CN115956955A - 呼吸道病原体鼻咽拭子/咽拭子20合1混采技术 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及呼吸道感染病原体鼻咽拭子/咽拭子20合1混采技术。所述技术是将采集自20人的20支拭子集合于一个采集管中进行检测的方法。所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒。根据前期混采检测技术条件，参考20份咽拭子的占用体积，采集液的体积，便于实验室检测的采集液液面高度，设计合适的采集管直径和高度，使6mL的保存液中能够容纳20支拭子，并有足够空间进行样本混匀。本发明避免了传统采集检测方法的核酸检测效率低，有利于尽早有效诊断呼吸道病原体感染，有助于控制感染的进一步扩散，及时阻止疫情蔓延具有重大的临床意义。

Description

呼吸道病原体鼻咽拭子/咽拭子20合1混采技术

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及呼吸道感染病原体鼻咽拭子/咽拭子20合1混采技术。

背景技术

由于呼吸道与外界相通，是诸多病原微生物侵入人体的门户，也是临床上最常见的感染部位。呼吸道感染分为上呼吸道感染和下呼吸道感染。上呼吸道感染常见的病原体为病毒，少数为细菌。下呼吸道感染的病原体较多，包括病毒、立克次体、衣原体、支原体、细菌、真菌等。为患者诊断的目的，临床可获得的标本种类包括合格痰标本、咽拭子和鼻咽拭子，对于诊断难度较大的呼吸道疾病可采集肺泡灌洗液、气管镜刷、气管穿刺、肺穿刺等标本。

在人类历史上，曾多次发生过呼吸道疾病的大流行。医学不发达的时代，人类只能任其肆虐，损失惨重。因此，当疫情出现且已有多代传播时，仅仅控制密接者是不够的，进行一定范围内的普遍筛查至关重要。

但是新冠核酸普遍筛查过程存在着一些问题，例如，医用标本采集用材料消耗大，造成筛查成本高昂；标本数量增多，医疗机构核酸检测能力不能相适应等，这些问题都大大地阻碍了新冠筛查的速度和范围。为此，多个地区提出了采用5合1混检和10合1混采检测技术，但混检造成了稀释，容易导致漏检；10合1混采已经在全国广泛使用，得到了普遍认可。但是，在不影响检测灵敏度的前提下，可以将10合1混采扩大至20合1混采，可以进一步提升检测效率。在疫情发生时，每提前一小时找到确诊病例对于减缓疫情传播都是至关重要的。

发明内容

针对上述问题，本发明为了进一步提高效率，克服现有技术存在的缺陷而提供的一种适用于大规模人群呼吸道病原体检测的采集方法及检测方法，旨在解决现有采集方式的高成本和低效率的问题。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案。

本发明提供了一种呼吸道病原体20合1混采技术，其特征在于，将采集自20人的20支拭子集合于一个采集管中进行检测的方法。

进一步地，所述拭子的尺寸为拭子杆长度15cm；植绒拭子头长度1.5cm、直径2.5mm；绒头厚度0.5mm；绒毛长度0.6mm，纤维度1.2D。

优选地，所述拭子包括鼻咽拭子和咽拭子。

进一步地，所述采集管的管帽和管体应为聚丙烯材质，螺旋口可密封，松紧适度；管体透明，可视度好；采集管尺寸为外径（14.8±0.2）mm×（100.5±0.4）mm，管帽外径（15.8±0.15）mm，高度（12.5±0.5）mm；采集管的容量企业定标10 mL；采集管内含6mL含胍盐或其他有效病毒灭活剂的粉红色保存液。

进一步地，所述技术适用于呼吸道病原体的大规模采集和检测。

优选地，所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒。

本发明还提供一种根据上述所述的一种呼吸道病原体20合1混采技术的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1：采集前，需将20 名受检者分配为一组，收集并登记受检者相关信息；

步骤2：采集呼吸道病原体，需两名医务人员配合，一人负责采集拭子，一人负责将拭子收集入采集管内；

步骤3：拭子采集完毕后，采集人员立即将拭子头折断置入标本保存管中，使拭子头落入采集管的液体中，应保证拭子头均浸入保存液中，动作轻柔，避免产生气溶胶；

步骤4：将标本运送至检测实验室，实验室检测人员应首先检查采集管管壁无破损、管口无渗漏，确认无误后立即进行检测；

步骤5：先将标本采集管在高频涡旋振荡器上振荡20s，充分振荡洗脱后静置；然后在生物安全柜内小心开盖取样，避免产生气溶胶；最后，应根据检测目标病原体的种类和方法，按试剂厂家操作说明书进行检测；

步骤6：依据检测试剂说明书，判断检测结果：阴性结果可直接出报告；阳性或灰区，应对该混采管的20 个受试者重新采集单管拭子进行复核；复核单管检测结果均为阴性，则按照阴性结果报告；如复核检测结果为阳性，则按传染病管控程序上报；必要时可采集单人单管多个拭子（鼻咽拭子+咽拭子）。

进一步地，所述步骤2中采集呼吸道病原体的具体方法包括：鼻咽拭子和咽拭子。

优选地，所述鼻咽拭子的采集包括：清理鼻腔，采样人员手执专用的鼻咽拭子贴鼻孔进入，待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转拭子3~5次，停留15~30秒。

优选地，所述咽拭子的采集包括：被采集人员头部微仰，嘴张大，并发“啊”音，露出两侧咽扁桃体，将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。

与现有技术相比本发明的有益效果。

1.本发明与10合1混采检测技术相比较的创新点，是改变了拭子的尺寸。根据前期混采检测技术条件，参考20份咽拭子的占用体积，采集液的体积，便于实验室检测的采集液液面高度，设计合适的采集管直径和高度，使6mL的保存液中能够容纳20支拭子，并有足够空间进行样本混匀。

2. 本发明能够显著减少大规模人群筛查所需要的医疗采集耗材，降低呼吸道病原体筛查成本。

3. 本发明避免了传统采集检测方法的核酸检测效率低，有利于尽早有效诊断呼吸道病原体感染，有助于控制感染的进一步扩散，及时阻止疫情蔓延。

具体实施方式

为使本发明实施例中目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

目前，大规模呼吸道病原体核酸筛查（比如新冠病毒）过程存在一些问题，例如，医用标本采集用材料消耗大，造成筛查成本昂贵；标本数量增多，医疗机构核酸检测能力不能相适应等，这些问题都大大地阻碍了呼吸道病原体核酸筛查的速度和范围。为此，多个地区提出了采用5合1混检和10合1混采检测技术，但混检造成了稀释，容易导致漏检；10合1混采已经在全国广泛使用，得到了普遍认可。但是，在不影响检测灵敏度的前提下，可以将10合1混采扩大至20合1混采，可以进一步提升检测效率。在疫情发生时，每提前一小时找到确诊病例对于减缓疫情传播都是至关重要的。

鉴于此，本发明提出一种大规模人群呼吸道病原体核酸检测的采集方法及检测方法，即20合1混采检测技术，用于节约医疗采集耗材，同时在保证检测质量的同时，提高检测速度，便于尽早发现感染者。在本发明的技术方案中，根据前期混采检测技术条件，参考20份咽拭子的占用体积，采集液的体积，便于实验室检测的采集液液面高度，设计合适的采集管直径和高度。病毒采集管的管帽和管体应为聚丙烯材质，螺旋口可密封，松紧适度。管体透明，可视度好。试管外径（14.8±0.2）mm×（100.5±0.4）mm，管帽外径（15.8±0.15）mm，高度（12.5±0.5）mm。容量企业定标10 mL，内含6mL含胍盐或其他有效病毒灭活剂的粉红色保存液，保持一定的流动性，方便取样。采集拭子的拭子杆为聚丙烯材质，长度15cm。植绒拭子头采用聚乙烯（PE）合成纤维或者人造纤维制成，长度1.5cm，直径2.5mm。绒头厚度0.5mm，绒毛长度0.6mm，纤维度1.2D。折断点位于距拭子头顶端3cm左右，易于折断。

本发明技术的实验室可行性分析包括了标本合适稀释浓度，扩增试剂最低检出限及5家实验室的室间比较。以康彻思坦5000及1000份阳性质控品（新冠核酸）分别制备1:1，1;2，1:3，1:4 系列梯度标本共8份，每份检测3次，确定标本合适稀释浓度。扩增试剂最低检出限使用参考品制备检出限附近浓度标本，每浓度检测20次，验证5家检出限均可低至说明书声明检出限（500-1000）的1/2（250-500）。每增加稀释1倍，理论CT值增加1，实验中发现稀释每增加1倍后，CT值增加0.16~1.1左右。结合本次筛查出的阳性标本检出CT值均小于34，若采用10合1混采，稀释1倍的情况下，CT值的增加1，将仍在阳性诊断界值（一般CT为37）范围内，推断不会影响阳性病例的检出。使用弱阳性质控品加入检测为阴性的20合1标本管中，制备5个（3弱阳2阴）室间比对标本，比较5家实验室（采用不同试剂）室间比对结果，结果一致。

在实际采集过程中，需选择空旷、通风良好的场地作为集中采集地点。根据原有场地条件，划分等候区、采集区、缓冲区和临时隔离区四区，有效分散待检人员密度。所有标本采集人员应掌握鼻咽拭子和口咽拭子采集技术规范、操作规程和生物安全防护等，并经考核合格后上岗。应有考核程序文件，留存培训和考核记录。

采集前，工作人员将20 名受检者分配为一组。收集并登记受检者相关信息，包括姓名、性别、身份证件号码、联系电话、采集地点、采集日期和时间。按照组别对采集管进行编号。推荐使用信息化手段关联受检者信息，如“全场景疫情病原体检测信息系统”通过手机扫描识别身份证信息，其他信息系统通过读卡器，扫描二维码等方式收集电子版信息。如不具备信息化条件，应当提前设计表格进行手工登记。纸质登记表随标本送检前应备份存档于采集点所在社区。

在具体实施时，采集鼻咽拭子时，应嘱咐被采集者清理鼻腔。采样人员一手轻扶被采集人员的头部，一手执专用的鼻咽拭子。拭子贴鼻孔进入，沿下鼻道的底部向后缓缓深入，由于鼻道呈弧形，不可用力过猛，以免发生外伤出血。待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转拭子3~5次，停留15~30秒。采集咽拭子时，被采集人员头部微仰，嘴张大，并发“啊”音，露出两侧咽扁桃体，将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。应由两名医务人员配合，一人负责采集拭子，一人负责将拭子收集入采集管内。拭子采集完毕后，采集人员将拭子传递给收集人员。收集人员立即将拭子头置入标本保存管中，拭子折断点置于管口处。稍向下用力折断拭子杆，使拭子头落入采集管的液体中，将拭子杆回收按照医疗垃圾处理。收集拭子应保证拭子头均浸入保存液中，动作轻柔，避免产生气溶胶。连续采集时，不必关闭采集管管盖。待20支拭子收集完毕，旋紧管盖，将采集管置于稳定的置物架上。如果20支拭子不是连续采集，每次放入拭子后应旋紧管盖，小心拿取放置，避免溢洒事件发生。采集管内拭子不足20支，应做好特殊标记并记录。

标本运送前，应仔细核对采集管标签与混采登记表（信息系统）信息，确保准确完整，编号一致后，将标本交给运送人员运送至检测实验室。运送人员和实验室接收人员应当对标本进行双签收。接收人员应仔细检查信息表填写完整，转运容器无破损。

实验室检测人员应在二级及以上生物安全实验室打开转运容器外包装。取出采集管，检查其管壁无破损、管口无渗漏，确认无误后可进入检测流程。如有破损、渗漏，应当立即停止操作，用吸水纸覆盖后使用含氯消毒剂进行消毒处理，做好不合格登记后销毁。核对采集管标签与混采登记表信息（或信息系统中的信息）一致。

实验室接收标本后，应立即进行检测。检测前将标本采集管在高频涡旋振荡器上振荡20s，充分振荡洗脱后静置。在生物安全柜内小心开盖取样，避免产生气溶胶。应根据检测目标病原体的种类和方法，按试剂厂家操作说明书进行检测。

依据检测试剂说明书，判断检测结果为未检出/阴性或者检出/阳性。阴性结果可直接出报告。混采检测结果为阳性或灰区，通知相关部门对该混采管的20 个受试者重新采集单管拭子进行复核，如为严重的呼吸道传染病，应立即通知进行单独隔离。必要时可采集单人单管多个拭子（鼻咽拭子+咽拭子）。如果复核单管检测结果均为阴性，则按照阴性结果报告。如复核检测结果为阳性，则按传染病管控程序上报。

检测后的阴性标本如果为非灭活标本，应尽快进行高压灭菌处理，做好高压灭菌及其质量监控记录。如为检验前已经灭活标本，则无需高压灭菌，直接按医疗废物一起转运出实验室进行销毁处理。检测结果阳性的标本,及时高压灭菌后按医疗垃圾处理。

应根据病原体的种类，确定标本采集、运送、接收和检测人员的防护级别。标本采集人员应至少采用二级生物安全防护，标本运送人员采用一级生物安全防护，标本接收人员应当为经生物安全防护培训的指定人员，采用二级以上生物安全防护。检测人员应根据检测病原体的种类采用二级或以上生物安全防护。

以上对本发明的较佳实施例中进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方法，其中未尽详细描述的设备和措施应该理解为用本领域中的普通方式予以实施；任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可以利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出可能的变动和修饰，这并不影响本发明的实质内容。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例中所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护范围内。

Claims (10)

1.一种呼吸道病原体20合1混采技术，其特征在于，将采集自20人的20支拭子集合于一个采集管中进行检测的方法。

2.根据权利要求1所述一种呼吸道病原体20合1混采技术，其特征在于，所述拭子的尺寸为拭子杆长度15cm；植绒拭子头长度1.5cm、直径2.5mm；绒头厚度0.5mm；绒毛长度0.6mm，纤维度1.2D。

3.根据权利要求2所述的技术，其特征在于，所述拭子包括鼻咽拭子和咽拭子。

4.如权利要求1所述的一种呼吸道病原体20合1混采技术，其特征在于，所述采集管的管帽和管体应为聚丙烯材质，螺旋口可密封，松紧适度；管体透明，可视度好；采集管尺寸为外径（14.8±0.2）mm×（100.5±0.4）mm，管帽外径（15.8±0.15）mm，高度（12.5±0.5）mm；采集管的容量企业定标10 mL；采集管内含6mL含胍盐或其他有效病毒灭活剂的粉红色保存液。

5.如权利要求1所述的一种呼吸道病原体20合1混采技术，其特征在于，所述技术适用于呼吸道病原体的大规模采集和检测。

6.根据权利要求4所述的技术，其特征在于，所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒。

7.根据权利要求1-6所述的一种呼吸道病原体20合1混采技术的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1：采集前，需将20 名受检者分配为一组，收集并登记受检者相关信息；

步骤2：采集呼吸道病原体，需两名医务人员配合，一人负责采集拭子，一人负责将拭子收集入采集管内；

步骤3：拭子采集完毕后，采集人员立即将拭子头折断置入标本保存管中，使拭子头落入采集管的液体中，应保证拭子头均浸入保存液中，动作轻柔，避免产生气溶胶；

步骤4：将标本运送至检测实验室，实验室检测人员应首先检查采集管管壁无破损、管口无渗漏，确认无误后立即进行检测；

步骤5：先将标本采集管在高频涡旋振荡器上振荡20s，充分振荡洗脱后静置；然后在生物安全柜内小心开盖取样，避免产生气溶胶；最后，应根据检测目标病原体的种类和方法，按试剂厂家操作说明书进行检测；

步骤6：依据检测试剂说明书，判断检测结果：阴性结果可直接出报告；阳性或灰区，应对该混采管的20 个受试者重新采集单管拭子进行复核；复核单管检测结果均为阴性，则按照阴性结果报告；如复核检测结果为阳性，则按传染病管控程序上报；必要时可采集单人单管多个拭子（鼻咽拭子+咽拭子）。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2中采集呼吸道病原体的具体方法包括：鼻咽拭子和咽拭子。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述鼻咽拭子的采集包括：清理鼻腔，采样人员手执专用的鼻咽拭子贴鼻孔进入，待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转拭子3~5次，停留15~30秒。

10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述咽拭子的采集包括：被采集人员头部微仰，嘴张大，并发“啊”音，露出两侧咽扁桃体，将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。