“一个要素”意指一个要素或多于一个的要素。

如本文所用，当提及诸如量、时距等可测量值时，“大约”意在涵盖指定值的±20％或±10％、更优选±5％、甚至更优选±1％、和仍更优选±0.1％的变化，因为这样的变化适合于执行所公开的方法。

如本文所用，“活化”指代已被充分刺激以诱导可检测的细胞增殖的T细胞的状态。活化也可能与诱导的细胞因子产生和可检测的效应物功能有关。术语“活化的T细胞”指代正在进行细胞分裂的T细胞等。

如本文所用，术语“自身免疫疾病”被定义为由自身免疫反应引起的障碍。自身免疫疾病是对自身抗原的不适当和过度反应的结果。自身免疫疾病的实例包括但不限于，阿狄森氏病(Addison's disease)、局限性脱发、强直性脊柱炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性腮腺炎、克罗恩氏病、糖尿病(I型)、营养不良性大疱性表皮松解症、附睾炎、肾小球肾炎、格雷夫斯氏病、吉-巴综合征(Guillain-Barr syndrome)、桥本氏病、溶血性贫血、系统性红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、寻常性天疱疮、银屑病、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征(Sjogren's syndrome)、脊椎关节病、甲状腺炎、血管炎、白癜风、粘液水肿、恶性贫血、溃疡性结肠炎等。

如本文所用，术语“自体的”意在指代源自同一个体的任何物质，随后将其重新引入该到个体中。

“同种异体的”指代源自同一物种的不同动物的移植物。

“异种的”指代源自不同物种的动物的移植物。

如本文所用，术语“癌症”被定义为特征在于畸变(异常，aberrant)细胞的快速且不受控制的生长的疾病。癌细胞可以局部扩散或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其它部位。各种癌症的实例包括但不限于，乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌(cervical cancer)、皮肤癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肾癌、肝癌、脑癌、淋巴瘤、白血病、肺癌等。在某些实施方式中，癌症是甲状腺髓样癌。

术语“切割(裂开，cleavage)”指代共价键的断裂，如在核酸分子的主链中。切割可通过多种方法引发，包括但不限于磷酸二酯键的酶促或化学水解。单链切割和双链切割都是可能的。双链切割可以作为两个不同的单链切割事件的结果而发生。DNA切割可导致平末端或交错末端的产生。在某些实施方式中，融合多肽可用于靶向切割的双链DNA。

如本文所用，术语“保守序列修饰”旨在指代不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。此类保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。通过本领域已知的标准技术，如位点定向诱变和PCR介导的诱变，可以将修饰引入到本发明的抗体中。保守氨基酸取代是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基置换的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有如下的氨基酸：碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，抗体的CDR区内的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其它氨基酸残基置换，并且可以使用本文所述的功能测定法测试改变的抗体结合抗原的能力。

“疾病”是动物的健康状态，其中动物不能维持体内稳态，并且其中如果疾病没有好转，则动物的健康继续恶化。相比之下，动物的“障碍”是一种健康状态，在这种状态下，动物能够维持体内稳态，但在这种状态下，动物的健康状态不如处于没有障碍时的健康状态。如果不加以治疗，障碍不一定会导致动物健康状态的进一步下降。

“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，并指代如本文所述的有效实现特定生物学结果或提供治疗或预防益处的化合物、配制物(formulation)、物质或组合物的量。此类结果可以包括但不限于通过本领域任何合适的手段确定的抗肿瘤活性。

“编码”指代用作生物过程中合成其它聚合物和大分子的模板的多核苷酸(如基因、cDNA或mRNA)中特定核苷酸序列的固有特性，这些聚合物和大分子具有限定的核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或限定的氨基酸序列以及由此产生的生物学特性。因此，如果对应于该基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其它生物系统中产生蛋白质，则该基因编码该蛋白质。编码链(其核苷酸序列与mRNA序列相同，并通常在序列表中提供)和非编码链(用作基因或cDNA转录的模板)都可以称为编码蛋白质或该基因或cDNA的其它产物。

如本文所用，术语“工程改造的”、“基因工程改造的”、“重组的”、“非天然存在的”和“非天然的”可互换使用以指代已被人类有意操纵的合成多核苷酸和多肽。

如本文所用，“内源性”指代来自生物体、细胞、组织或系统或产生于生物体、细胞、组织或系统之内的任何物质。

如本文所用，术语“外源性”指代从生物体、细胞、组织或系统引入或产生于生物体、细胞、组织或系统之外的任何物质。

如本文所用，术语“RNA干扰”或RNAi是这样的过程，通过其，合成小干扰RNA(siRNA)或RNA分子(包括微小RNA(miRNA)、短干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA))的表达，导致互补的内源性mRNA分子的序列特异性降解或翻译抑制。由此，RNAi是一种不会改变靶基因的DNA序列的转录后基因沉默的形式。

如本文所用，术语“miRNA模拟物”指代可相似于或模拟内源性miRNA的功能的内源性miRNA的双链合成版本。合成的miRNA模拟物可以被修改(例如，化学地)以具有比它们的内源等效物更多或更少的活性(例如，通过更大的降解抗性)。相比之下，“miRNA抑制剂”或“antimiRs”指代能够与内源性靶miRNA结合并阻止它们调控其mRNA靶标的合成单链RNA分子。

如本文所用，术语“扩增(扩展，expand)”指代数量增加，如T细胞数量增加。在一个实施方式中，离体扩增的T细胞在数量上相对于最初存在于培养物中的数量增加。在另一个实施方式中，离体扩增的T细胞相对于培养物中的其它细胞类型在数量上增加。如本文所用，术语“离体”指代已从活生物体(例如，人)中取出并在生物体外部(例如，在培养皿、试管或生物反应器中)繁殖的细胞。

如本文所用，术语“表达”定义为由其启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。

“表达载体”指代包含重组多核苷酸的载体，该重组多核苷酸包含与待表达的核苷酸序列可操作地连接的表达控制序列。表达载体包含足够用于表达的顺式作用元件；其它表达元件可以由宿主细胞或在体外表达系统中供给。表达载体包括本领域已知的所有那些，如掺入重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如，裸露的或包含在脂质体中的)和病毒(例如，仙台病毒、慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒)。

如本文所用，“同源的(homologous)”指代两个聚合分子之间，例如两个核酸分子之间，如两个DNA分子或两个RNA分子之间，或两个多肽分子之间的亚基序列同一性。当两个分子中的一个亚基位置被相同的单体亚基占据时；例如，如果两个DNA分子中的每一个中的一个位置被腺嘌呤占据，那么它们在该位置是同源的。两个序列之间的同源性是匹配或同源位置数量的直接函数；例如，如果两条序列中一半(例如，长度为十个亚基的聚合物中的五个位置)的位置是同源的，则两条序列是50％同源的；如果90％的位置(例如，10个中的9个)是匹配或同源的，则两个序列是90％同源的。

