CN116019099B - 一种用于防治花生白绢病的植物源增效组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于防治花生白绢病的植物源增效组合物，属于白绢病防治技术领域。本发明的植物源增效组合物包括松油醇和D‑柠檬烯；松油醇的浓度为40‑1000μg/mL，D‑柠檬烯的浓度为40‑1000μg/mL；松油醇和D‑柠檬烯的质量比为1:20‑20:1。本发明的松油醇和D‑柠檬醇在复配质量比1:20‑20:1范围内对齐整小核菌的菌丝生长均有明显的抑制增效作用；松油醇:D‑柠檬烯＝1:2和松油醇:D‑柠檬烯＝1:4对齐整小核菌的防效均高于各单剂处理，且与空白对照相比，药剂处理组的死棵现象显著降低，本发明的植物源增效组合物在防治白绢病上具有很大的应用前景。

Description

一种用于防治花生白绢病的植物源增效组合物

技术领域

本发明属于白绢病防治技术领域，特别是涉及一种用于防治花生白绢病的植物源增效组合物。

背景技术

花生作为目前产油效率最高的油料作物，是食用植物油供给的重要来源。但近几年来，由于气候变化、土壤生态环境恶化、常年连作及抗病品种缺乏等原因，导致花生病害如花生白绢病、花生根腐病和果腐病等土传病害的发生，成为制约花生安全生产和花生产业发展的重要限制性因素。花生白绢病是由齐整小核菌(Sclerotium rolfsii sacc.)引起的一种土传真菌病害，其主要以坚硬菌核越冬，且能在土壤中存活时间长达5-8年，为次年的初侵染源，高温高湿的环境条件为其提供了适宜的发病条件，可重复侵染，这无疑增加了花生白绢病的防治难度。齐整小核菌主要危害花生的茎基部、根部和荚果，造成茎基部、根部和荚果变黑变褐，严重时引起腐烂。花生白绢病如得不到及时有效控制，将直接威胁油料供给安全。通常，农民采用化学杀菌剂来保护植物免受病害侵扰和破坏。然而，重复使用化学杀菌剂会导致严重的环境和抗性问题。因此，对以植物源成分为主的可持续、生态友好的生物杀菌剂的使用需求日益增加。

松油醇(C₁₀H₁₈O)单萜类化合物，是不可多得的生物质资源，广泛存在于植物精油中，工业上以松节油为原料制得，是一种混合物，以α-松油醇为主，其为无色黏稠液体，沸点217℃，具有紫丁香花香，稀释后呈榜子香味。目前已有有关松油醇对植物病原真菌的研究，如对意大利青霉菌Penicillium italicum、稻瘟病菌Magnaporthae oryzae、茶树病原菌胶胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides和茶假拟盘多毛孢Pseudopestalotiopsiscamelliae-sinensis的抑菌活性，主要表现在对细胞壁合成的影响，导致细胞壁破坏，进而影响真菌的形态和膜的完整性，使细胞内成分泄漏等。然而，还未发现有关松油醇对花生病原真菌生物活性的报道。

D-柠檬烯(C₁₀H₁₆)是一种单环单萜，在柠檬、橙子和葡萄等柑橘类植物中大量存在，具有抗氧化、消炎和抗癌的作用。因为它具有高质量的香味特性，D-柠檬烯作为香料和香料添加剂在香水、肥皂、食品和饮料中的应用不断增加。通过对D-柠檬烯作用机制的研究，发现其与某些活性物质或细胞因子在作用过程中具有拮抗或协同作用，也使D-柠檬烯在农业上的应用更为广泛。目前已有D-柠檬烯原药和可溶液剂用于防治烟粉虱、红蜘蛛、炭疽病和白粉病的相关报道，D-柠檬烯也可作为助剂与农药混用，通过降低农药的表面张力，增加药液在作物叶片上的最大持留量和沉积量发挥协同增效作用。但是，还未发现有关D-柠檬烯对花生病原真菌生物活性的报道。

随着社会大众环保意识、食品安全意识、健康意识的提高，农药的发展也朝着高效、低毒、高选择性的方向转变。人们开始从天然产物中寻找高活性的化合物代替传统化学农药，这在新农药创制领域中具有重要的意义，并在许多生产实践中得到了广泛的应用。如百里酚和藁本内酯等活性成分陆续被开发成生物农药用于花生白绢病的防治。合理混配不仅能提高农药的防效，扩大防治谱和使用范围，节约劳力，减少用药量，而且能有效地延缓病虫害抗药性的发展。因此，急需寻找可替代化学农药的高效、低毒的天然产物活性物质及其复配组合来控制花生主要病害的危害。

发明内容

针对上述现有技术中存在的缺陷或不足，本发明的目的在于提供一种用于防治花生白绢病的植物源增效组合物，本发明的植物源增效组合物对齐整小核菌的菌丝生长有明显的抑制增效作用，经植物源增效组合物处理后死棵现象显著降低，该植物源增效组合物在防治白绢病上具有重要意义。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明的目的之一是提供一种用于防治花生白绢病的植物源增效组合物，包括松油醇和D-柠檬烯；所述松油醇的浓度为40-1000μg/mL；所述D-柠檬烯的浓度为40-1000μg/mL；所述松油醇和D-柠檬烯的质量比为1:20-20:1。

进一步地，所述松油醇的浓度为500-1000μg/mL；所述D-柠檬烯的浓度为500-1000μg/mL。

进一步地，所述松油醇和D-柠檬烯的质量比为1:2或1:4。

本发明的目的之二是提供一种所述的植物源增效组合物在防治花生白绢病中的应用。

进一步地，所述花生白绢病是由齐整小核菌引起的一种土传真菌病害。

进一步地，所述应用的方法为：将所述植物源增效组合物喷淋在植株根茎部及周围土壤中，所述植物源增效组合物的喷淋量为10mL/株。

本发明的有益效果：

本发明的松油醇和D-柠檬醇对花生白绢病齐整小核菌具有明显的抑菌作用，且松油醇在1000μg/mL处理时能够完全抑制菌核的产生，使之无法形成次年危害的初侵染源，对于防治花生白绢病具有重要意义。同时，松油醇和D-柠檬醇在复配质量比1:20-20:1范围内对齐整小核菌的菌丝生长均有明显的抑制增效作用。松油醇:D-柠檬烯＝1:2和松油醇:D-柠檬烯＝1:4对齐整小核菌的防效均高于各单剂处理，且与空白对照相比，药剂处理组的死棵现象显著降低，本发明的植物源增效组合物在防治白绢病上具有很大的应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为松油醇和D-柠檬烯对齐整小核菌的抑菌活性；

图2为松油醇(Terpineol)和D-柠檬烯(D-limonene)对齐整小核菌菌核形成影响柱形图；

图3为松油醇(Terpineol)和D-柠檬烯(D-limonene)对齐整小核菌菌核形成影响的培养基培养结果。

具体实施方式

为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

将松油醇和D-柠檬烯配制成不同浓度的单剂和配比组合。参照《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》标准，通过抑制菌丝生长速率法测定了不同药剂处理浓度对花生白绢病病原菌(齐整小核菌)的抑制活性，根据对照的生长情况，齐整小核菌接种3d后用十字交叉法测量菌落直径，计算各处理的菌丝生长抑制率。

抑制率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)]×100％

采用DPSv7.5软件处理数据进行分析，求出每个处理的实际抑菌率，按照下面公式计算理论抑菌率和增效系数，计算公式如下：

理论抑菌率(IRT)＝P_A×IR_A+P_B×IR_B

A、B为单剂，M为混合药剂。IR_A为A药剂实际抑制率，IR_B为B药剂实际抑制率，IR_M为混合药剂的实际抑制率，IR_T为混合药剂的理论抑制率。P为有效成分的百分含量，混剂增效系数为SR。SR＞1表现为增效作用，SR＝1表现为相加作用，SR＜1表现为拮抗作用。

采用DPSv7.5软件处理数据，求每种药剂处理的EC₅₀值。

表1松油醇(T)和D-柠檬烯(D)对花生白绢病病原菌的菌丝生长的影响

由表1可以看出，松油醇和D-柠檬烯两者均对导致花生白绢病的齐整小核菌具有优异的抑菌活性。具体表现如表1所示：D-柠檬烯和松油醇对齐整小核菌的EC₅₀值分别为60.87μg/mL和51.40μg/mL。

图1为松油醇和D-柠檬烯对齐整小核菌的抑菌活性，由图1可知，D-柠檬烯在1000μg/mL处理浓度下对齐整小核菌有较显著的抑菌效果，平均抑制率为99.45％，最小抑制浓度(MIC)≈1000μg/mL；松油醇对齐整小核菌效果最好，MIC为500μg/mL和1000μg/mL，能够完全抑制病原菌的生长。图2为松油醇(Terpineol)和D-柠檬烯(D-limonene)对齐整小核菌菌核形成影响柱形图；图3为松油醇(Terpineol)和D-柠檬烯(D-limonene)对齐整小核菌菌核形成影响的培养基培养结果。由图2和图3可知，松油醇在1000μg/mL浓度下能够长时间抑制齐整小核菌的菌丝生长和菌核的形成，MFC＝1000μg/mL；而D-柠檬烯不同处理之间对齐整小核菌菌核的形成数量并没有显著影响。

表2不同质量比松油醇与D-柠檬烯复配对齐整小核菌菌丝生长的抑制率

由表2可知，松油醇和D-柠檬烯均对齐整小核菌具有良好的抑制活性，两者在复配质量比为1:20-20:1的范围内，增效系数均大于1，表现出增效作用。松油醇:D-柠檬烯＝1:2和1:4时，二者的增效系数较大，分别为1.54和1.42倍(40μg/mL)以及1.14和1.15倍(200μg/mL)。这表明松油醇和D-柠檬烯在合适的复配质量比下能够更有效防治花生白绢病的发生。

实施例2

采用喷淋法测试松油醇和D-柠檬烯及其组合物松油醇:D-柠檬烯＝1:2和1:4对齐整小核菌引起的花生白绢病的盆栽防治效果。试验花生品种为豫花9326，选取颗粒饱满大小一致的花生种子置于盆中，加入无菌水淹没种子的三分之一，并放于培养箱中浸种半天。然后将基质土与蛭石以3:1的体积比例混合，加入无菌水调整土壤持水量为70％后置于盆钵中，将发芽的种子胚根朝下播种。

人工接种病菌：待播种一周后，选取健康、长势、大小一致的花生植株，每株在茎基部接种1个菌饼，并用土掩埋。当观察到花生植株和土壤上出现白色菌丝后，分别以500和1000μg/mL的松油醇、D-柠檬烯、T:D＝1:2和1:4药液喷淋植株根茎部及周围土壤，每株喷药液10mL。含0.1％DMSO和0.1％吐温-80的无菌水作为对照。每个处理20株，重复3次。施药3d后，按照以下分级标准鉴定病情：

0级：无病斑；

1级：仅在茎基部产生病斑；

3级：茎基部产生缢缩症状，整株的三分之一以下表现系统症状(枯萎、死亡、萎蔫等)；

5级：整株的三分之一到三分之二表现系统症状；

7级：整株的三分之二以上表现系统症状；

9级：植株枯死。

病情指数(％)＝Σ(病级数×该级病株数)/(最高病级数×调查总株数)×100％

杀菌剂对花生白绢病的防治效果按照下述公式计算：

防治效果(％)＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100％在不同浓度下两种单剂及不同复配质量比对齐整小核菌致病性和防治效果的影响见表3：

表3不同处理的病情指数和防治效果

由表3可知，盆栽防效试验与室内毒力试验结果一致，松油醇在500μg/mL和1000μg/mL剂量下的防效分别为53.04％和73.76％，高于D-柠檬烯在500μg/mL(47.24％)和1000μg/mL(70.93％)的防效；此外，松油醇:D-柠檬烯＝1:2和松油醇:D-柠檬烯＝1:4对齐整小核菌的防效均高于单剂处理。且与空白对照相比，药剂处理组的死棵现象显著降低。

综上所述，松油醇和D-柠檬醇对花生白绢病齐整小核菌具有明显的抑菌作用，且松油醇在1000μg/mL处理时能够完全抑制菌核的产生，使之无法形成次年危害的初侵染源，对于防治花生白绢病具有重要意义。与此同时，松油醇和D-柠檬醇在复配质量比1:20-20:1范围内对齐整小核菌的菌丝生长均有明显的抑制增效作用。盆栽防效试验与室内毒力试验结果一致，即松油醇:D-柠檬烯＝1:2和松油醇:D-柠檬烯＝1:4对齐整小核菌的防效均高于各单剂处理，且与空白对照相比，药剂处理组的死棵现象显著降低。表明松油醇和D-柠檬烯的复配组合物在防治白绢病上具有很大的应用前景。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (5)

1.一种用于防治花生白绢病的植物源增效组合物，其特征在于，活性成分由松油醇和D-柠檬烯组成；所述松油醇的浓度为40-1000μg/mL；所述D-柠檬烯的浓度为40-1000μg/mL；所述松油醇和D-柠檬烯的质量比为1:20-20:1。

2.根据权利要求1所述的用于防治花生白绢病的植物源增效组合物，其特征在于，所述松油醇的浓度为500-1000μg/mL；所述D-柠檬烯的浓度为500-1000μg/mL。

3.根据权利要求1所述的用于防治花生白绢病的植物源增效组合物，其特征在于，所述松油醇和D-柠檬烯的质量比为1:2或1:4。

4.一种如权利要求1-3任一项所述的植物源增效组合物在防治花生白绢病中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用的方法为：将所述植物源增效组合物喷淋在植株根茎部及周围土壤中，所述植物源增效组合物的喷淋量为10mL/株。