CN116003643A - 白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用 - Google Patents

白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116003643A
CN116003643A CN202210938228.XA CN202210938228A CN116003643A CN 116003643 A CN116003643 A CN 116003643A CN 202210938228 A CN202210938228 A CN 202210938228A CN 116003643 A CN116003643 A CN 116003643A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bletilla striata
oligosaccharide
bletilla
residue
mannose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210938228.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN116003643B (zh
Inventor
刘洪涛
张志刚
殷明珠
郑军平
胡海明
朱天翔
胡白飞
杨化冰
程雪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan Sishengyuan Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN202210938228.XA priority Critical patent/CN116003643B/zh
Publication of CN116003643A publication Critical patent/CN116003643A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116003643B publication Critical patent/CN116003643B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本申请涉及白芨技术领域,尤其涉及白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用。该白芨低聚糖具有以甘露糖和葡萄糖形成分子结构,所述分子结构包含1,4‑糖苷键连接的甘露糖残基、1,6‑糖苷键连接的甘露糖残基、1,4‑连接的葡萄糖残基以及终端葡萄糖残基。该白芨低聚糖具有更大的水溶性和更低的粘度,并且其具有明显的改善肠道菌群和抗巨噬细胞炎症的作用,为此其具有作为改善肠道菌群和抗巨噬细胞炎症相关调节剂或制品的应用前景。

Description

白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用
技术领域
本申请涉及白芨技术领域,尤其涉及白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用。
背景技术
白芨[Bletilla striata.(Thunb.)Reichb.f.],为兰科白芨属多年生草本植物,是我国传统的珍稀名贵中药材,具有极高的观赏价值、药用价值和经济价值。白芨块茎中的化合物组成超过150种,其中白芨多糖是其干块茎中组成最丰富的一类物质,含量最高可达60%。白芨多糖是一种高分子粘性多糖,其化学成分为葡甘露聚糖(包括β-葡萄糖和β-甘露糖),单糖残基以β-1,4-糖苷键连接,两者摩尔比约为1:4,分子量为70000-600000。白芨多糖具有抗菌活性、促进伤口愈合、抗肿瘤、抗纤维化、抗氧和抗消化道溃疡等生物活性,由于白芨多糖的无刺激、无副作用,其在食品、化妆品等工业也有广泛的应用。白芨多糖粘度大,水溶性差,在后续加工利用上带来很大的不便。鉴于多糖在白芨块茎中的绝对占比,如何在保持多糖生物活性的同时有效降低其粘性,已成为白芨产业当前面临的重大科学难题和产业瓶颈。
发明内容
为此,本申请实施例提供了一类白芨低聚糖,其具有更大的水溶性和低粘度,并且其具有明显的抗菌功能和创面修复功能,为此其不能保持其生物活性,还能更加利于作用发挥其抗菌和创面修复功能的相关原料。为此,本申请实施例至少公开如下技术方案:
第一方面,本申请实施例公开了一种白芨低聚糖,所述白芨低聚糖具有以甘露糖和葡萄糖形成分子结构,所述分子结构包含1,4-糖苷键连接的甘露糖残基、1,6-糖苷键连接的甘露糖残基、1,4-连接的葡萄糖残基以及终端葡萄糖残基。
第二方面,本申请实施例公开了一种白芨低聚糖,具有如式(I)~(III)任一所示的分子结构,
式I:
式II:
式III:
第三方面,本申请实施例公开了第一方面或第二方面的白芨低聚糖的制备方法,其包括:
获得β-甘露聚糖酶和白芨多糖提取物;
将所述β-甘露聚糖酶和所述白芨多糖提取物进行酶解反应即可制得所述白芨低聚糖。
第四方面,本申请实施例公开了一种抗巨噬细胞炎症的调节剂,包含第一方面或第二方面所述的白芨低聚糖。
第五方面,本申请实施例公开了一种改善肠道菌群调节剂,包含第一方面或第二方面所述的白芨低聚糖。
第六方面,本申请实施例公开了第一方面或第二方面所述的白芨低聚糖在制备抗巨噬细胞炎症和/或改善肠道菌群相关制品中的应用。
附图说明
图1为本申请实施例提供的白芨低聚糖的DEAE纤维素柱层析洗脱图(A)和琼脂糖凝胶分析图(B)。
图2为本申请实施例提供的白芨低聚糖的单糖组成液相分析图,图A为标准品检测结果,图B为样品检测结果。
图3为本申请实施例提供的白芨低聚糖的红外图谱。
图4为本申请实施例提供的白芨低聚糖的核磁共振图谱;图4A为C谱分析结果;图4B为H谱分析结果。
图5为本申请实施例提供的白芨低聚糖对NF-κB及MAPK等炎症通路的抑制试验结果图;图5A为NLRP3表达量的WB检测结果;图5B为iNOS表达量的WB检测结果;图5C为COX-2表达量的WB检测结果;图5D为p-P65和P65表达量的WB检测结果;图5E为ERK和p-ERK表达量的WB检测结果;图5F为JNK和p-JNK表达量的WB检测结果。
图6为本申请实施例提供的白芨低聚糖对肠道菌群生长的影响;图6A为肠道菌群体外发酵的生长曲线;图6B为肠道菌群体外发酵的pH变化曲线;图6C为肠道菌群体外发酵的总糖变化曲线;图6D为肠道菌群体外发酵的还原糖变化曲线。
图7为本申请实施例提供的白芨低聚糖在体外对人肠道菌群的门水平(图7A)和属水平(图7B)的组成的调节结果。
具体实施方式
为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请,并不用于限定本申请。本申请中未详细单独说明的试剂均为常规试剂,均可从商业途径获得;未详细特别说明的方法均为常规实验方法,可从现有技术中获知。
需要说明的是,本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象,而不必用于描述特定的顺序或先后次序,也不对其后的技术特征起到实质的限定作用。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换,以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外,术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形,意图在于覆盖不排他的包含,例如,包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元,而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
随着白芨多糖分子量的增大,其粘性增大,溶解度降低,这对于一些需要口服类产品(例如解救护肝养胃功能的口服液及保健品,亦或者益气养血、生津止渴、滋阴润燥、补血等保健功能的产品)的应用受到限制。为此,本申请实施例公开了一种白芨低聚糖,所述白芨低聚糖具有以甘露糖和葡萄糖形成分子结构,所述分子结构包含1,4-糖苷键连接的甘露糖残基、1,6-糖苷键连接的甘露糖残基、1,4-连接的葡萄糖残基以及终端葡萄糖残基。本申请实施例公开的白芨低聚糖的溶解度为90%以上,特性粘度低至92.5及以下。
在本申请实施例中,溶解度的检测方法包括:取1.0g样品分散于249.0g碎冰中,在0℃的冰水浴下剧烈搅拌约1h直至碎冰完全融化成水。样品溶液以4000rpm离心20min,取100.0g上层溶液于旋转蒸发仪上蒸发浓缩后在105℃干燥箱内干燥至恒重,记录重量m,每个样品测3个值并取平均数,按下公式计算其溶解度=2.5×m/W×100%;其中,m代表100.0g样品溶液干燥后的重量,W为样品重量。
在本申请实施例中,参照“Bailey NA,Fenton DE,William MG,etal.Complexesof ligands providing endogenous bridges:Part 7.The concurrent formation of 1+1and 2+2oxa-azamacrocycles;The X-ray crystal structure of exocyclic dinuclearcopper(II)compelexes[J]Journal of Chemical Society Dalton Trans,1989(9):1727~1738”提供的特性粘度公式[η]=[ηsp+3lnηr]/4C,测定本申请实施例提供的白芨低聚糖的相对粘度ηr和增比粘度ηsp,即可得到其特性粘度[η],特性粘度仅与其自身分子量和分子结构行相关。
在本申请实施例中,所述分子结构具有以1个葡萄糖残基和3个甘露糖残基形成的主链的聚合单元。
在本申请实施例中,所述聚合单元具有3~6个;可选地,所述聚合单元具有3~5个,进一步可选地,所述聚合单元具有3个或4个。
在本申请实施例中,所述聚合单元还具有一个连接在所述主链的支链的葡萄糖残基,该葡萄残基通过1,6-糖苷键连接主链的其中一个甘露糖残基。
在一个实施例中,该实施例公开了一种白芨低聚糖,具有如式I所示的结构
在一个实施例中,该实施例公开了一种白芨低聚糖,具有如式II所示的结构
在一个实施例中,该实施例公开了一种白芨低聚糖,具有如式III所示的结构
为此,本申请实施例公开了上述实施例提供的白芨低聚糖的制备方法,其包括:
获得β-甘露聚糖酶和白芨多糖提取物;
将所述β-甘露聚糖酶和所述白芨多糖提取物进行酶解反应即可制得所述白芨低聚糖。
在一些实施例中,该β-甘露聚糖酶选自如下A~C中的至少一项:
A.其氨基酸序列如SED ID NO.1所示的蛋白质;
B.具有与A中所述蛋白质至少90%及以上同源性氨基酸序列的蛋白质;
C.由A或B的氨基酸序列经过至少一个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有β-甘露聚糖酶活性的衍生的蛋白质。
在上述白低聚糖的制备方法的一个实施例中,该β-甘露聚糖酶是通过重组表达制得,其编码基因为地衣芽孢杆菌β-甘露聚糖酶BlmanA前体的编码基因,通过在GenBank中经NCBI Blast进行检索,β-甘露聚糖酶BlmanA基因长度为1083bp,如SEQ ID NO.2所示,将BlmanA酶利用SnapGene软件进行翻译,编码360个氨基酸,序列如SEQ ID NO.1。该β-甘露聚糖酶BlmanA属于糖苷酶水解酶超级家族A中的GH26家族;重组酶分子大小约为41kDa。
在上述白低聚糖的制备方法的一个实施例中,将如SEQ ID NO.2所示的目的序列构建至pET24a质粒中,得表达载体pET24a-BlManA,将其转入表达宿主E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,涂布于的LB抗性平板上,筛选阳性转化子。将验证正确的含有pET24a-BlManA的E.coli BL21(DE3)单菌落接种于含抗性的LB液体培养基中,37℃,200rpm培养12h。按2%的接种量转接到含抗性的LB液体培养基中,继续培养至OD600达到0.6;加入诱导剂IPTG,于37℃,200rpm诱导表达7h后,4℃、13000rpm离心10min收集菌体。用磷酸缓冲液洗涤菌体3次后,加磷酸缓冲液重悬细胞,超声波破碎后于4℃、8000rpm离心30min收集上清液。由于pET24a-BlManA中含有His-Tag编码序列,采用Ni-NTA柱纯化目标蛋白的方法纯化,将目的蛋白上清液经0.45μm滤膜过滤后上柱,分别用20和300mmol/L咪唑的缓冲液进行洗脱,洗脱后的样品使用脱盐柱进行脱盐处理,所得样品冷冻干燥,即可得到该β-甘露聚糖酶BlmanA。
在上述白低聚糖的制备方法的一个实施例中,该白芨提取物的制备方法包括:取新鲜白芨块茎,置于60℃烘箱内48h至完全烘干,分别用粉碎机打碎合并过60目筛后,取粉末50g,将粉末加入2500mL纯水中,在80℃水浴环境下加热并搅拌2h。过滤收集上清后,将滤渣再次重悬于纯水中,重复上述操作。滤去残渣后将两份滤液合并,旋转蒸发浓缩至1/10体积(约300mL)。按照多糖液:乙醇=1:4的体积比向浓缩后的多糖液中添加100%乙醇,静置过夜后,由于块茎粗多糖为大团棉花状,可直接过80目滤筛得到多糖沉淀;而须根多糖为分散絮状,需通过离心收集。将粗提多糖复溶于少量纯水中,用15%三氯乙酸处理溶液,离心后取上清液以去除蛋白质,直到上清液在250nm处紫外扫描没有信号峰,即得白芨多糖提取物。
在本申请实施例中,所述酶解反应的条件包括:30~70℃,pH范围为3.0~11.0。优选地,温度范围为60℃;优选地,pH范围为6~8.5,更优选地,pH为8.0。
在上述白芨低聚糖的制备方法的一些实施方式中,该制备方法还包括对酶解反应进行分离纯化的步骤。在透析过滤的一个实施例中,将酶解反应液经过溶解形成50mg/mL的溶液,过0.45μm滤膜后均匀装入以DEAF-Sepharose Fast Flow gel为填料的凝胶柱中(2.5cm×60cm。先用蒸馏水洗脱至无糖检出,分别用0.10,0.15和0.20M NaCL进行梯度洗脱,流速为2mL/min。采用自动收集器每管2mL进行收集,根据苯酚硫酸发检测其中糖很累,绘制洗脱曲线。将单一峰下的多糖按管数进行合并,分别旋蒸浓缩,再用蒸馏水透析(截留分子量为3000Da)72h后,冻干得到纯化的白芨低聚糖。在一些实施例中,将此实施例制得的白芨低聚糖进行采用DEAE纤维素柱层析分析,分别用0.10,0.0和0.50M NaCL进行梯度洗脱,流速为0.5mL/min,采用自动收集器每管2mL进行收集,根据OD490吸光值绘制洗脱曲线,如图1A所示,合并单一峰的洗脱液,浓缩后上样至琼脂糖凝胶柱层析分析,结果如图1B所示,其出峰时间为15min,测定其分子量为3902Da(分子量测量方法参照“莼菜多糖的分离、纯化及结构初步研究[J]中成药,2018,第4期”);参照“石花菜多糖的分离纯化及单糖组成分析[J]食品与发酵工业,2020年,第7期”公开的方法对其进行单糖组成分析结果如图2A和2B所示,其分子结构中仅包含甘露糖(72.97%)和葡萄糖(27.03%)。
进一步对上述实施例制得的白芨低聚糖进行红外光谱分析,结果如图3所示,其在893cm-1附近的吸收表明其存在β-糖苷键,在875cm-1及808cm-1处的吸收峰表明存在甘露糖残基。将该白芨低聚糖进行甲基化多糖经过水解、还原和乙酰化后,通过GC-MS进行糖苷键分析,结果如表2所示,白芨多糖主要包括四种类型的糖苷键,分别为1,4-连接的Manp,1,6-连接的Manp,1,4-连接的Glcp。
表1一个实施例提供的白芨低聚糖的糖苷键组成
进一步对上述实施例提供的白芨低聚糖进行NMR碳谱和氢谱分析结果如图4所示,结合其单糖组成比例、糖苷键结构、FTIR及NMR结果分析可知其分子结构如式I~III所示。并且,采用如上述实施例提供的方法检测白芨提取物中多糖的溶解度为62.3%,特性粘度为893.5;而如式I所示的白芨低聚糖的溶解度为92.6%,特性粘度为76.5;而如式II所示的白芨低聚糖的溶解度为93.6%,特性粘度为76.3;而如式II所示的白芨低聚糖的溶解度为93.2%,特性粘度为76.9;由此可见,本申请实施例提供的白芨低聚糖溶解度显著提升,而特性粘度显著降低。
参照“Zhou,X.J L.L.,Yin P.P.,Shi,L.L.,Zhang,J.H.,et al.Structuralcharacterisation and antioxidant activity evaluation of phenoliccold-pressedPerilla frutescens var.arguta seed flour[J].Food compounds from Chemistry,2014,164:150-157.”公开的方法检测式I~式III提供的白芨多糖的DPPH自由基清除率,并绘制不同浓度下的式I~式III提供的白芨多糖的DPPH清除率曲线图,根据曲线图估算DPPH清除率为50%的白芨多糖浓度(注为IC50-DPPH)。参照“温度、pH等因素对VitC清除超氧阴离子自由基能力影响的实验研究[J]中华临床医药杂志(北京),2002年,第24期”公开的方法检测式I~式III提供的白芨多糖的超氧阴离子自由基清除率,并绘制不同浓度下的式I~式III提供的白芨多糖的超氧阴离子自由基清除率曲线图,根据曲线图估算超氧阴离子自由基清除率为50%的白芨多糖浓度(注为IC50-O2)。结果显示,式I~式IIII提供的白芨多糖的IC50-DPPH依次为0.68mg/mL、0.76mg/mL和0.79mg/mL,而白芨提取物的IC50-DPPH为1.32mg/mL。式I~式IIII提供的白芨多糖IC50-O2依次为0.76mg/mL、0.83mg/mL和0.97mg/mL,而白芨提取物的IC50-DPPH为1.47mg/mL。由此说明,本申请实施例提供的白芨低聚糖具有明显的抗氧化性能。
参照“Qin,T.,Chen,J.,Wang,D.Y,Hu,YL.,Zhang,J.,et al.Selenylationmodification can enhance immune-enhancing activity of Chinese angelicapolysaccharide[J].Carbohydrate Polymers,2013,95(1):183~187.”公开的方法检测式I~式III提供的白芨多糖对成纤维细胞的毒性。结果显示,式I~式IIII提供的白芨多糖及白芨提取物在50~1000μg/mL浓度范围内作用成纤维细胞HFF-148h后对其增殖活性无显著影响,说明本申请实施例提供的白芨低聚糖无细胞毒性。
本申请实施例提供的白芨低聚糖还具有抑制巨噬细胞炎症的作用。在一个效果验证试验例中,其效果验证试验步骤包括:取对数生长期状态良好的RAW264.7巨噬细胞,消化为单个细胞悬液,调整细胞浓度为4×108/L,接种于24孔培养板中,培养24h;给药干预4h,给药体积为20μL,40μL,80μL,160μL的2mg/mL白芨低聚糖;药物作用后更换为含LPS培养基(终浓度为200ng/mL),细胞继续培养12h。收取培养细胞,提取细胞总蛋白。采用Westernblot法检测对白芨低聚糖NF-κB或MAPK信号通路的影响。检测基因包括:p-P65、IκBα、p-P38、p-JNK、p-ERK等。结果如图5所示,与LPS组相比,在加入10μg/mL白芨低聚糖后仅对iNOS和COX-2的表达有显著抑制作用;与LPS组相比,加入20μg/mL白芨低聚糖后对P65、ERK和JNK的磷酸化均有显著抑制作用。
由此提示,本申请实施例提供的白芨低聚糖具有在抗巨噬细胞炎症中相关应用前景。为此,本申请实施例提供了一种抗巨噬细胞炎症的调节剂,包含上述实施例提供的白芨低聚糖以及药学上可接受的辅料。在一些实施例中,该抗巨噬细胞炎症的调节剂的包含浓度不低于200μg/mL的如式I~式III任一所述的白芨低聚糖,以及其他药学上可接收的辅料。该抗巨噬细胞炎症的调节剂可进行瓶装产品,经过配料、过滤、灭菌和灌装的步骤其无菌灌装并密封至玻璃瓶中。药物上可接受的辅料包括甜味剂、酸味剂和防腐剂。例如,在一个抗巨噬细胞炎症的调节剂的配方实施例中,其包含1.5mg/mL白芨低聚糖,20wt%(质量百分比)的蜂蜜(作为甜味剂),0.17wt%的柠檬酸(作为酸味剂),0.02wt%的山梨酸钾(作为防腐剂)。
另外,本申请实施例提供的白芨低聚糖还具有改善肠道菌群,进而发挥调节机体功能的作用。在一个验证试验例中,其验证试验步骤包括:
(1)配制发酵培养基,以每升为例,其包括:2g蛋白胨、2g酵母膏、0.1g NaCl、0.01gK2HPO4、0.04g KH2PO4、0.01g MgSO4·7H2O、0.01g CaCl2·2H2O、2g NaHCO3、2mL Tween-80、0.05g血红素hemin、10μL维生素K1、0.5g L-半胱氨酸、0.5g胆汁盐和0.01g刃天青。发酵培养基配置完成后调pH至7.0~7.5,再抽滤灭菌后放置厌氧培养罐中。
(2)将1mL粪便悬液分别与9mL含有2.5mg/mL白芨多糖,2.5mg/mL白芨低聚糖及空白发酵培养基混匀后,放入厌氧培养罐中,37℃,125rpm厌氧培养48h。分别于发酵开始后第0h、第6h、第12h、第24h、第36h和第48h收集样品,使用多功能酶标仪检测OD600的吸光值,检测发酵液pH值;使用肠道微生物DNA提取试剂盒(货号51604,QIAGEN)对收集的肠道菌群进行处理,获取DNA样本,采用两步PCR扩增法构建DNA文库,采用高通量测序平台IlluminaMiseq对16S rDNA的V3-V4区进行测序,优化序列后进行OTU聚类分析、物种多样性分析和物种分类学分析。
如图6A所示,加入发酵白芨低聚糖后肠道菌群在对数生长期的生长速度大于在空白培养基中的生长速度,24h后的平台期的OD600也明显高于对照组。如图6B所示,发酵白芨低聚糖所有时间点pH值均显著低于空白组(P<0.05),发酵液的pH值降低可能是由于肠道菌群快速利用多糖产生的短链脂肪酸引起的。这些结果表明白芨低聚糖都能够促进肠道菌群的发酵生长,降低肠道pH。体外发酵不同时间点总糖及还原糖变化曲线如图6C、6D所示。在发酵48h内,白芨低聚糖发酵培养物中总碳水化合物的浓度从2.37±0.20mg/mL下降到0mg/mL,还原糖含量从0.54±0.02mg/mL先上升至0.64±0.03,最终下降到0mg/mL。对照组发酵培养物中,总碳水化合物的浓度12h内从0.12±0.02mg/mL下降到0mg/mL,还原糖含量一直维持在极低水平。白芨低聚糖组及对照组发酵培养物中的总碳水化合物的含量均发生了显著性的下降(P<0.05)。
如图7A所示,白芨低聚糖能够促进拟杆菌门及厚壁菌门的生长,抑制变形菌门的生长。在属水平上,白芨低聚糖能够促进拟杆菌属及链球菌属的生长,抑制埃希菌属及梭杆菌属的生长。这些结果表明,肠道菌群能够快速利用白芨低聚糖,白芨低聚糖能够通过改善肠道菌群,进一步发挥调节机体功能的作用。
由此提示,本申请实施例提供的白芨低聚糖具有改善肠道菌群的应应用前景。为此,本申请实施例提供了一种改善肠道菌群的调节剂,其包含上述实施例提供的白芨低聚糖以及药学上可接受的辅料。在一些实施例中,该改善肠道菌群的调节剂的包含浓度不低于200μg/mL的如式I~式III任一所述的白芨低聚糖,以及其他药学上可接收的辅料。该改善肠道菌群的调节剂可进行瓶装产品,经过配料、过滤、灭菌和灌装的步骤其无菌灌装并密封至玻璃瓶中。药物上可接受的辅料包括甜味剂、酸味剂和防腐剂。例如,在一个改善肠道菌群的调节剂的配方实施例中,其包含1.2mg/mL白芨低聚糖,15wt%(质量百分比)的蜂蜜(作为甜味剂),0.13wt%的柠檬酸(作为酸味剂),0.02wt%的山梨酸钾(作为防腐剂)。
以上所述,仅为本申请较佳的具体实施方式,但本申请的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,都应涵盖在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种白芨低聚糖,所述白芨低聚糖具有以甘露糖和葡萄糖形成分子结构,所述分子结构包含1,4-糖苷键连接的甘露糖残基、1,6-糖苷键连接的甘露糖残基、1,4-连接的葡萄糖残基以及终端葡萄糖残基。
2.根据权利权要1所述的白芨低聚糖,其中,所述分子结构具有以1个葡萄糖残基和3个甘露糖残基形成的主链的聚合单元,所述聚合单元具有3~6个;可选地,所述聚合单元具有3~5个,进一步可选地,所述聚合单元具有3个或4个。
3.根据权利要求1所述的白芨低聚糖,其中,所述聚合单元还具有一个连接在所述主链的支链的葡萄糖残基,该葡萄残基通过1,6-糖苷键连接主链的其中一个甘露糖残基。
4.一种白芨低聚糖,具有如式(I)~(III)任一所示的分子结构,
式I:
Figure FDA0003784482960000011
式II:
Figure FDA0003784482960000021
式III:
Figure FDA0003784482960000022
5.权利要求1~4任一所述的白芨低聚糖的制备方法,其包括:
获得β-甘露聚糖酶和白芨多糖提取物;
将所述β-甘露聚糖酶和所述白芨多糖提取物进行酶解反应即可制得所述白芨低聚糖。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其中,所述β-甘露聚糖酶选自如下A~C中的至少一项:
A.其氨基酸序列如SED ID NO.1所示的蛋白质;
B.具有与A中所述蛋白质至少90%及以上同源性氨基酸序列的蛋白质;
C.由A或B的氨基酸序列经过至少一个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有β-甘露聚糖酶活性的衍生的蛋白质。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其中,所述酶解反应的条件包括:30~70℃,pH范围为3.0~11.0;
优选地,温度范围为60℃;
优选地,pH范围为6~8.5;更优选地,pH为8.0。
8.一种抗巨噬细胞炎症的调节剂,包含如权利要求1~4任一所述的白芨低聚糖。
9.一种改善肠道菌群调节剂,包含如权利要求1~4任一所述的白芨低聚糖。
10.权利要求1~4任一所述的白芨低聚糖在制备抗巨噬细胞炎症和/或改善肠道菌群相关制品中的应用。
CN202210938228.XA 2022-08-05 2022-08-05 白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用 Active CN116003643B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210938228.XA CN116003643B (zh) 2022-08-05 2022-08-05 白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210938228.XA CN116003643B (zh) 2022-08-05 2022-08-05 白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116003643A true CN116003643A (zh) 2023-04-25
CN116003643B CN116003643B (zh) 2024-02-02

Family

ID=86035948

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210938228.XA Active CN116003643B (zh) 2022-08-05 2022-08-05 白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116003643B (zh)

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110008382A1 (en) * 2009-03-07 2011-01-13 Burrows Gregory G Compositions and methods using recombinant MHC molecules for the treatment of uveitis
US20180051069A1 (en) * 2015-03-06 2018-02-22 The General Hospital Corporation Compositions and methods for treating allergic inflammation
CN108892735A (zh) * 2018-06-04 2018-11-27 湖北中医药大学 一种白芨寡糖及其在促进血管新生中的应用
US20180346898A1 (en) * 2017-05-30 2018-12-06 Ab Enzymes Oy Mannanase variants
CN109010349A (zh) * 2018-10-29 2018-12-18 湖北中医药大学 白芨寡糖在改善肠道微生态中的应用
CN109364085A (zh) * 2018-10-29 2019-02-22 湖北中医药大学 白芨寡糖及其组合物在调节糖脂代谢紊乱中的应用
CN109970879A (zh) * 2019-03-21 2019-07-05 浙江中医药大学 一种白芨多糖提取物及其制备方法
CN111004335A (zh) * 2019-11-29 2020-04-14 湖南绿蔓生物科技股份有限公司 一种从白芨根茎中提取得到的白芨低聚糖及其制备方法
CN111647091A (zh) * 2020-05-27 2020-09-11 广东药科大学 一种太子参活性六碳醛低聚糖及其制备方法与应用
CN112587535A (zh) * 2021-01-06 2021-04-02 澳门大学 葡甘寡糖系列组合物、其制备方法及应用
CN113698502A (zh) * 2021-07-23 2021-11-26 上海海洋大学 白及须根低聚糖及其制备方法和应用

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110008382A1 (en) * 2009-03-07 2011-01-13 Burrows Gregory G Compositions and methods using recombinant MHC molecules for the treatment of uveitis
US20180051069A1 (en) * 2015-03-06 2018-02-22 The General Hospital Corporation Compositions and methods for treating allergic inflammation
US20180346898A1 (en) * 2017-05-30 2018-12-06 Ab Enzymes Oy Mannanase variants
CN108892735A (zh) * 2018-06-04 2018-11-27 湖北中医药大学 一种白芨寡糖及其在促进血管新生中的应用
CN109010349A (zh) * 2018-10-29 2018-12-18 湖北中医药大学 白芨寡糖在改善肠道微生态中的应用
CN109364085A (zh) * 2018-10-29 2019-02-22 湖北中医药大学 白芨寡糖及其组合物在调节糖脂代谢紊乱中的应用
CN109970879A (zh) * 2019-03-21 2019-07-05 浙江中医药大学 一种白芨多糖提取物及其制备方法
CN111004335A (zh) * 2019-11-29 2020-04-14 湖南绿蔓生物科技股份有限公司 一种从白芨根茎中提取得到的白芨低聚糖及其制备方法
