CN112129937A - 新型冠状病毒（covid-19）抗原检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents

新型冠状病毒（covid-19）抗原检测试剂盒及其检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及新型冠状病毒检测技术领域，且新型冠状病毒(COVID‑19)抗原检测试剂盒，包括长方体纸盒包装，所述长方体纸盒包装内带有检测卡、无菌拭子、样本抽提液、样本抽提管、吸头和说明书一份，所述检测卡包括卡壳、试纸条组成，所述试纸条包括样品垫、标记垫、NC膜、吸水纸和PVC底板，所述标记垫有胶体金标记的鼠源N蛋白单克隆抗体Ⅰ。本发明的检测试剂盒特异性强，而且检测速度快、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等多种场所的初步筛查，能够在数分钟内判断结果，为疑似患者排查和无症状感染者筛查提供更简便、更快速的现场检测手段，从而及早预防疫情扩散。

Description

新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒及其检测方法
技术领域
本发明涉及新型冠状病毒检测技术领域，具体为新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
2019新型冠状病毒(COVID-19)，因2019年发生病毒性肺炎病例而被发现，2020年1月12日被世界卫生组织命名。和中东呼吸综合征病毒(MERS)以及严重急性呼吸综合征病毒(SARS)都属于β冠状病毒，属于人畜共患病原体，可引起动物和人之间的感染，也可引起人和人之间的感染。COVID-19含有棘突(S)蛋白、膜(M)蛋白、和核衣壳(N)蛋白等标志性蛋白。为了获得有效的治疗，COVID-19快速诊断就显得非常重要，快速鉴定可以减少住院时间，减少抗病毒药物的使用和减少住院费用，极大地节约了资源。COVID-19抗原快速检测试剂盒(胶体金免疫层析法)提供了一种简便快速检测人口咽拭子、鼻拭子样本中的新型冠状病毒，由于它的简便快速性，有助于及早治疗提高效率。
目前针对新型冠状病毒(COVID-19)的检测方法主要是PCR核酸检测，但是该检测方法对技术要求高，容易出现假阴性，样本需要特殊处理，要求具备PCR扩增仪及凝胶电泳等专业的仪器设备，对新型冠状病毒的检测用时长，需专业技术人员操作和判断检测结果，无法应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等基层的早期初步筛查。
因此，亟需一种更方便、更准确、更快捷、更有效的检测新型冠状病毒(COVID-19)的诊断试剂，进行早期鉴别诊断。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒及其检测方法，准确性高、特异性强，而且检测速度快、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等多种场所的初步筛查，能够在数分钟内判断结果，为疑似患者排查和无症状感染者筛查提供更简便、更快速的现场检测手段，从而及早预防疫情扩散。
(二)技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒，包括长方体纸盒包装，所述长方体纸盒包装内带有检测卡、无菌拭子、样本抽提液、样本抽提管、吸头和说明书一份；
所述检测卡包括卡壳、试纸条组成，所述试纸条包括样品垫、标记垫、NC膜、吸水纸和PVC底板，所述标记垫有胶体金标记的鼠源N蛋白单克隆抗体Ⅰ，所述NC膜包括检测线(T线)和质控线(C线)，所述检测线包被鼠源N蛋白单克隆抗体Ⅱ，所述质控线包被羊抗鼠抗体。
优选的，所述样本提取液包括以下原料：酪蛋白0.05～0.4g、中和抗体0.02～0.4g、庆大霉素0.012～0.054g、牛血清白蛋白1.5～6g、氯化钠5～20g、L－谷氨酸3.4～9.8g、0.1molPBS缓冲液。
优选的，所述无菌拭子由拭子头(人造纤维)和聚苯乙烯塑料杆组成，经γ射线辐照灭菌，一次性使用。
优选的，所述卡壳的正面设置有观察窗和加样孔，所述观察窗与NC膜对应。
本发明要解决的另一技术问题是提供新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
一、样本采集：
①口咽拭子的采集方法：被采集者的头部略微倾斜，张大嘴，露出两侧的咽扁桃体，用无菌拭子擦拭舌根，轻微地来回擦拭被采集者两侧的咽扁桃体至少3次，然后上下擦拭咽后壁至少3次；
②鼻咽拭子的采集方法：采样者用一只手轻轻地扶住被采样者头部，采样人员另一只手握住无菌拭子，将无菌拭子从鼻孔插入，然后沿下鼻腔底部缓慢向后穿透，应避免大力，避免外伤性出血，当无菌拭子的尖端到达鼻咽腔的后壁时，将其轻轻旋转一周，以防止反射性咳嗽，停一分钟，然后慢慢取出无菌拭子；
三、样本处理：
添加7滴(约200μL)样本抽提液到样本抽提管中，将取样后的无菌拭子浸入到样本抽提液中，使样本抽提液完全渗透到无菌拭子中，旋转10秒并挤压无菌拭子10次，使液体尽可能保留在管内，取出并弃去无菌拭子，盖上滴头，摇晃样本抽提管，使其中液体混匀；
三、样本检验：
①在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，并严格按照说明书进行操作；
②取出检测卡，平衡至室温后，沿铝箔袋撕口拆开，将其平放；
③将2滴已处理过的样本抽提液(50-60μL)垂直滴入检测卡的加样孔内；
④室温放置10-20分钟后观察检测结果，超过20分钟观察结果无效；
四、检验结果解释：
①阳性：两条紫红色条带，检测线(T线)和质控线(C线)均显色；
②阴性：一条紫红色条带，仅质控线(C线)显色；
③无效：质控线(C线)无显色，检测无效，建议另取检测卡重新检测。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提供了新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒及其检测方法，具备以下有益效果：
(1)本发明的检测试剂盒特异性强，而且检测速度快、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等多种场所的初步筛查，能够在数分钟内判断结果，为疑似患者排查和无症状感染者筛查提供更简便、更快速的现场检测手段，从而及早预防疫情扩散。
(2)本发明能够准确的判断该机体的免疫学反应状态，从而根据检测结果，给出准确的检测结果，有助于提高新冠病毒检出率，避免“假阴性”结果，防止漏检，进一步提升检查准确性，为临床诊治新型冠状病毒肺炎提供帮助。
附图说明
图1为本发明中试纸条的结构示意图；
图2为本发明中卡壳的结构示意图；
图3为本发明中检验结果解释图。
图中标号说明：
1、卡壳；11、观察窗；12、加样孔；2、试纸条；21、样品垫；22、标记垫；23、NC膜；24、吸水纸。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒，包括长方体纸盒包装，长方体纸盒包装内带有检测卡、无菌拭子、样本抽提液、样本抽提管、吸头和说明书一份；
检测卡包括卡壳1、试纸条2组成，试纸条2包括样品垫21、标记垫22、NC膜23、吸水纸24和PVC底板25，标记垫22有胶体金标记的鼠源N蛋白单克隆抗体Ⅰ，NC膜23包括检测线(T线)和质控线(C线)，检测线包被鼠源N蛋白单克隆抗体Ⅱ，质控线包被羊抗鼠抗体。
进一步的，样本提取液包括以下原料：酪蛋白0.05～0.4g、中和抗体0.02～0.4g、庆大霉素0.012～0.054g、牛血清白蛋白1.5～6g、氯化钠5～20g、L－谷氨酸3.4～9.8g、0.1molPBS缓冲液。
进一步的，无菌拭子由拭子头(人造纤维)和聚苯乙烯塑料杆组成，经γ射线辐照灭菌，一次性使用。
请参阅图2，卡壳1的正面设置有观察窗11和加样孔12，观察窗11与NC膜23对应。
请参阅图3，新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
一、样本采集：
①口咽拭子的采集方法：被采集者的头部略微倾斜，张大嘴，露出两侧的咽扁桃体，用无菌拭子擦拭舌根，轻微地来回擦拭被采集者两侧的咽扁桃体至少3次，然后上下擦拭咽后壁至少3次；
②鼻咽拭子的采集方法：采样者用一只手轻轻地扶住被采样者头部，采样人员另一只手握住无菌拭子，将无菌拭子从鼻孔插入，然后沿下鼻腔底部缓慢向后穿透，应避免大力，避免外伤性出血，当无菌拭子的尖端到达鼻咽腔的后壁时，将其轻轻旋转一周，以防止反射性咳嗽，停一分钟，然后慢慢取出无菌拭子；
四、样本处理：
添加7滴(约200μL)样本抽提液到样本抽提管中，将取样后的无菌拭子浸入到样本抽提液中，使样本抽提液完全渗透到无菌拭子中，旋转10秒并挤压无菌拭子10次，使液体尽可能保留在管内，取出并弃去无菌拭子，盖上滴头，摇晃样本抽提管，使其中液体混匀；
三、样本检验：
①在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，并严格按照说明书进行操作；
②取出检测卡，平衡至室温后，沿铝箔袋撕口拆开，将其平放；
③将2滴已处理过的样本抽提液(50-60μL)垂直滴入检测卡的加样孔内；
④室温放置10-20分钟后观察检测结果，超过20分钟观察结果无效；
四、检验结果解释：
①阳性：两条紫红色条带，检测线(T线)和质控线(C线)均显色；
②阴性：一条紫红色条带，仅质控线(C线)显色；
③无效：质控线(C线)无显色，检测无效，建议另取检测卡重新检测，如图3所示。
原理：采集到的样本经样本抽提液处理后加样，测试时，当含有新冠病毒N蛋白的抽提液，加入到检测卡的加样孔11后，在层析作用下，样本向吸水纸24端移动，先经过标记垫22，N蛋白与胶体金标记的鼠源N蛋白单克隆抗体I特异性结合，并继续向吸水纸24端移动，当样本移动到T线时，结合了标记抗体的N蛋白以双抗体夹心的方式与T线中包被的N蛋白单克隆抗体II特异性结合，留在T线的位置；剩余液体继续向吸水纸24端移动，当移动到C线位置时，胶体金标记的鼠源N蛋白抗体I与C线中的羊抗鼠抗体特异性结合，T线显示红色条带，提示新型冠状病毒抗原阳性，无论T线是否显色，C线都应显示红色，若C线未显色，则表明检测无效，此样本需重新进行检测。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒，其特征在于：包括长方体纸盒包装，所述长方体纸盒包装内带有检测卡、无菌拭子、样本抽提液、样本抽提管、吸头和说明书一份；
所述检测卡包括卡壳(1)、试纸条(2)组成，所述试纸条(2)包括样品垫(21)、标记垫(22)、NC膜(23)、吸水纸(24)和PVC底板(25)，所述标记垫(22)有胶体金标记的鼠源N蛋白单克隆抗体Ⅰ，所述NC膜(23)包括检测线(T线)和质控线(C线)，所述检测线包被鼠源N蛋白单克隆抗体Ⅱ，所述质控线包被羊抗鼠抗体。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒，其特征在于：所述样本提取液包括以下原料：酪蛋白0.05～0.4g、中和抗体0.02～0.4g、庆大霉素0.012～0.054g、牛血清白蛋白1.5～6g、氯化钠5～20g、L－谷氨酸3.4～9.8g、0.1molPBS缓冲液。
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒，其特征在于：所述无菌拭子由拭子头(人造纤维)和聚苯乙烯塑料杆组成，经γ射线辐照灭菌，一次性使用。
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒，其特征在于：所述卡壳(1)的正面设置有观察窗(11)和加样孔(12)，所述观察窗(11)与NC膜(23)对应。
5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒，其特征在于：所述样本抽提管和吸头均为聚苯乙烯塑料。
6.新型冠状病毒(COVID-19)抗原检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
一、样本采集：
①口咽拭子的采集方法：被采集者的头部略微倾斜，张大嘴，露出两侧的咽扁桃体，用无菌拭子擦拭舌根，轻微地来回擦拭被采集者两侧的咽扁桃体至少3次，然后上下擦拭咽后壁至少3次；
②鼻咽拭子的采集方法：采样者用一只手轻轻地扶住被采样者头部，采样人员另一只手握住无菌拭子，将无菌拭子从鼻孔插入，然后沿下鼻腔底部缓慢向后穿透，应避免大力，避免外伤性出血，当无菌拭子的尖端到达鼻咽腔的后壁时，将其轻轻旋转一周，以防止反射性咳嗽，停一分钟，然后慢慢取出无菌拭子；
二、样本处理：
添加7滴(约200μL)样本抽提液到样本抽提管中，将取样后的无菌拭子浸入到样本抽提液中，使样本抽提液完全渗透到无菌拭子中，旋转10秒并挤压无菌拭子10次，使液体尽可能保留在管内，取出并弃去无菌拭子，盖上滴头，摇晃样本抽提管，使其中液体混匀；
三、样本检验：
①在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，并严格按照说明书进行操作；
②取出检测卡，平衡至室温后，沿铝箔袋撕口拆开，将其平放；
③将2滴已处理过的样本抽提液(50-60μL)垂直滴入检测卡的加样孔内；
④室温放置10-20分钟后观察检测结果，超过20分钟观察结果无效；
四、检验结果解释：
①阳性：两条紫红色条带，检测线(T线)和质控线(C线)均显色；
②阴性：一条紫红色条带，仅质控线(C线)显色；
③无效：质控线(C线)无显色，检测无效，建议另取检测卡重新检测。
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