CN116023510A - 双佐剂重组带状疱疹疫苗 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种双佐剂重组带状疱疹疫苗，其包含一种融合蛋白，所述融合蛋白包含水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)以及IgG的Fc片段。该双佐剂重组带状疱疹疫苗具有稳定、安全、有效，且配方简单、成本低等优点，能诱导机体免疫系统针对重组水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E融合蛋白产生特异性结合抗体，可以在有相应需要的受试者中诱导针对水痘带状疱疹病毒的免疫应答。

Description

双佐剂重组带状疱疹疫苗

技术领域

本发明涉及一种疫苗制剂，特别涉及能诱导机体免疫系统针对重组水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E融合蛋白产生特异性结合抗体的疫苗制剂。

背景技术

带状疱疹(HZ)是由水痘-带状疱疹病毒(VZV)复苏引起的急性感染性疾病，好发于老年人和免疫低下人群，病毒通过神经传播到表皮细胞，沿肋间神经区域形成水疱疹症状，常伴剧烈的顽固性带状疱疹后神经痛(PHN)，严重影响患者生活质量。此外，HZ还可导致病毒播散、中风、脑炎和视力损伤(包括失明)等严重并发症。HZ发病率较高，研究发现90％以上的成人均感染过VZV，其中约20％的血清学阳性个体在一生中会发生HZ。HZ的治疗包括及时应用抗病毒和镇痛类药物，但这些药物只能减少急性HZ患者的不适及疼痛症状，不能明显的缩短HZ的病程以及缓解/减少后遗症的发生。随着我国社会老龄化加剧，HZ防控形势更加严峻。

国内尚无带状疱疹疫苗上市，国外已有默克公司的ZOSTAVAX和GSK公司的SHINGRIX两种带状疱疹疫苗获准上市使用。

接种过VZV减毒株(OKA株)的人或自然感染VZV后可以获得保护性免疫。OKA株减毒活疫苗已被美国FDA、中国药品监督管理局、欧盟等机构批准用于儿童接种，以预防野生型水痘病毒感染儿童，高剂量的OKA株病毒减毒活疫苗已被美国FDA、欧盟批准用于预防50岁以上老年人，以预防或降低他们罹患带状疱疹病毒引起的肋间神经痛等带状疱疹病毒引起的疾病。目前，欧盟、美国等60多个国家和地区已推荐≥50岁免疫功能正常人群接种Zostavax预防带状疱疹和PHN。接种方法是在上臂三角肌区皮下注射单剂疫苗(0.65mL，含19，400PFU病毒)。偶尔出现头痛、注射局部反应等不良反应。经大规模多中心临床试验验证，50～59岁免疫功能正常人群接种后带状疱疹发病率降低69.8％，而≥60岁人群接种后带状疱疹发病率、PHN发病率和疾病负担分别下降51.3％、66.5％和61.1％。Zostavax的预防效率随接种者年龄增长而逐渐降低，严重免疫抑制和孕妇又是接种的禁忌症。因此，制备更加安全有效疫苗的需要尤为迫切。

GSK公司开发的VZV gE重组蛋白和AS01B佐剂制备的带状疱疹亚单位疫苗，接种≥50岁免疫功能正常人群使带状疱疹和PHN的发病率分别降低97.2％和91.2％，接种≥70岁人群则分别降低89.8％和88.8％，效果优于减毒活疫苗Zostavax。尽管其效果明显优于VZV减毒活疫苗Zostavax，但该疫苗配方复杂，抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，佐剂ASO1B，特别是其中的QS21不能化学合成，原材料稀缺，价格贵，导致供应不足。

因此有必要开发安全、有效，且配方简单、成本低的VZV疫苗。

发明内容

为了解决上述问题，本发明使用人IgG4 Fc突变体与VZV病毒gE蛋白肽链的膜外区融合从而形成稳定、安全、有效，且配方简单、成本低的二聚体VZV疫苗。

在一方面，本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白依次包含第一种新冠突变株的S蛋白的受体结合结构域(RBD)或其功能片段、免疫球蛋白Fc区和第二种新冠突变株的S蛋白的受体结合结构域或其功能片段，所述第一种新冠突变株和第二种新冠突变株是不同的突变株。

在另一方面，本发明提供了一种编码前述的融合蛋白的核酸。

在另一方面，本发明提供了一种包含前述核酸的表达载体。

在另一方面，本发明提供了一种宿主细胞，表达前述融合蛋白，或包含前述核酸和/或前述表达载体。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含前述融合蛋白、核酸、表达载体和/或所述宿主细胞，以及一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂。

在另一方面，本发明提供了一种疫苗，其包含前述融合蛋白、核酸、表达载体和/或所述宿主细胞，以及一种或多种佐剂。

在另一方面，本发明提供了前述融合蛋白、核酸、表达载体和/或所述宿主细胞和/或前述药物组合物在制备治疗或预防与水痘带状疱疹病毒相关的疾病或病状的疫苗中的用途。

在另一方面，本发明提供了一种在有相应需要的受试者中诱导针对水痘带状疱疹病毒的免疫应答的方法，所述方法包括：向受试者施用前述疫苗。

本发明具有如下的有益效果：

1.本发明的使用人IgG4Fc突变体从而减少单分子形成，同时减少了ADCC效应、克服生产过程中出现末端不均一的问题，保证了本发明疫苗更安全和稳定；

2.VZV-gE与人IgG4Fc连接形成二聚体有利于促进表达和纯化，同时抗原提呈给DC细胞提高免疫反应水平，此外gE形成二聚体增加了分子量有利于增加gE的免疫原性；