CN111647091A (zh) * 2020-05-27 2020-09-11 广东药科大学 一种太子参活性六碳醛低聚糖及其制备方法与应用
CN112587535A (zh) * 2021-01-06 2021-04-02 澳门大学 葡甘寡糖系列组合物、其制备方法及应用
CN113698502A (zh) * 2021-07-23 2021-11-26 上海海洋大学 白及须根低聚糖及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN116003643B (zh) 2024-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chen et al. Digestion under saliva, simulated gastric and small intestinal conditions and fermentation in vitro by human intestinal microbiota of polysaccharides from Fuzhuan brick tea
CN109750070B (zh) 一种功能性桑叶低聚糖及其制备方法和应用
CN103255076B (zh) 一种芽孢杆菌、一种透明质酸酶及其制备方法和用途
CN109939027B (zh) 一种猴头菌发酵制备含麦角硫因的化妆品原液的方法
CN111285939B (zh) 一种具有抗氧化和调节肠道菌群功效的海蒿子多糖及其制备方法与应用
WO2010098217A1 (ja) フルクタン含有食品からの免疫賦活発酵食品
CN115404252A (zh) 一种黑木耳多糖及其应用和制备方法
CN116042342A (zh) 一种人参露酒及其生产工艺
CN110710677A (zh) 一种复合酵素及其制备方法
CN112724270B (zh) 一种低分子量苜蓿多糖及其制备方法与调节肠道菌群的应用
CN107312765A (zh) 一种难以降解cs‑e的糖胺聚糖裂解酶及其编码基因与应用
KR100710275B1 (ko) 바실러스속 미생물을 이용한 대두피 또는 흑두피 발효방법,그리고 및 대두피 또는 흑두피 발효물을 함유하는 조성물
CN114085875A (zh) 一种胞外多糖、制备方法及其应用
CN116003643B (zh) 白芨低聚糖、调节剂、制备方法及应用
CN111925946B (zh) 利用连续流加液体深层发酵生产茶藨子叶状层菌的工艺
CN109628347A (zh) 一株发光杆菌fc615及其培养方法与应用
CN115844930B (zh) 一种银杏叶炮制方法及所得产物
CN112794925B (zh) 一种阳春砂多糖及其制备方法和应用
CN114027510A (zh) 一种蛋白核小球藻多糖混合物及其制备方法和作为新型益生元的应用
CN114231576A (zh) 罗伊氏乳杆菌在制备植物多糖中的应用
CN115025033A (zh) 一种桑叶发酵组合物、制备方法、应用
CN115260324B (zh) 一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法
CN114149936B (zh) 一株发酵小麦麸皮合成胞外多糖的菌株
CN114134188B (zh) 一种发酵小麦麸皮合成胞外多糖的方法
CN112979835B (zh) 杂多糖和多糖制品以及石斛多糖及其制备方法和它们的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20231102

Address after: No. 128-2, Bowu Avenue, Xinchong Street, Xinzhou District, Wuhan City, Hubei Province, 430000

Applicant after: Wuhan Sishengyuan Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 430000, No.16, Huangjiahu West Road, Hongshan District, Wuhan City, Hubei Province

Applicant before: Liu Hongtao

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant