CN116067926A - 一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂及其制备方法与应用。本发明制备的潜血显现试剂由试剂A和试剂B组成：试剂A含有聚集诱导发光的显影分子，增稠剂，稳定剂，水。试剂B为过氧化氢溶液。此试剂不破坏显现的血液DNA，适用范围广。此试剂在潜血显现过程中，被血液中的铁卟啉催化过氧化氢产生的初生态氧，氧化使荧光淬灭同时产生肉眼可见吸收颜色的变化。本发明方法填补了目前市面没有既利用荧光又利用吸收颜色变化识别潜血的试剂空白。本发明制备的潜血显现试剂与市售荧光潜血试剂荧光效果对比，具有亮度高、显现时间长等特点；与市售肉眼可见颜色变化潜血试剂效果对比，具有显现颜色透亮、显现反应时间短等特点。

Description

一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于潜血显现技术领域，具体涉及一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂及其制备方法与应用。
背景技术
潜血痕迹作为一种常见的生物物证，对案件的侦破起到了至关重要的作用。鉴别潜血痕迹试剂，常用于公安系统刑侦过程中，快速发现还原现场提供证据，潜血试剂在使用过程中操作简单，不破坏潜血痕迹中的DNA。常见潜血痕迹的显现方法有物理显现法、化学显现法、光学显现法等。
按照技术作用原理，潜血显现试剂主要包括鲁米诺、四甲基联苯胺、氨基黑10B、酸性黄、考马斯亮蓝等。中国专利CN113125424A公开了一种用于便携式潜血痕迹显现的复配试剂及其制备方法和使用方法，所述复配试剂包括溶液A和溶液B，按质量百分比计，溶液A包括：三芳甲烷型染料0.8-2.0％、乳酸0.1-0.9％、氯化钙或氯化钠0.8-10％、柠檬酸0.02-0.5％、亚硫酸钠0.02-1.5％，余量为水；溶液B包括：氯化钙或氯化钠0.5-10％，双氧水3-30％，余量为水。该试剂解决了其中①鲁米诺发光弱，需在暗室进行观察，限制其在自然环境下的便携应用的问题(血催化鲁米诺化学发光性能的研究[J].蔡俊,伍斌,邓鸾姣,冯志明.化学与生物工程.2014(12))；②使用四甲基联苯胺显色时，需固定剂，毒性大(潜血手印显现新技术实验研究[J].刘娜,冯涛,王跃.科技创新与应用.2016(19))；③酸性黄试剂显色后，需染色和漂洗，操作复杂(Chemical Enhancement of Footwear Impressions inBlood Recovered from Cotton using Alginate Casts[J].Jurgens,Eline,Hainey,Ainsley,Shaw,Lynsey,Andries,Jan.Journal of Forensic Identification.2015(3))等问题。但是，这种潜血显现试剂只能单一地通过肉眼可见颜色变化或者荧光颜色变化来鉴别血液，当遇到复杂客体时，有时会出现肉眼可见颜色观察不清晰，反而荧光颜色效果好，或者出现荧光颜色观察不清晰，肉眼可见颜色变化好等情况，从而在判断上难以辨别，导致无法鉴别血液。
发明内容
为了进一步解决现有潜血痕迹显现上限的问题，本发明在潜血显现试剂分子中引入聚集诱导发光分子，当这类分子聚集时，原本消耗分子激发态能量的分子内运动被抑制，从而使得猝灭分子荧光的非辐射跃迁被极大地抑制，分子主要通过辐射跃迁释放能量而发光。同时聚集诱导发光分子一般具有扭曲的分子结构，在聚集时难以形成π-π堆积，因而也减少了激发态能量通过非辐射通道衰减。这类分子特点为具有高荧光强度，因此进一步也可从荧光角度完成潜血显现。目前完成在潜血显现过程中观察到自然光下吸收颜色变化的同时利用紫外灯照射观察到聚集诱导发光分子发生荧光猝灭。在潜血显现试剂分子中引入聚集诱导发光分子，解决现有潜血显现技术只能单一看自然光下吸收颜色或荧光变化的情况。
本发明旨在解决潜血痕迹检测技术能力提高方面问题，提供了一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂及其制备方法与应用。
本发明解决上述技术问题采取的技术方案如下。
本发明提供一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，由试剂A和试剂B组成。
试剂A含有聚集诱导发光分子、增稠剂、稳定剂、水。试剂A中，聚集诱导发光分子浓度为0.05-1.5wt％；增稠剂浓度为0.2-1wt％；稳定剂浓度为0.03-0.1wt％；试剂B为浓度1-3wt％的过氧化氢水溶液。
所述聚集诱导发光分子由4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺缩合得到，聚集诱导发光分子包含一个或多个选自下式I的主链结构：
Figure BDA0004006732220000021
式I中的R至少一个或多个选自以下基团：
Figure BDA0004006732220000022