3.本发明使用VZV gE的膜外区与人IgG4 Fc片段融合；在哺乳类动物细胞(CHO)获得了高效表达的分泌型的gE-Fc融合蛋白，表达量达到3g/L；

4.本发明的CHO细胞表达的重组gE-Fc融合蛋白质为糖基化蛋白，保持了天然gE蛋白质的空间结构，免疫原性好，细胞免疫检测IL-2和IFN-γ均有作用。令人惊讶的是，该融合蛋白与双佐剂组合使用免疫原性显著增加；

5.采用本发明的双佐剂重组带状疱疹疫苗，与目前市售效果最好的GSK研制的Shingrix免疫效果比较，本发明的疫苗一免后起效更快，二免检测也有更好的效果；

6.本发明的疫苗使用常规的铝佐剂和CpG佐剂联合，价格低廉容易获得，克服了GSK研制的Shingrix疫苗配方复杂，抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，以及佐剂原材料稀缺，价格昂贵等缺陷。同时也因为Shingrix抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，导致制备抗原、制剂工艺以及后续的使用上均较为麻烦。本发明的抗原和佐剂可以直接混合，预灌充注射器分装制剂，非常便利。

附图说明

图1为VZV-gE-Fc纯化结果。

图2为不同铝盐佐剂配制的重组VZV-gE-Fc疫苗免疫小鼠的免疫效果对比。

图3为不同剂量氢氧化铝佐剂的免疫效果对比。

图4为不同剂量CpG佐剂的免疫效果对比。

图5为不同剂量抗原的免疫效果对比。

图6为ELISPOT细胞免疫效果评价。其中，图6a为IL-2的检测结果，图6b为IFN-γ的检测结果。

图7为本发明的双佐剂VZV-gE-FC重组带状疱疹疫苗(VZV-GNW)和葛兰素史克欣安立适Shingrix(VZV-GSK)免疫效果对比。其中，图7a为一免后的效果，图7b为一免和二免后的效果。

具体实施方式

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

如本文使用的和除非另作说明，术语“约”或“大约”是指在给定值或范围的加或减10％之内。在需要整数的情况下，该术语是指在给定值或范围的加或减10％之内、向上或向下舍入到最接近的整数。

如本文使用的和除非另作说明，术语“包含”，“包括”，“具有”，“含有”，包括其语法上的等同形式，通常应当理解为开放式且非限制性的，例如，不排除其他未列举的要素或步骤。

如本文所使用的，术语“融合蛋白”是指由一种或多种分子组成的天然或合成分子，其中具有不同特异性的两种或多种基于肽或蛋白质(包括糖蛋白)的分子任选的通过化学的或基于氨基酸的接头分子融合在一起。该连接可通过C-N融合或N-C融合(以5′→3′方向)，优选C-N融合而实现。

如本文所使用的，术语“抗体”或“免疫球蛋白”有最广义的含义，特别包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2个完整抗体构成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及抗体片段，只要其显示出具有所需的生物学活性即可。此术语一般包括由2个或多个具有不同结合特异性的抗体或抗体片段连接在一起构成的杂合抗体。

如本文所使用的，术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可以变化，但人IgG重链Fc区通常定义为自位置Cys226，或自Pro230处的氨基酸残基延伸至重链的羧基端。可以除去Fc区的C端赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)，例如在抗体的产生或纯化期间，或通过重组工程化改造编码抗体重链的核酸。因此，完整抗体的组合物可以包含已除去所有K447残基的抗体群体，未除去任何K447残基的抗体群体，和具有有和无K447残基的抗体混合物的抗体群体。

如本文所使用的，序列“相同性”或“同一性”具有本领域公认的含义，并且可以利用发明的技术计算两个核酸或多肽分子或区域之间序列相同性的百分比。可以沿着多核苷酸或多肽的全长或者沿着该分子的区域测量序列相同性。虽然存在许多测量两个多核苷酸或多肽之间的相同性的方法，但是术语“相同性”是技术人员公知的(Carrillo,H.&Lipman,D.,SIAM J Applied Math 48:1073(1988))。

如本文所使用的，术语“疾病”或“病状”是指能够用本文提供的融合蛋白、药物组合物或方法治疗的患者或个体的生存状态或健康状态。

术语“疫苗”是纯化的抗原疫苗或免疫原性组合物，亚基疫苗或免疫原性组合物，灭活的整体病毒疫苗或免疫原性组合物，或减毒病毒疫苗或免疫原性组合物。在一些实施方案中，疫苗或免疫原性组合物是纯化的融合蛋白。

如本文所使用的，术语“治疗(treating或treatment)”是指成功治疗或改善损伤、疾病、病理或病状(condition)的任何指标，包含任何客观或主观参数，如，消除；缓解；减轻症状或使得损伤、病理或病状对患者而言更易忍受；减缓退化或衰退的速度；或使退化的最终点较少衰退；改善患者的身体或精神健康。症状的治疗或改善可以基于客观或主观参数；包含身体检查、神经精神病学检查和/或精神病学评估的结果。术语“治疗”及其缀合可以包含预防损伤、病理、病状或疾病。在实施例中，治疗是预防。在实施例中，治疗不包含预防。