“人源化”形式的非人(例如，鼠)抗体是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其它抗原结合亚序列)，其包含源自非人免疫球蛋白的最小序列。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(CDR)的残基被来自非人类物种(供体抗体)(如小鼠、大鼠或兔)的CDR的残基置换，具有期望的特异性、亲和力、和容量。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非人残基置换。此外，人源化抗体可包含既不在受体抗体中也不在导入的CDR或框架序列中发现的残基。进行这些修饰以进一步精进(refine)和优化抗体性能。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个，通常为两个可变域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区并且所有或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体最好还将包括免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jones et al.,Nature,321:522-525,1986；Reichmann et al.,Nature,332:323-329,1988；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596,1992。

“完全人的(Fully human)”指代免疫球蛋白，如抗体，其中整个分子是人源的或由与抗体的人形式相同的氨基酸序列组成。

如本文所用，“同一性”指代两个聚合分子之间，特别是两个氨基酸分子之间，如两个多肽分子之间的亚基序列同一性。当两个氨基酸序列在相同位置具有相同残基时；例如，如果两个多肽分子中的每一个中的一个位置被精氨酸占据，则它们在该位置是相同的。两个氨基酸序列在比对中的相同位置具有相同残基的同一性或程度通常以百分比表示。两个氨基酸序列之间的同一性是匹配或同一位置数量的直接函数；例如，如果两个序列中的一半(例如，长度为10个氨基酸的聚合物中的五个位置)位置是相同的，则两个序列是50％同一的；如果90％的位置(例如，10个中的9个)是匹配或相同的，则两个氨基酸序列是90％同一的。

“分离的”指代改变或脱离自然状态。例如，天然存在于活体动物中的核酸或肽不是“分离的”，但与其天然状态的共存物质部分或完全分开的相同核酸或肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白质可以以基本上纯化的形式存在，或者可以存在于非天然环境中，如例如宿主细胞中。

如本文所用，术语“修饰的”意指本发明的分子或细胞的改变的状态或结构。分子可以以多种方式进行修饰，包括化学、结构和功能上的修饰。可以通过引入核酸来修饰细胞。

如本文所用，术语“调节(modulating)”意指与不存在治疗或化合物的情况下对象中的反应水平相比和/或与其它方面相同但未经治疗的对象中的反应水平相比，介导对象中反应水平的可检测的增加或减少。该术语涵盖扰乱和/或影响天然信号或反应，从而在对象，优选地，人类中介导有益的治疗反应。

在本发明的上下文中，对于普遍存在的核酸碱基使用以下缩写。“A”指代腺苷，“C”指代胞嘧啶，“G”指代鸟苷，“T”指代胸苷，“U”指代尿苷。

除非另有指定，“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括彼此简并版本并且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。短语编码蛋白质或RNA的核苷酸序列也可以包括内含子，就编码蛋白质的核苷酸序列而言在一些版本中可以含有内含子(一个或多个)。

术语“可操作地连接”指代调控序列和异源核酸序列之间的功能性连接，导致后者表达。例如，当第一核酸序列与第二核酸序列置于功能关系时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，在该启动子与编码序列可操作地连接。通常，可操作连接的DNA序列是连续的，并且在需要连接两个蛋白质编码区时，在同一阅读框中。

免疫原性组合物的“肠胃外”施用包括例如皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌肉内(i.m.)或胸骨内注射，或输注技术。

如本文所用，术语“多核苷酸”被定义为核苷酸链。此外，核酸是核苷酸的聚合物。因此，如本文使用的核酸和多核苷酸是可互换的。本领域技术人员具有核酸是可以水解成单体“核苷酸”的多核苷酸的常识。如本文所用，多核苷酸包括但不限于通过本领域可用的任何手段——包括但不限于重组手段，即，使用普通的克隆技术和PCRTm等并通过合成手段从重组文库或细胞基因组中克隆核酸序列——获得的所有核酸序列。

如本文所用，术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”是可互换使用的，并且指代由通过肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白质或肽必须含有至少两个氨基酸，并且对可以组成蛋白质或肽序列的最大氨基酸数没有限制。多肽包括包含通过肽键彼此连接的(joined)两个或更多个氨基酸的任何肽或蛋白质。如本文所用，该术语指代短链，其在本领域中例如通常也被称为肽、寡肽和寡聚体；和较长的链，其在本领域中通常被称为蛋白质，其中有很多种类型。“多肽”包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚体、异源二聚体、多肽的变体、修饰的多肽、衍生物、相似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或其组合。

如本文所用，术语“启动子”定义为被细胞的合成机器(machinery)或引入的合成机器识别的DNA序列，其需要启动多核苷酸序列的特异性转录。

如本文所用，术语“启动子/调控序列”意指与启动子/调控序列可操作地连接的基因产物的表达所需的核酸序列。在一些情况下，该序列可以是核心启动子序列，而在其它情况下，该序列还可以包括增强子序列和基因产物表达所需的其它调控元件。例如，启动子/调控序列可以是以组织特异性方式表达基因产物的序列。

“组成型”启动子是这样的核苷酸序列，当其与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作地连接时，在细胞的大部分或所有生理条件下导致基因产物在细胞中产生。

“诱导型”启动子是这样的核苷酸序列，当其与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作地连接时，基本上仅当细胞中存在对应于启动子的诱导物时才导致该基因产物在细胞中产生。

“组织特异性”启动子是这样的核苷酸序列，当其与基因编码或指定的多核苷酸可操作地连接时，基本上只有当细胞是对应于启动子的组织类型的细胞时才导致该基因产物在细胞中产生。

“信号转导途径”指代在将信号从细胞的一部分传递到细胞的另一部分中起作用的多种信号转导分子之间的生化关系。短语“细胞表面受体”包括能够接收信号并跨细胞的质膜传输信号的分子和分子复合物。

就术语“特异性地结合”而言，如本文所用的关于抗体，意指识别特定抗原但基本上不识别或结合样本中其它分子的抗体。例如，与来自一个物种的抗原特异性地结合的抗体也可以与来自一个或多个物种的抗原结合。但是，这种跨物种反应性本身不改变抗体作为特异性的分类。在另一个实例中，特异性地结合抗原的抗体也可以结合抗原的不同等位基因形式。然而，这种交叉反应性本身不改变抗体作为特异性的分类。在一些情况下，术语“特异性结合”或“特异性地结合”可用于指抗体、蛋白质或肽与第二化学种类(chemicalspecies)的相互作用，以表示相互作用取决于化学种类上特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在；例如，抗体识别并结合特定的蛋白质结构，而不是一般的蛋白质。如果抗体对表位“A”具有特异性，则在含有标记“A”和抗体的反应中，含有表位A(或游离的、未标记A)的分子的存在将减少与抗体结合的标记A的数量。

术语“对象”旨在包括其中可以引发免疫反应的活生物体(例如，哺乳动物)。如本文所用，“对象”或“患者”可以是人类或非人类哺乳动物。非人类哺乳动物包括例如家畜和宠物，如羊、牛、猪、犬、猫和鼠哺乳动物。优选地，对象是人。