优选的是，所述增稠剂为聚乙二醇，聚丙烯酰胺，聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种的混合，每种增稠剂的浓度为0.2-1wt％。
优选的是，所述稳定剂为亚硫酸钠，抗坏血酸钠，抗坏血酸棕榈酸酯中的一种或几种的混合，每种稳定剂的浓度为0.03-0.1wt％。
本发明还提供上述一种基于聚集诱导发光分子的潜血显色试剂的制备方法：先制备出试剂A和试剂B，然后将试剂A和试剂B按体积比混合，即得到所述潜血显现试剂。
优选的是，所述试剂A的制备方法如下：
(1)在惰性气体保护下，将4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺按照1：(2-2.5)物质的量之比溶于溶剂中进行缩合反应，反应后依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体pH调节至中性，提纯出产物；
(3)将步骤(2)所得产物加入水溶液中，混合均匀，加入增稠剂，稳定剂，得到试剂A。
优选的是，步骤(1)中，溶剂为乙醇溶液。
优选的是，步骤(1)中，惰性气体为氮气、氩气、氦气中的一种或者几种的混合。
优选的是，步骤(1)中，反应的温度为60-100℃，时间为10-20h。更优选的是，反应的温度为60-80℃，时间为12-20h。
优选的是，步骤(2)中，采用氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液和乙酸钠溶液中的一种或几种混合调节中间体的pH至中性。
优选的是，步骤(2)中，采用盐析的方法进行提纯，使用的盐为硫酸钠、氯化钠和碳酸钠等一种或几种无机盐的混合物。
本发明还提供了上述的一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂的使用方法：按体积比为(8-15)∶(1-5)将试剂A和试剂B混合，喷在潜血表面，等待1-10s，含有聚集诱导发光分子的潜血试剂会发生荧光猝灭同时产生肉眼可见吸收颜色的变化。
本发明合成的分子是基于传统经典易于合成的具有聚集诱导发光性质的四苯乙烯作为母核，通过共价键连接形成三苯基甲烷的结构，这种方式合成的聚集诱导发光分子被过氧化氢催化血液产生的初生态氧氧化形成醌式结构，导致分子共轭体系发生变化，产生荧光猝灭及肉眼可见吸收颜色的变化。
本发明在潜血显现试剂分子中引入聚集诱导发光分子，具有高荧光强度的作用，进一步可从荧光角度完成潜血显现。在潜血显现过程中，被血液中的铁卟啉催化过氧化氢产生的初生态氧，氧化使荧光淬灭同时利用紫外灯照射可以观察到聚集诱导发光分子发生荧光猝灭同时产生肉眼可见吸收颜色的变化。此试剂解决了现有潜血显现技术只能单一看自然光下吸收颜色变化的情况。该试剂不破坏显现的血液DNA，适用范围广，因此在鉴别潜血痕迹、潜血显现领域中具有很好的应用前景。
本发明制备的潜血显现试剂，鉴别血液时既能显现出肉眼颜色上的变化也能同时显现荧光颜色的变化，并且利用聚集诱导发光分子普遍具有的高亮度等性质，可以利用荧光对后续提高潜血痕迹检测能力方面有重要的现实意义和应用价值。且该方法操作简单、显色快捷、配方无毒、对遗传物质无损伤，同时潜血痕迹显现效果不受背景颜色、材质的客体影响。
与现有技术相比，本发明具有的优点和有益效果如下：
(1)本发明制备的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，在血迹处有变色响应，血迹周边有荧光响应，两者能清晰显影血迹边界，以及痕量血迹。通过变色显色颜色的调整，增强了裸眼的观测敏感性。
(2)本发明设计合成了独特的聚集诱导发光分子，在显现血液过程中，通过被过氧化氢催化血液产生的初生态氧氧化形成醌式结构，导致分子共轭体系发生变化，产生荧光猝灭及肉眼可见吸收颜色的变化，填补了市场没有既利用荧光又利用吸收颜色变化识别潜血的试剂空白。
(3)本发明制备的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，与市面所售荧光潜血试剂效果对比荧光层面，具有亮度高、显现时间长等特点。
(4)本发明制备的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，与市面所售肉眼可见颜色变化潜血试剂效果对比，具有显现颜色透亮、显现反应时间短等特点。
附图说明
为了更清晰地说明本发明的技术方案，下面将对具体实施例中所需附图作简单地介绍。
图1为本发明的聚集诱导发光分子被氧化前后结构示意图。
图2为在自然光下，T(含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)，BL(血液)，10X(稀释10倍血液)，T+BL(血液+含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)在玻璃片上的示意图。
图3为在365nm紫外灯照射条件下，T(含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)，BL(血液)，10X(稀释10倍血液)，T+BL(血液+含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)在玻璃片上的示意图。
图4为在自然光下，T(含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)，BL(血液)，100X(稀释100倍血液)，T+BL(血液+含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)在玻璃片上的示意图。
图5为在365nm紫外灯照射条件下，T(含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)，BL(血液)，100X(稀释100倍血液)，T+BL(血液+含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)在玻璃片上的示意图。
图6为在自然光下，T(含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)，BL(血液)，1000X(稀释1000倍血液)，T+BL(血液+含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)在玻璃片上的示意图。
图7为在365nm紫外灯照射条件下，T(含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)，BL(血液)，1000X(稀释1000倍血液)，T+BL(血液+含有聚集诱导发光分子的潜血试剂)在玻璃片上的示意图。
图8为市售产品与稀释10X血液显现荧光图像，市售产品(L)，BL(血液)，10X(稀释10倍血液)，L+BL(市售产品+血液)。
图9为市售产品与稀释100X血液显现荧光图像，市售产品(L)，BL(血液)，100X(稀释100倍血液)，L+BL(市售产品+血液)。
图10为市售产品与稀释1000X血液显现荧光图像，市售产品(L)，BL(血液)，1000X(稀释1000倍血液)，L+BL(市售产品+血液)。
图11为市售产品与稀释10X血液显现肉眼可见图像，市售产品(Q)，BL(血液)，10X(稀释10倍血液)，L+BL(市售产品+血液)。
图12为市售产品与稀释100X血液显现肉眼可见图像，市售产品(Q)，BL(血液)，100X(稀释100倍血液)，L+BL(市售产品+血液)。
图13为市售产品与稀释1000X血液显现肉眼可见图像，市售产品(Q)，BL(血液)，1000X(稀释1000倍血液)，L+BL(市售产品+血液)。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
为了进一步理解本发明，下面结合具体实施方式对本发明优选实施方案进行描述。
本发明实施例制备的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，由试剂A和试剂B组成。
试剂A含有聚集诱导发光分子，增稠剂，稳定剂，水。聚集诱导发光分子由4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺缩合得到。
试剂B为浓度1-3wt％的过氧化氢水溶液。
上述技术方案中，试剂A中，聚集诱导发光分子浓度为0.05-1.5wt％，优选为0.4-0.7wt％。
上述技术方案中，增稠剂为聚乙二醇8000，聚丙烯酰胺，聚乙烯吡咯烷酮K30中的一种或几种的混合，每种增稠剂的浓度为0.2-1wt％，优选为0.3-1wt％。
上述技术方案中，稳定剂为亚硫酸钠，抗坏血酸钠，抗坏血酸棕榈酸酯中的一种或几种的混合，每种稳定剂的浓度为0.03-0.1wt％”，优选为0.04-0.05wt％。
上述技术方案中，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为1-3wt％。
将制备好的试剂A和试剂B分装，得到所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
下面将结合附图和实施例对本发明进一步说明。下述聚集诱导发光分子结构式如图1，为实验室制备，制备方法为：将4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺按照1:2物质的量之比溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应12h，进行缩合反应，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体，然后用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物。其他试剂如无特殊说明，均可从商业途径得到。
Figure BDA0004006732220000061
实施例1
试剂A的制备：
(1)取4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺，按照1:2物质的量比，溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应12h，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体利用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物；
(3)使聚集诱导发光分子溶解到水中，浓度为0.5wt％；
聚乙二醇8000浓度为0.8wt％；
亚硫酸钠浓度为0.04wt％；
使聚集诱导发光分子溶液，聚乙二醇8000，亚硫酸钠混合均匀，制成试剂A。
然后制备试剂B，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为1wt％。
试剂A与试剂B按体积比为8∶1混合，制成所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
实施例2
试剂A的制备：
(1)取4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺，按照1:2.25物质的量比，溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应12h，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体利用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物；
(3)使聚集诱导发光分子溶解到水中，浓度为0.5wt％；
聚乙二醇8000浓度为1wt％；
亚硫酸钠浓度为0.03wt％；
使聚集诱导发光分子溶液，聚乙二醇8000，亚硫酸钠混合均匀，制成试剂A。
然后制备试剂B，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为2wt％。
试剂A与试剂B按体积比为8∶1混合，制成所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
实施例3
试剂A的制备：
(1)取4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺，按照1:2.5物质的量比，溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应12h，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体利用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物；
(3)使聚集诱导发光分子溶解到水中，浓度为0.5wt％；
聚乙二醇8000浓度为1wt％；
亚硫酸钠浓度为0.05wt％；
使聚集诱导发光分子溶液，聚乙二醇8000，亚硫酸钠混合均匀，制成试剂A。
然后制备试剂B，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为2wt％。
试剂A与试剂B按体积比为8∶1混合，制成所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
实施例4
试剂A的制备：
(1)取4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺，按照1:2物质的量比，溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应15h，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体利用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物；
(3)使聚集诱导发光分子溶解到水中，浓度为0.5wt％；
聚乙二醇8000浓度为3wt％；
亚硫酸钠浓度为0.05wt％；
使聚集诱导发光分子溶液，聚乙二醇8000，亚硫酸钠混合均匀，制成试剂A。
然后制备试剂B，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为3wt％。
试剂A与试剂B按体积比为8∶1混合，制成所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
实施例5
试剂A的制备：
(1)取4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺，按照1:2物质的量比，溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应20h，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体利用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物；
(3)使聚集诱导发光分子溶解到水中，浓度为0.5wt％；
聚乙二醇8000浓度为0.6wt％；
亚硫酸钠浓度为0.07wt％；
使聚集诱导发光分子溶液，聚乙二醇8000，亚硫酸钠混合均匀，制成试剂A。
然后制备试剂B，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为1.5wt％。
试剂A与试剂B按体积比为8∶1混合，制成所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
实施例6
试剂A的制备：
(1)取4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺，按照1:2物质的量比，溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应12h，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体利用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物；
(3)使聚集诱导发光分子溶解到水中，浓度为0.5wt％；
聚乙二醇8000浓度为0.4wt％；
亚硫酸钠浓度为0.08wt％；
使聚集诱导发光分子溶液，聚乙二醇8000，亚硫酸钠混合均匀，制成试剂A。
然后制备试剂B，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为2.5wt％。
试剂A与试剂B按体积比为5∶1混合，制成所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
实施例7
试剂A的制备：
(1)取4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺，按照1:2物质的量比，溶于乙醇溶液中，在氮气保护下，100℃反应12h，依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体利用氢氧化钠调节pH至中性，用无水硫酸钠盐析，纯化出产物；
(3)使聚集诱导发光分子溶解到水中，浓度为0.5wt％；
聚乙二醇8000浓度为0.6wt％；
亚硫酸钠浓度为0.09wt％；
使聚集诱导发光分子溶液，聚乙二醇8000，亚硫酸钠混合均匀，制成试剂A。
然后制备试剂B，试剂B为过氧化氢水溶液，浓度为2.5wt％。
试剂A与试剂B按体积比为3∶1混合，制成所述基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂。
对实施例1所得的潜血显现试剂进行测试
分别配制稀释血液为10倍，100倍，1000倍，即10X，100X，1000X，滴在玻璃片上。
分别在稀释为10X，100X，1000X的血液上滴加实施例1制备的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，在自然光下的显现现象分别为图2至图7所示：
如图2所示，自然光下条件下，T为聚集诱导发光分子溶液呈现无色，BL为稀释10倍血液呈现为红色，T+BL为在血液中添加聚集诱导发光分子溶液，经过3秒后快速地呈现明亮绿色。
如图3所示，365nm紫外灯照射条件下，T为聚集诱导发光分子溶液荧光呈蓝色，BL为稀释10倍血液无荧光，T+BL为在血液中添加聚集诱导发光分子，体系蓝色荧光猝灭，呈现无荧光特性。
如图4所示，自然光下条件下，T为聚集诱导发光分子溶液呈现无色，BL为稀释100倍血液呈现为淡红色，T+BL为在血液中添加聚集诱导发光分子溶液，经过3秒后快速地呈现明亮蓝色。
如图5所示，为365nm紫外灯照射条件下，T为聚集诱导发光分子溶液荧光呈蓝色，BL为稀释100倍血液无荧光，T+BL为在血液中添加聚集诱导发光分子，体系蓝色荧光猝灭，呈现无荧光特性。
如图6所示，自然光下条件下，T为聚集诱导发光分子溶液呈现无色，BL为稀释1000倍血液呈现为无色，T+BL为在血液中添加聚集诱导发光分子溶液，经过3秒后快速地呈现明亮蓝色。
如图7所示，365nm紫外灯照射条件下，T为聚集诱导发光分子溶液荧光呈蓝色，BL为稀释1000倍血液无荧光，T+BL为在血液中添加聚集诱导发光分子，体系蓝色荧光猝灭，呈现无荧光特性。
以下为市面所售蓝星类潜血显现试剂L通过化学发光手段检测血液试剂效果：
如图8所示，自然光下条件下，L为与血液作用产生发光现象，试剂本身呈现为无色，BL为稀释10倍血液呈现为红色，L+BL为在血液中添加试剂后发光呈现蓝色，经过30秒后，发光颜色慢慢褪去，几分钟后发光颜色完全消失。显现时间较短。
如图9所示，自然光下条件下，L为与血液作用产生发光现象，试剂本身呈现为无色，BL为稀释100倍血液呈现为淡红色，L+BL为在血液中添加试剂后发光呈现蓝色。
如图10所示，自然光下条件下，L为与血液作用产生发光现象，试剂本身呈现为无色，BL为稀释1000倍血液呈现为无色，L+BL为在血液中添加试剂后发光呈现淡蓝色。
以下为市面所售蓝影类潜血显现试剂Q通过肉眼可见颜色变化手段检测血液试剂效果：
如图11所示，自然光下条件下，Q为与血液作用会发生肉眼可见吸收颜色变化，试剂本身呈现无色，BL为稀释10倍血液呈现为红色，L+BL为在血液中添加试剂10秒后体系缓慢呈现黯淡的肉眼可见蓝色。
如图12所示，自然光下条件下，Q为与血液作用会发生肉眼可见吸收颜色变化，试剂本身呈现无色，BL为稀释100倍血液呈现为淡红色，L+BL为在血液中添加试剂10秒后体系缓慢呈现黯淡的肉眼可见蓝色。
如图13所示，自然光下条件下，Q为与血液作用会发生肉眼可见吸收颜色变化，试剂本身呈现无色，BL为稀释1000倍血液呈现为无色，L+BL为在血液中添加试剂10秒后体系缓慢呈现黯淡的肉眼可见淡蓝色。
利用365nm紫外灯进行照射，T+BL发生明显荧光猝灭现象及产生肉眼可见颜色变化。
对比图2和图8可知，本发明制备的潜血显现试剂具有荧光强度高即显现时间长的特点，体现在：图8的L+BL发光呈现蓝色，经过30秒后，发光颜色慢慢褪去，几分钟后发光颜色完全消失，显现时间较短。而图2中的T+BL发光呈现为绿色，且5天内荧光颜色不会褪去。
对比图2、图4、图6和图11、图12、图13可知，本发明制备的潜血显现试剂相比市售肉眼可见颜色变化的潜血试剂，具有显现颜色透亮、显现反应时间短的特点。
以上实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，其特征在于，所述潜血显现试剂由试剂A和试剂B组成；试剂A含有聚集诱导发光分子、增稠剂、稳定剂、水；试剂A中，聚集诱导发光分子浓度为0.05-1.5wt％；增稠剂浓度为0.2-1wt％；稳定剂浓度为0.03-0.1wt％；试剂B为浓度1-3wt％的过氧化氢水溶液；所述聚集诱导发光分子由4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺缩合得到，聚集诱导发光分子包含一个或多个选自下式I的主链结构：
Figure FDA0004006732210000011
式I中的R至少一个或多个选自以下基团：
Figure FDA0004006732210000012
2.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂，其特征在于，所述增稠剂为聚乙二醇，聚丙烯酰胺，聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种的混合，每种增稠剂的浓度为0.2-1wt％；所述稳定剂为亚硫酸钠，抗坏血酸钠，抗坏血酸棕榈酸酯中的一种或几种的混合，每种稳定剂的浓度为0.03-0.1wt％。
3.权利要求1或2所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂的制备方法，其特征在于，先制备出试剂A和试剂B，然后将试剂A和试剂B按体积比混合，即得到所述潜血显现试剂。
4.根据权利要求3所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂的制备方法，其特征在于，试剂A的制备方法如下：
(1)在惰性气体保护下，将4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲醛与N-乙基-N-(3’-磺酸苄基)苯胺按照1：(2-2.5)物质的量之比溶于溶剂中进行缩合反应，反应后依次用异丙醇、甲醇、二氯甲烷冲洗纯化得到中间体；
(2)将步骤(1)所得的中间体pH调节至中性，提纯出产物；
(3)将步骤(2)所得产物加入水溶液中，混合均匀，加入增稠剂，稳定剂，得到试剂A。
5.根据权利要求4所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂为乙醇；步骤(1)所述惰性气体为氮气、氩气、氦气中的一种或者几种的混合。
6.根据权利要求4所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，反应的温度为60-100℃，时间为10-20h。
7.根据权利要求4所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，采用氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液和乙酸钠溶液中的一种或几种混合调节中间体的pH至中性。
8.根据权利要求4所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，采用盐析的方法进行提纯，使用的盐为硫酸钠、氯化钠和碳酸钠等一种或几种无机盐的混合物。
9.权利要求1或2所述的基于聚集诱导发光分子的潜血显现试剂在鉴别潜血痕迹中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，按体积比为(8-15)∶(1-5)将试剂A和试剂B混合，喷在潜血表面；等待1-10s，含有聚集诱导发光分子的潜血试剂会发生荧光猝灭同时产生肉眼可见吸收颜色的变化。
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