如本文所使用的(并且在本领域中被充分理解的)，“治疗(treating或treatment)”还广泛地包含用于在受试者的病状中获得有益的或期望的结果(包含临床结果)的任何方法。有益的或期望的临床结果可以包含但不限于：减轻或改善一种或多种症状或病状、减轻疾病程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、预防疾病传播或扩散、延迟或减缓疾病进展、改善或缓解疾病状态、减少疾病复发以及缓解(无论是部分的还是全部的，以及无论是可检测的还是不可检测的)。换句话说，如本文所使用的，“治疗”包含对疾病的任何治愈、改善或预防。治疗可以预防疾病发生；抑制疾病扩散；缓解疾病的症状、完全或部分去除疾病的根本原因、缩短疾病的持续时间或这些事物的组合。

如本文所使用的，“治疗(Treating和treatment)”包含预防性治疗。治疗方法包含向受试者施用治疗有效量的活性剂。施用步骤可以由单次施用组成，或者可以包含一系列施用。治疗期的长度取决于多种因素，如病状的严重程度、患者的年龄、活性剂的浓度、在治疗中所使用的组合物的活性或其组合。还应当理解，用于治疗或预防的药剂的有效剂量可以在特定治疗或预防方案的过程中增加或减少。通过本领域中已知的标准诊断测定，剂量的变化可以产生并且变得显而易见。在一些情况下，可能需要慢性施用。例如，以足以治疗患者的量向受试者施用组合物，且持续足够的持续时间。

如本文所使用的，术语“预防”是指减少患者的疾病症状的发生。如上所述，预防可以是完全的(没有可检测的症状)或部分的，使得观察到比不存在治疗时可能发生的症状更少的症状。

如本文所使用的，“患者”或“有需要的受试者”是指遭受或易于遭受可以通过施用如本文所提供的药物组合物进行治疗的疾病或病状的活生物体。非限制性实例包含人、其它哺乳动物、牛科动物、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、牛、鹿和其它非哺乳动物。在一些实施例中，患者是人。

术语“联合给药”是指将本发明的融合蛋白或疫苗与已知药物(或其它化合物，或其它疫苗)进行“联合用药”，从而二者都具有治疗或诊断效果。这种联合用药可以包括相对于施用本发明的融合蛋白或疫苗而言对该药物(或其它化合物，或其它疫苗)进行并行(即同时)、在前或相继给药。本领域一般技术人员将能够很容易判断特定药物(或其它化合物，或其它疫苗)以及本发明的联合物的合适的给药时间、顺序和剂量。

如本文所使用的，术语“有效量”是足以实现所陈述目的的量(例如实现它被施用来达成的作用，治疗疾病，降低酶活性，增加酶活性，降低蛋白质功能，减轻疾病或病状的一种或多种症状)。“有效量”的实例是足以促成治疗、预防或减少疾病的一种或多种症状的量，所述量也可以被称为“治疗有效量”。一种或多种症状的“减少”意指降低一种或多种症状的严重程度或频率，或消除一种或多种症状。药物的“预防有效量”是当施用于受试者时，将具有预期的预防效果的药物的量，例如预防或延迟损伤、疾病、病理或病状的发作(或复发)或降低损伤、疾病、病理或病状或其症状发作(或复发)的可能性。完全预防效果不一定通过施用一次剂量发生，并且可以在仅施用一系列剂量之后发生。因此，预防有效量可以以一次或多次施用的形式施用。

如本文所使用的，术语“治疗有效量”是指如上文所描述的足以改善病症的治疗剂的量。例如，对于给定参数，治疗有效量将显示增加或降低至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％。治疗功效也可以表示为“倍数”增加或减少。例如，治疗有效量可以相对于对照具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的效果。

剂量可以根据患者的需要和所采用的融合蛋白或疫苗而变化。在本发明的上下文中，向患者施用的剂量应足以随时间推移而在患者体内产生有益治疗反应。剂量的大小也将通过任何不良副作用的存在、性质和程度确定。针对特定情况来确定适当的剂量是在执业者的技能之内的。通常，治疗开始于比融合蛋白或疫苗的最优剂量小的较小剂量。其后，剂量以小增量增加直到达到在这些情况下的最优效果。可以单独调整给药的量和间隔，以提供所施用融合蛋白或疫苗的对所治疗的特定临床适应症有效的水平。这将提供与个体疾病状态的严重程度相称的治疗方案。

如本文所使用的，术语“施用”意指向受试者口服施用、以栓剂形式施用、局部接触、静脉内、肠胃外、腹膜内、肌肉内、病灶内、鞘内、鼻内或皮下施用，或植入缓慢释放装置(例如，微型渗透泵)。通过任何途径进行施用，包含肠胃外和经粘膜(例如，颊、舌下、腭、牙龈、鼻、阴道、直肠或经皮)。肠胃外施用包含例如静脉内、肌肉内、动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内施用。其它递送模式包含但不限于使用脂质体调配物、静脉内输注、经皮贴剂等。在实施例中，施用不包含施用除了所叙述的活性剂之外的任何活性剂。

在一方面，本发明提供了一种融合蛋白，该融合蛋白包含水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)以及IgG的Fc片段。

在一些实施方案中，前述融合蛋白中水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)包含与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列。

在一些优选的实施方案中，前述水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在一些优选的实施方案中，前述IgG的Fc片段是人IgG的Fc片段。

在一些优选的实施方案中，前述人IgG的Fc片段包含与SEQ ID NO.2示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列。

在一些优选的实施方案中，前述人IgG的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在一些实施方案中，前述融合蛋白中，水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZVgE)和IgG的Fc片段之间包含接头。

在一些优选的实施方案中，前述接头为柔性接头。

在一些优选的实施方案中，前述柔性接头选自GGGGS(SEQ ID NO.5)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO.6)、GSGGGSGGGGSGGGGSA(SEQ ID NO.7)。

在一些优选的实施方案中，前述柔性多肽为GSGGGSGGGGSGGGGSA(SEQ ID NO.7)。

在一些优选的实施方案中，前述融合蛋白包含与SEQ ID NO.3示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列。

在一些优选的实施方案中，前述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

在另一方面，本发明提供了编码前述融合蛋白的核酸。

在一些优选的实施方案中，融合蛋白的编码核酸包含与SEQ ID NO.4所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列。

在一些优选的实施方案中，前述融合蛋白的编码核酸为SEQ ID NO.4所示的核酸。

在一些优选的实施方案中，前述核酸是mRNA。

在另一方面，本发明提供了一种包含前述核酸的表达载体。

在一些优选的实施方案中，前述表达载体选自原核表达载体或真核表达载体。

在一些优选的实施方案中，前述表达载体为真核表达载体。

在一些优选的实施方案中，所述真核表达载体是腺病毒载体。

在一些优选的实施方案中，前述真核表达载体为在293细胞或CHO细胞中表达的载体。

在另一方面，本发明提供了一种宿主细胞，其表达前述融合蛋白，或包含前述核酸和/或包含前述表达载体。

在一些优选的实施方案中，前述宿主细胞是原核细胞或真核细胞。

在一些优选的实施方案中，前述原核细胞是细菌细胞。

在一些优选的实施方案中，前述原核细胞是大肠杆菌细胞。

在一些优选的实施方案中，前述真核细胞选自酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。

在一些优选的实施方案中，前述哺乳动物细胞选自CHO、HEK293、SP2/0、BHK、C127等。

在一些优选的实施方案中，前述真核细胞为CHO细胞。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含前述融合蛋白、权利要求4所述核酸、前述表达载体和/或前述宿主细胞，以及一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂。

在另一方面，本发明提供了一种疫苗，其包含前述融合蛋白、前述核酸、前述表达载体和/或前述宿主细胞，以及一种或多种佐剂。

在一些优选的实施方案中，前述佐剂选自氢氧化铝、CpG、磷酸铝、皂苷例如QuilA、QS-21、GPI-0100、油包水型乳状液、水包油型乳状液、水包油包水型乳状液中的一种或多种。

在一些优选的实施方案中，前述佐剂为氢氧化铝和CpG双佐剂。

在一些优选的实施方案中，前述融合蛋白、铝佐剂和CpG佐剂的比例为1-8:5-240：1-20。

在一些更优选的实施方案中，前述融合蛋白、铝佐剂和CpG佐剂的比例为1-4:20-60:1-10。

在另一方面，本发明提供了前述融合蛋白、前述核酸、前述表达载体和/或前述宿主细胞和/或前述的药物组合物在制备治疗或预防与水痘带状疱疹病毒相关的疾病或病状的疫苗中的用途。

在另一方面，本发明提供了一种在有相应需要的受试者中诱导针对水痘带状疱疹病毒的免疫应答的方法，该方法包括：向受试者施用前述疫苗。

在一些优选的实施方案中，前述受试者是哺乳动物或鸟类。

在一些优选的实施方案中，前述受试者是人类、牛、犬、猫、山羊、绵羊、猪、马、火鸡、鸭或鸡。

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例1：融合蛋白VZV-gE-Fc的制备

本实施例的重组带状疱疹亚单位疫苗抗原靶点选择VZV-gE。在抗原结构设计时，加入了人IgG4 Fc片段，将VZV-gE蛋白和人IgG Fc片段融合，并形成VZV-gE-Fc稳定的二聚体抗原结构形成VZV gE-人IgG Fc融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。两条相同的VZV gE-人IgG Fc融合蛋白通过二硫键连接成同源二聚体。

设计偏向CHO-K1细胞的高表达的VZV-gE-Fc融合蛋白抗原基因序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。VZV-gE的氨基酸序列(SEQ ID NO.1)

SVLRYDDFHIDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYN

QGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSV

EENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEIS

YRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGD

EKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYST

CLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDT

PESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLLRYAAW

TGGLA

IgG Fc的氨基酸序列(SEQ ID NO.2)

ESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKP

REEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVS

LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSLG

VZV gE-人IgG Fc融合蛋白氨基酸序列(SEQ ID NO.3)

SVLRYDDFHIDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYN

QGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSV

EENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEIS

YRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGD

EKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYST

CLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDT

PESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLLRYAAW

TGGLAGSGGGSGGGGSGGGGSAESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQE

DPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQ

PREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKS

RWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG

VZV gE-人IgG Fc融合蛋白抗原核酸序列(SEQ ID NO.4)

TCTGTTCTGAGATACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACTCCGTGTACGAGCCTTATT

ACCACTCTGACCACGCCGAATCCTCTTGGGTCAACAGAGGCGAGTCTTCTCGGAAGGCTTACGATCACAATTC

CCCCTACATCTGGCCTCGGAACGACTACGACGGCTTTCTGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGCGTGTATAAC

CAGGGACGGGGGATCGACTCTGGCGAGAGGCTGATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGATCTGGGCG

ATGATACCGGCATCCACGTGATCCCTACCCTGAACGGCGACGACAGACACAAGATCGTGAATGTGGACCAACG

CCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAATCCTAAGCCTCAGGGCCAGCGGCTGATCGAAGTGTCCGTG

GAAGAGAATCATCCTTTTACATTGAGAGCCCCCATCCAACGGATCTACGGTGTCAGATACACAGAGACATGGT

CCTTCCTGCCTTCCCTGACATGCACCGGCGACGCCGCTCCTGCTATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCAC

CTGCTTCCAGGATGTCGTCGTCGACGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCCGAGATCTCC

TACCGGTTCCAAGGCAAGAAAGAAGCCGATCAGCCTTGGATCGTGGTGAACACCTCTACCCTGTTCGATGAAC

TGGAACTGGATCCTCCTGAGATCGAGCCTGGCGTGCTCAAAGTGCTGAGGACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGT

GTACATCTGGAACATGCGGGGATCCGACGGCACATCTACCTACGCTACCTTCCTGGTCACCTGGAAGGGCGAT

GAAAAGACAAGAAACCCAACCCCTGCTGTGACCCCCCAGCCTAGAGGCGCTGAGTTCCACATGTGGAACTACC

ACTCCCATGTGTTTTCCGTGGGCGACACCTTTTCCCTGGCCATGCACCTGCAGTACAAGATCCATGAGGCTCC

TTTCGACCTCCTGCTGGAGTGGCTGTATGTGCCTATCGATCCCACCTGCCAGCCTATGAGACTGTACTCCACG

TGTCTGTACCACCCTAACGCCCCTCAGTGTCTGAGCCACATGAACTCCGGCTGCACCTTCACCAGCCCTCATC

TCGCTCAGAGAGTGGCCTCAACTGTGTACCAGAACTGCGAGCATGCTGACAACTACACCGCCTACTGCCTGGG

CATTTCTCACATGGAACCCTCTTTCGGCCTGATCCTGCACGACGGCGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGATACA

CCTGAAAGCCTCTCTGGCCTGTACGTGTTCGTGGTTTACTTCAACGGCCACGTGGAAGCCGTGGCTTATACCG

TGGTCTCTACCGTGGACCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGAGAGGCTTTCCGCCTACCGCTGGCCAGCCACC

TGCCACCACCAAACCAAAGGAGATCACTCCTGTGAACCCTGGAACATCCCCCCTGCTGAGATACGCCGCCTGG

ACCGGCGGCCTGGCTGGCTCCGGCGGCGGAAGCGGCGGCGGAGGCTCCGGAGGCGGCGGATCCGCCGAGTCCA

AGTACGGCCCTCCTTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCCGAGGCTGCCGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTTCCTCC

TAAGCCCAAGGATACACTGATGATCTCCCGGACCCCAGAGGTGACCTGCGTGGTGGTCGATGTGAGTCAAGAA

GACCCCGAAGTGCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCTAGAGAAG

AGCAGTTCAACAGTACCTACAGAGTGGTTTCTGTGCTGACCGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGA

GTACAAGTGCAAGGTGTCTAACAAGGGCCTGCCCTCTTCCATCGAAAAGACCATCTCTAAGGCCAAAGGCCAG

CCTCGCGAACCACAAGTGTACACACTGCCTCCTTCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCTCTGACCT

GTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCTGTGGAATGGGAGAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTA

CAAGACCACTCCACCTGTACTAGACTCCGATGGCTCCTTCTTCCTGTACTCTCGGCTGACCGTGGACAAGTCT

AGATGGCAGGAAGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACCCAGAAGT

CCCTGTCTCTGAGCCTGGGA

将金斯瑞生物技术有限公司合成基因片段VZV-gE-Fc，通过HindIII、Not I酶切合成基因片段VZV-gE-Fc和PKS001空载体(购自中山康晟生物技术有限公司，货号A13201)连接，成功构建的载体命名为PKS001gEFc。将重组表达载体PKS001gEFc转化至大肠杆菌top10感受态细胞(购自Transgene，货号CD101)，转化菌用含有氨苄的LB液体筛选培养基复壮后扩大培养，37℃振荡培养过夜后用无内毒素质粒大提试剂盒(增强型)(天根生化科技(北京)有限公司，DP120-01)提取质粒，电穿孔转化CHO-K1细胞(中山康天晟合生物技术有限公司，货号A14101)。通过加压筛选、ELISA和Protein A HPLC筛选出表达量为3g/L的高表达单克隆株，连续传代培养，每天监测细胞密度及细胞活力，培养12-14天，当细胞活力降至50-60％时，停止培养，离心过滤收获培养上清。

培养上清结果的Protein A凝胶色谱柱亲和纯化，然后再用DEAE Sepharose4Fast Flow用不同浓度的NaCl溶液进行梯度洗脱，再经Sephacryl S400 HR分子筛色谱柱纯化(图1)，纯度达到97％以上，收集目标产物备用。

实施例2：疫苗组的筛选及免疫原性研究

本实施例以实施例1制备的VZV gE-人IgG Fc(VZV-gE-Fc)融合蛋白的同源二聚体为免疫原，用20mM组氨酸盐酸，140mM精氨酸盐酸盐，0.02％聚山梨酯80pH 6.0稀释，室温条件下与氢氧化铝或磷酸铝佐剂混悬液(铝含量0.2mg/ml)、CpG1018佐剂(购自广州锐博生物技术有限公司)混合均匀，分别制备成含铝佐剂疫苗溶液、含CpG佐剂疫苗溶液以及含铝佐剂和CpG佐剂的双佐剂疫苗溶液，然后放置于2～8℃。

自2～8℃上述疫苗溶液，无菌条件下分装入2ml西林瓶内(或预填充玻璃注射器内)，每瓶0.5ml(或1.0ml)，密封后放置于2～8℃避光保存。

取出上述疫苗溶液，以C57BL/6小鼠(购自斯贝福(北京)生物技术有限公司)为动物模型开展了免疫原性研究。

具体方法为：选择6-8周龄C57BL/6小鼠随机分组，每组5只小鼠，肌肉注射上述疫苗组合物，并设置了不同组：PBS对照组、疫苗组(铝佐剂和/或CpG1018佐剂)、蛋白组(实施例1制备的蛋白)和疫苗组(实施例1制备的蛋白和佐剂(铝佐剂和/或CpG1018佐剂))，具体分组参见具体试验的免疫方案，分别于0、3周免疫，第3、5周采血，第5周取脾脏。采用ELISA法检测血清中的抗VZV-gE-Fc蛋白的抗体滴度(即total IgG)，采用ELISPOT法检测脾细胞中的细胞免疫水平，主要为IL-2、IFN-γ的表达。结果显示通过本发明提供的技术方案所获得的VZV gE-人IgG Fc蛋白所制备得到的疫苗组合免疫原性非常好，可作为潜在的重组带状疱疹候选疫苗抗原，具体操作如下：

本实施例中的C57BL/6雌性小鼠均购自斯贝福(北京)生物技术有限公司。

ELISA方法：

1.试剂配制

1.1ELISA包被液(1X)配制：取ELISA包被液(10X)(购自索莱宝，货号：C1055)用无菌蒸馏水稀释至1X。

1.2.PBS配制：取出PBS powder，每袋用2L无菌蒸馏水溶解。

1.3.洗液：PBST(含0.05％Tween-20的PBS)

量取1L过滤后的PBS到蓝盖瓶中，加入500μLTween-20，充分混匀，存于2～8℃备用。根据实际情况，按此方法配制所需体积的PBST。

注：PBST现用现配，当天使用。

1.4.封闭液和样品稀释液(含5％脱脂奶粉的PBS)

称取PBS体积的5％的脱脂奶粉(奶粉质量/g＝PBS体积/mLx5％)，将从2～8℃取出的PBS平衡至室温，量取所需体积的PBS溶液至已加入奶粉的离心管中，然后充分溶解，备用。

注：封闭液和样品稀释液现用现配，当天使用。

1.5.稀释羊抗鼠二抗

将规格为1mL的二抗(购自CST，货号7076s)平衡至室温，然后进行分装，放置在-20℃±5℃保存。每次使用之前取出，按1:4000进行稀释，此处稀释液为PBS。

注：稀释后的二抗，当天使用。

1.6.终止液(购自索莱宝，货号C1058)

2.ELISA检测血清结合抗体滴度：

2.1包被：取VZV-gE-his(北京吉诺卫制品有限公司制备，浓度为2mg/ml)抗原原液用ELISA包被液(1X)稀释到1000ng/mL，包被酶标版，100μl/孔，4℃放置过夜。

2.2封闭：将包被板从2～8℃取出后，洗板3次，每次洗液体积为300μl/孔，洗完后若孔内残留洗液，则要在吸水纸上拍干；然后在已包被孔中加入预先配制的封闭液，300μl/孔，盖封板膜，37℃，60-90min。

2..3血清稀释：在离心管内用样品稀释液将待检血清稀释至合适浓度。

2.4加样：将封闭后的包被板洗板3次，每次洗液体积为300μl/孔，洗完后若孔内残留洗液，则要在吸水纸上拍干。将已稀释好的各个浓度的待检样品依次加入至样品孔中，100μl/孔；加入100μl样品稀释液作为空白对照(Blk)，设置5个复孔，盖上封板膜，37℃孵育60min。

2.5加二抗：弃去样品，洗板3次，每次洗液体积为300μl/孔，洗完后若孔内残留洗液，则要在吸水纸上拍干；加入稀释后的二抗，100μl/孔，盖封板膜，37℃孵育60min。

2.6显色：将96孔板洗板3次，每次洗液体积为300μl/孔，洗完后若孔内残留洗液，则要在吸水纸上拍干，加单组分TMB显色液1(提前从

取出，平衡至室温)，100μl/孔，25℃避光显色，15min。

2.7终止：显色后立即加入终止液终止反应，50μl/孔，轻晃混匀。

2.8检测：将酶标板放入酶标仪，在450nm波长下测吸光度值。

2.9判定：大于阴性小鼠OD值的2.1倍判为阳性。

注：以下检测结合抗体效价的ELISA方法都同上。

A：筛选最佳的铝佐剂

取6-8周龄C57BL/6雌性小鼠15只，随机分为3组，按表1设计的免疫方案免疫动物，通过检测1、2、3组二免14d ELISA效价，筛选到最佳铝佐剂。

表1不同铝盐佐剂配制的重组VZV-gE-Fc疫苗免疫小鼠的免疫方案

组别

免疫原

佐剂

免疫体量

免疫方式

免疫次数

动物数量

1

PBS

-

0.1ml

i.m

2

5

2

VZV-gE-FC 10μg

<![CDATA[0.2mg ALPO<sub>4</sub>]]>

0.1ml

i.m

2

5

3

VZV-gE-FC 10μg

<![CDATA[0.2mg AL(OH)<sub>3</sub>]]>

0.1ml

i.m

2

5

结果见图2，可以看出，两种常用的铝佐剂之间无显著性差异。

B：筛选最佳的铝佐剂剂量

取6-8周龄C57BL/6雌性小鼠25只，随机分为5组，按表2设计的免疫方案免疫动物，通过检测4、5、6、7、8、9组一免21d和二免14d结合抗体效价，筛选到铝佐剂最佳剂量。

表2筛选最佳的铝佐剂剂量的免疫方案

组别

免疫原

佐剂

免疫体量

免疫方式

免疫次数

动物数量

4

PBS

-

0.1ml

i.m

2

5

5

VZV-gE-Fc 10μg

<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>]]>

0.1ml

i.m

2

5

6

VZV-gE-Fc 10μg

<![CDATA[0.3mgAL(OH)<sub>3</sub>]]>

0.1ml

i.m

2

5

7

VZV-gE-Fc 10μg

<![CDATA[0.4mgAL(OH)<sub>3</sub>]]>

0.1ml

i.m

2

5

8

VZV-gE-Fc 10μg

<![CDATA[0.5mgAL(OH)<sub>3</sub>]]>

0.1ml

i.m

2

5

9

VZV-gE-Fc 10μg

<![CDATA[0.6mgAL(OH)<sub>3</sub>]]>

0.1ml

i.m

2

5

结果如图3所示，0.2mg-0.6mg铝佐剂的免疫效果无显著性差异。

C：筛选到最佳的CpG佐剂剂量

取6-8周龄C57BL/6雌性小鼠25只，随机分为5组，按表设3计的免疫方案免疫动物，通过检测10、11、12、13、14组一免21d和二免14d结合抗体效价，筛选到CpG佐剂最佳剂量。

表3筛选到最佳的CpG佐剂剂量的免疫方案

结果如图4所示，CpG佐剂的剂量在5μg-50μg范围内无显著性差异。

D：探索最佳的抗原剂量

取6-8周龄C57BL/6雌性小鼠25只，随机分为5组，按表4设计的免疫方案免疫动物，通过检测15、16、17、18、19、20组一免21d和二免14d结合抗体效价，筛选到最佳抗原剂量。

表4小鼠上探索最佳的抗原剂量的免疫方案

组别

免疫原

佐剂

免疫体量

免疫方式

免疫次数

动物数量

15

PBS

-

0.1ml

i.m

2

5

16

VZV-gE-Fc 2.5μg

<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>

0.1ml

i.m

2

5

17

VZV-gE-Fc 5μg

<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>

0.1ml

i.m

2

5

18

VZV-gE-Fc 10μg

<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>

0.1ml

i.m

2

5

19

VZV-gE-Fc 20μg

<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>

0.1ml

i.m

2

5

结果如图5所示，2.5-20μg的抗原剂量均无显著性差异。

小结：疫苗制剂处方检测中发现，抗原含量为2.5-20μg，5μg较佳；氢氧化铝佐剂为0.2-0.6mg，0.2mg较佳，CpG佐剂为5-50μg，10μg较佳。

E：细胞免疫测定进一步疫苗筛选

取6-8周龄C57BL/6雌性小鼠25只，随机分为5组，按表5设计的免疫方案免疫动物，通过ELISPOT检测20、21、22、23、24、25组二免14d脾淋巴细胞IL-2、IFN-γ因子表达。

表5细胞免疫方案设计

组别	免疫原	佐剂	免疫体量	免疫方式	免疫次数	动物数量
							20	PBS	-	0.1ml	i.m	2	5
21	VZV-gE-Fc 10μg	-	0.1ml	i.m	2	5
							22	VZV-gE-Fc 10μg	<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>]]>	0.1ml	i.m	2	5
23	VZV-gE-Fc 10μg	10μgCpG	0.1ml	i.m	2	5
							24	VZV-gE-Fc 10μg	<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>	0.1ml	i.m	2	5
25	-	<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>	0.1ml	i.m	2	5

ELISPOT检测方法：

根据Murine IL-2 Single-Color Enzymatic ELISPOT Assay(购自CTL货号mIL2p-2M/2)试剂盒说明书和Murine IFN-γSingle-Color Enzymatic ELISPOT Assay(购自CTL货号mIFNgp-2M/2)试剂盒说明书对二免14d小鼠的脾淋巴细胞检测。

结果见图6所示。由图6a可见，IL-2的检测结果显示，双佐剂组刺激极显著优于单佐剂组和不加佐剂的抗原组。而图6b中IFN-γ的检测显示，双佐剂组刺激细胞IFN-γ也是最多的，但与CpG单佐剂组无显著差异，与单佐剂铝佐剂组、不加佐剂的抗原组有显著差异。

实施例3：本发明的双佐剂VZV-gE-FC重组带状疱疹疫苗(VZV-GNW)和GSK研制的Shingrix(VZV-GSK)免疫效果对比将本发明的双佐剂VZV-gE-FC重组带状疱疹疫苗(VZV-GNW)和葛兰素史克欣安立适，即GSK研制的Shingrix(VZV-GSK)免疫效果对比。

针对带状疱疹，国内尚无带状疱疹疫苗上市，国外默克公司的ZOSTAVAX和GSK公司的Shingrix两种带状疱疹疫苗获准上市使用。其中，GSK研制的Shingrix是目前带状疱疹疫苗获准上市使用的疫苗中效果最好的，鉴于Shingrix优秀的预防效果，美国CDC推荐Shingrix取代默沙东带状疱疹疫苗Zostavax。然而，GSK的VZV疫苗Shingrix使用的佐剂是AS01B，其中QS21成分限量供应导致Shingrix每剂价格达到150-200美元。这个疫苗使用的时候需将抗原重组gE抗原(CHO细胞表达)单独冻干包装，然后将AS01B单独包装，注射人体前需要将佐剂与抗原混合。通过对比实验，发现本发明的疫苗一免后起效更快，二免检测比GSK研制的Shingrix血清抗体效价也有所提高。具体实验和结果如下：

本发明的双佐剂VZV-gE-FC重组带状疱疹疫苗(VZV-GNW)组成如下(表6)：

表6 50ul双佐剂VZV-gE-FC重组带状疱疹疫苗

VZV-gE-FC 7.5μg

<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>

制备方法如上述实施例。

试验免疫方案见表7：

取6-8周龄C57BL/6雌性小鼠18只，随机分为3组，每组6只。按表7设计的免疫方案免疫动物，用ELISA方法检测一免21d和二免14d的结合抗体效价；通过ELISPOT检测26、27、28组二免14d脾淋巴细胞IFN-γ因子表达。

表7双佐剂VZV-E-FC重组带状疱疹疫苗和GSK研制的Shinrix免疫方案

组别

免疫原

佐剂

免疫体量

免疫方式

免疫次数

动物数量

26

PBS

-

50ul

i.m

2

6

27

VZV-GSK

ASO1B

50ul

i.m

2

6

28

VZV-gE-FC 7.5μg

<![CDATA[0.2mgAL(OH)<sub>3</sub>+10μgCpG]]>

50ul

i.m

2

6

注：为了保证同等条件下第27组(VZV-GSK)和第28组(VZV-gE-FC)免疫原中VZV抗原一致，VZV-gE-FC剂量取7.5μg。

ELISA效价结果见表8和图7所示，其中，图7a为一免后的效果，图7b为一免和二免后的效果。

表8双佐剂VZV-gE-FC重组带状疱疹疫苗和GSK研制的Shingrix体液免疫效果对比

结论：结果显示，本发明的疫苗(VZV-GNW)一免后起效更快，二免检测比GSK研制的Shingrix(VZV-GSK)血清抗体效价也有所提高。本发明的疫苗使用常规的铝佐剂和CpG佐剂联合，价格低廉容易获得，克服了GSK研制的Shingrix疫苗配方复杂，抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，以及佐剂原材料稀缺，价格昂贵等缺陷。同时，由于GSK研制的Shingrix(VZV-GSK)抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，导致在制备抗原、制剂工艺以及后续的使用上均较为麻烦。本发明的抗原和佐剂可以直接混合，预灌充注射器分装制剂，非常便利。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)以及IgG的Fc片段。

2.权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)包含与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

优选地，所述IgG的Fc片段是人IgG的Fc片段；

更优选地，所述人IgG的Fc片段包含与SEQ ID NO.2示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述人IgG的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，所述水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZVgE)和IgG的Fc片段之间包含接头；

优选地，所述接头为柔性接头；

优选地，所述柔性接头选自GGGGS(SEQ ID NO.5)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO.6)、GSGGGSGGGGSGGGGSA(SEQ ID NO.7)；

更优选地，所述柔性多肽为GSGGGSGGGGSGGGGSA(SEQ ID NO.7)；

优选地，所述融合蛋白包含与SEQ ID NO.3示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.编码权利要求1-3任一项所述的融合蛋白的核酸；

优选地，所述融合蛋白的编码核酸包含与SEQ ID NO.4所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；更优选地，所述融合蛋白的编码核酸为SEQ ID NO.4所示的核酸；

优选地，所述核酸是mRNA。

5.一种包含权利要求4所述的核酸的表达载体；

优选地，所述表达载体选自原核表达载体或真核表达载体；

更优选地，所述表达载体为真核表达载体；

更优选地，所述真核表达载体为在293细胞或CHO细胞中表达的载体；

更优选地，所述真核表达载体是腺病毒载体。

6.一种宿主细胞，其表达权利要求1-3任一项所述的融合蛋白，或包含权利要求4所述的核酸和/或包含权利要求5所述的表达载体；

优选地，所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞；

优选地，所述原核细胞是细菌细胞；优选地，所述原核细胞是大肠杆菌细胞；

优选地，所述真核细胞选自酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞；优选地，所述哺乳动物细胞选自CHO、HEK293、SP2/0、BHK、C127等；更优选地，所述真核细胞为CHO细胞。

7.一种药物组合物，其包含权利要求1-3任一项所述的融合蛋白、权利要求4所述核酸、权利要求5所述表达载体和/或权利要求6所述宿主细胞，以及一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂。

8.一种疫苗，其包含权利要求1-3任一项所述的融合蛋白、权利要求4所述核酸、权利要求5所述表达载体和/或权利要求6所述宿主细胞，以及一种或多种佐剂；

优选地，所述佐剂选自氢氧化铝、CpG、磷酸铝、皂苷例如Quil A、QS-21、GPI-0100、油包水型乳状液、水包油型乳状液、水包油包水型乳状液中的一种或多种；

优选地，所述佐剂为氢氧化铝和CpG双佐剂；

优选地，所述融合蛋白、铝佐剂和CpG佐剂的比例为1-8:5-240:1-20；更优选地，所述融合蛋白、铝佐剂和CpG佐剂的比例为1-4:20-60:1-10，优选1:40:2。

9.权利要求1-3任一项所述的融合蛋白、权利要求4所述核酸、权利要求5所述表达载体和/或权利要求6所述宿主细胞和/或权利要求7所述的药物组合物在制备治疗或预防与水痘带状疱疹病毒相关的疾病或病状的疫苗中的用途。

10.一种在有相应需要的受试者中诱导针对水痘带状疱疹病毒的免疫应答的方法，所述方法包括：向受试者施用权利要求8所述的疫苗；

优选地，所述受试者是哺乳动物或鸟类；

优选地，所述受试者是人类、牛、犬、猫、山羊、绵羊、猪、马、火鸡、鸭或鸡。

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