“靶位点”或“靶序列”指代定义在足以发生结合的条件下结合分子可以特异性结合的核酸的一部分的基因组核酸序列。

如本文所用，术语“治疗”意指治疗和/或预防。通过抑制、缓解或根除疾病状态获得治疗效果。

如本文所用，术语“转染的”或“转化的”或“转导的”指代将外源核酸转移或引入到宿主细胞中的过程。“转染的”或“转化的”或“转导的”细胞是已用外源核酸转染、转化或转导的细胞。该细胞包括主要对象细胞及其后代。

术语“转基因”指代已经或即将被人工插入到动物，特别是哺乳动物，更特别是活体动物的哺乳动物细胞的基因组中的遗传物质。

术语“转基因动物”指代非人类动物，通常是哺乳动物——其具有作为染色体外元件存在于其细胞的一部分中或稳定整合到其种系DNA中的非内源性(即，异源性)核酸序列(即，在其大部分或所有细胞的基因组序列中)，例如转基因小鼠。通过对例如宿主动物的胚胎或胚胎干细胞的遗传操作，将异源核酸引入到此类转基因动物的种系中。

术语“敲除小鼠”指代已具有现有基因失活(即“敲除”)的小鼠。在一些实施方式中，通过同源重组使基因失活。在一些实施方式中，用人工核酸序列置换或破坏使基因失活。

如本文所用的术语“治疗”疾病意指降低对象经历的疾病或障碍的至少一种体征或症状的频率或严重性。

如本文所用，短语“在转录控制下”或“可操作连接”意指启动子相对于多核苷酸处于正确的位置和定向，以控制通过RNA聚合酶的转录起始和多核苷酸的表达。

“载体”是包含分离的核酸并且可用于将分离的核酸递送至细胞内部的组成物质(composition of matter)。许多载体是本领域已知的，包括但不限于线性多核苷酸、与离子或两亲化合物相关的多核苷酸、质粒和病毒。因此，术语“载体”包括自主复制的质粒或病毒。该术语还应解释为包括促进核酸转移到细胞中的非质粒和非病毒化合物，如例如聚赖氨酸化合物、脂质体等。病毒载体的实例包括但不限于，仙台病毒载体、腺病毒载体、腺伴随病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体等。

范围：贯穿本公开，本发明的各个方面可以以范围格式呈现。应当理解，范围格式的描述仅仅是为了方便和简洁，不应解释为对本发明范围的不灵活限制。因此，应该认为对范围的描述已经具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值。例如，对诸如从1到6的范围的描述应被认为具有具体公开的子范围，如从1到3、从1到4、从1到5、从2到4、从2到6、从3到6等，以及该范围内的单个数字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的广度如何，这都适用。

描述

本发明基于以下出乎预料的发现：在肥胖的糖尿病小鼠中抑制基因Krüppel样因子11(KLF11)的表达会减少体脂和体重、恢复葡萄糖稳态和胰岛素敏感性并改善胃肠(GI)功能。在一些实施方式中，KLF11的抑制剂是短的非编码siRNA分子，其通过RNA干扰防止KLF11基因的表达。还提供了使用KLF11抑制性siRNA治疗糖尿病、肥胖症、葡萄糖稳态失调和糖尿病相关胃肠障碍的方法和组合物。

糖尿病及相关状况

一方面，本公开的发明提供了治疗有需要的对象的糖尿病的方法，包括向对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂。

糖尿病(diabetes或diabetes mellitus)指代广泛涉及由于激素胰岛素的产生、分泌或功能的缺陷的结果而无法正确调控葡萄糖或糖的使用的一组疾病。胰岛素的异常功能导致糖类、脂肪和蛋白质代谢异常。糖尿病分为两种普通型。1型或胰岛素依赖型糖尿病由自身免疫反应导致，该自身免疫反应导致胰腺中产生胰岛素的β胰岛细胞遭到破坏，导致全身缺乏胰岛素。该疾病的治疗主要由定期监测血糖水平和一天数次注射胰岛素组成。未能控制胰岛素剂量可导致严重的低血糖和对大脑和其它功能的危及生命的损害。

2型或非胰岛素依赖型糖尿病(T2DM)是一种更复杂的疾病，通常在成人中产生，并且与对胰岛素作用产生抗性的葡萄糖反应组织(如脂性脂肪组织、肌肉和肝脏)有关。在T2DM的早期，胰腺胰岛细胞通过分泌过量的胰岛素来补偿。在不进行干预的情况下，会导致β胰岛细胞功能障碍，导致代偿失调和慢性高血糖。此外，T2DM还可能伴有外周胰岛素抗性，其中另外的胰岛素敏感细胞无法正常反应。虽然1型糖尿病通常是一种在生命早期出现的急性疾病，但2型糖尿病可以在生命后期逐渐发展，这是由于包括遗传和生活方式在内的许多因素造成的。常用于治疗T2DM的药物有以下几类：1)直接刺激胰岛素分泌但有引起低血糖风险的胰岛素释放剂；2)一种饮食胰岛素释放剂，其增强葡萄糖诱导的胰岛素分泌，但必须在每餐前服用；3)双胍，包括二甲双胍，其减少由消化产生的葡萄糖；4)胰岛素增敏剂，如噻唑烷二酮衍生物罗格列酮(rosiglitazone)和吡格列酮(pioglitazone)，其通过调节糖代谢基因的表达来改善对胰岛素的外周反应，但具有诸如体重增加、水肿和肝细胞毒性等副作用；5)胰岛素注射，通常在晚期T2DM中需要。

2型糖尿病的代谢性质和由该状况导致的异常高血糖通常导致影响广泛身体组织的症状和障碍的发展。糖尿病与肥胖、脂肪肝病、高脂血症、脂肪肝病和GI动力障碍(包括胃轻瘫和便秘)的高发病率有关。

T2DM相关的胰岛素抗性通常与动脉粥样硬化、肥胖症、高脂血症和原发性高血压有关。这组异常状况构成“代谢”或胰岛素抗性。此外，胰岛素抗性与脂肪肝疾病有关，脂肪肝疾病可能导致慢性炎症或非酒精性脂肪性肝炎、纤维化和肝硬化。非酒精性脂肪肝疾病始于肝脏中三酰甘油的积累，并定义为超过5％的肝细胞中存在细胞质脂滴或TAG水平超过健康个体的第95个百分位。T2DM和脂肪肝疾病都合享共患病(comorbidities)，并且不利地影响各自疾病的进展。2型糖尿病是患有脂肪肝疾病的患者的进行性肝病和肝脏相关死亡的危险因素，而脂肪肝疾病可能是患有2型糖尿病的个体中心血管风险和死亡率的标志。非酒精性脂肪性肝炎——一种以肝细胞损伤和炎症为特征的NAFLD的组织学亚型，在大约10％的患有T2DM的患者中存在，并且与肝硬化的发展和肝脏相关死亡的风险增加有关。

糖尿病性胃轻瘫是一种常见但严重的慢性上胃肠道障碍，其定义为在没有物理梗阻的情况下出现胃排空延迟，并伴有诸如恶心、呕吐、早饱(early satiation)、胃气胀、和腹痛的症状。目前，FDA批准的唯一治疗糖尿病性胃轻瘫的药物是甲氧氯普胺(metoclopramide)——一种具有弱5-HT4激动剂活性的多巴胺D2受体拮抗剂和5-HT3受体拮抗剂，其指示由于不超过12周的治疗而减轻与急性和复发性糖尿病胃瘀滞相关的症状。然而，甲氧氯普胺治疗与显著的副作用如突然的肌肉痉挛和抑郁/情绪变化有关。

