CN115960767A - 一种植物乳植杆菌及其应用 - Google Patents
一种植物乳植杆菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115960767A CN115960767A CN202211396878.2A CN202211396878A CN115960767A CN 115960767 A CN115960767 A CN 115960767A CN 202211396878 A CN202211396878 A CN 202211396878A CN 115960767 A CN115960767 A CN 115960767A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- yys
- linoleic acid
- conjugated linoleic
- food
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims abstract description 58
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 58
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims abstract description 58
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims abstract description 82
- JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 9-cis,11-trans-octadecadienoic acid Chemical compound CCCCCC\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 229940108924 conjugated linoleic acid Drugs 0.000 claims abstract description 58
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 27
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 19
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 11
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 9
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 3
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 abstract description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 5
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 abstract description 5
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 abstract description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 4
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 7
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 7
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 241000030538 Thecla Species 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 6
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 4
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 4
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 4
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 2
- 235000011437 Amygdalus communis Nutrition 0.000 description 2
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 2
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 2
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 2
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 2
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 2
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 2
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 2
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N fructooligosaccharide Chemical compound OC[C@H]1O[C@@](CO)(OC[C@@]2(OC[C@@]3(OC[C@@]4(OC[C@@]5(OC[C@@]6(OC[C@@]7(OC[C@@]8(OC[C@@]9(OC[C@@]%10(OC[C@@]%11(O[C@H]%12O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]%12O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%11O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%10O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]9O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]8O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]7O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]6O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]5O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]4O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]3O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]2O)[C@@H](O)[C@@H]1O FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N 0.000 description 2
- 229940107187 fructooligosaccharide Drugs 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- QKGYJVXSKCDGOK-UHFFFAOYSA-N hexane;propan-2-ol Chemical compound CC(C)O.CCCCCC QKGYJVXSKCDGOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 2
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADHNUPOJJCKWRT-JLXBFWJWSA-N (2e,4e)-octadeca-2,4-dienoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\C=C\C(O)=O ADHNUPOJJCKWRT-JLXBFWJWSA-N 0.000 description 1
- 244000298697 Actinidia deliciosa Species 0.000 description 1
- 235000009436 Actinidia deliciosa Nutrition 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical class OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 1
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000010227 cup method (microbiological evaluation) Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000008394 flocculating agent Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 description 1
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 229940049918 linoleate Drugs 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 238000006864 oxidative decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000020238 sunflower seed Nutrition 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种植物乳植杆菌及其应用。所述植物乳植杆菌命名为：植物乳植杆菌YYS‑99，保藏编号：CGMCC No.25838。本发明提供的植物乳植杆菌YYS‑99分离筛选自云南省玉溪市易门县油坊油料中，其为天然菌种，具有较高食品安全性，能够高效地将亚油酸转化为具有生物活性且对人体健康有益的共轭亚油酸，同时，该菌具有良好的耐胃酸、耐胆盐及肠道定植能力，可应用于生产富含共轭亚油酸的发酵产品，或应用于益生菌产品，改善肠道菌群结构，起到抗氧化、降低人体胆固醇、抗动脉粥样硬化、降低体内脂肪沉积等作用。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种植物乳植杆菌及其应用。
背景技术
共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)是含有共轭双键的十八碳二烯酸的总称，是人体无法合成，必须从外界食物中获取但又必不可少的脂肪酸之一，被称为“二十一世纪的新型营养素”。研究表明，CLA具有增强人体抗氧化能力和免疫能力的作用，并且在调节血液胆固醇和甘油三酸脂水平、防止动脉粥样硬化、促进脂肪氧化分解等方面具有调节作用。CLA最重要的天然来源是反刍动物相关食品，但含量却非常低。另外，在亚麻籽油、红花油、花生油、葵花籽油、棉籽油和玉米油等植物油脂中存在着大量的CLA的前体物亚油酸(Linoleic acid，LA)，但其中CLA的含量却很低，通常低于0.1％，很难实现对它的提取利用。
近年来，利用微生物代谢合成CLA的研究越来越为研究者所关注，其中应用最多的是乳酸菌，很多乳酸菌都具有转化LA为CLA的能力，并且由于乳酸菌所产生的亚油酸异构酶有很强的专一性，大部分的乳酸菌生成CLA均具有生理活性。另外，由于乳酸菌兼性厌氧的特点，很容易培养，乳酸菌生物转化CLA的转化率较高，培养条件易于控制、稳定安全，可进行大规模培养。同时，乳酸菌是人体肠道中的正常菌群，具有帮助消化、维持肠道微生态平衡、增强免疫力等生理功能。乳酸菌良好的益生性和营养功效使其广泛应用于食品加工行业，它既可以改善食品风味，也能提高食品的营养价值和贮藏性。因此，利用乳酸菌来转化生成CLA具有很好的发展前景。
目前，国内外产CLA微生物的研究尚处在菌株筛选、产CLA微生物培养条件优化阶段。市场上销售的CLA产品多以游离的LA或具有高含量LA的植物油为前体物，在一定条件下，通过碱催化的异构化来生产CLA。然而化学法得到的CLA往往是由多种异构体组成，对底物的实际利用效率也十分有限，这就造成极大的浪费。
马青雯，吉佳佳，钱白萍等培养的乳酸菌M9在培养温度为30℃，培养时间为28h、发酵液初始pH值为6的条件下进行发酵，CLA含量为67.53μg/mL(乳酸菌M9高产共轭亚油酸培养条件优化[J].食品与发酵科技，2019，55(3):51-55)。上述产CLA的菌株产量较低。
申请号：CN202210790287.7的中国发明专利公开了：鼠李糖乳杆菌SG906接种至含有游离亚油酸和谷氨酸的培养基中发酵72h，产CLA含量虽高达7.95g/L，但该鼠李糖乳杆菌是经过诱变技术后高产CLA的，不是天然菌种，不符合食品相关法规，不能应用于食品。
因此，现有技术中尝试将产CLA的菌种应用到食品中，但是大部分学者筛选到的产CLA的菌株产量过低(诱变菌株产量高，但不安全)，且不耐胃液、肠液消化，对食源性致病菌没有抑制作用，不适合应用到食品中。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种植物乳植杆菌及其应用，本发明的植物乳植杆菌在高产CLA的同时，耐胃液、耐胆盐并有较好的肠道定植能力，对食源性致病菌具有抑制作用，其在食品或保健品等领域具有重要的应用价值。
本发明的技术方案为：提供了一种植物乳植杆菌YYS-99，该菌株的分类命名为：植物乳植杆菌YYS-99，拉丁文学名：Lactiplantibacillus plantarum，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2022年9月28日，保藏编号：CGMCC No.25838。
本发明的另一技术方案为：提供一种上述植物乳植杆菌YYS-99在生产益生菌产品中的应用。
本发明的又一技术方案为：提供上述植物乳植杆菌YYS-99在生产富含共轭亚油酸的食品中的应用。
本发明的又一技术方案为：提供上述植物乳植杆菌YYS-99在生产抑制食源性致病菌的食品中的应用。
本发明的又一技术方案为：提供上述植物乳植杆菌YYS-99在生产耐胃酸，耐胆盐的食品中的应用。
本发明的又一技术方案为：提供一种菌剂，所述菌剂包含上述的植物乳植杆菌YYS-99。
本发明的又一技术方案为：提供一种富含共轭亚油酸的发酵产品，所述发酵产品为上述植物乳植杆菌YYS-99进行发酵得到。
本发明的又一技术方案为：提供一种生产共轭亚油酸的方法，将上述植物乳植杆菌YYS-99进行发酵，得到发酵产物，即得到共轭亚油酸。
优选的，上述生产共轭亚油酸的方法中，所述发酵所用底物包括亚油酸。
优选的，上述生产共轭亚油酸的方法中，所述底物中亚油酸浓度为0.5mg/mL。
本发明的有益效果：本发明提供的植物乳植杆菌YYS-99分离筛选自云南省玉溪市易门县油坊油料中，其为天然菌种，具有较高食品安全性，在底物亚油酸浓度为0.5mg/mL时，其转化生成共轭亚油酸(CLA)的量最大，为205.4μg/mL，转化率约为41.1％，因此其能够较为高效的将亚油酸转化为具有生物活性且对人体健康有益的共轭亚油酸，可应用于生产富含共轭亚油酸的发酵产品。
进一步的，本发明的植物乳植杆菌还对食源性致病菌具有明显的抑制作用，同时，该菌具有良好的耐胃酸、耐胆盐及肠道定植能力，可应用于益生菌产品，改善肠道菌群结构，起到抗氧化、降低人体胆固醇、抗动脉粥样硬化、降低体内脂肪沉积等作用。
附图说明
图1为本发明具体实施方式实施例1的植物乳植杆菌YYS-99溶钙圈；
图2为本发明具体实施方式实施例1的植物乳植杆菌YYS-99的菌落形态；
图3为本发明具体实施方式实施例2的共轭亚油酸(CLA)测定标准曲线；
图4为本发明具体实施方式实施例4的植物乳植杆菌YYS-99的革兰氏染色；
图5为本发明具体实施方式实施例4的植物乳植杆菌YYS-99的16S r RNA扩增产物琼脂糖凝胶电泳。
图6为本发明具体实施方式实施例4的基于16S r RNA序列的植物乳植杆菌YYS-99系统发育树。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图详予说明。
实施例1乳酸菌的分离
从云南省玉溪市易门县油坊中无菌采取油料样品，采用涂布平板法，取5g油料样品放入无菌均质袋中，做好标记，加入45mL 0.85％的生理盐水后完全拍打混匀。然后吸取100μL样品进行10倍系列的梯度稀释，分别吸取稀释倍数为10-3、10-4、10-5、10-6的样品100μL，涂布于含2.5％ CaCO3的MRS平板上，37℃倒置培养24h。挑取长势良好，溶钙圈大的菌落(如图1)，通过平板划线分离法反复分离纯化(如图2)，直至得到单菌落，将该分离菌株命名为YYS-99，-80℃甘油菌库保藏。
实施例2高产共轭亚油酸条件筛选
1、CLA标准曲线绘制
称取100mg CLA标准品和200mg吐温80，混匀，再溶于水并定容至10mL，充分搅拌乳化后，经0.45pm无菌滤膜过滤除菌后获得10mg/mL的CLA标准储备液，于-20℃避光保存。分别取以下表1标准储备液，充分振荡30s，再静置2-10min；测定233nm下的吸光值。以CLA质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线(如图3)。
表1 CLA标准曲线配置表
2、待测样品的检测分析
(1)底物亚油酸(LA)的配制
底物LA母液的配制(30mg/ml)：按照300mg LA，200mg吐温80的比例蜗旋震荡混合均匀，用去离子水定容至10mL，常温磁力搅拌20min至混合物充分乳化，然后混合物经过0.22μm无菌水系滤膜过滤除菌后避光保存于-20℃环境中。为了保证母液不会因反复冻融而出现破乳现象，母液使用前需要重新涡旋震荡10min。
底物小麦胚芽粉母液的配制：微粉碎的小麦胚芽粉1g，200mg吐温80的比例，用去离子水定容至10mL，搅拌均匀，超声波细胞粉碎机乳化5min。
(2)培养基配置
按照表2配置各培养基，高温高压灭菌锅121℃灭菌15min。
表2培养基配置表
(3)样品检测
将活化好的植物乳植杆菌YYS-99按照2％的接种量接种至各类MRS培养基中，37℃培养箱中培养72h，以未发酵的空白液为对照，发酵液经过8000g离心10min，收集上清液于干净离心管中，按照发酵液：异丙醇：正己烷为3:3:6(v/v/v)的比例进行混合，漩涡震荡充分混合后，静止分层，转移上层的正己烷层于干净的储液瓶中，每个样品做3个平行，233nm测定吸光值。
由测得的标准曲线获得CLA浓度与OD233nm吸光值的线性关系，从而试验得出YYS-99在底物亚油酸浓度为0.5mg/mL时(LA+MRS培养基)，其转化生成共轭亚油酸(CLA)的量最大，为205.4μg/mL，转化率约为41.1％。
实施例3对食源性致病菌的抑菌作用
采用牛津杯法，分别取100μL活菌数为107CFU/mL的大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、宋内氏志贺氏菌于平板内，倒入适量加热熔化的LB固体培养基，摇晃均匀，待其冷却凝固后，在平板内适当的间隔依次放入牛津杯，然后取YYS-99发酵液100μL添加至牛津杯孔内，以MRS液体培养基做阴性对照，以乳酸链球菌素做阳性对照，3个重复。37℃静置培养24h后，拍照并用游标卡尺采用十字交叉法测定抑菌圈直径。
试验结果得，YYS-99对大肠埃希氏菌的抑菌圈直径为(15.27±0.22)mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为(14.28±0.12)mm，对宋内氏志贺氏菌的抑菌圈直径为(16.84±0.32)mm，均高于阳性对照乳酸链球菌素(13.68±0.16)mm。表明YYS-99对食源性致病菌具有较好的抑制效果。
实施例4乳酸菌的鉴定
(1)生理生化试验
将筛选纯化的菌株YYS-99进行革兰氏染色(如图4)及过氧化氢酶试验，并对其生理生化指标进行测定，试验结果对照《伯杰氏系统细菌学手册第八版》进行菌种的初步判定。试验得出该筛选菌株YYS-99革兰氏染色为紫色，呈阳性。其细胞形状为杆状，接触酶和氧化酶为阴性，无芽孢形成。
(2)16S r RNA鉴定
根据细菌基因DNA提取试剂盒说明操作提取未知菌株基因DNA，以基因DNA为模板进行16S r RNA基因的PCR扩增。
扩增引物使用通用引物27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')和1492R(5'-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3')。
其中PCR反应体系：DNA2μL，27F 2μL，1492R 2μL，Premix Ex Taq 25μL，ddH2O 19μL。PCR反应条件：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30次循环；最后72℃延伸5min。YYS-99提取DNA基因组后16S r RNA扩增片段如图5所示。然后将PCR扩增产物送去DNA测序(广州擎科生物工程有限公司)。测序序列结果在NCBI数据库中用Blast软件搜索近似序列，将所测得的序列和从基因库中获得的相关种属的16S r RNA基因序列进行比对，运用Mega7.0软件构建系统发育树，结果如图6所示。
27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'(SEQ ID NO.1)。
1492R：5'-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3'(SEQ ID NO.2)。
16S r RNA基因序列测定结果如下：
TTAGGCGGCTGGTTCCTAAAAGGTTACCCCACCGACTTTGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGAATGGCTTTAAGAGATTAGCTTACTCTCGCGAGTTCGCAACTCGTTGTACCATCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACCAGAGTGCCCAACTTAATGCTGGCAACTGATAATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTATCCATGTCCCCGAAGGGAACGTCTAATCTCTTAGATTTGCATAGTATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGAATGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACTTAGCATTCATCGTTTACGGTATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTACCCATACTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTTTCCCAGTTTCCGATGCACTTCTTCGGTTGAGCCGAAGGCTTTCACATCAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAAATACCGTCAATACCTGAACAGTTACTCTCAGATATGTTCTTCTTTAACAACAGAGTTTTACGAGCCGAAACCCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTTCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATTACCCTCTCAGGTCGGCTACGTATCATTGCCATGGTGAGCCGTTACCCCACCATCTAGCTAATACGCCGCGGGACCATCCAAAAGTGATAGCCGAAGCCATCTTTCAAGCTCGGACCATGCGGTCCAAGTTGTTATGCGGTATTAGCATCTGTTTCCAGGTGTTATCCCCCGCTTCTGGGCAGGTTTCCCACGTGTTACTCACCAGTTCGCCACTCACTCAAATGTAAATCATGATGCAAGCACCAATCAATACCAGAGTTCGTTCG(SEQID NO.3)。
根据该菌株的细胞形态、生理生化特征、16S r RNA基因序列等数据综合分析，参考《伯杰氏系统细菌学手册第八版》，鉴定该菌株为植物乳植杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)YYS-99。
实施例5菌株模拟胃液耐酸性和肠液耐胆盐试验
1、菌株模拟胃液耐酸性试验
称取0.2g NaCl与0.35g胃蛋白酶溶解于适量蒸馏水中，用1mol/L盐酸调节pH值为1.5、2.5、3.5，用100ml容量瓶定容至刻度。将植物乳植杆菌YYS-99活化后培养24h的发酵液按2％接种量分别接入不同pH值的模拟人工胃酸溶液中，37℃水浴恒温处理0、2、4h后，分别十倍梯度稀释，振荡均匀后取100μL菌液倒板，37℃下培养24h，计算YYS-99活菌数和存活率。
表3菌株模拟胃液耐酸性试验统计表
由表3可得植物乳植杆菌YYS-99在不同模拟人工胃液pH下,随着pH值的升高，存活率不断提高；处理更长时间时，存活率不降反升，表明一部分活菌对胃酸具有耐受性，开始增殖。
2、菌株模拟肠液耐胆盐试验
将植物乳植杆菌YYS-99活化后培养24h的发酵液按2％接种量分别接入0.3％、0.5％与0.7％质量浓度的猪胆盐溶液中，37℃水浴恒温处理0、2、4h后，分别十倍梯度稀释，振荡均匀后取100μL菌液倒板，37℃下培养24h后，计算YYS-99活菌数和存活率。
表4菌株模拟肠液耐胆盐试验统计表
由表4可得植物乳植杆菌YYS-99在模拟人工肠液胆盐不同质量浓度下，随着模拟人工肠液胆盐质量浓度的升高，存活率也在不断下降，但处理更长时间时，存活率不降反升，表明一部分活菌对胆盐具有耐受性，开始增殖。
实施例6利用本发明植物乳植杆菌YYS-99制备发酵食品
实验一、添加亚油酸
分别称取花生40g、芝麻30g和杏仁30g，加入500mL无菌水，煮沸后熬煮1h，过滤残渣，留下混合液，补水至500mL。然后往混合液中加入10％益生元(低聚果糖)，并添加2ml亚油酸，于121℃灭菌15min。按5％接种量接入植物乳植杆菌YYS-99发酵液，置于37℃摇床180r/min振荡培养72h后按照异丙醇-正己烷萃取法测定共轭亚油酸(CLA)的含量。
实验二、不添加亚油酸
分别称取花生40g、芝麻30g和杏仁30g，加入500mL无菌水，煮沸后熬煮1h，过滤残渣，留下混合液，补水至500mL。然后往混合液中加入10％益生元(低聚果糖)，于121℃灭菌15min。按5％接种量接入植物乳植杆菌YYS-99发酵液，置于37℃摇床180r/min振荡培养72h后按照异丙醇-正己烷萃取法测定共轭亚油酸(CLA)的含量。
试验得出经植物乳植杆菌YYS-99发酵后，呈现出独特的良好风味，测出实验一中共轭亚油酸(CLA)的含量为360.1μg/mL、实验二中共轭亚油酸(CLA)的含量为11.6μg/mL，表明该植物乳植杆菌YYS-99可以将富含亚油酸的食品原料经发酵转化生成对人体健康有益的共轭亚油酸(CLA)。既改善了食品风味，也提高了食品的营养健康功效，为其广泛应用于食品加工行业奠定了良好的基础。
实施例7利用本发明植物乳植杆菌YYS-99制备菌剂
将植物乳植杆菌YYS-99以培养基质量的3％接种量接种于121℃灭菌15min的培养基中，以培养基总质量添加10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨、0.3％酵母浸膏和余量水组成，调节pH6.8。然后，在温度37℃下培养18h后，于4℃下6000r/min离心20min，弃上清，加入pH 7.2磷酸盐缓冲液清洗2-4次，得到菌泥，再用保护剂重悬菌液浓度为1010CFU/mL。所述的保护剂含有100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖与10g/LL-谷氨酸钠。
然后，将该悬浮液在温度37℃下预培养60min，再进行冷冻干燥，得到所述的植物乳植杆菌YYS-99菌剂。利用上述方法制备的菌剂中含有大于1×1010CFU/g的活性植物乳植杆菌YYS-99。
实施例8利用本发明植物乳植杆菌YYS-99制备益生菌产品
