CN115991795B - 一种艾根多糖及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种艾根多糖及其制备方法和用途，该艾根多糖的单糖组成包括葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，且葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸的摩尔比为62.91:17.17:8.55:5.75:1.96:1.72:1.94。本发明艾根经渗漉脱脂，水提浓缩，再通过Sevag法脱蛋白、醇沉透析获得艾根多糖，其有效利用了传统药材的副产品，提高经济效益，且原料成本低；同时得到的艾根多糖具有优良的免疫调节活性和极低的毒性。

Description

一种艾根多糖及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于天然植物活性多糖领域，具体涉及一种艾根多糖及其制备方法和用途。
背景技术
多糖是由多个单糖分子通过糖苷键相互连接而成的聚合物，广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物的细胞壁中。多糖因其来源广泛，结构与活性多样，毒副作用小而成为天然药物、膳食补充剂和化妆品原料研究的热点。如茯苓多糖、香菇多糖、银耳多糖、枸杞多糖等，这类多糖对人体的免疫功能有调节作用，能激活免疫受体，提高机体的免疫功能；且不同多糖由于结构的多样性其功能也不同。但多糖分离和纯化难度较大、结构复杂，研究与开发门槛高，使其在健康产业中的应用受到限制。
艾根为菊科蒿属多年生草本植物艾(Artemisia argyi Levl.et Vant)的根，在我国大多数地区均有出产，为种植艾叶药材的副产品，植物资源丰富；目前对艾叶的利用较为广泛，如制备艾灸条，提取艾叶黄酮、多糖或精油，但是对艾根的利用相对少一些，民间有用作滋补品来煲汤，但该部位的药用和食疗价值尚未得到充分认识和开发，需要进行深入研究，特别是未见艾根多糖及其提取和利用的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术不足，提供一种艾根多糖及其制备方法和用途，增加多糖种类，且该艾根多糖具有增强动物免疫力的作用。
为达到上述技术目的，本发明的技术方案提供一种艾根多糖：该艾根多糖的单糖组成包括葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，且葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸的摩尔比为62.91:17.17:8.55:5.75:1.96:1.72:1.94。
进一步地，艾根多糖的主成分的重均分子量为5.9kDa。
本发明还提供一种艾根多糖的制备方法的技术方案，包括以下步骤：
S1，艾根经渗漉法处理得到艾根残渣，干燥得到艾根残渣粉；
S2，艾根残渣粉加水提取、过滤、合并滤液以及浓缩，得到艾根粗多糖浓缩液；
S3，艾根粗多糖浓缩液经Sevag法脱蛋白，再经过醇沉处理收集沉淀物，沉淀物加水溶解后进行透析处理，将透析处理所得产物干燥，得到艾根多糖。
进一步地，步骤S1中，所述渗漉法处理是先将艾根烘干至恒重，粉碎得到艾根粗粉，再用90％以上的乙醇渗漉处理，渗漉时间为10～14h，重复5～7次，得到艾根残渣。
进一步地，步骤S2中，所述提取是向艾根残渣粉中加蒸馏水加热提取，艾根干重和蒸馏水的比例为1kg：(8～15)L；提取温度为80～90℃，提取2～4次，每次提取1～2h。
进一步地，步骤S2中，所述浓缩是浓缩至滤液原体积的1/12～1/8。
进一步地，步骤S3中，所述Sevag法脱蛋白的具体操作为：向艾根粗多糖溶液中加入Sevag试剂混匀后静置，弃去有机相，重复至液面交界处无白色混悬物。
进一步地，步骤S3中，醇沉处理是向Sevag法脱蛋白得到的艾根粗多糖提取液中加入乙醇，至乙醇终浓度不低于80％，搅匀后于4℃静置过夜，收集沉淀物。
进一步地，步骤S3中，透析处理是采用截留分子量为500Da的透析袋，透析时间为20～48h，在透析后2～4h、6～8h和10～14h时更换蒸馏水，在最后一次更换透析液后再至少进行2h的透析。
进一步地，步骤S3中，透析处理所得产物经D354离子交换树脂脱色再进行冷冻干燥。
如上所述艾根多糖在制备抗肿瘤药物中的用途。
进一步地，所述抗肿瘤药物为抗肝癌、卵巢癌或结肠癌的药物。
如上所述艾根多糖在制备增强化疗后免疫力药物中的用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
本发明艾根经渗漉脱脂，水提浓缩，再通过Sevag法脱蛋白、醇沉透析，获得艾根多糖，其有效利用了传统药材的副产品，提高经济效益，且原料成本低；本发明所得到的艾根多糖作为植物多糖类成分，经研究发现具有优良的免疫调节活性和极低的毒性，肿瘤细胞增殖实验发现其对肿瘤细胞有较好的抑制作用，对正常细胞无毒性作用。本发明艾根多糖具有较好的市场应用前景和开发价值。
附图说明
图1为本发明艾根多糖AARP的单糖组成色谱图(1.甘露糖，2.鼠李糖，3.葡萄糖醛酸，4.半乳糖醛酸，5.葡萄糖，6.半乳糖，7.木糖，8.阿拉伯糖)。
图2为两个艾根均一组分多糖的高效凝胶渗透色谱图(HPGPC)及单榶组成图。
图3为本发明艾根多糖AARP对HEK293细胞毒性(A)和抑制肿瘤(卵巢癌(B)、肝癌细胞(C)、和结肠癌细胞(D)的增殖结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明制备艾根多糖的步骤包括：
(1)艾根预处理：鲜艾根于50～60℃烘干至恒重，粉碎后得到艾根粗粉。
(2)艾根粗粉脱脂及去除黄酮等小分子物质后得到艾根残渣。
(3)将艾根残渣置于真空干燥箱50～60℃干燥，或者阴凉处室温自然晾干得艾根残渣粉；干燥后的艾根残渣粉置于圆底烧瓶中，加入蒸馏水加热回流提取1～3h，重复提取2～4次，过滤，合并滤液，用闪式蒸发器浓缩滤液至原体积1/12～1/8，即得艾根粗多糖浓缩液。
(4)艾根粗多糖浓缩液经Sevag法脱蛋白后，得到艾根粗多糖提取液；加入适量乙醇至终浓度不低于80％，搅匀后于4℃静置过夜，收集沉淀物，以无水乙醇洗涤后加入适量蒸馏水溶解，透析以除尽小分子物质。
(5)透析后的艾根粗多糖溶液过D354离子交换树脂色谱柱脱色，用蒸馏水1BV/h的流速洗脱直至硫酸蒽酮检测无明显颜色变化，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥即得艾根多糖AARP。
作为优选，步骤(2)脱脂及去除黄酮等小分子物质，具体为艾根粗粉装入滤袋置于渗漉桶中，加体积浓度在90％以上的乙醇没过药材，渗漉时间为10～14h，重复5～7次。
作为优选，步骤(3)中加热提取时，蒸馏水的量为艾根干重的8～15倍，提取温度为80～90℃，提取2～4次，每次提取1～2h。
作为优选，步骤(3)中闪蒸浓缩比为12:1-8:1。
作为优选，步骤(4)中Sevag法脱蛋白的具体操作为：艾根粗多糖溶液按1:1(v/v)加入Sevag试剂混匀后静置60min，弃去有机相，重复至少5次，至液面交界处无白色混悬物；Sevag试剂由氯仿及正丁醇按体积比4：1配制。
作为优选，步骤(4)中醇沉的具体操作为：在艾根粗多糖提取液中加入3-5倍体积乙醇，充分搅拌，4℃过夜，3000g离心10min。
作为优选，步骤(4)中透析袋的截留分子量为500Da，蒸馏水中透析时间为20～48h，在透析后2～4h，6～8h和10～14h更换蒸馏水，在最后一次更换透析液后再至少进行2h的透析。
作为优选，本发明使用成本较低的D354离子交换树脂进行脱色，可大大减轻后继纯化步骤中DEAE离子交换树脂的使用寿命，提高多糖品相、降低纯化成本。
下面通过具体的实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例1
一种艾根多糖的制备方法，包括的步骤如下：
(1)艾根于50～60℃烘干至恒重，粉碎后得到艾根粗粉。
(2)取艾根粗粉0.5kg装入滤袋置于渗漉桶中，加95％乙醇没过药材，渗漉时间为24h，重复7次，收集剩下的艾根残渣。
(3)艾根渣室温干燥后以10倍85℃热水浸提3次，每次2h，过滤，合并滤液。用闪式蒸发器浓缩滤液至原体积约1/10，即得艾根粗多糖浓缩液。
(4)粗多糖浓缩液按1:1(v/v)加入Sevag试剂(氯仿-正丁醇4:1)脱蛋白，充分振摇后静置，弃去有机相，重复至少5次，至液面交界处无白色混悬。脱蛋白后的粗多糖提取液中加入乙醇至终浓度不低于80％，充分搅拌，4℃过夜，3000g离心10min，收集沉淀物以适量蒸馏水溶解，选用截留分子量为500Da的透析袋在蒸馏水中透析48h，期间在透析后2-4h，6-8h和10-14h更换蒸馏水，在最后一次更换透析液后再进行至少2h的透析。于D354弱碱性阴离子交换树脂脱色，用蒸馏水1BV·h-1的流速洗脱直至硫酸蒽酮检测无明显颜色变化，收集洗脱液减压浓缩至小体积后冷冻干燥，即得艾根多糖AARP，得率约为10.35％(按艾根干重计)。
实施例2
一种艾根多糖的制备方法，包括的步骤如下：
(1)艾根于50～60℃烘干至恒重，粉碎后得到艾根粗粉。
(2)取艾根粗粉1kg装入滤袋置于渗漉桶中，加95％乙醇没过药材，渗漉时间为24h，重复7次，收集剩下的艾根残渣。
(3)将艾根残渣置于干燥箱50～60℃干燥，干燥得到的艾根残渣粉置于25L圆底烧瓶，加入15L蒸馏水，加热回流提取，过滤，收集滤液，提取3次(第二、三次加水量均为8L)，每次2h，滤过，合并滤液。用闪式蒸发器浓缩滤液至原体积约1/8，即得艾根粗多糖浓缩液。
(4)艾根粗多糖浓缩液按1:1(v/v)加入Sevag试剂(氯仿-正丁醇4:1)脱蛋白，充分振摇后静置，弃去有机相，重复至少5次，至液面交界处无白色混悬。脱蛋白后的粗多糖提取液中加入乙醇至终浓度不低于80％，充分搅拌，4℃过夜，3000g离心10min，收集沉淀物，加入适量蒸馏水溶解，选用截留分子量为1000Da的透析袋在蒸馏水中透析48h，期间在透析后2-4h，6-8h和10-14h更换蒸馏水，在最后一次更换透析液后再至少进行2h的透析。除尽小分子物质后冷冻干燥，即得艾根多糖AARP，得率约为13.5％(按艾根干重计)。
实施例3
一种艾根多糖的制备方法，包括的步骤如下：
(1)艾根于50～60℃烘干至恒重，粉碎后得到艾根粗粉。
(2)取艾根粗粉0.5Kg装入滤袋置于渗漉桶中，加95％乙醇没过药材，渗漉时间为24h，重复7次，收集剩下的艾根残渣。
(3)将艾根残渣置于干燥箱50～60℃干燥，干燥得到的艾根残渣粉置于25L圆底烧瓶，加入7.5L蒸馏水，加热回流提取2次，每次2h，过滤合并滤液。用闪式蒸发器浓缩滤液至约原体积约1/12，即得艾根粗多糖浓缩液。
(4)粗多糖浓缩液中加入乙醇至终浓度不低于80％，充分搅拌，4℃过夜，抽滤收集沉淀物，加入适量蒸馏水溶解后按1:1(v/v)加入Sevag试剂(氯仿-正丁醇4:1)脱蛋白，充分振摇后静置，弃去有机相，重复至少5次，至液面交界处无白色混悬。水相选用截留分子量为1000Da的透析袋在蒸馏水中透析48h，期间在透析后2-4h，6-8h和10-14h更换蒸馏水，在最后一次更换透析液后再进行至少2h的透析。除尽小分子物质后冷冻干燥，即得艾根多糖AARP，得率约为12.1％。
测试例1
通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生-HPLC测定法测定艾根多糖AARP的单糖组成。
结果如图1所示，其中1为甘露糖，2为鼠李糖，3为葡萄糖醛酸，4为半乳糖醛酸，5为葡萄糖，6为半乳糖，7为木糖，8为阿拉伯糖。其中木糖含量很少，可忽略不计，为了方便表示，本发明艾根多糖(AARP)主要为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸以摩尔比62.91:17.17:8.55:5.75:1.96:1.72:1.94组成；主成分的保留时间为24.39min，重均分子质量为5.9kDa。
测试例2
为了进一步分析本发明实施例1所得艾根多糖的组成，将其通过以下步骤进行进一步纯化分离。
(1)取AARP溶于蒸馏水中，9000g离心5min，取上清液上样于DEAE Bestarose FF层析柱上样浓度为150mg～200mg/ml，流速为1.2～1.5ml/min。依次用蒸馏水和0.05mol/L的NaCl溶液洗脱，用自动收集器收集洗脱液，共收集36管，用硫酸蒽酮法检测，收集合并有显色反应的试管，冷冻干燥，发现水洗脱的中性多糖为AARP的主要成分。
(2)将水洗部分洗脱液减压浓缩后，冷冻干燥得到艾根中性多糖，该中性多糖以蒸馏水溶解，离心取上清过Sephacryl S-100HR层析柱以蒸馏水1.2～1.5ml/min洗脱，自动收集器收集洗脱液，硫酸蒽酮法检测流份，收集合并有显色反应的试管，冷冻干燥，得到2个分子量均一的组分，经HPGPC检测为两个重均分子量分别约为6kDa和5kDa的多糖组分AARP1和AARP2，如图2所示。
对本发明制得的中性均一多糖进行单糖组成分析，单糖组成分别为甘露糖：葡萄糖：半乳糖＝1.65：94.42：3.93和甘露糖：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖＝3.87：73.88：20.72：1.53。
将本发明所得多糖组分AARP1和AARP2的单糖组成与参考文献(ZL202111052426.8，一种艾叶多糖在调节人体肠道菌群结构中的应用)中四种艾叶多糖(ASP00、ASP01、ASP02和ASP05)进行对比，结果如下表1所示。
表1本发明艾根多糖与参考文献中艾叶多糖的对比
阿拉伯糖Ara 半乳糖Gal 葡萄糖Glu 甘露糖Man 鼠李糖Rha
ASP00 1 3.66 8.55 2.97 /
ASP01 2.11 21.06 9.54 1 /
ASP02 3.14 8.99 1.84 1 /
ASP05 1.76 14.02 4.53 1 1.22
AARP1 / 3.93 94.42 1.65 /
AARP2 1.53 20.72 73.88 3.87 /
由表1可知，由于本发明艾根多糖AARP中的酸性多糖含量较低，经过DEAEBestarose FF层析柱以及Sephacryl S-100HR层析柱分离纯化后，得到的两个均一组分多糖AARP1和AARP2中均为中性多糖；同时由本发明检测出的单糖组成与参考文献对比结果可知，本发明艾根多糖与参考文献中的艾叶多糖组成完全不同，葡萄糖的含量相对较高，因此本发明提供了一种全新的多糖。
测试例3
对本发明实施例1制得的艾根多糖AARP进行免疫活性实验。
1实验分组和给药
雄性昆明小鼠(5-6周龄，体重30～35g，购自湖北省医学实验动物中心，许可证号SCXK(鄂)2020-0018)按体重随机分4组，每组6只。设正常组、模型组和多糖低、高剂量组。低、高剂量组分别给予200和600mg/kg艾根多糖灌胃，连续20d。正常组和模型组每日灌胃0.4ml(等体积)生理盐水，连续20d。给药15d后按以下方法建立环磷酰胺免疫抑制小鼠模型。
2免疫抑制小鼠模型
模型组、多糖低、高剂量组分别于第16、17、18、19天腹腔注射环磷酰胺80mg/kg，正常组按相同方法注射等体积生理盐水。实验期间小鼠自由饮食。最后一次给药后，小鼠禁食12h，自由饮水。
3碳廓清实验
末次腹腔注射后，称重，每只小鼠尾静脉注射1:4倍稀释的印度墨汁，注入墨汁后立即计时，分别在第5min(t1)、15min(t2)从小鼠眼底静脉丛取血20μl，并立即置于2ml的0.1％Na2CO3溶液中，用酶标仪在600nm波长处测吸光度值OD1、OD2，计算清除指数K。处死小鼠取肝脏、脾脏及胸腺称重，计算脾指数、胸腺指数及吞噬指数α。按如下公式(1)-(4)计算清除指数K，吞噬指数α以及其它指数。
K＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1) (1)
脾指数＝脾重/体重 (3)
胸腺指数＝胸腺重/体重 (4)
计算器官指数，相关指数见表2。
表2本发明多糖对免疫低下小鼠器官指数的影响
与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。
由表2可知，与正常组比较，模型组器官指数、清除指数K和吞噬指数α均显著降低，表明环磷酰胺对小鼠的免疫系统产生明显损害，给予艾根多糖干预后其免疫低下状态均得到明显恢复，且高剂量组效果略好于低剂量组，说明艾根多糖对化疗药物造成的小鼠免疫低下有良好的恢复能力。
3细胞毒性实验
在37℃、5％ CO2条件下，将HEK293T细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养。调整细胞浓度至8×104/ml，每孔100μl。给药组浓度分别为10、100、500、1000μg/ml，空白组为PBS，每组设三个复孔，96孔板混匀后培养24h，进行CCK-8实验，用酶标仪在波长450nm处测定吸光值，参见图3，在293T细胞体系下，与空白组相比，不同浓度给药组均无显著性差异，说明艾根多糖对正常细胞无毒性作用。
4、抑制肿瘤细胞增殖实验
在37℃、5％ CO2条件下，将人肝癌细胞HepG2、人卵巢癌细胞A2780和人结肠癌细胞HCT116用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养。分别调整细胞浓度至6×104、5×104、4×104个/ml，每孔100μl。给药组浓度分别为10、100、500、1000μg/ml，空白组为PBS，每组设三个复孔，96孔板混匀后培养24h，CCK-8法检测细胞增殖率，用酶标仪在波长450nm处测定吸光值，按公式“抑制率＝(A空-A样)/A空”计算细胞增殖抑制率，参见图3，与空白组相比，不同浓度艾根多糖对人肝癌细胞HepG2、人卵巢癌细胞A2780和结肠癌细胞HCT116呈现浓度依耐性的抑制活性；对肝癌HepG2、卵巢癌A2780、结肠癌HCT116细胞半抑制浓度(IC50)分别为489.0、510.7和866.5μg·mL-1。
本发明公开了一种活性艾根多糖及其制备方法和用途。其过程为艾根粗粉经乙醇渗漉脱脂，Sevag法脱蛋白、水提醇沉，D354树脂脱色、冻干后获得艾根多糖(AARP)。具体包括如下步骤：(1)艾根预处理：鲜艾根于50～60℃烘干至恒重，粉碎后以乙醇渗漉去除脂质等小分子物质，干燥箱烘干或阴凉处自然晾干得艾根残渣粉。(2)艾根多糖的制备：艾根残渣粉以8～15倍(质量体积比，kg/L)85℃热水浸提2-3次，每次1～2h，过滤，合并滤液，减压浓缩即得艾根粗多糖浓缩液。经Sevag法脱蛋白后加入乙醇至终浓度不低于80％，搅匀后于4℃静置过夜，收集沉淀物，加入适量蒸馏水溶解，以截止分子量500Da的透析袋透析除尽小分子物质，水溶液过D354离子交换树脂柱脱色后冷冻干燥后即得艾根多糖AARP，得率在10.35～13.5％。该多糖主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸以摩尔比62.91:17.17:8.55:5.75:1.96:1.72:1.94组成。AARP经DEAE-Fastflow和Sephacryl S-100HR柱层析进一步纯化可得两个主要组分AARP1和AARP2，分子量分别为6kDa和5kDa，本发明制得的艾根多糖AARP具有良好的免疫调节和抗肿瘤活性；药理实验证明，本发明艾根多糖具有增强动物免疫力的作用，可作为人体非特异性免疫增强剂，亦可作为保健食品或药品原料用于免疫低下或肿瘤化疗患者的辅助治疗。
以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。

Claims (4)

1.一种艾根多糖，其特征在于，所述艾根多糖的单糖组成包括葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，且葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸的摩尔比为62.91:17.17:8.55:5.75:1.96:1.72:1.94；
所述艾根多糖的主成分的重均分子量为5.9 kDa；
所述艾根多糖的制备方法包括以下步骤：
S1，艾根经渗漉法处理得到艾根残渣，干燥得到艾根残渣粉；
S2，艾根残渣粉加水提取、过滤、合并滤液以及浓缩，得到艾根粗多糖浓缩液；
S3，艾根粗多糖浓缩液经Sevag法脱蛋白，再经过醇沉处理收集沉淀物，沉淀物加水溶解后进行透析处理，将透析处理所得产物干燥，得到艾根多糖；
步骤S1中，所述渗漉法处理是先将艾根烘干至恒重，粉碎得到艾根粗粉，再用90%以上的乙醇渗漉处理，渗漉时间为10～14h，重复5～7次，得到艾根残渣；
步骤S2中，所述提取是向艾根残渣粉中加蒸馏水加热提取，艾根干重和蒸馏水的比例为1kg：（8～15）L；提取温度为80～90℃，提取2～4次，每次提取1～2h；所述浓缩是浓缩至滤液原体积的1/12～1/8；
步骤S3中，所述Sevag法脱蛋白的具体操作为：向艾根粗多糖溶液中加入Sevag试剂混匀后静置，弃去有机相，重复至液面交界处无白色混悬物；醇沉处理是向Sevag法脱蛋白后艾根粗多糖提取液中加入乙醇，至乙醇终浓度不低于80%，搅匀后于4℃静置过夜，收集沉淀物；透析处理是采用截留分子量为500 Da的透析袋，透析时间为20～48h，在透析后2～4h、6～8h和10～14h时更换蒸馏水，在最后一次更换透析液后再至少进行2h的透析。
2.一种艾根多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，艾根经渗漉法处理得到艾根残渣，干燥得到艾根残渣粉；
S2，艾根残渣粉加水提取、过滤、合并滤液以及浓缩，得到艾根粗多糖浓缩液；
S3，艾根粗多糖浓缩液经Sevag法脱蛋白，再经过醇沉处理收集沉淀物，沉淀物加水溶解后进行透析处理，将透析处理所得产物干燥，得到艾根多糖；
步骤S1中，所述渗漉法处理是先将艾根烘干至恒重，粉碎得到艾根粗粉，再用90%以上的乙醇渗漉处理，渗漉时间为10～14h，重复5～7次，得到艾根残渣；
步骤S2中，所述提取是向艾根残渣粉中加蒸馏水加热提取，艾根干重和蒸馏水的比例为1kg：（8～15）L；提取温度为80～90℃，提取2～4次，每次提取1～2h；所述浓缩是浓缩至滤液原体积的1/12～1/8；
步骤S3中，所述Sevag法脱蛋白的具体操作为：向艾根粗多糖溶液中加入Sevag试剂混匀后静置，弃去有机相，重复至液面交界处无白色混悬物；醇沉处理是向Sevag法脱蛋白后艾根粗多糖提取液中加入乙醇，至乙醇终浓度不低于80%，搅匀后于4℃静置过夜，收集沉淀物；透析处理是采用截留分子量为500 Da的透析袋，透析时间为20～48h，在透析后2～4h、6～8h和10～14h时更换蒸馏水，在最后一次更换透析液后再至少进行2h的透析。
3.如权利要求1所述艾根多糖在制备抗肿瘤药物中的用途。
4.如权利要求1所述艾根多糖在制备增强化疗后免疫力药物中的用途。
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