CN116076731A - 一种高免疫活力的益生菌制剂及其制备方法 - Google Patents
一种高免疫活力的益生菌制剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种高免疫活力的益生菌制剂及其制备方法,涉及功能性食品领域,解决现有益生菌进入胃、小肠和大肠后,都会导致其活性活力下降,也会影响益生菌在大肠定植的问题,包括如下步骤:以胆盐水解酶为芯材Ⅰ,将芯材Ⅰ和壁材Ⅰ溶于水,后得内核微胶囊;以内核微胶囊等为芯材Ⅱ,菊粉等为壁材Ⅱ,然后再加入冰醋酸,最后洗涤三次,得湿态的二层包被微胶囊,将其与辅料混合后进行干燥,即得;本发明为三层包埋的微胶囊结构,穿过胃时,有效的避免胃酸对益生菌活力影响;在进入小肠后,益生菌得以充分释放的同时,有效的缓解胆盐对益生菌增殖的不利影响;进而在进入大肠后,释放的胆盐水解酶进一步避免大肠内残余胆盐对益生菌增殖和定植的影响。
Description
技术领域
本发明涉及功能性食品技术领域,更具体的是涉及高免疫活性的益生菌技术领域。
背景技术
益生菌是一类定植于宿主肠道或生殖系统内,能通过改善宿主机体微生态平衡而产生的确切有益的活性微生物的总称。益生菌分布广泛,种类繁多。目前研究较多的益生菌主要是乳酸菌属和双歧杆菌属。乳酸菌是利用可发酵碳水化合物(主要包括葡萄糖和乳糖)发酵产生乳酸的细菌的统称,是一类厌氧或兼性厌氧型且无芽孢的革兰氏阳性菌,主要包括有干酪乳杆菌,嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌。双歧杆菌因其菌体末端分叉而起名双岐,属于厌氧型革兰氏阳性杆菌,它能适应肠道内的无氧环境,在小肠的中后部分或大肠内大量生长繁殖,主要包括长双岐杆菌,婴儿双歧杆菌和青春双岐杆菌等。这些益生菌主要通过促进肠道内有益菌的生长繁殖来抑制有害菌的生长,从而起到调节肠道内微生态平衡和调节肠道功能的作用,来达到促进人体健康的目的。
益生菌对人体有诸多好处,如可以促进有益菌的生长,改善肠道环境等。但益生菌如果想要真正发挥其益生作用,就必须在肠道内大量存活和定植,这样才能有效改善肠道微生态和代谢出足够的代谢产物来刺激肠道。
益生菌最终发挥作用的地方主要是在消化道的下端,即小肠中下段和大肠内,尤其是大肠内更为益生菌定植的主要场所。但是益生菌在进入胃和小肠时,人的胃酸和胆汁中胆盐对益生菌的伤害极大,很少有益生菌能直接承受这么恶劣的环境,就造成了以传统方式直接摄入益生菌后其在体内存活率较低,达不到益生效果。所以要提高益生菌对体内环境的中胃酸及胆盐的耐受程度,提高益生菌在体内的存活率,从而促进益生菌发挥益生作用。
传统方法是将益生菌采用微胶囊技术进行包埋,采用合成高分子物质或者天然物质形成能有半透性或者密封的微小粒子,它可以对益生菌剂进行包裹,从而起到物理阻隔或者缓释的目的;按囊壁划分可以将微胶囊划分为单层、双层、多层微胶囊;按囊芯划分则可分为单核、双核多核微胶囊。但是传统方法常规做法是其胶囊在胃部保持完整或缓释,抵御胃酸的恶劣环境,在通过胃部进入小肠后,胶囊就完成了崩解,益生菌就直接裸露在富含胆汁的小肠环境中,从而无法避免或缓解胆汁对益生菌活力的不利影响。
如专利公开号CN111713685公开了一种微胶囊壁材及其在制备益生菌微胶囊中的应用,其壁材为脑蛋白酸钠、阴离子多糖以及冻干保护剂,其应用方法为传统的乳化法,从而得到传统的以益生菌为内核的单层微胶囊结构。该法其益生菌无法抵御小肠及大肠残余胆盐的影响。
专利公开号CN111588038公开了一种海藻酵素益生菌微胶囊及其制备方法,其是以益生菌、海藻酵素及玉米淀粉为芯材,海藻酸钠、壳聚糖及氯化钙为壁材,制得微胶囊,该方法制得微胶囊在肠道崩解后,其益生菌直接暴露在肠道环境中,无法有效改善和缓解胆盐对定植增殖的影响。
专利公开号CN109619593公开了一种益生菌双层胶囊及其制备方法,是通过菌体的扩繁冻干,然后加入抗性淀粉、乳清蛋白、海藻酸钙、海藻酸钠制得菌胶液,再加入到大豆油汇总,搅拌加冰乙酸制得微胶囊,最后洗涤干燥后制得单层微胶囊,随后以海藻酸钠等采用凝聚法二层包被,制得双层微胶囊成品。该方法大大提高了益生菌的释放或者隔离性能,但是其益生菌不能有效的在小肠释放,同时其在大肠释放后,不能抵御残余胆盐的侵害。
专利公开号CN111317140公开了一种耐胆盐耐胃酸益生菌制剂及其制备方法和应用,是通过以多孔糊精、麦芽糊精、抗氧化剂、益生菌菌泥及甘油三酯制备益生菌乳化液,以益生菌乳化液与葵花籽油、中链甘油三酯、聚甘油脂肪酸酯、磷脂及抗氧化剂混合制备益生菌油包水返胶束乳液,以生菌油包水返胶束乳液、中链甘油三酯、磷脂等混合制得耐盐益生菌胶束乳液,以耐盐益生菌胶束乳液、多孔糊精、乳清蛋白粉、海藻糖等混合制得耐胃酸益生菌胶束乳液,最后将耐胃酸益生菌胶束乳液均质干燥后制得益生菌粉。该方一共包埋了四层结构,这就直接造成微胶囊在胃肠道内稳定性极为难以控制,同时工艺极为复杂,产业化极为困难,而且微胶囊在大肠完全崩解后,益生菌将与残余的胆盐直接接触,无法有效改善和缓解胆盐对益生菌定植增殖的影响。
目前针对如何有效缓解胃部的胃酸及小肠内的胆盐对益生菌的影响,大多都是采用微胶囊的工艺,其原理就是微胶囊起到与胃酸及胆盐物理隔离的作用,从而减轻胃酸及胆盐对其活力的损害。有时为了更好起到隔离效果,或采用双层甚至三、四层结构。但是无论采用几层结构,益生菌微胶囊通过胃酸进入到小肠后,可能由于壁材过于稳定,益生菌不能在小肠得以释放,也可能在小肠释放后其直接与胆盐发生接触,从而导致其活力下降;同时益生菌微胶囊进入大肠后,其发生崩解,益生菌会直接受到残余的胆盐的影响,进而也会影响益生菌在大肠的定植及免疫活力。
发明内容
本发明的目的在于:为了解决上述现有的技术的益生菌进入胃后,胃酸会导致其活性下降活力下降,进入小肠后胆盐会导致其活力下降,进入大肠后残余胆盐也会影响益生菌在大肠的定植及免疫活力的问题,本发明提供一种高免疫活力的益生菌制剂及其制备方法,其是具有三层包埋的微胶囊结构,其在穿过胃时,可以有效的避免胃酸对益生菌活力影响;随后在进入小肠后,益生菌得以充分释放的同时,有效的缓解胆盐对益生菌增殖的不利影响;再而在进入大肠后,释放的胆盐水解酶可以进一步避免大肠内残余胆盐对益生菌增殖和定植的影响。
本发明为了实现上述目的具体采用以下技术方案:一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,包括如下步骤:
步骤1、以胆盐水解酶为芯材Ⅰ,以邻苯二甲酸醋酸纤维素、低聚果糖、果胶及碳酸钙为壁材Ⅰ,将芯材Ⅰ和壁材Ⅰ溶于水,在真空条件下充分搅拌,后进行负压喷雾干燥得内核微胶囊;
步骤2、以内核微胶囊、益生菌、破乳剂及载体保护剂为芯材Ⅱ,菊粉、葡甘聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、黄原胶及碳酸钙为壁材Ⅱ,将芯材Ⅱ和壁材Ⅱ在水溶中充分混合后,加入含吐温的大豆油搅拌乳化,然后再加入冰醋酸并继续搅拌,最后用含吐温的水洗涤三次,得湿态的二层包被微胶囊;
步骤3、将湿态的二层包被微胶囊与辅料混合(充分搅拌混合均匀,湿态二层包被微胶囊外层均匀裹满辅料即可)后进行干燥(干燥为脱去水分为目的,为真空干燥、沸腾干燥、真空冷冻干燥中的任意一种,真空干燥温度为50~65℃,真空度为-0.1~-0.08MPa;沸腾干燥温度为80~90℃;真空冷冻干燥,预冻温度为-10℃~-20℃、升华干燥温度为-5~0℃、解析干燥温度为40~55℃),即得高免疫活力的益生菌制剂。
本申请的技术方案中:胆盐是胆汁的主要成分之一,其是由肝细胞分泌的胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合而成的钠盐或钾盐。其可以作为乳化剂参与脂肪消化和吸收。但是胆盐随肝胆排至小肠后,约有95%在回肠末端吸收入血,进而经过肝脏再次合成胆汁,如此循环利用。但是在回肠末端还没完全吸收入血的约5%残余胆盐,则进一步会进入到大肠,而大肠是肠道菌落的主要定植和增殖的场所,这些残余的胆盐就会对肠道的菌落的定植和增殖带来不利影响。
胆盐水解酶的加入,其由于经过了微胶囊包埋处理,其在经过胃部及小肠等胃肠道过程中保持微胶囊包埋状态,在到达大肠后,其微胶囊开始崩解,胆盐水解酶即开始释放,从而开始降解大肠中残余的胆盐,减缓胆盐对大肠内益生菌的定植和增殖的不利影响。同时由于包埋胆盐水解酶微胶囊在胃及小肠环境中不发生崩解,故而胆盐水解酶一方面不会受到胃酸的破坏,也不会对小肠中的胆盐进行降解,即保护了酶的活性,也保护了小肠中胆盐不受破坏,从而不影响胆盐在小肠内的生理功能。再而,胆盐在大肠水解后的产物为甘氨酸、牛磺酸等物质,可以给予益生菌定植和增殖的碳源和氮源。加之,胆盐水解酶是大肠释放后,其降解了残余的胆盐,进而减少了大肠对脂肪的消化吸收,也降低了胆固醇的水平,进而有益于减肥和胆固醇水平的调节。
邻苯二甲酸醋酸纤维素是自然界安全的半合成高分子材料,其具有优良的生理惰性,其在酸性条件不能溶解,但是在中性或碱性条件下可以缓慢溶解,故而有利于抵御胃酸的破坏,并抵御一定时间的中性或碱性条件。同时,由于邻苯二甲酸醋酸纤维素形成的胶囊结构其存在着多孔状,故而需与其他壁材配合使用,添加一定比例的低聚果糖及果胶,可以有效改善微胶囊对胃酸的抵御能力,同时对其在中性或弱碱性条件也能缓慢崩解(低聚果糖其对酸性稳定性好,在酸性条件下难以降解,果胶在酸性溶液中较在碱性溶液中稳定,故而两者与邻苯二甲酸纤维素及碳酸钙结合后,可以强化四者形成的壁材在胃部中抵御胃酸的能力,并在一定时间内抵御小肠内部中性或碱性条件),从而使得益生菌制剂能够顺利通过胃酸而进入小肠,且内核微胶囊结构能顺利通过小肠,直达大肠。海藻酸盐易与阳离子形成凝胶,并且形成的胶囊,同时该胶囊易在近小肠的中性环境降解(海藻酸盐在胃酸中处于pH较低情况下会形成凝胶,而但其流经小肠中后,环境的pH值升高,海藻酸盐则会趋于缓慢溶解)。
在微胶囊制备过程中采用真空条件下进行搅拌,可以有效的避免搅拌过程中空气进入粘稠的混合液中,同时也可以将混合液中的空气排出,从而使得制备的内核微胶囊中尽可能的少的滞留空气,从而有效避免微胶囊内部出现大量的空洞,从而使得微胶囊的结构更为致密,强化外界条件对微胶囊的不利影响。
同时,采用负压喷雾干燥,更有利于在较低温度条件下实现喷雾干燥,同时也有效降低了喷雾过程中,微胶囊中混入的空气含量,从而有效避免微胶囊内部出现大量的空洞。
胆盐是由肝细胞分泌的胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合而形成的钠盐或钾盐。它是胆汁中参与脂肪消化和吸收的主要成分。胆盐同时也是一种阴离子表面活性剂,在小肠内的各种水溶性及脂溶性物质进行充分乳化,从而促进各种营养物质参与体内的消化降解反应。
破乳剂是一种能破坏乳状液的表面活性剂,其主要通过部分取代稳定膜的作用使乳状液破坏,从而打破的乳浊液的稳定性,使得各种物质(底物)与酶系接触面减少,有效降低酶解反应。
两性离子表面活性剂其带有阳离子和阴离子,其阳离子带有正电荷可以中和胆盐这一阴离子表面活性剂的负电荷,破坏乳状液油水两相的稳定性,从而有效减低其乳化性能,从而使得乳化失稳而破乳。
非离子表面活性剂其作为一种高分子表面活性剂剂,其能溶于油水的连续相,从而对乳化滴具有桥接作用,使之聚集和凝结而破乳,故而其与两性离子表面活性剂配合使用具有更好的破乳性能。
二层包被微胶囊其在小肠崩解,破乳剂在小肠内得以释放,其能打破胆盐对小肠内环境乳化稳定性,降低小肠环境的乳化性,进而有效的减少胆盐与益生菌的接触,从而增强其在小肠内的存活、定植及增殖能力,提高益生菌的免疫活力。
菊糖也即植物多糖,是由糖苷键结合的糖链,至少要超过10个的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物,其作为一种天然的碳水化合物,由于其稳定性好,其很难在水中和胃肠道上游部位溶解,故而其制备的微胶囊可以更加完整的直达到小肠之后才得以崩解和降解。葡甘聚糖是有葡萄糖及甘露糖聚合而成的高分子多糖,能结合大量水分,通过氢键、分子偶极、诱导偶极、瞬间偶极等作用力与水分子结合形成难于自由运动的巨大分子,具有极好的成膜性和胶凝性。羧甲基纤维素是纤维素经羧甲基化得到的,其钠盐以及海藻酸钠易于钙盐发生离子交换反应,从而形成交联的网状凝胶结构(羧甲基纤维素钠及海藻酸钠含有大量的羧酸根(COO-),其极易与钙离子(Ca2+)发生离子交联,从而出现错综复杂的立体网络结构)。以菊粉、葡甘聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、黄原胶、碳酸钙为原料制作的壁材Ⅱ,其可以有效的使二层包被微胶囊及其包埋的内核微胶囊完整的顺利通过胃,以致在其进入小肠之后开始发生崩解,从而释放益生菌和破乳剂。
湿态二层包被微胶囊外层包裹的其他辅料,可以是其他根据需要添加,并进行比例调整,以其可以实现包裹并干燥即可,故而其适用性极广,可以通过添加附加其他功能性成分从而赋予其生理功能性。譬如便于吸收的小分子蛋白肽---海洋鱼低聚肽、人体蛋白的主要主场之一---胶原蛋白粉、具有免疫活性--酵母β-葡聚糖、具有神经再生促进作用---N-乙酰神经氨酸、对胎儿视力和智力发育有促进作用---DHA藻油粉、调节口感滋味和补充盐分---食用盐、抗焦虑缓解疲劳改善睡眠---γ-氨基丁酸。
该具有三层包被性能高免疫活力益生菌制剂,其最外层包被为以乳粉及具有特殊生理功能的辅料组成,这层包被一方面含有益生菌生长和增殖的营养物质,同时也含有不同人体需求的功能性物质,最外层包被直接是以溶解状态进入胃部,并发挥着营养及生理功能的作用。二层包被微胶囊由于其具有以菊粉、葡甘聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、黄原胶及碳酸钙组成的壁材,其可以有效的抵御胃酸,并包裹着内核微胶囊及益生菌顺利通过胃部而顺利进入小肠,有效的避免胃酸对益生菌及内核微胶囊的影响;随后二层包被微胶囊在小肠内开始崩解,并缓慢释放益生菌、破乳剂及微核为胶囊,益生菌在破乳剂的作用保护下,有效的抵御小肠内的胆盐对其破坏;内核微胶囊依然保持着包埋状态,其内核中的胆盐水解酶未在小肠内释放,从而避免胆盐水解酶过早的在小肠内降解胆盐,进而避免打破对小肠内正常的胆盐水平。当包埋着胆盐水解酶的内核微胶囊与益生菌一起进入大肠后,内核微胶囊开始不同程度的降解,并释放其中的胆盐水解酶,进而开始对大肠内的残余胆盐进行降解,进而进一步缓解大肠内的残余胆盐对益生菌活力、增殖和定植的影响。
优选的,步骤1中,芯材Ⅰ与壁材Ⅰ的质量比为1:2~4,水的量为芯材Ⅰ与壁材Ⅰ总重量的3.5~9倍,壁材Ⅰ中邻苯二甲酸醋酸纤维素、低聚果糖、果胶及碳酸钙的质量比为10:0.3~1:1~4:0.1~0.6。
优选的,步骤1中,胆盐水解酶的酶活力为1000~100000U/g;水的温度为30~50℃;真空条件下的真空度为-0.09~-0.05MPa;负压喷雾干燥的负压真空度为-0.07~-0.04MPa,进风温度为90~110℃,出风温度为40~85℃。
优选的,步骤2中,芯材Ⅱ与壁材Ⅱ的质量比为1:3~5,芯材Ⅱ的内核微胶囊、益生菌、破乳剂及载体保护剂的质量比为1:8~15:0.05~0.1:0.5~1;壁材Ⅱ的菊粉、葡甘聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、黄原胶及碳酸钙的质量比为5:0.01~0.1:0.5~1:1~3:0.1~0.5:1~3;水的量为芯材Ⅱ和壁材Ⅱ总重量的3~6倍;水的温度为30~50℃。
优选的,益生菌有效活菌数≥5*1011CFU/g,益生菌为青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌、唾液乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜热链球菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌乳亚种、格氏乳杆菌、约氏乳杆菌、清酒乳杆菌、乳酸片球菌、产丙酸丙酸杆菌、戊糖片球菌、马克斯克鲁维酵母中的一种或多种。
优选的,破乳剂包括两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂,两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂的质量比为10:0.5~2;两性离子表面活性剂包括卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和神经鞘磷脂中的一种或多种;非离子表面活性剂包括丙二醇脂肪酸酯、山梨醇酐单月桂酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、木糖醇酐单硬脂酸酯、柠檬酸脂肪酸甘油酯中的一种或多种。
优选的,载体保护剂为低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、抗性糊精、麦芽糊精、低聚木糖、L-阿拉伯糖、壳寡糖中的一种或几种。
优选的,葡甘聚糖为魔芋提取分离而得到,分子量为2万~200万道尔顿,更优选分子量为20万~100万道尔顿。
优选的,大豆油的量为芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液的3~7倍(体积倍数);大豆油中吐温的含量为0.3~1.2%;冰醋酸的添加量为芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液的0.005-0.02倍(体积倍数);含吐温的水中吐温含量为0.5~1.5%,吐温为吐温-20、吐温-40和吐温-60中的一种或多种。
优选的,湿态的二层包被微胶囊与辅料的质量比为1:0.3~0.6;辅料为乳粉和其他辅料;乳粉与其他辅料的质量比10:2~5;乳粉为牛乳粉、羊乳粉、骆驼乳粉中的一种或多种(根据需要任意配比);其他辅料为海洋鱼低聚肽、胶原蛋白粉、酵母β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、DHA藻油粉、食用盐、γ-氨基丁酸中的一种或多种(根据需要任意配比)。
所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法制得的高免疫活力的益生菌制剂。
所述的益生菌制剂推荐最佳食用时间为空腹时,即早餐前1~3h、早餐后1~2h、中餐后2~3h、晚餐后3~5h,更优选早餐前1~3h。
尽量选择空腹食用时间可以有效的避开早中晚餐进食时刺激胃酸及肠道胆盐的分泌高峰期;同时也可以避免流质状态的益生菌制剂与固体状态的食物相混合,从而直接影响流质状态益生菌制剂在肠胃中的通过速度(流质状态的食物穿过胃肠道的速度较固态食物速度快)。
本发明的有益效果如下:
1、本发明高免疫活力益生菌制剂,其最外层包被为以乳粉及具有特殊生理功能的辅料组成,这层包被一方面含有益生菌生长和增殖的营养物质,同时也含有不同人体需求的功能性物质,最外层包被直接是以溶解状态进入胃部,并发挥着营养及生理功能的作用。二层包被微胶囊由于其具有以菊粉、葡甘聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、黄原胶及碳酸钙组成的壁材,其可以有效的抵御胃酸,并包裹着内核微胶囊及益生菌顺利通过胃部而顺利进入小肠,有效的避免胃酸对益生菌及内核微胶囊的影响;随后二层包被微胶囊在小肠内开始崩解,并缓慢释放益生菌、破乳剂及微核为胶囊,益生菌在破乳剂的作用保护下,有效的抵御小肠内的胆盐对其破坏;内核微胶囊依然保持着包埋状态,其内核中的胆盐水解酶未在小肠内释放,从而避免胆盐水解酶过早的在小肠内降解胆盐,进而避免打破对小肠内正常的胆盐水平。当包埋着胆盐水解酶的内核微胶囊与益生菌一起进入大肠后,内核微胶囊开始不同程度的降解,并释放其中的胆盐水解酶,进而开始对大肠内的残余胆盐进行降解,进而进一步缓解大肠内的残余胆盐对益生菌活力、增殖和定植的影响;
2、本发明的益生菌制剂,有效活菌数高,即有效活菌数≥1.2×109CFU/g;
3、本发明的益生菌制剂,其益生菌包埋率高,即包埋率≥90%;
4、本发明的益生菌制剂,其可以顺利通过胃部,能够有效抵御胃酸;
5、本发明的的益生菌制剂,其可以有效抵御小肠内胆盐对益生菌不利影响,并保持小肠内正常的胆盐水平,从而增强其在小肠内的存活率高,提高益生菌的免疫活力;
6、本发明的益生菌制剂,其可以有效对大肠内残余胆盐进行降解,缓解其对益生菌的不利影响,从而增强其在小肠内的存活、定植及增殖能力,提高益生菌的免疫活力;
7、本发明的益生菌制剂,其工艺简单,适用性极广,产品可以附加其他多种生理活性功能,产业化能力强。
附图说明
图1是本发明实施例1、D7和D9的胃液解囊试验;
图2是本发明实施例1、D7、D9和D10的胃液益生菌存活试验;
图3是本发明实施例1、D6和D7的小肠液解囊试验;
图4是本发明实施例1、D2、D3、D4和D5的小肠液解囊益生菌存活试验;
图5是本发明实施例1、D1、D8的大肠液解囊益生菌存活试验;
图6是本发明实施例1、D1、D6和D8的大肠液解囊胆盐水解试验。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
本发明实施例所使用的原料或化学试剂,如无特殊说明,均通过常规商业或者自制途径获得。
1、解囊方法:将1g制备的益生菌制剂加入到10ml、0.06mol/L柠檬酸钠水溶液中,在摇床中于37℃、250r/min摇晃30min,取样即得解囊的益生菌制剂。
2、有效活菌数的检测方法:按方法1解囊后,依据T/CNFIA 131-2021益生菌食品的团体标准要求进行检测。
3、包埋率的测定:按方法1解囊后,进行活菌计数,同时计算最初添加的活菌数。
包埋率的计算公式为:包埋率=(微胶囊包埋的活菌数/起始添加的活菌数)*100%
4、体外模拟胃肠道系统存活率的测定
(1)模拟胃液的配置及胃存活率测定
将0.26g氯化钾、0.02g磷酸二氢钾、1.05g碳酸氢钠、1.40g氯化钠、0.01g二水合氯化镁、0.04g碳酸铵和0.01g二水合氯化钙于500mL无菌水中混合均匀,并用1.00mmol/L盐酸或1.00mmol/L氢氧化钠调pH至2.00,胃蛋白酶保持在3.20g/L,充分混合均匀后即得模拟胃液。
称取0.1g制备的微胶囊产品(益生菌制剂产品),放入装有50ml的模拟胃液中,在37℃的摇床中分别震荡0、10、20、30、40、50min时,离心收集微球,并无菌水洗涤后,分别比例取样干燥称重并参考包埋率的测定方法进行解囊后,测定解囊率和活菌数,并计算胃存活率。
胃解囊率A1=1-[最终微胶囊干重/(最初微胶囊干重*N1)]*100%
N1=[(内核微胶囊原辅料配方干重+二层包被微胶囊原辅料配方干重)/全部原辅料配方干重]*100%
胃存活率B1=(最终活菌数/最初添加活菌数)*100%
(2)模拟小肠液的配置及小肠存活率测定
将0.25g氯化钾、0.01g磷酸二氢钾、3.27g碳酸氢钠、1.12g氯化钠、6.13g六水合氯化镁和0.03g二水合氯化钙于500mL无菌水中混合均匀,并用1.00mmol/L盐酸或1.00mmol/L氢氧化钠调整pH至7.40,胰酶保持在10.00g/L,胆盐保持在3.00g/L,充分混合均匀后即得模拟小肠液。
取0.1g试验(1)在震荡30min时,离心干燥制备的微胶囊产品,放入装有50ml的模拟小肠液中,在37℃的摇床中分别震荡0、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8h时,离心收集微球,并无菌水洗涤后,分别比例取样干燥称重测定解囊率,同时对小肠液进行测定活菌数,计算小肠存活率。
小肠解囊率(二层包被微胶囊)A2=[最初(1)试验微胶囊干重-最终微胶囊干重/(最初(1)试验微胶囊干重*N2)]*100%
N2=[(二层包被微胶囊原辅料配方干重)/(内核微胶囊原辅料配方干重+二层包被微胶囊原辅料配方干重)]*100%
小肠存活率B2=(最终活菌数/最初添加活菌数)*100%
(3)模拟大肠液的配置及大肠繁殖倍数和胆盐水解率的测定
参考模拟小肠液的配方,将胆盐保持在0.1g/L,其他配方和操作不变,即得模拟大肠液。
取0.1g试验(2)在震荡4h时,离心干燥制备的微胶囊产品,放入装有50ml的模拟大肠液中,继续在37℃的摇床中分别震荡0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10h时,直接测定大肠液中胆盐含量和活菌数,计算胆盐水解率和存活率。
胆盐水解率=1-(最终胆盐含量/最初胆盐含量)*100%
大肠存活率B3=(最终活菌数/最初添加活菌数)*100%
实施例1
1、内核微胶囊的制备:精确称取酶活力单位8000U/g的胆盐水解酶10g、邻苯二甲酸醋酸纤维素20g、低聚果糖1.5g、果胶2g、碳酸钙0.7g,加入温度为40℃的温水205g后,再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀,然后在负压真空度为-0.05MPa,进风温度为100℃,出风温度为65℃条件下负压喷雾干燥,即得内核微胶囊。
2、二层包被微胶囊的制备:精确称取内核微胶囊34.2g、益生菌(动物双歧杆菌与嗜酸乳杆菌质量比为1:1,有效活菌总数9.3*1011CFU/g)342g、破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)2.4g、载体保护剂(低聚果糖)27.3g、菊粉1000g、葡甘聚糖(20万Da)10g、海藻酸钠140g、羧甲基纤维素钠400g、黄原胶46g、碳酸钙300g,再加入温度为40℃的11510g温水后搅拌均匀,接着加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液5倍的大豆油(吐温-20含量为0.7%),搅拌均匀使其充分乳化,然后加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液0.015倍的冰醋酸并继续搅拌均匀,最后用水(吐温含量1%)洗涤三次后,即得湿态的二层包被微胶囊。
3、益生菌制剂成品的制备:向上述制得湿态二层包被微胶囊中,加入牛乳粉3177g、其他辅料(乳清蛋白粉:胶原蛋白粉:N-乙酰神经氨酸:DHA藻油粉的质量比例为1:1:0.01:0.001)953g,充分混合均匀后,置于真空度为-0.1MPa、温度为60℃的条件下真空干燥后,即得高免疫活力的益生菌制剂。
相关的检测指标和结果,见表1及图1-6。
实施例2
1、内核微胶囊的制备:精确称取酶活力单位30000U/g的胆盐水解酶10g、邻苯二甲酸醋酸纤维素15g、低聚果糖1.5g、果胶6g、碳酸钙0.8g,加入温度为40℃的温水200g后,再在-0.06MPa的真空度条件下充分混合均匀,然后在负压真空度为-0.06MPa,进风温度为90℃,出风温度为75℃条件下负压喷雾干燥,即得内核微胶囊。
2、二层包被微胶囊的制备:精确称取内核微胶囊33.3g、益生菌(干酪乳杆菌:瑞士乳杆菌:罗伊氏乳杆菌质量比为1:1:1,有效活菌总数8.7*1011CFU/g)270g、破乳剂(卵磷脂与山梨醇酐单棕榈酸酯质量比为10:0.7)1.7g、载体保护剂(低聚异麦芽糖)33.3g、菊粉700g、葡甘聚糖(100万Da)1.7g、海藻酸钠84g、羧甲基纤维素钠140g、黄原胶63g、碳酸钙168g,再加入温度为40℃的4485g温水后搅拌均匀,接着加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液4倍大豆油(吐温-20含量为1%),搅拌均匀使其充分乳化,然后加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液0.01倍的冰醋酸并继续搅拌均匀,最后用水(吐温含量1%)冲洗三次后,即得湿态的二层包被微胶囊。
3、益生菌制剂成品的制备:向上述制得湿态二层包被微胶囊中,加入羊乳粉1850g、其他辅料(海洋鱼低聚肽:胶原蛋白粉:N-乙酰神经氨酸:γ-氨基丁酸的质量比例为1:0.5:0.01:0.01)850g,充分混合均匀后,置于真空度为-0.09MPa、温度为70℃的条件下真空干燥后,即得高免疫活力的益生菌制剂。
相关的检测指标和结果,见表1。
实施例3
1、内核微胶囊的制备:精确称取酶活力单位100000U/g的胆盐水解酶10g、邻苯二甲酸醋酸纤维素30g、低聚果糖1g、果胶4g、碳酸钙0.5g,加入温度为40℃的温水180g后,再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀,然后在负压真空度为-0.05MPa,进风温度为100℃,出风温度为65℃条件下负压喷雾干燥,即得内核微胶囊。
2、二层包被微胶囊的制备:精确称取内核微胶囊45.5g、益生菌(动物双歧杆菌与嗜酸乳杆菌质量比为1:2,有效活菌总数8.5*1011CFU/g)500g、破乳剂(卵磷脂磷脂酰乙醇胺与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:2)4.6g、载体保护剂(麦芽糊精)25g、菊粉1400g、葡甘聚糖(50万Da)28g、海藻酸钠168g、羧甲基纤维素钠280g、黄原胶28g、碳酸钙280g,再加入温度为40℃的8277g温水后搅拌均匀,接着加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液3倍大豆油(吐温-20含量为0.3%),搅拌均匀使其充分乳化,然后加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液0.02倍的冰醋酸并继续搅拌均匀,最后用水(吐温含量0.5%)洗涤三次后,即得湿态的二层包被微胶囊。
3、益生菌制剂成品的制备:向上述制得湿态二层包被微胶囊中,加入牛乳粉5500g、其他辅料(乳清蛋白粉:胶原蛋白粉:γ-氨基丁酸:DHA藻油粉的质量比例为1:0.01:0.5:0.001)2200g,充分混合均匀后,置于真空度为-0.1MPa、温度为70℃的条件下真空干燥后,即得高免疫活力的益生菌制剂。
相关的检测指标和结果,见表1。
实施例4
1、内核微胶囊的制备:精确称取酶活力单位10000U/g的胆盐水解酶10g、邻苯二甲酸醋酸纤维素18g、低聚果糖0.6g、果胶2g、碳酸钙0.7g,加入温度为40℃的温水180g后,再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀,然后在负压真空度为-0.05MPa,进风温度为100℃,出风温度为65℃条件下负压喷雾干燥,即得内核微胶囊。
2、二层包被微胶囊的制备:精确称取内核微胶囊31g、益生菌(婴儿双歧杆菌:保加利亚乳杆菌:嗜热链球菌:格氏乳杆菌质量比为1:2:1:2,有效活菌总数9.2*1011CFU/g)270g、破乳剂(卵磷脂磷脂酰乙醇胺与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)1.9g、载体保护剂(低聚木糖)16g、菊粉900g、葡甘聚糖(50万Da)7g、海藻酸钠119g、羧甲基纤维素钠216g、黄原胶36g、碳酸钙230g,再加入温度为40℃的8405g温水后搅拌均匀,接着加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液7倍大豆油(吐温-20含量为0.4%),搅拌均匀使其充分乳化,然后加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液0.005倍的冰醋酸并继续搅拌均匀,最后用水(吐温含量1.5%)洗涤三次后,即得湿态的二层包被微胶囊。
3、益生菌制剂成品的制备:向上述制得湿态二层包被微胶囊中,加入牛乳粉3500g、其他辅料(乳清蛋白粉:胶原蛋白粉:γ-氨基丁酸:DHA藻油粉的质量比例为1:0.01:0.5:0.001)702g,充分混合均匀后,置于真空度为-0.1MPa、温度为70℃的条件下真空干燥后,即得高免疫活力的益生菌制剂。
相关的检测指标和结果,见表1。
实施例5
1、内核微胶囊的制备:精确称取酶活力单位10000U/g的胆盐水解酶10g、邻苯二甲酸醋酸纤维素15g、低聚果糖1.5g、果胶4g、碳酸钙0.9g,加入温度为40℃的温水200g后,再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀,然后在负压真空度为-0.05MPa,进风温度为100℃,出风温度为65℃条件下负压喷雾干燥,即得内核微胶囊。
2、二层包被微胶囊的制备:精确称取内核微胶囊32g、益生菌(婴儿双歧杆菌:罗伊氏乳杆菌:格氏乳杆菌质量比为1:1:2,有效活菌总数8.8*1011CFU/g)370g、破乳剂(神经鞘磷脂与山梨醇酐单月桂酸酯质量比为10:1)2.5g、载体保护剂(低聚木糖)20g、菊粉1000g、葡甘聚糖(40万Da)16g、海藻酸钠180g、羧甲基纤维素钠300g、黄原胶80g、碳酸钙200g,再加入温度为40℃的11043g温水后搅拌均匀,接着加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液5倍大豆油(吐温-20含量为0.5%),搅拌均匀使其充分乳化,然后加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液0.025倍的冰醋酸并继续搅拌均匀,最后用水(吐温含量0.7%)洗涤三次后,即得湿态的二层包被微胶囊。
3、益生菌制剂成品的制备:向上述制得湿态二层包被微胶囊中,加入羊乳粉4560g、其他辅料(乳清蛋白粉:胶原蛋白粉:γ-氨基丁酸:DHA藻油粉的质量比例为1:0.01:1:0.5)1100g,充分混合均匀后,置于真空度为-0.1MPa、温度为70℃的条件下真空干燥后,即得高免疫活力的益生菌制剂。
相关的检测指标和结果,见表1。
实施例6
1、内核微胶囊的制备:精确称取酶活力单位10000U/g的胆盐水解酶10g、邻苯二甲酸醋酸纤维素20g、低聚果糖1.5g、果胶2g、碳酸钙0.7g,加入温度为40℃的温水205g后,再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀,然后在负压真空度为-0.05MPa,进风温度为100℃,出风温度为65℃条件下负压喷雾干燥,即得内核微胶囊。
2、二层包被微胶囊的制备:精确称取内核微胶囊34.2g、益生菌(青春双歧杆菌:干酪乳杆菌:唾液乳杆菌:动物双歧杆菌:嗜酸乳杆菌质量比为1:1:1:2:1,有效活菌总数9.9*1011CFU/g)342g、破乳剂(神经鞘磷脂与柠檬酸脂肪酸甘油酯质量比为10:1.5)2.4g、载体保护剂(低聚木糖)27.3g、菊粉1000g、葡甘聚糖(40万Da)10g、海藻酸钠140g、羧甲基纤维素钠400g、黄原胶46g、碳酸钙300g,再加入温度为40℃的11510g温水后搅拌均匀,接着加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液5倍的大豆油(吐温-20含量为0.7%),搅拌均匀使其充分乳化,然后加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液0.015倍的冰醋酸并继续搅拌均匀,最后用水(吐温含量1%)洗涤三次后,即得湿态的二层包被微胶囊。
3、益生菌制剂成品的制备:向上述制得湿态二层包被微胶囊中,加入牛乳粉3177g、其他辅料(乳清蛋白粉:胶原蛋白粉:DHA藻油粉的质量比例为1:1:0.01)953g,充分混合均匀后,置于真空度为-0.1MPa、温度为60℃的条件下真空干燥后,即得高免疫活力的益生菌制剂。
相关的检测指标和结果,见表1。
实施例7
1、内核微胶囊的制备:精确称取酶活力单位60000U/g的胆盐水解酶10g、邻苯二甲酸醋酸纤维素15g、低聚果糖1.5g、果胶6g、碳酸钙0.8g,加入温度为40℃的温水200g后,再在-0.06MPa的真空度条件下充分混合均匀,然后在负压真空度为-0.06MPa,进风温度为90℃,出风温度为75℃条件下负压喷雾干燥,即得内核微胶囊。
2、二层包被微胶囊的制备:精确称取内核微胶囊33.3g、益生菌(干酪乳杆菌:瑞士乳杆菌菌质量比为1:1,有效活菌总数8.5*1011CFU/g)270g、破乳剂(磷脂酰乙醇胺与柠檬酸脂肪酸甘油酯质量比为10:1)1.7g、载体保护剂(抗性糊精)33.3g、菊粉700g、葡甘聚糖(100万Da)1.7g、海藻酸钠84g、羧甲基纤维素钠140g、黄原胶63g、碳酸钙168g,再加入温度为40℃的4485g温水后搅拌均匀,接着加入芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液4倍大豆油(吐温-20含量为1%),搅拌均匀使其充分乳化,然后加入芯材Ⅱ
和壁材Ⅱ混合水溶液0.01倍的冰醋酸并继续搅拌均匀,最后用水(吐温含量1%)洗涤三次后,即得湿态的二层包被微胶囊。
3、益生菌制剂成品的制备:向上述制得湿态二层包被微胶囊中,加入羊乳粉1850g、其他辅料(海洋鱼低聚肽、酵母β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、γ-氨基丁酸的质量比例为1:0.5:0.01:0.01)850g,充分混合均匀后,置于真空度为-0.09MPa、温度为70℃的条件下真空干燥后,即得高免疫活力的益生菌制剂。
相关的检测指标和结果,见表1。
对比例1(D1)
将步骤1中的“胆盐水解酶”替换为同等活力单位的“脂肪酶”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图5和6。
对比例2(D2)
将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(阴离子表面活性剂—硬脂酰乳酸钠)”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图4。
对比例3(D3)
将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(两性离子表面活性剂—磷脂酰乙醇胺)”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图4。
对比例4(D4)
将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(非离子表面活性剂—丙二醇脂肪酸酯)”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图4。
对比例5(D5)
将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(去离子水)”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图4。
对比例6(D6)
将步骤1中的“邻苯二甲酸醋酸纤维素”替换为“海藻酸钠”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图3和图6。
对比例7(D7)
将步骤2中的“葡甘聚糖(20万Da)”替换为“葡聚糖(20万Da)”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图1、2和3。
对比例8(D8)
将步骤1中的“再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀”替换为“再在常压条件下充分混合均匀”,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图5和6。
对比例9(D9)
依照实施例1的配方,将步骤1的所有原辅料,直接混合后加入3倍量去离子水后进行造粒干燥,然后再加入步骤2的原辅料,加入5倍量的去离子水后进行造粒,最后按照步骤3的工艺和参数进行制备和干燥。
相关的检测指标和结果,见表1及图1和2。
对比例10(D10)
将步骤1中壁材Ⅰ和壁材Ⅱ用等质量的麦芽糊精替代,其他工艺及其参数全部按实施例1进行。
相关的检测指标和结果,见表1及图2。
表1不同实施例及对比例产品益生菌有效活菌数及包埋率的结果
组别 | <![CDATA[有效活菌数(×10<sup>-10</sup>)CFU/g]]> | 包埋率% |
实施例1 | 3.24 | 94.5 |
实施例2 | 3.01 | 92.5 |
实施例3 | 3.05 | 92.2 |
实施例4 | 3.02 | 93.5 |
实施例5 | 2.98 | 92.8 |
实施例6 | 2.94 | 94.2 |
实施例7 | 3.12 | 93.3 |
D1 | 3.13 | 93.2 |
D2 | 2.98 | 89.8 |
D3 | 2.93 | 91.7 |
D4 | 2.88 | 91.3 |
D5 | 2.43 | 88.4 |
D6 | 3.03 | 92.4 |
D7 | 1.24 | 82.2 |
D8 | 3.08 | 91.3 |
D9 | 1.64 | 23.5 |
D10 | 1.02 | 0 |
由表1知,相比实施例1,所有对比例的有效活菌数及其包埋率都较低。从有效活菌数的数据来看,尤其是对比例10(D10),其未采用包埋的方式的而直接混合干燥,在干燥过程中益生菌可能由于其直接暴露空气中,从而导致有效活菌数极低;对比例7(D7),其葡聚糖作为壁材成分之一,其性能要弱于葡甘聚糖,导致了干燥比较困难,干燥时间更长,从而导致有效活菌数偏低;对比例9(D),采用常规的包埋方式,包埋不完全,干燥过程中部分益生菌直接暴露于空气中,从而导致有效活菌数偏低。从包埋率的数据来看,对比例10(D10)由于其未采用包埋方式,故而其测的包埋率为0;而对比例9(D9)其采用常规的包埋方式,包埋不够彻底,故而包埋率也极低;对比例7(D7),其葡聚糖作为壁材成分之一,包埋效果差于葡甘聚糖,故而其包埋率也偏低。
由图1可以看出:相比对实施例1,对比例7(D7),将步骤2“葡甘聚糖(20万Da)”替换为“葡聚糖(20万Da)”后,制得益生菌制剂产品在模拟胃液中的解囊速度明显加快,解囊时间明显缩短;对比例9(D9)de常规包埋方式其解囊速度更为快速,解囊时间更短;对比例10(D10)的无包埋方式其不存在解囊,其他对比例对解囊影响不大。
由图2可以看出:相比对实施例1,对比例7(D7)、对比例9(D9)、对比例10(D10),制得益生菌制剂产品在模拟胃液中益生菌的存活率都较实施例1低,且随着时间的延长,存活率越低;其他对比例对存活率影响不大。
结合图1和图2的数据分析,可以看出:将步骤2“葡甘聚糖(20万Da)”替换为“葡聚糖(20万Da)”以及采用常规包埋(D9)后,产品在胃液解囊速度明显加快,时间明显缩短,这就会直接导致包被的微胶囊极易受到胃酸的破坏,从而导致微胶囊二层包埋过早的崩解,导致益生菌接触到胃酸,进而导致益生菌在体内的活性降低;同时无包埋(D10)无解囊数据而言,其胃液益生菌存活率也最低。
由图3可以看出:相比对实施例1,对比例6(D6),将步骤1中的“邻苯二甲酸醋酸纤维素”替换为“海藻酸钠”后,在前期其解囊率与其他实施例1略慢,但是随着时间的延长,其解囊率还有提高,甚至超过了100%,这就说明在后期,内核微胶囊开始不同程度的降解解囊,而导致二层包被解囊时其解囊率超过100%的结论,这对内核后期的解囊极为不利。对比例7(D7),将步骤2“葡甘聚糖(20万Da)”替换为“葡聚糖(20万Da)”后,制得益生菌制剂产品在模拟小肠液中的解囊速度明显减慢,解囊时间明显延长,解囊时间过长会导致二层包被难以在小肠内完全崩解,包被内的益生菌难以快速完全释放出来。其他组对解囊不利影响不大,对比例10(D10)无包埋组已经无法开展试验。
由图4可以看出:相比对实施例1,对比例2(D2),将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(阴离子表面活性剂—硬脂酰乳酸钠)”、对比例3(D3)将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(两性离子表面活性剂—磷脂酰乙醇胺)”、对比例4(D4)将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(非离子表面活性剂—丙二醇脂肪酸酯)”后,对比例5(D5)将步骤2中的“破乳剂(卵磷脂与丙二醇脂肪酸酯质量比为10:1)”替换为“破乳剂(去离子水)”后益生菌的存活率,前期略低,但是后期明显降低,其他组对存活的不利影响不大,对比例10(D10)无包埋组已经无法开展试验。
由图5可以看出:相比对实施例1,对比例1(D1),将步骤1中的“胆盐水解酶”替换为同等活力单位的“脂肪酶”后,大肠液中的益生菌存活率明显低于实施例1,说明脂肪酶酶在大肠液中得以释放,不能降解了残余胆盐,不能有效缓解胆盐对益生菌的活力影响。对比例8(D8),将步骤1中的“再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀”替换为“再在常压条件下充分混合均匀”,益生菌的存活率一直略低于实施例1,说明非真空制得内核微胶囊,其胶囊外壁存在大量孔隙,在前期小肠内的有部分胆盐水解酶穿过孔隙进入到小肠内,导致在内核后期进入大肠液后,胆盐水解酶含量偏低,进而对胆盐的降解水平降低,不利于缓解大肠残留胆盐对益生菌活力的不利影响。其他组对益生菌存活的不利影响不大,对比例10(D10)无包埋组已经无法开展试验。
由图6可以看出:相比对实施例1,对比例1(D1),将步骤1中的“胆盐水解酶”替换为同等活力单位的“脂肪酶”后,大肠液中的胆盐降解率极低。对比例6(D6),将步骤1中的“邻苯二甲酸醋酸纤维素”替换为“海藻酸钠”后,大肠液中内核崩解速度过慢,胆盐水解酶释放速度过慢,不利于快递降解大肠中残留的胆盐,进而不利于益生菌的活力。对比例8(D8),将步骤1中的“再在-0.09MPa的真空度条件下充分混合均匀”替换为“再在常压条件下充分混合均匀”,其中后期胆盐水解率要低于实验组1,说明大肠液内胆盐水解酶含量偏低,常压制得内核微胶囊产生的孔洞,使得胆盐水解酶在前面小肠内就有部分被释放。其他组对胆盐水解的不利影响不大,对比例10(D10)无包埋组已经无法开展试验。
因此,基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1、以胆盐水解酶为芯材Ⅰ,以邻苯二甲酸醋酸纤维素、低聚果糖、果胶及碳酸钙为壁材Ⅰ,将芯材Ⅰ和壁材Ⅰ溶于水,在真空条件下充分搅拌,后进行负压喷雾干燥得内核微胶囊;
步骤2、以内核微胶囊、益生菌、破乳剂及载体保护剂为芯材Ⅱ,菊粉、葡甘聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、黄原胶及碳酸钙为壁材Ⅱ,将芯材Ⅱ和壁材Ⅱ在水溶中充分混合后,加入含吐温的大豆油搅拌乳化,然后再加入冰醋酸并继续搅拌,最后用含吐温的水洗涤三次,得湿态的二层包被微胶囊;
步骤3、将湿态的二层包被微胶囊与辅料混合后进行干燥,即得高免疫活力的益生菌制剂。
2.根据权利要求1所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,步骤1中,芯材Ⅰ与壁材Ⅰ的质量比为1:2~4,水的量为芯材Ⅰ与壁材Ⅰ总重量的3.5~9倍,壁材Ⅰ中邻苯二甲酸醋酸纤维素、低聚果糖、果胶及碳酸钙的质量比为10:0.3~1:1~4:0.1~0.6。
3.根据权利要求2所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,步骤1中,胆盐水解酶的酶活力为1000~100000U/g;水的温度为30~50℃;真空条件下的真空度为-0.09~-0.05MPa;负压喷雾干燥的负压真空度为-0.07~-0.04MPa,进风温度为90~110℃,出风温度为40~85℃;步骤3中,干燥为真空干燥、沸腾干燥、真空冷冻干燥中的任意一种,真空干燥温度为50~65℃,真空度为-0.1~-0.08MPa;沸腾干燥温度为80~90℃;真空冷冻干燥,预冻温度为-10℃~-20℃、升华干燥温度为-5~0℃、解析干燥温度为40~55℃。
4.根据权利要求1所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,步骤2中,芯材Ⅱ与壁材Ⅱ的质量比为1:3~5,芯材Ⅱ的内核微胶囊、益生菌、破乳剂及载体保护剂的质量比为1:8~15:0.05~0.1:0.5~1;壁材Ⅱ的菊粉、葡甘聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、黄原胶及碳酸钙的质量比为5:0.01~0.1:0.5~1:1~3:0.1~0.5:1~3;水的量为芯材Ⅱ和壁材Ⅱ总重量的3~6倍;水的温度为30~50℃。
5.根据权利要求1所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,益生菌有效活菌数≥5*1011CFU/g,益生菌为青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌、唾液乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜热链球菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌乳亚种、格氏乳杆菌、约氏乳杆菌、清酒乳杆菌、乳酸片球菌、产丙酸丙酸杆菌、戊糖片球菌、马克斯克鲁维酵母中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,破乳剂包括两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂,两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂的质量比为10:0.5~2;两性离子表面活性剂包括卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和神经鞘磷脂中的一种或多种;非离子表面活性剂包括丙二醇脂肪酸酯、山梨醇酐单月桂酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、木糖醇酐单硬脂酸酯、柠檬酸脂肪酸甘油酯中的一种或多种;载体保护剂为低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、抗性糊精、麦芽糊精、低聚木糖、L-阿拉伯糖、壳寡糖中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,大豆油的量为芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液的3~7倍;大豆油中吐温的含量为0.3~1.2%;冰醋酸的添加量为芯材Ⅱ和壁材Ⅱ混合水溶液的0.005-0.02倍;含吐温的水中吐温含量为0.5~1.5%,吐温为吐温-20、吐温-40和吐温-60中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法,其特征在于,湿态的二层包被微胶囊与辅料的质量比为1:0.3~0.6;辅料为乳粉和其他辅料;乳粉与其他辅料的质量比10:2~5;乳粉为牛乳粉、羊乳粉、骆驼乳粉中的一种或多种;其他辅料为海洋鱼低聚肽、胶原蛋白粉、酵母β-葡聚糖、N-乙酰神经氨酸、DHA藻油粉、食用盐、γ-氨基丁酸中的一种或多种。
9.如权利要求1-8任一项所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法制得的高免疫活力的益生菌制剂。
10.如权利要求1-8任一项所述的一种高免疫活力的益生菌制剂的制备方法制得的高免疫活力的益生菌制剂,食用时间为餐前1~3h、早餐后1~2h、中餐后2~3h、或晚餐后3~5h。
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