所述益生菌产品为植物乳植杆菌YYS-99与其他配料的组合物；所述产品中，植物乳植杆菌YYS-99的活菌数不低于1×106CFU/mL或1×106CFU/g。所述配料包含益生元、填充剂、酸味剂、溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂以及助滤剂中的一种或几种。
所述益生菌产品的剂型可以为固体饮料、饮料、压片糖果、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
更为具体的是，一种植物乳植杆菌YYS-99固体饮料的制造方法，将所述植物乳植杆菌YYS-99菌种用液体培养液培养，收集和洗涤菌体，添加辅料，干燥制备成活性菌粉；取菌粉10份，木糖醇24份，全脂奶粉24份，发酵猕猴桃粉13.705份，麦芽糊精21.6份，低聚半乳糖6.1份，低聚果糖0.1份，无水柠檬酸0.495份，混合均匀，得到植物乳植杆菌YYS-99固体饮料。所述固体饮料中植物乳植杆菌YYS-99活菌数不低于1×108CFU/g。
综上所述，本发明提供的植物乳植杆菌YYS-99分离筛选自云南省玉溪市易门县油坊油料中，为天然菌种，具有较高食品安全性，在底物亚油酸浓度为0.5mg/mL时，其转化生成共轭亚油酸(CLA)的量最大，为205.4μg/mL，转化率约为41.1％，可应用于生产富含共轭亚油酸的发酵产品。其改善了食品风味，也提高了食品的营养健康功效。
进一步的，本发明的植物乳植杆菌YYS-99还对食源性致病菌具有明显的抑制作用，有利于减少由食源性致病菌引起的食品腐败变质对人体健康的危害，且具有一定的耐胃酸，耐胆盐作用，可在人体肠道中定植，起到改善肠道菌群结构的作用，其具有较高的商业应用价值。
如未明确指出，本发明实施例中涉及的实验操作方法为本领域常规的实验操作方法，涉及的试剂或仪器均可从正规渠道商购获得。
试验用到的菌种及其培养基如表5所示。
表5试验菌种及培养基
注:a：ATCC，美国典型菌种保藏中心(American Type Culture Collection)，b：CICC，中国工业微生物菌种保藏管理中心(China Center ofIndustrial CultureCollection)。
本发明实施例中所涉及的培养基：MRS液体培养基：葡萄糖20.0g，胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸粉5.0g，吐温80 1.0m L，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸铵2.0g，无水乙酸钠5.0g，硫酸镁0.5g，一水硫酸锰0.25g，去离子水1L，pH 6.5(加1.5％琼脂为固体培养基)。
LB培养基：蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，牛肉膏3.0g，去离子水1L，pH 7.0(加1.5％琼脂为固体培养基)。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)YYS-99，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25838。
2.权利要求1所述的植物乳植杆菌YYS-99在生产益生菌产品中的应用。
3.权利要求1所述的植物乳植杆菌YYS-99在生产富含共轭亚油酸的食品中的应用。
4.权利要求1所述的植物乳植杆菌YYS-99在生产抑制食源性致病菌的食品中的应用。
5.权利要求1所述的植物乳植杆菌YYS-99在生产耐胃酸，耐胆盐的食品中的应用。
6.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂包含权利要求1所述的植物乳植杆菌YYS-99。
7.一种富含共轭亚油酸的发酵产品，其特征在于，所述发酵产品为权利要求1所述植物乳植杆菌YYS-99进行发酵得到。
8.一种生产共轭亚油酸的方法，其特征在于，将如权利要求1所述植物乳植杆菌YYS-99进行发酵，得到发酵产物，即得到共轭亚油酸。
9.根据权利要求8所述生产共轭亚油酸的方法，其特征在于，所述发酵所用底物包括亚油酸。
10.根据权利要求9所述生产共轭亚油酸的方法，其特征在于，所述底物中亚油酸浓度为0.5mg/mL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211396878.2A CN115960767B (zh) | 2022-11-09 | 2022-11-09 | 一种植物乳植杆菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211396878.2A CN115960767B (zh) | 2022-11-09 | 2022-11-09 | 一种植物乳植杆菌及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115960767A true CN115960767A (zh) | 2023-04-14 |
| CN115960767B CN115960767B (zh) | 2024-04-26 |
Family
ID=87359195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211396878.2A Active CN115960767B (zh) | 2022-11-09 | 2022-11-09 | 一种植物乳植杆菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115960767B (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1772911A (zh) * | 2005-11-07 | 2006-05-17 | 浙江工商大学 | 利用乳酸菌制备共轭亚油酸的方法 |