通过KLF11信号传导的RNA干扰进行的基因表达调控

一方面，本发明提供了使用干扰RNA分子抑制KLF11信号传导以治疗糖尿病和与糖尿病相关的状况的方法。在某些实施方式中，KLF11信号传导抑制剂是通过RNA干扰来调节KLF11活性的小的非编码RNA分子。

RNA干扰(RNAi)是一种序列特异性RNA靶向过程，它提供了一种直接敲低和有效沉默任何含有同源序列的基因的方法。RNAi的基因调控机制涉及非编码的沉默RNA分子的表达，这些RNA分子与自靶基因转录的mRNA分子互补。互补的RNA分子被表达成长的双链RNA(dsRNA)，然后被RNase III/解旋酶蛋白Dicer切割成19-27个核苷酸(nt)的小干扰RNA(siRNA)分子，在3'端有2nt的突出端。之后，siRNA被并入到被称为RNA诱导沉默复合体(RISC)的核糖核酸酶蛋白复合物中。siRNA的一条链仍与RISC缔合以引导复合物朝向互补的靶RNA。这种siRNA指导的核酸内切酶消化靶mRNA，导致被靶向的RNA的截短和失活。被靶向的mRNA的降解导致所产生的蛋白质的翻译减少。以此方式，siRNA指导的RNAi能够有效地沉默或敲除被靶向的基因，而不会突变或改变基因组DNA序列。

miRNA是小的非编码RNA分子，长度通常为20-22个核苷酸。miRNA充当基因表达和功能的关键调节因子，其通过与转录后RNA相互作用并调节其稳定性和随后的翻译来改变基因表达。对包括miRNA在内的ncRNA的生物学作用的了解正在迅速推进。许多进化研究已经揭示，非编码RNA可以蛋白质编码RNA表达的近4倍的量表达。

内源性miRNA被RNA聚合酶II转录为100-1000个核苷酸(nt)的初级miRNA(pri-RNA)。miRNA可以通过5'加帽和3'聚(A)加尾进行修饰。pri-miRNA的miRNA编码部分形成发夹，被dsRNA特异性核糖核酸酶Drosha及其辅因子DiGeorge综合征临界区8(DGCR8)切割，以形成约60-70nt长的pre-miRNA。pre-miRNA由Dicer和反式激活蛋白RNA结合蛋白TRBP进一步加工，以产生含有两个成熟miRNA(5'-和3'-链miRNA)的miRNA双链体。每个成熟miRNA的长度为约22-23nt。

根据成熟miRNA与其靶标之间的互补程度，可以存在几种mRNA沉默机制。成熟miRNA的位置2到7的前导碱基被称为“种子”序列，提供与靶mRNA的大部分配对特异性。在一些情况下，种子序列与其同族靶标(cognate target)之间的完全配对足以介导同族mRNA的切割和降解。然而，对于哺乳动物和病毒mRNA靶标更典型的是，种子和其它区域中的错配配对损害切割，并且通过对翻译机制结合的物理干扰发生翻译抑制。由于miRNA靶向同族mRNA所需的种子序列的互补长度短，因此每个miRNA都有靶向和调节数百个转录物的可能性。此外，mRNA分子反过来也可以被许多不同的miRNA作用。虽然大多数miRNA将靶蛋白水平降低不到2倍，但这通常足以发挥显著的生理效应。因此，内源性miRNA通路代表了同时微调多个基因的表达以及调节特定的功能通路高效系统。预计miRNA将控制哺乳动物中所有蛋白质编码基因的大约30％的活性，在正常生理过程(从胚胎发育到造血细胞发育)与疾病(心血管疾病、癌症和免疫紊乱)中发挥重要作用。

KLF11靶向性siRNA

在本发明的一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是干扰RNA分子。在一些实施方式中，干扰RNA分子是短干扰RNA或siRNA。

选定的KLF11靶向性siRNA分子的序列在表1中列出。

表1.

治疗方法

还提供了治疗有需要的对象的糖尿病的方法。方法包括向对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自包括shRNA、siRNA和miRNA的组。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是siRNA。在一些实施方式中，KLF11靶向性siRNA分子是表1中所列的那些。

在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂还包含药学上可接受的载剂或佐剂。

还提供了组合物，其包含本文公开的KLF11信号传导的抑制剂和药学上可接受的载剂或佐剂。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自包括shRNA、siRNA和miRNA的组。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是siRNA。在一些实施方式中，KLF11靶向性siRNA分子是表1中所列的那些。

还提供了用于治疗胃肠疾病的方法，包括向有需要的对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗对象的胃肠疾病。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自包括shRNA、siRNA和miRNA的组。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是siRNA。在一些实施方式中，KLF11靶向性siRNA分子是表1中所列的那些。

在一些实施方式中，胃肠疾病选自胃轻瘫、功能性胃肠障碍、功能性胃肠动力障碍和假肠梗阻。在进一步的实施方式中，功能性胃肠障碍选自肠易激综合征、功能性便秘和非特异性功能性肠障碍。

提供了用于减轻体重的方法，包括向有需要的对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而减轻对象的体重。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自包括shRNA、siRNA和miRNA的组。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是siRNA。在一些实施方式中，KLF11靶向性siRNA分子是表1中所列的那些。

还提供了用于降低血糖的方法，包括向有需要的对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而降低对象的血糖。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自包括shRNA、siRNA和miRNA的组。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是siRNA。在一些实施方式中，KLF11靶向性siRNA分子是表1中所列的那些。

还提供了用于增加胰岛素敏感性的方法，包括向有需要的对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而增加对象的胰岛素敏感性。在进一步的实施方式中，施用KLF11信号传导的抑制剂导致对象的血糖水平降低。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自包括shRNA、siRNA和miRNA的组。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是siRNA。在一些实施方式中，KLF11靶向性siRNA分子是表1中所列的那些。

在一些未治疗的糖尿病对象中，对象的β细胞中不产生或仅以低水平产生胰岛素。在未治疗的糖尿病对象中，位于胰岛细胞中的β细胞减少。胰岛细胞位于对象的胰腺中。

还提供了用于治疗糖尿病的方法，包括向有需要的对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗对象的糖尿病。在一些实施方式中，糖尿病是1型或2型糖尿病。在一些实施方式中，施用KLF11信号传导的抑制剂导致对象的血糖水平降低。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自包括shRNA、siRNA和miRNA的组。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是siRNA。在一些实施方式中，KLF11靶向性siRNA分子是表1中所列的那些。

在任一前述方法的一些实施方式中，通过注射施用KLF11信号传导的抑制剂。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂可以口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、通过鼻内滴注、通过植入、通过腔内或膀胱内滴注、眼内、动脉内、病灶内、经皮或通过应用于粘膜来施用。

在任一前述方法的一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂进一步包含药学上可接受的载剂或佐剂。

设想可以将KLF11信号传导的抑制剂与其它适合糖尿病(1型或2型)的治疗组合施用于对象。在一些实施方式中，其它治疗是胰岛素、胰岛素增敏剂(噻唑烷二酮)、二甲双胍、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂(艾塞那肽(Exenatide)、阿必鲁肽(Albiglutide)、度拉鲁肽(Dulaglutide)、利拉鲁肽(Liraglutide)、利司那肽(Lixisenatide))、二肽基肽酶-4(DPP4)抑制剂(西他列汀(Sitagliptin)、维达列汀(Vildagliptin)、阿格列汀(Alogliptin)、利格列汀(Linagliptin))、钠-葡萄糖转运蛋白-2(SGLT2)抑制剂(达格列净(Dapagliflozin)、恩格列净(Empagliflozin))和磺脲类(格列梅德)。

设想可以将KLF11信号传导的抑制剂与其它适合胃肠障碍的治疗组合施用于对象。在一些实施方式中，其它治疗是促动力剂(prokinetics)、5-HT4受体激动剂(普卡必利(Prucalopride)、替加色罗(tegaserod)和Velusetrag)、生长素释放肽(ghrelin)激动剂(雷拉瑞林(Relamorelin))、多巴胺受体拮抗剂和5-HT4激动剂(甲氧氯普胺和多潘立酮(domperidone))、胃动素受体激动剂(大环内酯抗生素：红霉素和阿奇霉素)]、镇吐剂(anti-emetic agent)(阿瑞匹坦(Aprepitant)、异丙嗪(Promethazine)、甲哌氯丙嗪(Prochlorperazine)和昂丹司琼(Ondansetron))，以及作用于分泌的剂(鲁比前列酮(Lubiprostone)和特纳帕诺(Tenapanor))。

在一些实施方式中，KLF11抑制性siRNA包括包含SEQ ID NO:1-8或其组合的核酸序列。

多核苷酸递送系统

基于多核苷酸的治疗，例如本发明中描述的那些，依赖于载体或载体系统使遗传构建体穿梭到靶细胞中。将核酸导入肿瘤或组织细胞的方法包括物理方法、生物方法和化学方法。将一种或几种多核苷酸如RNA或反义寡核苷酸导入宿主细胞或组织的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质体转染(lipofection)、粒子轰击、显微注射、电穿孔等。可以使用商业上可获得的方法将多核苷酸导入靶细胞，包括电穿孔(Amaxa Nucleofector-II(AmaxaBiosystems,德国科隆))、(ECM 830(BTX)(Harvard Instruments,马赛诸塞州波士顿)或Gene Pulser II(BioRad,科罗拉多州丹佛)、Multiporator(Eppendort,德国汉堡)。还可以利用采用脂质体转染的阳离子脂质体介导的转染、利用聚合物包封、利用肽介导的转染或利用生物弹道(biolistic)颗粒递送系统如“基因枪”将寡核苷酸导入细胞(参见，例如，Nishikawa,et al.Hum Gene Ther.,12(8):861-70(2001)。

将多核苷酸导入宿主细胞的化学手段包括胶体分散系统，如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠和脂质基系统包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送媒剂的示例性胶体系统是脂质体(例如，人工膜囊泡)。

适用的脂质可以从商业来源获得。例如，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)可以从Sigma,St.Louis,MO获得；磷酸二乙酰基酯(“DCP”)可以从K&K实验室(Plainview,NY)获得；胆固醇(“Choi”)可以从Calbiochem-Behring获得；二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(“DMPG”)和其它脂质可以从Avanti Polar Lipids,Inc.(亚特兰大州伯明翰)获得。脂质在氯仿或氯仿/甲醇中的储备溶液可在约-20℃下储存。使用氯仿作为唯一的溶剂，因为它比甲醇更容易蒸发。“脂质体”是一个通用术语，包括通过产生封闭的脂质双层或聚集体而形成的各种单层和多层脂质媒剂。脂质体的特征可在于具有含磷脂双层膜和内部水性介质的囊泡结构。多层脂质体具有由水性介质隔开的多个脂质层。当磷脂悬浮在过量的水溶液中时，它们自发形成。脂质组分在形成封闭结构之前经历自我重排，并将水和溶解的溶质截留在脂质双层之间(Ghosh et al.,(1991)Glycobiology 5:505-10)。然而，在溶液中结构不同于正常泡囊结构的组合物也包括在内。例如，脂质可以呈现胶束结构或仅仅作为脂质分子的非均匀聚集体存在。也考虑了lipofectamine-核酸复合物。在本发明的一些实施方式中，可使用脂质或化学系统如，例如纳米颗粒、树状聚体、聚合物、脂质体或阳离子递送系统来递送寡核苷酸。

将感兴趣的多核苷酸导入宿主细胞的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，尤其是逆转录病毒载体，已经成为将基因插入哺乳动物，例如人类细胞的最广泛使用的方法。其它病毒载体可以来源于慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒I、腺病毒和腺相关病毒等。参见例如美国专利号5,350,674和5,585,362。

目前，实现将遗传构建体转移到活细胞中的最高效和有效的方法是通过使用基于复制缺陷型病毒的载体系统。本领域已知的一些最有效的载体是基于腺相关病毒(AAV)的载体。AAV是细小病毒科的小病毒，它们是有吸引力的基因转移用载体，因为它们是复制缺陷型的，不引起任何人类疾病，仅引起非常轻微的免疫反应，能够感染活跃分裂以及静止的细胞，并且稳定地保持在染色体外状态下而不整合到靶细胞的基因组中。在某些实施方案中，本发明的pre-RNA剪接剂可以通过基于AAV的系统递送给对象。

不管用于将核酸导入细胞的方法如何，都可以进行多种测定来确认细胞中核酸的存在。这种测定包括，例如，本领域技术人员公知的“分子生物学”测定，如DNA印迹和RNA印迹、RT-PCR和PCR；“生物化学”测定，如检测特定肽的存在与否，例如通过免疫学手段(ELISA和蛋白质印迹)或通过本文所述的测定来鉴定落入本发明范围内的剂。

药物组合物

提供了组合物，其包含KLF11信号传导的抑制剂。在一些实施方式中，KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。在一些实施方式中，小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

在一些实施方式中，小的非编码RNA分子是包含核酸序列的siRNA，该核酸序列包括SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或其组合。

本发明的药物组合物可包含与一种或多种药学上或生理学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或赋形剂组合的如本文所述的KLF11信号传导的抑制剂。此类组合物可包含缓冲剂，如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸，如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。本发明的组合物优选配制用于静脉内施用。

本发明的药物组合物可以以适合于待治疗(或预防)的疾病的方式给药。施用的数量和频率将由诸如患者状况、患者疾病的类型和严重程度等因素来确定，但适当的剂量可通过临床试验来确定。

本发明的药物组合物可以以诸如片剂、胶囊、粉末、溶液、悬浮液、乳剂等的固体或液体形式施用。本发明的药物组合物可以通过以下来施用：口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、通过鼻滴注、通过植入、通过腔内或膀胱内滴注、眼内、动脉内、病灶内、经皮或通过应用至粘膜。在一些实施方式中，组合物可以例如通过吸入应用于鼻、咽或支气管(bronchial tubes)。

待施用于患者的上述治疗的剂量将随着所治疗状况的确切性质和治疗的受者而变化，并且可以由身体和生理因素(如体重、状况的严重程度、先前或同时发生的治疗干预，以及施用途径)确定。可根据本领域接受的实践进行对于人体施用的剂量的标度。例如，对于成年患者，miR模拟物的剂量将通常在1至约100mg的范围内，通常每月施用一次，持续1至12个月之间的时间。优选的每月剂量是每月1至10mg，但在一些情况下，可以使用每月超过10mg的更大剂量。

人剂量的量最初可以通过从小鼠中使用的化合物的量外推来确定，因为技术人员认识到与动物模型相比修改对人的剂量是本领域的常规。在某些实施方式中，设想剂量可包括每次施用约1微克/kg/体重、5微克/kg/体重、10微克/kg/体重、50微克/kg/体重、100微克/kg/体重，200微克/kg/体重，350微克/kg/体重，500微克/kg/体重、1毫克/kg/体重、5毫克/kg/体重、10毫克/kg/体重、50毫克/kg/体重、100毫克/kg/体重、200毫克/kg/体重、350毫克/kg/体重或500毫克/kg/体重，至1000mg/kg/体重或更多，以及其中可推导出的任何范围的有效量。在其它实施方式中，有效量可以是约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或约100mg/kg体重。在其它实施方式中，设想有效量可以在约1微克化合物至约100mg化合物的范围内。在其它实施例中，有效量可为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg每单剂量。在另一个实施方式中，有效量包括小于约2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95mg每天。在示例性实施方式中，有效量包括少于约50mg每天。当然，根据初始临床试验的结果和特定对象的需要，可以向上或向下调整单剂量的量或每日剂量的量，如在此类治疗方案中常规进行的那样。本领域技术人员将认识到需要修改给药的条件和情况。

将被认为有效剂量的精确确定取决于每个对象的个体因素，包括具体对象他们的大小、年龄、性别、体重和状况。本领域技术人员根据本公开和本领域知识可以容易地查明剂量。

任选地，本发明的方法提供将本发明的组合物施用于合适的动物模型以鉴定组合物(一个或多个)的剂量、其中组分的浓度和施用组合物(一个或多个)的时机，这引起组织修复、减少细胞死亡或诱导另一种理想的生物反应。这样的确定不需要过度的实验，而是常规的，且可无需过度的实验即可查明。

生物活性剂可以作为无菌液体制剂(preparation)(例如，等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散液或粘性组合物)方便地提供给对象，其可以缓冲至选定的pH。本发明的细胞和试剂可以作为液体或粘性配制物提供。对于一些应用，液体配制物是期望的，因为它们便于施用，尤其是通过注射。在期望与组织长时间接触的情况下，粘性组合物可能是优选的。这种组合物在适当的粘度范围内配制。液体或粘性组合物可包含载剂，其可为含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)和其合适混合物的溶剂或分散介质。

无菌可注射溶液通过将他仑帕奈(talampanel)和/或吡仑帕奈(perampanel)悬浮在所需量的适当溶剂中，根据需要与不同量的其它成分一起制备。这种组合物可以与合适的载剂、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。组合物也可以被冻干。根据施用途径和期望的制剂，组合物可以含有辅助物质(auxiliary substances)，如润湿、分散或乳化剂(例如，甲基纤维素)、pH缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、调味剂、色素(colors)等。可以查阅标准文本如“REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE”,第17版,1985(通过引用并入本文)以制备合适的制剂，无需过度实验。

可以添加增强组合物的稳定性和无菌性的各种添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。可以通过各种抗细菌和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)来确保防止微生物的作用。可以通过使用延迟吸收的剂例如单硬脂酸铝和明胶产生可注射药物形式的延长吸收。然而，根据本发明，使用的任何媒剂、稀释剂或添加剂必须与存在于它们的条件培养基中的细胞或试剂相容。

组合物可以是等渗的，即它们可以具有与血液和泪液相同的渗透压。本发明的组合物所期望的等渗性可以使用氯化钠或其它药学上可接受的试剂如右旋糖、硼酸、酒石酸钠、丙二醇或其它无机或有机溶质来实现。对于含有钠离子的缓冲液，氯化钠特别优选的。

如果需要，可以使用药学上可接受的增稠剂(如甲基纤维素)将组合物的粘度维持在选定的水平。其它合适的增稠剂包括例如黄原胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆等。合适的载剂和其它添加剂的选择将取决于确切的施用途径和特定剂型的性质，特定剂型例如液体剂型(例如，组合物是否要配制成溶液、悬浮液、凝胶或另一种液体形式，如定时释放形式或液体填充形式)。本领域技术人员将认识到组合物的组分应选择为化学惰性的。

应当理解，将可用于本发明的方法和组合物不限于实施例中阐述的特定配制物。提出以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供关于如何制作和使用本发明的细胞、扩大和培养方法以及治疗方法的完整公开和描述，并非旨在限制发明人视为其发明的范围。

除非另有指示，否则本发明的实施采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在技术人员的能力范围(purview)内。此类技术在文献中得到了充分解释，文献如“Molecular Cloning:A Laboratory Manual”,第四版(Sambrook,2012)；“Oligonucleotide Synthesis”(Gait,1984)；“Culture of AnimalCells”(Freshney,2010)；“Methods in Enzymology”“Handbook of ExperimentalImmunology”(Weir,1997)；“Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells”(Miller andCalos,1987)；“Short Protocols in Molecular Biology”(Ausubel,2002)；“PolymeraseChain Reaction:Principles,Applications and Troubleshooting”,(Babar,2011)；“Current Protocols in Immunology”(Coligan,2002)。这些技术适用于生产本发明的多核苷酸和多肽，由此，可以在制作和实践本发明时加以考虑。特定实施方式的特别有用的技术将在以下部分中讨论。

实验实施例

通过下面参考实验实施例对本发明作进一步详细描述。提供这些实施例仅是为了说明的目的，除非另有规定，否则不旨在进行限制。因此，本发明决不应被解释为限于以下实施例，而是应被解释为涵盖由于本文提供的教导而变得明显的任何和所有变化。

无需进一步说明，相信本领域普通技术人员可以使用前述说明和以下说明性实施例来制作和利用本发明的化合物并实施要求保护的方法。因此，以下工作实施例具体指出了本发明的优选实施方式，并且不应被解释为以任何方式限制本公开的其余部分。

实施例1：通过RNA干扰来抑制KLF11表达。

设计了一系列siRNA分子来靶向从小鼠和人KLF11基因两者转录的KLF11 mRNA。(图1A)小鼠Klf11 siRNA的序列和结构(siKlf11-1和siKlf11-2，ThemoFisherScientific)。siKlf11-1和siKlf11-2与小鼠Klf11 mRNA互补(在NM_178357.3中分别为503-521和946-964)。(图1B)人KLF11 siRNA的序列和结构(siKLF11-1和siKLF11-2，FisherScientific)。siKLF11-1和siKLF11-2与小鼠KLF11 mRNA互补(在NM_003597.4中分别为434-452和824-842)。

实施例2：通过抑制KLF11表达来治疗肥胖症相关糖尿病

然后进行研究以确定用siKlf11处理是否会挽救喂食高蔗糖和果糖饮食的小鼠中发展出的肥胖表型。(图2)用高脂肪高蔗糖饮食(HFHSD)喂食雄性C57小鼠18周(4-22周龄)，随后在20周的周期内(22-42周龄)在22、26、30、34和38周(总共5次注射)注射siKlf11混合物(siKlf11-1和siKlf11-2)或未注射，用HFHSD或正常饮食(ND)喂食小鼠。注射后(PI)每周测量体重。n＝6只/组。**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。在本公开的整个后续研究中，siKlf11混合物都用于注射。

然后测定siKlf11处理挽救喂食HFHSD的小鼠的糖尿病表型的能力。(图3)每周测量图2中小鼠的空腹血糖。n＝6只/组。**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。进一步观察到siKlf11通过恢复HFHSD诱导的糖尿病小鼠的基础胰岛素水平来降低葡萄糖水平。(图4A)siKlf11 PI或未注射4周，每周测量喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠的胰岛素。(图4B)在PI 4周时测量A1C。每个实验的每种条件n＝8。**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。

然后进行了后续研究以观察在HFHSD诱导的糖尿病小鼠中，通过siKlf11抑制KLF11信号传导是否恢复了餐时胰岛素敏感性。(图5)siKlf11 PI或未注射4周，在将葡萄糖注射到喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠中之前和之后5min、10min和30min时测量胰岛素。每个实验的每种条件n＝3。**p<0.01，(10分钟和30分钟相对于5分钟)。类似地，进一步观察到siKlf11防止HFHSD诱导的糖尿病小鼠中GLP-1的丧失(图6)。siKlf11 PI或未注射4周，每周测量喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠的GLP-1水平。每个实验的每种条件n＝7。**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。与此同时，观察到siKlf11在HFHSD诱导的糖尿病小鼠中维持瘦蛋白水平的能力(图7)。siKlf11 PI或未注射4周，每周测量喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠的瘦蛋白水平。每个实验的每种条件n＝7。

实施例3：通过KLF11抑制来恢复血糖调节

然后进行了一系列研究以观察用siKlf11处理是否能够显著改善HFHSD诱导的糖尿病小鼠的葡萄糖耐量。(图8A和8B)在siKlf11 PI或未注射的4周内，测定喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠中的葡萄糖耐量测试(GTT)和曲线下面积(AUC)。每个实验的每种条件n＝6-12。**p<0.01，(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。同样地，siKlf11显著改善了HFHSD诱导的糖尿病小鼠的胰岛素耐量。(图9A和9B)siKlf11 PI或未注射4周，喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠中的胰岛素耐量测试(ITT)和曲线下面积(AUC)。每个实验的每种条件n＝7-12。**p<0.01，(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。不希望被理论所束缚，这些数据表明KLF11信号传导的敲低能够恢复肥胖-糖尿病小鼠的正常的葡萄糖和胰岛素耐量水平。

实施例4：通过KLF11抑制来改善胃肠功能

胃肠功能缺陷是与肥胖症和糖尿病相关的常见并发症。对siKlf11的后续研究观察了KLF11抑制是否也可以改善受影响小鼠的GI功能，连同已确立的对体重和血糖稳态的改善。(图10A)siKlf11 PI或未注射4周，喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠的总GI转运时间，(图10B)粪粒排出量，和(图10C)结肠转运时间。(图10D)在siKlf11注射之前和siKlf11注射之后PI 4周时，在相同的小鼠中测量的总GI转运时间，(图10E)粪粒排出量，(图15)胰岛素水平，和(图10F)结肠转运时间。每个实验的每种条件n＝6-20。*p<0.05，**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。这些数据表明，接受siKlf11处理的小鼠的GI功能得到显著改善。

实施例5：通过KLF11抑制来治疗肥胖症

图11A-11B描述了siKlf11在喂食HFHSD或ND的小鼠中防止肥胖症和/或糖尿病的发展。雄性C57小鼠两次注射siKlf11混合物——在4周和9周时(在图中标为1和2)——或者未注射，然后喂食HFHSD或ND。(图11A)然后在研究期间每周评估体重。虽然与ND对照相比，喂食HFHSD的小鼠显示体重显著增加，但也接受siKlf11的HFHSD喂食小鼠的体重变化与ND对照没有统计学差异。接受siKlf11的ND喂食小鼠的对照组在体重上也与仅ND组没有统计学差异。(图11B)在同一研究中，每周还观察空腹血糖水平。在HFHSD喂食的小鼠中，以mg/dL测量的血糖水平从第6周开始增加，并最终在第12周达到略低于200ng/dL的峰值，而ND喂食的小鼠的血糖水平很大程度上保持不变。从第7周开始，接受siKlf11的HFHSD喂食的小鼠显示出血糖略微增加，然而血糖水平很大程度上保持不变直到第11周，之后在第12周回落到在ND喂食的小鼠中观察到的水平。接受ND和siKlf11两者的小鼠的血糖水平与仅ND的小鼠没有统计学差异。n＝6只/组。*p<0.05和**p<0.01，(HFHSD喂食的小鼠相对于ND喂食的小鼠)，^#p<0.05和^##p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11相对于未注射)。这些数据证明了siKlf11防止小鼠的肥胖症和糖尿病发展的巨大能力，甚至在那些喂食HFHSD的小鼠中也是如此。

糖尿病和糖尿病相关疾病的相对常见的发生导致了许多药物的开发，这些药物被设计用来对抗这种疾病的各个方面。然后将KLF11抑制与现有的用于糖尿病和肥胖症的药物进行比较，以将其与用于这些障碍的常用的临床治疗策略进行比较。图12A-12C描绘了与指示的抗糖尿病和促动力药物相比，siKlf11在降低体重和血糖方面具有深远和持久的效果。(图12A)siklf 11、四种常用的抗糖尿病药物(胰岛素、二甲双胍、DPPIV抑制剂(西他列汀)、GLP-1受体激动剂(利拉鲁肽))和促动力药物(普卡必利)的药效的研究设计。进行腹膜内注射(IP)；口服施用(口服：PO)；皮下注射(SC)；3IP，3次腹膜内注射；5IP，或5次腹膜内注射以施用这些药物。(图12B和12C)在喂食ND或HFHSD和用siKlf11混合物、抗糖尿病药物、促动力药物处理，或未处理的小鼠中从24周龄起在处理后8周测量的体重和空腹血糖。n＝3，*p<0.05和**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11 3IP相对于未注射)，^#p<0.05和^##p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，siKlf11 5IP相对于未注射)。(图13A和13B)在用siKlf11、GLP-1激动剂处理或未注射之前和之后4周和8周时，在喂食ND或HFHSD的雄性C57小鼠中测量GLP-1和瘦蛋白的水平。n＝3。*p<0.05和**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，PI 4周和8周时的siKlf11或GLP-1激动剂相对于未注射)。(图14)在用siKlf11、GLP-1激动剂、DPPVI抑制剂、二甲双胍、胰岛素、普卡必利处理或未注射之前和之后1-4周和8周时，喂食HFHSD(糖尿病)的雄性小鼠中禁食6小时后胰岛素水平的比较。n＝3。*p<0.05和**p<0.01(在HFHSD喂食的小鼠中，PI 8周时的药物注射相对于未注射)

总而言之，这些数据证明了siKlf11用于治疗肥胖症和糖尿病的临床效用，并且siKlf11能够提供等同于或优于现有药物的临床结果并显示出作为研究药物的前景。

列举的实施方式

提供了以下列举的实施方式，其编号不应被解释为指定重要性级别。

实施方式1提供了治疗有需要的对象的糖尿病的方法，包括向所述对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗糖尿病。

实施方式2提供了实施方式1的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

实施方式3提供了实施方式2的方法，其中所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

实施方式4提供了实施方式3的方法，其中所述小的非编码RNA分子是siRNA。

实施方式5提供了实施方式4的方法，其中所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

实施方式6提供了实施方式1-5中任一项的方法，其中所述糖尿病是2型糖尿病。

实施方式7提供了实施方式1-6中任一项的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂还包含药学上可接受的载剂或佐剂。

实施方式8提供了减轻有需要的对象的体重的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而减轻所述对象的体重。

实施方式9提供了降低有需要的对象的血糖的方法，所述方法包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而降低所述对象的血糖。

实施方式10提供了用于增加有需要的对象的胰岛素敏感性的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而增加胰岛素敏感性。

实施方式11提供了实施方式8-10中任一项的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

实施方式12提供了实施方式11的方法，其中所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

实施方式13提供了实施方式12的方法，其中所述小的非编码RNA分子是siRNA。

实施方式14提供了实施方式13的方法，其中所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

实施方式15提供了实施方式8-14中任一项的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂还包含药学上可接受的载剂或佐剂。

实施方式16提供了治疗有需要的对象的胃肠疾病的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗所述对象的胃肠疾病。

实施方式17提供了实施方式16的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

实施方式18提供了实施方式17的方法，其中所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

实施方式19提供了实施方式18的方法，其中所述小的非编码RNA分子是siRNA。

实施方式20提供了实施方式19的方法，其中所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

实施方式21提供了实施方式16-20中任一项的方法，其中所述胃肠疾病选自胃轻瘫、功能性胃肠障碍、功能性胃肠动力障碍和假肠梗阻。

实施方式22提供了实施方式21的方法，其中所述功能性胃肠障碍选自肠易激综合征、功能性便秘和非特异性功能性肠障碍。

实施方式23提供了组合物，其包含KLF11信号传导的抑制剂和药学上可接受的载剂或佐剂。

实施方式24提供了实施方式23的组合物，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

实施方式25提供了实施方式24的组合物，其中所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

实施方式26提供了实施方式25的组合物，其中所述siRNA由选自SEQ ID NO:1-8或其组合的核苷酸序列编码。

其它实施方式：

在本文中对变量的任何定义中的要素列表的叙述包括将该变量定义为任何单个要素或所列要素的组合(或子组合)。本文对实施方式的叙述包括作为任何单个实施方式或与任何其它实施方式或其部分组合的实施方式。

本文引用的每项专利、专利申请和出版物的公开内容均在此通过引用以其整体并入本文。虽然本发明已参照具体实施方式进行了公开，但很明显的是，本领域的其它技术人员可以在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下设计本发明的其它实施方式和变化。所附权利要求旨在解释为包括所有此类实施方式和等效变化。

                         序列表

<110>  内华达研究与创新公司

       S·罗

<120>  用于治疗糖尿病和肥胖症的KLF11 siRNA

<130>  369055-7017WO1(00051)

<150>  美国临时申请号: 63/065,242

<151>  2020-08-13

<160>  8

<170>  PatentIn版本3.5

<210>  1

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKlf11-1

<400>  1

guuccuuccc aaguaguuau u                                                21

<210>  2

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKlf11-1

<400>  2

gacaaggaag gguucaucaa u                                                21

<210>  3

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKlf11-2

<400>  3

ucugauuucu gucccuguau u                                                21

<210>  4

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKlf11-2

<400>  4

ggagacuaaa gacagggaca u                                                21

<210>  5

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKLF11-1

<400>  5

acaguuuacu cagcacuaau u                                                21

<210>  6

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKLF11-1

<400>  6

ccugucaaau gagucgugau u                                                21

<210>  7

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKLF11-2

<400>  7

caccugaacu accaaaagau u                                                21

<210>  8

<211>  21

<212>  RNA

<213>  人工序列

<220>

<223>  siKLF11-2

<400>  8

guguggacuu gaugguuuuc u                                                21

Claims (27)

1.治疗有需要的对象的糖尿病的方法，包括向所述对象施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗糖尿病。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述小的非编码RNA分子是siRNA。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述KLF11的抑制剂是由选自SEQ ID NO:1-8或其任意组合的核苷酸序列编码的siRNA。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖尿病是2型糖尿病。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂还包含药学上可接受的载剂或佐剂。

8.减轻有需要的对象的体重的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而减轻所述对象的体重。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是选自shRNA、siRNA和miRNA的小的非编码RNA分子。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述KLF11的抑制剂是由选自SEQ ID NO:1-8或其任意组合的核苷酸序列编码的siRNA。

11.降低有需要的对象的血糖的方法，所述方法包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而降低所述对象的血糖。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是选自shRNA、siRNA和miRNA的小的非编码RNA分子。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述KLF11的抑制剂是由选自SEQ ID NO:1-8或其任意组合的核苷酸序列编码的siRNA。

14.用于增加有需要的对象的胰岛素敏感性的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而增加胰岛素敏感性。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是选自shRNA、siRNA和miRNA的小的非编码RNA分子。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述KLF11的抑制剂是由选自SEQ ID NO:1-8或其任意组合的核苷酸序列编码的siRNA。

17.治疗有需要的对象的胃肠疾病的方法，包括施用有效量的KLF11信号传导的抑制剂，从而治疗所述对象的胃肠疾病。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述小的非编码RNA分子是siRNA。

21.根据权利要求17所述的方法，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是由选自SEQIDNO:1-8或其任意组合的核苷酸序列编码的siRNA。

22.根据权利要求17所述的方法，其中所述胃肠疾病选自胃轻瘫、功能性胃肠障碍、功能性胃肠动力障碍和假肠梗阻。

23.根据权利要求17所述的方法，其中所述胃肠疾病是选自肠易激综合征、功能性便秘和非特异性功能性肠障碍的功能性胃肠障碍。

24.组合物，其包含KLF11信号传导的抑制剂和药学上可接受的载剂或佐剂。

25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是小的非编码RNA分子。

26.根据权利要求25所述的组合物，其中所述小的非编码RNA分子选自shRNA、siRNA和miRNA。

27.根据权利要求24所述的组合物，其中所述KLF11信号传导的抑制剂是由选自SEQIDNO:1-8或其任意组合的核苷酸序列编码的siRNA。

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