CN113061195A - 一种具有降血脂作用的复合多糖及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有降血脂作用的复合多糖及其制备方法和应用。所述复合多糖总糖含量为97.87～101.87％，平均分子量是3.5～4.0×104Da，由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖按照摩尔质量比93.6～94.8:2.70～2.73:2.70～2.73:0.50～0.51:0.50～0.51组成。制备方法是山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓依次经过粉碎、蒸汽爆破，混合均匀后依次通过水提、浓缩、醇沉、透析、冷冻干燥、反复冻融法除蛋白、Sephadex G‑75凝胶层析柱分离纯化得到复合多糖纯品。本发明制备的复合多糖纯度高、降血脂活性强，提取工艺简便、成本低廉、可操作性强，避免大量有毒有机溶剂的使用对环境和人体的伤害。可广泛应用于药物、保健食品等行业中，同时也可作为中间体广泛运用于降血脂各个领域中，具有良好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于药物及保健食品领域，具体涉及一种具有降血脂作用的复合多糖及其分离纯化制备方法和应用，尤其是一种具有降血脂活性的复合多糖及其分离纯化制备方法和应用。
背景技术
高脂血症与心血管疾病的病理生理关系密切，能够加剧和加速动脉粥样硬化病变进程，对全世界人类健康产生巨大威胁(缩短寿命、死亡率高等)。改变饮食和服用降脂药物均可以调节脂质代谢，降低血脂，进而治疗高脂血症。然而，降脂药物(烟酸、他汀类和贝特类)具有肝炎、外源性皮疹和便秘等副作用。植物源多糖是兼具降血脂功能和安全性的生物活性成分，探索其对高脂血症及其相关并发症的预防具有重要意义。
多糖类化合物是由10个以上单糖通过苷键连接而成的聚糖，是植物重要的一类初级代谢产物，广泛存在于中草药、水果、蔬菜、菌类、藻类等许多食源性植物中。近三十年的研究表明，多糖具有降血脂、抗氧化、抗菌、抗病毒、调节免疫系统、抗肿瘤、降血糖等多种生物活性，在医药、保健食品等领域极具应用前景。
中草药山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞以及茯苓，既是食品也是药品，属于药食同源物质。复合多糖由两种或两种以上多糖组分复配而成，其具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、增强免疫功能等多种药理活性。针对来源于上述药食同源物质的单一多糖结构和生物活性已开展大量的研究工作，但药食同源复合多糖分离纯化及其降血脂活性研究还未见报道。而且大部分的复合多糖制备都是先分别制备每种成分的多糖提取物再进行混合，制备方法复杂，操作麻烦。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复合多糖的分离纯化制备方法，实现对复合多糖的进一步分离纯化，获得具有高降血脂活性的复合多糖的纯品。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案，
一种具有降血脂作用的复合多糖总糖含量为97.87～101.87％，平均分子量是3.5～4.0×104Da。
优选的，复合多糖由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖按照摩尔质量比93.6～94.8:2.70～2.73:2.70～2.73:0.50～0.51:0.50～0.51组成。
一种具有降血脂作用的复合多糖的制备方法，包含如下步骤：
(1)粉碎：将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓分别于60℃烘干至恒重，放入粉碎机中，以30000～50000r/min的转速粉碎1～5分钟，分别获得粉碎细度为50～300目的山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉，备用；
(2)蒸汽爆破：将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉分别在室温下复水，加蒸馏水调节各原料粗粉含水率为5～30％，浸泡时间6～12h，然后放入物料仓进行蒸汽爆破，汽爆压力0.5～2.5MPa，保压时间30～150s，接着于60℃烘干至恒重，得到山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉，备用；
(3)水提：将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉混合均匀后，加入蒸馏水，并且超声处理，加水体积是原料量的5～40倍v/m，提取次数1～5次，超声功率100～500w，超声温度40～80℃，超声时间30～70min，然后真空抽滤，接着在滤液中加入果胶酶处理，随后于95℃灭活5min，获得无果胶的滤液A；
(4)浓缩：将步骤(3)滤液A浓缩，浓缩温度50～60℃，得到浓缩液；
(5)醇沉：将步骤(4)浓缩液中加入无水乙醇至乙醇浓度为75～80％v/v，沉淀12～24h，于4500r/min离心15min，获得沉淀物；
(6)透析：将步骤(5)沉淀物用蒸馏水溶解，于3500r/min离心15min，收集上清液，并用Mw3500D的透析袋自来水透析48h，蒸馏水透析24h，得到透析液；
(7)冷冻干燥：将步骤(6)透析液于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间24～48h，获得复合粗多糖A；
(8)反复冻融法除蛋白：将步骤(7)复合粗多糖A用蒸馏水溶解后，于-20℃冷冻，然后室温溶解，接着于4000～4500r/min离心10～15min，反复冻融3～5次，收集上清液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间24～48h，获得复合粗多糖B；
(9)Sephadex G-75凝胶层析柱的分离纯化：将步骤(8)复合粗多糖B溶于蒸馏水后，于4000～4500r/min离心10～15min，然后上Sephadex G-75凝胶层析柱，进行洗脱，分步收集，洗脱液用苯酚-硫酸法测定吸光度，绘制洗脱曲线，洗脱得到一个洗脱峰，将该洗脱峰的洗脱液透析、真空冷冻干燥后，获得复合多糖CPS-1。
优选的，步骤(3)将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉，按照质量比4:2:2:1.5:1:1混合。
优选的，步骤(3)使用0.2％果胶酶于50℃处理2h。
优选的，步骤(4)浓缩至浓缩前体积的1/5。
优选的，步骤(9)采用超纯水进行洗脱，流速为2.0mL/min，10mL/管。
一种复合多糖CPS-1在制备具有降血脂作用的药物或保健食品中的应用。
本发明的优点和有益效果：
1、本发明实现对复合多糖的进一步分离纯化，获得总糖含量为97.87～101.87％，平均分子量是3.5～4.0×104Da，由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖按照摩尔质量比93.6～94.8:2.70～2.73:2.70～2.73:0.50～0.51:0.50～0.51组成的复合多糖纯品。该复合多糖具有高的降血脂活性，能够显著减轻高脂模型小鼠体重20.47％和肝脏重量33.12％，提高血清中HDL-C水平43.40％，减少血清中TC含量32.52％、TG含量57.38％、LDL-C含量48.99％和LPS活力48.53％，增加肝脏中LPL活力99.07％和HL活力85.01％。
2、本发明提取工艺简便、成本低廉、可操作性强，避免大量有毒有机溶剂的使用对环境和人体的伤害。分离纯化获得的复合多糖可广泛应用于药物、保健食品等行业中，同时也可作为中间体广泛运用于降血脂各个领域中，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1为实施例1复合粗多糖B经Sephadex G-75的洗脱曲线图；
图2为实施例1复合多糖CPS-1的紫外光谱图；
图3为实施例1复合多糖CPS-1的高效凝胶渗透色谱图；
图4为实施例1复合多糖CPS-1的高效气相色谱图；
图5为实施例1复合多糖CPS-1的傅里叶红外光谱图；
图6为实施例1复合多糖CPS-1的核磁共振氢谱图；
图7为实施例1复合多糖CPS-1的核磁共振碳谱图。
具体实施方式
本发明公开了一种具有降血脂活性的复合多糖及其分离纯化制备方法和应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓分别于60℃烘干至恒重，放入粉碎机中，以42000r/min的转速粉碎3分钟，分别获得粉碎细度为100目的山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉。
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉分别在室温下复水，加蒸馏水调节各原料粗粉含水率为15％，浸泡时间12h，然后放入物料仓进行蒸汽爆破，汽爆压力2.0MPa，保压时间90s，接着于60℃烘干至恒重，得到山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉。
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉，按照质量比4:2:2:1.5:1:1混合均匀后，加入蒸馏水，并且超声处理，加水体积是原料量的30倍v/m，提取次数3次，超声功率400w，超声温度65℃，超声时间45min，然后真空抽滤，接着在滤液中加入0.2％果胶酶于50℃处理2h，随后于95℃灭活5min，获得无果胶的滤液A。
将滤液A浓缩，浓缩温度55℃，浓缩至浓缩前体积的1/5，得到浓缩液，然后加入无水乙醇至乙醇浓度为80％v/v，沉淀24h，于4500r/min离心15min，获得沉淀物，接着用蒸馏水溶解，于3500r/min离心15min，收集上清液，并用Mw3500D的透析袋自来水透析48h，蒸馏水透析24h，得到透析液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间48h，获得复合粗多糖A。
将步骤复合粗多糖A用蒸馏水溶解后，于-20℃冷冻，然后室温溶解，接着于4500r/min离心15min，反复冻融3次，收集上清液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间48h，获得复合粗多糖B。
将复合粗多糖B溶于蒸馏水后，于4500r/min离心15min，然后上Sephadex G-75凝胶层析柱，采用超纯水进行洗脱，流速为2.0mL/min，10mL/管，分步收集，洗脱液用苯酚-硫酸法测定吸光度，绘制洗脱曲线，洗脱得到一个洗脱峰，将该洗脱峰的洗脱液透析、真空冷冻干燥后，获得复合多糖CPS-1。运用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定复合多糖CPS-1的平均分子量为38726Da。得到的复合多糖总糖含量为101.87％，由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖按照摩尔质量比93.6:2.70:2.72:0.50:0.50组成。
实施例2
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓分别于60℃烘干至恒重，放入粉碎机中，以50000r/min的转速粉碎1分钟，分别获得粉碎细度为300目的山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉。
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉分别在室温下复水，加蒸馏水调节各原料粗粉含水率为30％，浸泡时间12h，然后放入物料仓进行蒸汽爆破，汽爆压力2.5MPa，保压时间150s，接着于60℃烘干至恒重，得到山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉。
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉，按照质量比4:2:2:1.5:1:1混合均匀后，加入蒸馏水，并且超声处理，加水体积是原料量的5倍v/m，提取次数1次，超声功率100w，超声温度80℃，超声时间30min，然后真空抽滤，接着在滤液中加入0.2％果胶酶于50℃处理2h，随后于95℃灭活5min，获得无果胶的滤液A。
将滤液A浓缩，浓缩温度60℃，浓缩至浓缩前体积的1/5，得到浓缩液，然后加入无水乙醇至乙醇浓度为80％v/v，沉淀24h，于4500r/min离心15min，获得沉淀物，用蒸馏水溶解，于3500r/min离心15min，收集上清液，并用Mw3500D的透析袋自来水透析48h，蒸馏水透析24h，得到透析液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间24h，获得复合粗多糖A。
将复合粗多糖A用蒸馏水溶解后，于-20℃冷冻，然后室温溶解，接着于4500r/min离心15min，反复冻融5次，收集上清液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间48h，获得复合粗多糖B；
将复合粗多糖B溶于蒸馏水后，于4500r/min离心15min，然后上Sephadex G-75凝胶层析柱，采用超纯水进行洗脱，流速为2.0mL/min，10mL/管，分步收集，洗脱液用苯酚-硫酸法测定吸光度，绘制洗脱曲线，洗脱得到一个洗脱峰，将该洗脱峰的洗脱液透析、真空冷冻干燥后，获得复合多糖CPS-1。运用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定复合多糖CPS-1的平均分子量为38000Da，复合多糖总糖含量为97.87％，复合多糖由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖按照摩尔质量比94.8:2.73:2.73:0.51:0.51组成。
实施例3
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓分别于60℃烘干至恒重，放入粉碎机中，以30000r/min的转速粉碎5分钟，分别获得粉碎细度为50目的山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉。
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉分别在室温下复水，加蒸馏水调节各原料粗粉含水率为5％，浸泡时间6h，然后放入物料仓进行蒸汽爆破，汽爆压力0.5MPa，保压时间50s，接着于60℃烘干至恒重，得到山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉。
将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉，按照质量比4:2:2:1.5:1:1混合均匀后，加入蒸馏水，并且超声处理，加水体积是原料量的40倍v/m，提取次数5次，超声功率500w，超声温度80℃，超声时间30min，然后真空抽滤，接着在滤液中加入0.2％果胶酶于50℃处理2h，随后于95℃灭活5min，获得无果胶的滤液A。
将滤液A浓缩，浓缩温度50℃，浓缩至浓缩前体积的1/5，得到浓缩液，然后加入无水乙醇至乙醇浓度为75％v/v，沉淀24h，于4500r/min离心15min，获得沉淀物，用蒸馏水溶解，于3500r/min离心15min，收集上清液，并用Mw3500D的透析袋自来水透析48h，蒸馏水透析24h，得到透析液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间48h，获得复合粗多糖A。
将复合粗多糖A用蒸馏水溶解后，于-20℃冷冻，然后室温溶解，接着于4000r/min离心10min，反复冻融3次，收集上清液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间48h，获得复合粗多糖B；
将复合粗多糖B溶于蒸馏水后，于4000r/min离心10min，然后上Sephadex G-75凝胶层析柱，采用超纯水进行洗脱，流速为2.0mL/min，10mL/管，分步收集，洗脱液用苯酚-硫酸法测定吸光度，绘制洗脱曲线，洗脱得到一个洗脱峰，将该洗脱峰的洗脱液透析、真空冷冻干燥后，获得复合多糖CPS-1。运用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定复合多糖CPS-1的平均分子量为37850Da，复合多糖总糖含量为98.98％，复合多糖由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖按照摩尔质量比94.8:2.72:2.70:0.51:0.50组成。
实施例4
利用本发明实施例1制备的复合多糖降血脂活性的实验方法：
将所有小鼠随机分组，每组10只，分为空白组、高脂模型组、阳性对照组(辛伐他汀3.33mg/kg)、复合低剂量组(50mg/kg)、复合中剂量组(100mg/kg)和复合高剂量组(200mg/kg)。小鼠适应环境一周后即开始试验，除空白组外其他各组均饲喂高脂饲料，30天后依据各组小鼠体重判断造模情况，然后根据试验设计喂食，继续灌胃30天，试验结束，取小鼠血清和肝脏进行降血脂相关指标体重、肝脏重量、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂肪酶(LPS)、总脂酶(LPL)检测。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠体重的影响作用
由表1可知，在连续给予高脂饲料30d后，与空白组相比，高脂模型组小鼠体重显著增加(P＜0.05)，增重了11.60％，这说明本试验小鼠高脂模型建立成功。继续给各组小鼠灌胃30d，各组小鼠体重变化如表1所示，阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠体重显著低于高脂模型组(P＜0.05)，差值分别为19.27％、11.01％、14.35％和20.47％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，复合多糖降低小鼠体重的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显降低髙脂饲料引起的体重増加。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠肝脏重量的影响作用
小鼠高脂模型建立成功后，继续给各组小鼠灌胃30d，解剖取出肝脏称重。复合多糖CPS-1对各组肝脏重量的影响如表1所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠肝脏重量显著低于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为23.38％、9.09％、25.32％和33.12％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖降低肝脏重量的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显减轻髙脂饲料引起的小鼠肝脏负担。
表1小鼠体重和肝脏重量(n＝10)
aP<0.05与模型组比较差异显著；bP<0.05与空白组比较差异显著。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠血清TC的影响作用
复合多糖CPS-1对各组TC水平的影响如表2所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠血清TC水平显著低于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为32.99％、21.71％、27.73％和32.52％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖降低血清TC水平的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显降低髙脂饲料引起的小鼠血清TC水平。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠血清TG的影响作用
复合多糖CPS-1对各组TG水平的影响如表2所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠血清TG水平显著低于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为58.65％、39.24％、49.38％和57.38％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖降低血清TG水平的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显降低髙脂饲料引起的小鼠血清TG水平。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠血清HDL-C的影响作用
复合多糖CPS-1对各组HDL-C水平的影响如表2所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠血清HDL-C水平显著高于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为18.08％、13.92％、23.69％和43.40％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖提高血清HDL-C水平的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显提高髙脂饲料引起的小鼠血清HDL-C水平。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠血清LDL-C的影响作用
复合多糖CPS-1对各组LDL-C水平的影响如表2所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠血清LDL-C水平显著低于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为50.34％、23.49％、36.91％和48.99％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖降低血清LDL-C水平的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比有显著性差异(P<0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显降低髙脂饲料引起的小鼠血清LDL-C水平。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠血清LPS活力的影响作用
复合多糖CPS-1对各组LPS活力水平的影响如表2所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠血清LPS活力水平显著低于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为54.13％、18.93％、44.00％和48.53％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖降低血清LPS活力水平的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显降低髙脂饲料引起的小鼠血清LPS活力水平。
表2血清TC、TG、HDL-C、LDL-C和LPS水平(n＝10)
aP<0.05与模型组比较差异显著；bP<0.05与空白组比较差异显著。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠肝脏LPL活力的影响作用
复合多糖CPS-1对各组LPL水平的影响如表3所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠肝脏LPL水平显著高于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为116.81％、62.64％、99.07％和126.15％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖提高肝脏LPL水平的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显提高髙脂饲料引起的小鼠肝脏LPL水平。
复合多糖CPS-1对高脂模型小鼠肝脏HL活力的影响作用
复合多糖CPS-1对各组HL水平的影响如表3所示。阳性药物对照组、复合低剂量组、复合中剂量组、复合高剂量组小鼠肝脏HL水平显著高于高脂模型组(P<0.05)，差值分别为80.72％、30.04％、66.45％和85.01％。随着复合多糖CPS-1喂食剂量的增加，多糖提高肝脏HL水平的效果越好，复合多糖CPS-1高剂量组与阳性药物对照组相比无显著性差异(P>0.05)。这说明复合多糖CPS-1能明显提高髙脂饲料引起的小鼠肝脏HL水平。
表4-3小鼠肝脏LPL和HL活力(n＝10)
aP<0.05与模型组比较差异显著；bP<0.05与空白组比较差异显著。
本发明中所述山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓是本领域技术人员公知的，可以通过商业途径购买得到，可以为药材，也可以是饮片，只要其符合《中华人民共和国药典》(2020年版)质量标准即可。
本发明所述复合多糖的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括使用者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、使用时间、代谢速率、病程严重程度以及主治医师的主观判断。本领域的技术人员依据上述因素可以确定所述复合多糖的使用剂量和使用方法。
本领域技术人员可以根据不同使用者的需求将本发明所述复合多糖加入制备不同剂型时所需的各种常规的添加剂，如崩解剂、润滑剂、乳化剂、粘合剂等，以常规制剂方法，制成常用药物或保健食品，如胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、粉剂、颗粒剂、散剂等。
本发明提供了一种具有降血脂作用的保健食品，包括有效量的本发明所述复合多糖和保健食品中可接受的辅料。
所述保健食品优选为胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、散剂或口服液。
本发明还提供了一种具有降血脂作用的药物，包括有效量的本发明所述复合多糖和药学上可接受的辅料。
所述药物优选为胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、散剂或口服液。
所述一种具有降血脂活性的复合多糖在降血脂活性领域的应用，特别用于降血脂活性保健食品和药物领域。
Claims (8)
1.一种具有降血脂作用的复合多糖，其特征在于，所述复合多糖总糖含量为97.87～101.87％，平均分子量是3.5～4.0×104Da。
2.根据权利要求1所述的一种具有降血脂作用的复合多糖，其特征在于，所述复合多糖由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖按照摩尔质量比93.6～94.8:2.70～2.73:2.70～2.73:0.50～0.51:0.50～0.51组成。
3.权利要求1所述一种具有降血脂作用的复合多糖的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)粉碎：将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓分别于60℃烘干至恒重，放入粉碎机中，以30000～50000r/min的转速粉碎1～5分钟，分别获得粉碎细度为50～300目的山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉，备用；
(2)蒸汽爆破：将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓粗粉分别在室温下复水，加蒸馏水调节各原料粗粉含水率为5～30％，浸泡时间6～12h，然后放入物料仓进行蒸汽爆破，汽爆压力0.5～2.5MPa，保压时间30～150s，接着于60℃烘干至恒重，得到山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉，备用；
(3)水提：将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉混合均匀后，加入蒸馏水，并且超声处理，加水体积是原料量的5～40倍v/m，提取次数1～5次，超声功率100～500w，超声温度40～80℃，超声时间30～70min，然后真空抽滤，接着在滤液中加入果胶酶处理，随后于95℃灭活5min，获得无果胶的滤液A；
(4)浓缩：将步骤(3)滤液A浓缩，浓缩温度50～60℃，得到浓缩液；
(5)醇沉：将步骤(4)浓缩液中加入无水乙醇至乙醇浓度为75～80％v/v，沉淀12～24h，于4500r/min离心15min，获得沉淀物；
(6)透析：将步骤(5)沉淀物用蒸馏水溶解，于3500r/min离心15min，收集上清液，并用Mw3500D的透析袋自来水透析48h，蒸馏水透析24h，得到透析液；
(7)冷冻干燥：将步骤(6)透析液于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间24～48h，获得复合粗多糖A；
(8)反复冻融法除蛋白：将步骤(7)复合粗多糖A用蒸馏水溶解后，于-20℃冷冻，然后室温溶解，接着于4000～4500r/min离心10～15min，反复冻融3～5次，收集上清液，于-50℃真空冷冻干燥，干燥时间24～48h，获得复合粗多糖B；
(9)Sephadex G-75凝胶层析柱的分离纯化：将步骤(8)复合粗多糖B溶于蒸馏水后，于4000～4500r/min离心10～15min，然后上Sephadex G-75凝胶层析柱，进行洗脱，分步收集，洗脱液用苯酚-硫酸法测定吸光度，绘制洗脱曲线，洗脱得到一个洗脱峰，将该洗脱峰的洗脱液透析、真空冷冻干燥后，获得复合多糖CPS-1。
4.根据权利要求3所述一种具有降血脂作用的复合多糖的制备方法，其特征在于，步骤(3)将山楂、荷叶、苦荞麦、决明子、枸杞、茯苓精粉，按照质量比4:2:2:1.5:1:1混合。
5.根据权利要求3所述一种具有降血脂作用的复合多糖的制备方法，其特征在于，步骤(3)使用0.2％果胶酶于50℃处理2h。
6.根据权利要求3所述一种具有降血脂作用的复合多糖的制备方法，其特征在于，步骤(4)浓缩至浓缩前体积的1/5。
7.根据权利要求3所述一种具有降血脂作用的复合多糖的制备方法，其特征在于，步骤(9)采用超纯水进行洗脱，流速为2.0mL/min，10mL/管。
8.权利要求1所述的一种具有降血脂作用的复合多糖在制备具有降血脂作用的药物或保健食品中的应用。
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