| CN1928071A (zh) * | 2006-08-11 | 2007-03-14 | 江南大学 | 植物乳杆菌及用该菌生物制备共轭亚油酸的方法 |
| CN101020895A (zh) * | 2007-01-24 | 2007-08-22 | 安徽农业大学 | 一种植物乳杆菌发酵制备富含共轭亚油酸青贮饲料的方法 |
| CN101074426A (zh) * | 2007-01-24 | 2007-11-21 | 合肥市科茂隆生物工程有限公司 | 一种植物乳杆菌发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法 |
| US20080057044A1 (en) * | 2004-09-02 | 2008-03-06 | Cj Corp. | Lactobacillus Plantarum with Body-Fat Reducing Activity and the Foods Containing Them |
| CN101914477A (zh) * | 2010-08-10 | 2010-12-15 | 浙江大学 | 一株植物乳杆菌菌株及其用途 |
| US20110177198A1 (en) * | 2008-05-13 | 2011-07-21 | OU Tervisliku PIIMa Biotehnologiate Arenduskeskus (Biocompetence Centre of Healthy Diary Products) | Isolated Microorganism Strain Lactobacillus Plantarum Tensia DSM 21380 as Antimicrobial and Antihypertensive Probiotic, Food Product and Composition Comprising Said Microorganism and Use of Said Microorganism for Preparation of Antihypertensive Medicine and Method for Suppressing Pathogens and Non-Starter Lactobacilli in Food Product |
| CN102144667A (zh) * | 2011-02-15 | 2011-08-10 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 生物转化法制备富含共轭亚油酸的活性乳酸菌饮料的方法 |
| CN102206687A (zh) * | 2011-04-27 | 2011-10-05 | 浙江大学 | 一种植物乳杆菌生物转化共轭亚油酸的方法 |
| CN112708587A (zh) * | 2019-10-25 | 2021-04-27 | 江南大学 | 一种可高产共轭亚油酸的植物乳杆菌工程菌 |
| US20220017886A1 (en) * | 2019-10-23 | 2022-01-20 | Jiangnan University | Linoleic Acid Isomerase and its Application in Production of Conjugated Linoleic Acid |
-
2022
- 2022-11-09 CN CN202211396878.2A patent/CN115960767B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080057044A1 (en) * | 2004-09-02 | 2008-03-06 | Cj Corp. | Lactobacillus Plantarum with Body-Fat Reducing Activity and the Foods Containing Them |
| CN1772911A (zh) * | 2005-11-07 | 2006-05-17 | 浙江工商大学 | 利用乳酸菌制备共轭亚油酸的方法 |
| CN1928071A (zh) * | 2006-08-11 | 2007-03-14 | 江南大学 | 植物乳杆菌及用该菌生物制备共轭亚油酸的方法 |
| CN101020895A (zh) * | 2007-01-24 | 2007-08-22 | 安徽农业大学 | 一种植物乳杆菌发酵制备富含共轭亚油酸青贮饲料的方法 |
| CN101074426A (zh) * | 2007-01-24 | 2007-11-21 | 合肥市科茂隆生物工程有限公司 | 一种植物乳杆菌发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法 |
| US20110177198A1 (en) * | 2008-05-13 | 2011-07-21 | OU Tervisliku PIIMa Biotehnologiate Arenduskeskus (Biocompetence Centre of Healthy Diary Products) | Isolated Microorganism Strain Lactobacillus Plantarum Tensia DSM 21380 as Antimicrobial and Antihypertensive Probiotic, Food Product and Composition Comprising Said Microorganism and Use of Said Microorganism for Preparation of Antihypertensive Medicine and Method for Suppressing Pathogens and Non-Starter Lactobacilli in Food Product |
| CN101914477A (zh) * | 2010-08-10 | 2010-12-15 | 浙江大学 | 一株植物乳杆菌菌株及其用途 |
| CN102144667A (zh) * | 2011-02-15 | 2011-08-10 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 生物转化法制备富含共轭亚油酸的活性乳酸菌饮料的方法 |
| CN102206687A (zh) * | 2011-04-27 | 2011-10-05 | 浙江大学 | 一种植物乳杆菌生物转化共轭亚油酸的方法 |
| US20220017886A1 (en) * | 2019-10-23 | 2022-01-20 | Jiangnan University | Linoleic Acid Isomerase and its Application in Production of Conjugated Linoleic Acid |
| CN112708587A (zh) * | 2019-10-25 | 2021-04-27 | 江南大学 | 一种可高产共轭亚油酸的植物乳杆菌工程菌 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| B YANG 等: "Synthesis of conjugated linoleic acid by the linoleate isomerase complex in food-derived lactobacilli", 《JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY》, vol. 117, no. 2, 31 August 2014 (2014-08-31) * |
| 余梦为;郦萍;付碧石;顾青;: "共轭亚油酸生物合成及其对肠道菌群影响的研究进展", 食品科技, no. 03, 20 March 2020 (2020-03-20) * |
| 董明;齐树亭;: "植物乳杆菌发酵生产共轭亚油酸", 饲料工业, no. 04, 20 February 2007 (2007-02-20) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115960767B (zh) | 2024-04-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101338283B (zh) | 一种干酪乳杆菌及其在固态发酵中的应用 | |
| CN116024130B (zh) | 一株降血尿酸发酵乳杆菌a21215及其应用 | |
| CN101139557B (zh) | 一种干酪乳杆菌及其在改善血脂代谢和免疫调节中的应用 | |
| CN102206599B (zh) | 一种耐氧耐酸性长双歧杆菌 | |
| CN110106119B (zh) | 一株分离自母乳的鼠李糖乳杆菌m9及其应用 | |
| KR20210088408A (ko) | 락토바실러스 플란타럼 및 그의 용도 | |
| CN108707565B (zh) | 一种两歧双歧杆菌及其应用 | |
| JP5855939B2 (ja) | セレノヒドロキシ酸化合物を使用してセレンが濃縮された光合成微生物、並びに栄養食品、化粧品及び医薬におけるこれらの使用 | |
| CN112094790B (zh) | 一种调节肠道菌群的植物乳杆菌lp45活菌制剂及应用 | |
| CN110577912A (zh) | 一种格氏乳杆菌及其在制备发酵乳中的应用 | |
| CN104430847A (zh) | 发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum Lee工作发酵剂制品及其预防便秘保健用途 | |
| CN104381440A (zh) | 发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum Lee工作发酵剂制品及其预防便秘保健用途 | |
| CN114591854B (zh) | 一种具有降解植物性脂肪功能的植物乳杆菌lz026及其应用 | |
| CN110878273B (zh) | 一株短双歧杆菌及其在制备共轭脂肪酸中的应用 | |
| CN116445321A (zh) | 降核苷降血尿酸罗伊氏乳杆菌a21160及其应用 | |
| CN110607253B (zh) | 一种嗜热链球菌及其增殖培养方法和应用 | |
| CN113930367B (zh) | 一株具有降胆固醇性能的乳酸菌及其应用 | |
| CN113604385B (zh) | 具有降解黄油能力的德氏乳杆菌及其应用 | |
| CN115873765A (zh) | 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-1及其产品与应用 | |
| CN115960767B (zh) | 一种植物乳植杆菌及其应用 | |
| CN112391317B (zh) | 一种生产燕窝酸的益生菌株组合物及用途 | |
| CN115851520B (zh) | 一种副干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN115851537B (zh) | 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-142及其产品与应用 | |
| CN115851538B (zh) | 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-171及其产品与应用 | |
| CN116676239B (zh) | 一种植物乳杆菌vb165及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |