CN115947775B - 一种制备化合物（i）的方法和化合物（i）及其用途 - Google Patents

Abstract

本申请提供了一种制备化合物（I）的方法和化合物（I）及其用途，其中，方法包括：将化合物1与DOTA‑三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品，将化合物2粗品纯化得到化合物2纯品；将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品，将所述化合物3粗品提纯得到化合物3纯品；将化合物3纯品与3‑马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品，将所述化合物4粗品提纯得到化合物4纯品；将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品，将化合物（I）粗品纯化得到化合物（I）纯品。其产物纯度满足原料药质量标准，可进行商业化生产，较现有技术进行4次高效制备液相分离，本申请仅需要两次，生产效率更高。

Description

一种制备化合物（I）的方法和化合物（I）及其用途

技术领域

本申请涉及医药技术领域，尤其涉及一种制备化合物（I）的方法和化合物（I）及其用途。

背景技术

专利CN111741751A公开了DOTA-EB-PSMA的化学结构式，是一种伊文思蓝(EvansBlue)染料类的衍生物，可以作为靶向前列腺癌的放射疗法和显像剂。

在使用betta发射体，最常用的小分子为177LU-PSMA-617,目前已经上市。在大多数临床试验中，患者的常规治疗由多达包括3个周期的177LU-PSMA-617组成。

177Lu-PSMA-617是一种放射配体疗法（radioligand therapy，RLT），这类疗法结合了一种可与肿瘤表达的标志物结合的靶向性化合物和一种放射性同位素，可导致DNA损伤，抑制肿瘤生长和复制。这种治疗方法能够精确地向肿瘤细胞靶向递送辐射，同时限制对周围正常组织的损害。

放射性药物前体化合物（I）是一种类似于177LU-PSMA-617的化合物，它和177LuCl3发生络合反应得到资料前列腺癌的药物。

现有技术中，合成放射性药物前体化合物（I） (DOTA-EB-PSMA)的方法主要参考专利：中国专利CN111741751A（发明名称：伊文思蓝衍生物的化学缀合物及其作为靶向前列腺癌的放射疗法和显像剂的用途）；文献：Zhantong Wang, Rui Tian, Gang Niu, Ying Ma,Lixin Lang, Lawrence P. Szajek, Dale O. Kiesewetter, Orit Jacobson andXiaoyuan Chen，伊文思蓝改良的PSMA-617：单次低剂量注射放射配体疗法治疗前列腺特异性膜和抗原阳性肿瘤，Bioconjugate Chem., Just Accepted Manuscript• DOI:10.1021/acs.bioconjchem.8b00556 • Publication Date (Web): 14 Aug 2018Downloaded from http://pubs.acs.org on August 15, 2018。

文献（J Nucl Med 2017; 58:590–597）记载的合成工艺：

。

但是，该合成工艺存在以下问题：

1、每一步中间体都需要HPLC制备分离纯化，成本高，周期长，操作冗繁，难以实现工业化放大生产。而且，纯化容易导致分解，每步HPLC纯化需要4~5天时间。

2、收率总体依然偏低，经济效益难以保证。

3、中间体和终产品质量标准设定较低，大部分中间体纯度不超过90%，没有达到最大单杂（需小于0.5%）和总杂限度（需小于2%）要求，难以满足作为药物中间体质量相关标准要求，无法用于实际治疗。

4、只有化合物2能够纯化，其他中间体均不稳定，所以需要得到高纯度化合物2产品，才能够制得合格的其他中间体。

另外，在专利WO2017/196806和WO2019/070236中合成了类似化合物，其主要对于结构鉴定和药物的构效关系进行了重点阐述，只有很小的篇幅对合成表述，做出少量研发样品并进行结构鉴定，没有合成相关后处理及收率数据，对与该类化合物的合成工艺及生产放大可借鉴意义有限。

发明内容

为解决现有技术中的问题，本申请提供一种制备化合物（I）的方法以和由该方法制备的化合物（I）以及化合物（I）在靶向放射疗法中作为显像剂的用途。本申请技术方案如下：

1、一种制备化合物（I）的方法，包括以下步骤：

将化合物1与提纯后的DOTA-三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品，将化合物2粗品纯化得到化合物2纯品；

将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品，将所述化合物3粗品提纯得到化合物3纯品；

将化合物3纯品与3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品，将所述化合物4粗品提纯得到化合物4纯品；

将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品，将化合物（I）粗品纯化得到化合物（I）纯品；

。/>

2、根据项1所述的方法，提纯DOTA-三叔丁酯包括以下步骤：

混合乙酸乙酯与水，得到乙酸乙酯与水的混合液；

将DOTA-三叔丁酯加入到乙酸乙酯与水的混合液中搅拌，将下层水相用碱溶液调节至pH=7.4-7.6，静置，分液；

其中，DOTA-三叔丁酯与乙酸乙酯和水的质量比为1：（6~10）：（5~10）；

合并有机相并在外浴温度T≤30°C下减压浓缩有机相直至无馏分；

惰性气体保护下，向浓缩后的有机相中加入N,N-二甲基甲酰胺，稀释溶解至澄清，得到DOTA-三叔丁酯的N,N-二甲基甲酰胺溶液。

3、根据项1所述的方法，将化合物1与提纯后的DOTA-三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下， 将DOTA-三叔丁酯的溶液和HATU加入到反应容器中，搅拌溶解至澄清；继续加入DIPEA并搅拌均匀；在0~10°C下加入化合物1；

其中化合物1与DOTA-三叔丁酯、HATU和DIPEA的摩尔比为 1.0:（2.0~4.0）：（1.8~3.5）:（4.0 ~5.0）；升温至10~25°C进行保温反应，至反应完全，得到第一反应液；

惰性气体保护下，控温0~5°C，将第一反应液滴加至磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液，过滤，得到固体成分；淋洗固体成分后，控温T≤30°C，将固体成分在惰性气体下干燥，得到化合物2粗品。

4、根据项1所述的方法，所述将化合物2粗品纯化得到化合物2纯品为通过反相高效制备液相分离纯化得到化合物2纯品。

5、根据项1所述的方法，所述将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，混合纯化水、三异丙基硅烷、三氟乙酸并搅拌均匀，降温至0~5°C后，加入化合物2纯品并搅拌均匀； 其中，

化合物2与水、三异丙基硅烷和三氟乙酸的摩尔比为1:（30 ~50）：（3.0 ~5.0）：（150 ~200）；

然后升温至15~30°C保温反应3~5h，得到含化合物3的反应液；

惰性气体保护， 15~30°C下，将化合物3的反应液滴加至析晶溶剂中，析出固体产物，过滤得第一滤饼，以得到化合物3粗品。

6、根据项5所述的方法，将所述化合物3粗品提纯得到化合物3纯品包括以下步骤：将第一滤饼进行打浆、过滤、干燥，以提纯所述化合物3，得到化合物3纯品。

7、根据项1所述的方法，所述将化合物3纯品与3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，将化合物3溶解至N,N-二甲基甲酰胺，控温20~30°C，滴加三乙胺溶液；

滴加完三乙胺后向体系中加入3-马来酰亚胺丙酸羟基琥珀酰亚胺酯，20~30°C下保温反应至反应完全，得到含化合物4的反应液；

其中，化合物3与三乙胺和3-马来酰亚胺丙酸羟基琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1.0：（4.0 ~6.0）：（1.1 ~1.5）；

惰性气体保护下，将所述含化合物4的反应液滴加入析晶溶剂并搅拌均匀，过滤，干燥后得第二滤饼，以得到化合物4粗品。

8、根据项7所述的方法，将所述化合物4粗品提纯得到化合物4纯品包括以下步骤：惰性气体保护下，将乙腈和析晶溶剂加入到反应容器中，将第二滤饼加入反应容器中打浆、过滤、干燥，得化合物4纯品。

9、根据项5~8中任一项所述的方法，所述析晶溶剂为甲基叔丁基醚 、异丙醚或乙醚。

10、根据项1所述的方法，所述将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，向反应容器中加入纯化水，磷酸氢二钠，氯化钠，和L-抗坏血酸，搅拌至澄清；

调节体系pH至pH=6.8~7.0，得第一溶液；

惰性气体保护下，将化合物4加入到第一溶液中，搅拌澄清备用，得到第二溶液；

将化合物5用N,N-二甲基甲酰胺溶解备用，得第三溶液；

惰性气体保护下，控温20~30℃将第三溶液滴加到第二溶液中，滴加完毕后，控温20-30℃保温反应，至反应完全；

其中，化合物5与化合物4和L-抗坏血酸、磷酸氢二钠的摩尔比为1：（ 1.05~1.25）：（ 0.10~0.25 ）：（0.50 ~ 0.80）。

11、根据项1所述的方法，其特征在于，

所述将化合物（I）粗品纯化得到化合物（I）纯品为通过反相高效制备液相分离纯化得到化合物（I）纯品。

12、一种化合物（I），其特征在于，由项1~11中任一项所述的方法制得；

。

13、项12所述的化合物（I）在靶向放射疗法中作为显像剂的用途。

通过本申请提供的制备化合物（I）的方法，得到产物纯度满足原料药质量标准，可进行商业化生产，较现有技术进行4次高效制备液相分离，本申请制备过程仅需要两次HPLC纯化，与现有技术相比，每次生产至少节省8~10天时间，生产效率更高；而且能够批量大量生产，能够满足使用（如在靶向放射疗法中作为显像剂）的需要。

上述说明仅是本申请技术方案的概述，为了能够使得本申请的技术手段更加清楚明白，达到本领域技术人员可依照说明书的内容予以实施的程度，并且为了能够让本申请的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，下面以本申请的具体实施方式进行举例说明。

实施方式

本申请的以下实施方式仅用来说明实现本申请的具体实施方式，这些实施方式不能理解为是对本申请的限制。其他的任何在未背离本申请的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均视为等效的置换方式，落在本申请的保护范围之内。

本实施例提供了一种制备化合物（I）的方法，包括以下步骤：

将化合物1与提纯后的DOTA-三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品，将化合物2粗品纯化（反相制备液相分离提纯）得到化合物2纯品；

将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品，将所述化合物3粗品提纯得到化合物3纯品；

将化合物3纯品与3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品，将所述化合物4粗品提纯得到化合物4纯品；

将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品，将化合物（I）粗品纯化（反相制备液相分离提纯）得到化合物（I）纯品；

。/>

以上实施例提供了一种新的制备化合物（I）的方法，相对于背景技术中介绍的现有技术生产需要四次HPLC纯化，以上实施例的方案仅需要两次，从而每次生产至少节省8~10天时间，生产效率更高，产物纯度更高，且杂质含量均在药用质量标准范围内；另外，以上实施例的方案能够批量大量生产，满足使用（如在靶向放射疗法中作为显像剂）。

在一个实施例中，提纯DOTA-三叔丁酯包括以下步骤：

混合乙酸乙酯与水，得到乙酸乙酯与水的混合液；

将DOTA-三叔丁酯加入到乙酸乙酯与水的混合液中搅拌，将下层水相用碱溶液调节至pH=7.4~7.6范围内（具体地，可以为7.4、7.5或7.6），静置，分液；

其中，DOTA-三叔丁酯与乙酸乙酯和水的质量比为1：（6~10）：（5~10）（具体地，可以为1：6：5、1：8：5、1：10：5、1：6：7、1：8：7、1：10：7、1：6：9、1：8：9或1：10：9）；

合并有机相并在外浴温度T≤30°C下减压浓缩有机相直至无馏分；

惰性气体保护下，向浓缩后的有机相中加入N,N-二甲基甲酰胺，稀释溶解至澄清，得到DOTA-三叔丁酯的N,N-二甲基甲酰胺溶液。

在一个实施例中，将化合物1与提纯后的DOTA-三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下， 将DOTA-三叔丁酯溶液和HATU加入到反应容器中，搅拌溶解至澄清；继续加入DIPEA并搅拌均匀；在0~10°C下加入化合物1；

其中化合物1与DOTA-三叔丁酯、HATU和DIPEA的摩尔比为 1.0:（2.0~4.0）：（1.8~3.5）:（4.0 ~5.0）（具体地，可以为1.0：2.0：2.0：4.0、1.0：3.0：3.0：4.5或1.0：4.0：3.5：5.0）；升温至10~25°C进行保温反应，，至反应完全得到第一反应液；

惰性气体保护下，控温0~5°C，将第一反应液滴加至磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液，过滤，得到固体成分；淋洗固体成分后，控温T≤30°C，将固体成分在惰性气体下干燥，得到化合物2粗品。

在一个实施例中，所述将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，混合纯化水、三异丙基硅烷、三氟乙酸并搅拌均匀，降温至0~5°C后，加入化合物2纯品并搅拌均匀； 其中，

化合物2与水、三异丙基硅烷和三氟乙酸的摩尔比为1:（30 ~50）：（3.0 ~5.0）：（150 ~200）（具体地，可以为30：3.0：150、40：4.0：175或50：5.0：200）；

然后升温至15~30°C保温反应3~5h，得到含化合物3的反应液；

惰性气体保护， 15~30°C下，将化合物3的反应液滴加至析晶溶剂中，析出固体产物，过滤得第一滤饼，得到化合物3粗品。

本申请中，所述析晶溶剂具体为甲基叔丁基醚 、异丙醚或乙醚。

在一个实施例中，将所述化合物3粗品提纯得到化合物3纯品包括以下步骤：将第一滤饼进行打浆、过滤、干燥，以提纯所述化合物3，得到化合物3纯品。

本申请中，打浆是指将滤饼浸入析晶溶剂并搅拌，以使滤饼成分分散至析晶溶剂，可溶性杂质保留在析晶溶剂中，达到精制产物的目的。

在一个实施例中，所述将化合物3纯品与3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，将化合物3溶解至N,N-二甲基甲酰胺，控温20~30°C，滴加三乙胺溶液；

滴加完三乙胺后向体系中加入3-马来酰亚胺丙酸羟基琥珀酰亚胺酯，20~30°C下保温反应至反应完全，得到含化合物4的反应液；

其中，化合物3与三乙胺和3-马来酰亚胺丙酸羟基琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1.0：（4.0 ~6.0）：（1.1 ~1.5）（具体地，可以为1.0：4.0：1.1、1.0：5.0：1.3或1.0：6.0：1.5）；

惰性气体保护下，将所述含化合物4的反应液滴加入析晶溶剂并搅拌均匀，过滤，干燥后得第二滤饼，以得到化合物4粗品。

在一个实施例中，将所述化合物4粗品提纯得到化合物4纯品包括以下步骤：

惰性气体保护下，将乙腈和析晶溶剂加入到反应容器中，将第二滤饼加入反应容器中打浆、过滤、干燥，得化合物4纯品。

在一个实施例中，所述将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，向反应容器中加入纯化水，磷酸氢二钠，氯化钠，和L-抗坏血酸，搅拌至澄清；

调节体系pH至pH=6.8-7.0，得第一溶液；

惰性气体保护下，将化合物4加入到第一溶液中，搅拌澄清备用，得到第二溶液；

将化合物5用N,N-二甲基甲酰胺溶解备用，得第三溶液；

惰性气体保护下，控温20~30℃将第三溶液滴加到第二溶液中，滴加完毕后，控温20-30℃保温反应，至反应完全（化合物5无残留）；

其中，化合物5与化合物4和L-抗坏血酸、磷酸氢二钠的摩尔比为1：（ 1.05~1.25）：（ 0.10~0.25 ）：（0.50 ~ 0.80）（具体地，可以为1：1.05：0.10：0.50、1：1.10：0.18：0.6、1：1.20：0.20：0.7或1：1.25：0.25：0.80）。

在一个实施例中，所述将化合物2粗品纯化得到化合物2纯品，和/或所述将化合物（I）粗品纯化得到化合物（I）纯品为通过反相高效制备液相（一种HPLC）分离纯化得到化合物（I）纯品。

实施例

下述所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。

下述所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

为了便于本申请表述，本申请中的化学物质代码/缩写与中文名称的对应情况如表1所示。

表1：主要反应物料名称表英文及缩写汇总表

。

实施例1

具体制备方法：

1、制备化合物2:

。

1.1、提纯制备DOTA-三叔丁酯溶液

向反应釜中先后加入0.963kg乙酸乙酯（EA）和0.729kg纯化水，加入0.144kgDOTA-三叔丁酯；向体系中加入0.972kg碳酸氢钠溶液调节pH至7.4-7.6（下层水相）；

将体系静置分液，用0.963kg乙酸乙酯（EA）萃取水相，搅拌，静置，分液；

合并有机相转移至旋蒸瓶中，于外浴温度T≤30°C下减压浓缩直至无馏分。

氮气保护下，向旋蒸瓶中加入0.540kg N,N-二甲基甲酰胺（DMF），稀释溶解至澄清得到DOTA-三叔丁酯溶液。

1.2、反应制备化合物2粗品

氮气保护下，向反应釜中加入提纯的DOTA-三叔丁酯溶液和0.095kg HATU，搅拌溶解至澄清。在氮气保护下向体系中加入0.065kg DIPEA，滴毕，向体系中加入0.090kg 化合物1。

将体系升温至10~25°C进行保温反应5h后，对体系取样进行HPLC检测，至原料无残留，停止反应。

配制磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液：氮气保护下，向反应釜中加入11.7kg纯化水（10kg）、磷酸氢二钠（0.5kg）和磷酸二氢钠（0.8kg），搅拌至固体全溶，降温至0~5°C。

氮气保护下，控温0~5°C，将中控合格反应液滴加到磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液中，滴加完毕。

将体混合后系过滤，滤饼用纯化水淋洗两次；

控温T≤30°C，将滤饼真空干燥12h以上，得到化合物2粗品。

1.3、纯化制备化合物2纯品

化合物2粗品用甲醇溶解，（甲醇：粗品=（10~15）：1）（质量比）。

流动相A：将纯化水（60kg），醋酸铵（0.2kg）和三氟乙酸（0.5kg），加入反应釜中，搅拌，以备用。

流动相B：将制备乙腈（25kg），异丙醇（25kg）和三氟乙酸（0.2kg）加入到反应釜中，搅拌，以备用。

填柱：取YMC*GEL ODS-AQ-HG 14nm和异丙醇进行匀浆，得到填料溶液，摇匀后倒入制备柱进行装柱。

洗脱

进行制备前准备，运行空白，并进行预实验；确定洗脱条件为：

。

根据预实验结果决定收集计划，后续每2~5针合并为一批，每批对应组分合并后送HPLC检测，纯度≥97%为合格组分，氮气保护下，合并暂存；

合并合格组分，于外浴温度T≤30°C下减压浓缩至无馏分，得固体产物。

收料，得到紫色固体粉末0.114kg；收率73.6%；纯度：99.64%。

2、制备化合物3

。

2.1反应制备化合物3

氮气保护下，向5L反应釜中先后加入0.040kg纯化水、0.036kg三异丙基硅烷（TIS）、1.116kg三氟乙酸（TFA），体系搅拌溶解得溶液1；

氮气保护下，将化合物2（0.104kg）在溶液1（0.953kg）搅拌溶解，得溶液2；

将溶液2滴加到5L反应釜中，体系升温至15-30℃保温反应3~5h，之后取样，HPLC检测，至化合物2无残留，停止反应，得到含化合物3的反应液。氮气保护下，搅拌，向10L反应釜中加入甲基叔丁基醚（6kg）,将上述含化合物3的反应液滴加到反应釜中，过程中析出固体产物（析晶），搅拌。

将体系过滤，滤饼用甲基叔丁基醚淋洗得到滤饼1（化合物3粗品）。

2.2提纯化合物3

氮气保护下，控温15~30°C，滤饼1用甲基叔丁基醚打浆。

氮气保护下，将体系中溶液转移至压滤罐过滤，用甲基叔丁基醚淋洗液滤饼；

氮气保护下，30℃下真空干燥。

收料，得到紫色粉末状固体0.0882kg，收率：97%，纯度：99.00%。

3、制备化合物4

。

3.1反应制备化合物4粗品

氮气保护下，将化合物3（0.088kg）和N,N-二甲基甲酰胺（1.032kg）加入到反应釜中，搅拌溶解，控温20~30°C，向体系中滴加三乙胺（0.037kg），加毕，搅拌，得反应液1。

氮气保护下，将3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯（0.023kg）和N,N-二甲基甲酰胺（0.78kg）加入到反应瓶中，搅拌溶解，得溶液4。

将溶液4滴加到反应液1的体系中，控制体系20~30°C保温反应，监控至化合物3无残留，得溶液5。

氮气保护下，向10L反应釜中加入甲基叔丁基醚（6kg），搅拌条件下将溶液5滴加到体系中，过程中析出固体，搅拌。

将体系转移至压滤罐过滤，滤饼用甲基叔丁基醚淋洗，得到滤饼2（化合物4粗品）。

3.2提纯化合物4

氮气保护下，将乙腈（0.172kg），甲基叔丁基醚（0.437kg）和滤饼2加入到反应瓶中；控温15-30°C，搅拌2h。

体系用压滤罐过滤，滤饼用甲基叔丁基醚淋洗，得到滤饼3。

氮气保护下，控温30°C下，真空干燥。

收料，得到紫色粉末状固体0.0988kg，收率98.2%；纯度：98.06%。

4、制备化合物（I）

。

氮气保护下，反应釜中先后加入纯化水（2.730kg），磷酸氢二钠（0.0102kg），氯化钠（0.0242kg）和L-抗坏血酸（0.0028kg），搅拌至澄清。

向体系中滴加磷酸氢二钠或盐酸调节体系pH=6.8-7.0，得溶液6。

氮气保护下，向反应瓶中加入化合物4（0.98kg）和溶液6（0.328 kg）搅拌澄清，得溶液7。

氮气保护下，将N,N-二甲基甲酰胺（1.2884kg）和化合物5（0.0485kg）加入到反应瓶中，搅拌溶解，得溶液8。

氮气保护下，控温20~30°C，将溶液8滴加到溶液7中，保温反应过程中取样检测（HPLC），直至化合物4无残留，得溶液9。

将溶液9进行制备液相分离：

填料：YMC*GELODS-AQ-HG 14nm 12um

色谱柱型号: DAC-100

洗脱液A：纯化水：三乙胺：磷酸=800：1：4（质量比）

洗脱液B：乙腈。

洗脱比例：

。

收集洗脱液，分批转移至旋转蒸发仪，于外浴T≤30^oC下减压浓缩至无馏分流出。

将浓缩后组分，过80D纳滤除盐，除盐后滤液，冻干，得得到深紫色固体粉末0.138kg，收率87.8%；纯度99.36%。

如表2的检验结果所显示的，经过本工艺生产，得到的前体化合物（I）质量满足药品监管要求，质量稳定可靠。

表2：化合物（I）的检验结果

。

对比例1：

对比例1与实施例1的区别仅在于不进行实施例1中的“1.1、提纯制备DOTA-三叔丁酯溶液”步骤，即直接使用“0.144kg DOTA-三叔丁酯”替代“1.2、反应制备化合物2粗品”步骤中的“提纯的DOTA-三叔丁酯溶液”进行反应。

对比例2：

对比例1与实施例1的区别仅在于不进行实施例1中的“1.3、纯化制备化合物2纯品”步骤，即直接使用“1.2、反应制备化合物2粗品”步骤中得到的“化合物2粗品”进行后续反应。

对比例3：

对比例3与实施例1的区别仅在于不进行实施例1中的“2.2提纯化合物3”步骤，即直接使用“2.1反应制备化合物3”所得到的滤饼1进行后续反应。

对比例4：

对比例4与实施例1的区别仅在于不进行实施例1中的“3.2提纯化合物4”步骤，即直接使用“3.1反应制备化合物4”所得到的滤饼2进行后续反应。

将实施例1与对比例1~4的产物质量、收率、产物纯度汇总至表3。

表3：实施例1与对比例1~4所制得的化合物（I）的质量、第4步收率与产物纯度

。

根据以上实施例1与对比例1~4可以知道：

实施例1与现有技术相比，其收率高，且纯度（不论是单杂还是总杂）均能够达到原料药质量标准；相对于现有技术生产需要四次HPLC纯化，实施例1的方案仅需要两次，从而每次生产至少节省8~10天时间，生产效率更高；另外，现有技术批量小，未进行反应过程，后处理等具体描述，实施例1的方案能够批量大量生产，满足生产的需要。

实施例1与对比例1~4比较，可以知道，首先，收率更高；其次，纯度（不论是单杂还是总杂）均能够达到原料药质量标准，而从对比例1~4的最终制品的纯度来看，总杂均不满足要求（需小于2%），无法用于实际治疗过程。

尽管以上对本申请的实施方案进行了描述，但本申请并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本申请权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本申请要求保护之列。

Claims (5)

1.一种制备化合物（I）的方法，包括以下步骤：

将化合物1与提纯后的DOTA-三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品，将化合物2粗品纯化得到化合物2纯品；

将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品，将所述化合物3粗品提纯得到化合物3纯品；

将化合物3纯品与3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品，将所述化合物4粗品提纯得到化合物4纯品；

将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品，将化合物（I）粗品纯化得到化合物（I）纯品；

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其中，提纯DOTA-三叔丁酯包括以下步骤：

混合乙酸乙酯与水，得到乙酸乙酯与水的混合液；

将DOTA-三叔丁酯加入到乙酸乙酯与水的混合液中搅拌，将下层水相用碱溶液调节至pH=7.4~7.6，静置，分液；

其中，DOTA-三叔丁酯与乙酸乙酯和水的质量比为1：（6~10）：（5~10）；

合并有机相并在外浴温度T≤30°C下减压浓缩有机相直至无馏分；

惰性气体保护下，向浓缩后的有机相中加入N,N-二甲基甲酰胺，稀释溶解至澄清，得到DOTA-三叔丁酯的N,N-二甲基甲酰胺溶液；

其中，将化合物1与提纯后的DOTA-三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下， 将DOTA-三叔丁酯的溶液和HATU加入到反应容器中，搅拌溶解至澄清；继续加入DIPEA并搅拌均匀；在0~10°C下加入化合物1；

升温至10~25°C进行保温反应，至反应完全，得到第一反应液；

惰性气体保护下，控温0~5°C，将第一反应液滴加至磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液，过滤，得到固体成分；淋洗固体成分后，控温T≤30°C，将固体成分在惰性气体下干燥，得到化合物2粗品；

其中，所述将化合物2粗品纯化得到化合物2纯品为通过反相高效制备液相分离纯化得到化合物2纯品；

其中，所述将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，混合纯化水、三异丙基硅烷、三氟乙酸并搅拌均匀，降温至0~5°C后，加入化合物2纯品并搅拌均匀；

然后升温至15~30°C保温反应3~5h，得到含化合物3的反应液；

惰性气体保护， 15~30°C下，将化合物3的反应液滴加至析晶溶剂中，析出固体产物，过滤得第一滤饼，以得到化合物3粗品；

其中，将所述化合物3粗品提纯得到化合物3纯品包括以下步骤：

将第一滤饼进行打浆、过滤、干燥，以提纯所述化合物3，得到化合物3纯品；

其中，所述将化合物3纯品与3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，将化合物3溶解至N,N-二甲基甲酰胺，控温20~30°C，滴加三乙胺溶液；

滴加完三乙胺后向体系中加入3-马来酰亚胺丙酸羟基琥珀酰亚胺酯，20~30°C下保温反应至反应完全，得到含化合物4的反应液；

惰性气体保护下，将所述含化合物4的反应液滴加入析晶溶剂并搅拌均匀，过滤，干燥后得第二滤饼，以得到化合物4粗品；

其中，将所述化合物4粗品提纯得到化合物4纯品包括以下步骤：

惰性气体保护下，将乙腈和析晶溶剂加入到反应容器中，将第二滤饼加入反应容器中打浆、过滤、干燥，得化合物4纯品；

其中，所述将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品包括以下步骤：

惰性气体保护下，向反应容器中加入纯化水，磷酸氢二钠，氯化钠，和L-抗坏血酸，搅拌至澄清；

调节体系pH至pH=6.8~7.0，得第一溶液；

惰性气体保护下，将化合物4加入到第一溶液中，搅拌澄清备用，得到第二溶液；

将化合物5用N,N-二甲基甲酰胺溶解备用，得第三溶液；

惰性气体保护下，控温20~30℃将第三溶液滴加到第二溶液中，滴加完毕后，控温20-30℃保温反应，至反应完全；

其中，所述将化合物（I）粗品纯化得到化合物（I）纯品为通过反相高效制备液相分离纯化得到化合物（I）纯品；

其中，所述析晶溶剂为甲基叔丁基醚。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

在将化合物1与提纯后的DOTA-三叔丁酯通过缩合反应得到化合物2粗品过程中，化合物1与DOTA-三叔丁酯、HATU和DIPEA的摩尔比为 1.0:（2.0~4.0）：（1.8~3.5）:（4.0 ~5.0）。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

在将化合物2纯品脱Boc基保护得到化合物3粗品过程中，化合物2与水、三异丙基硅烷和三氟乙酸的摩尔比为1:（30 ~50）：（3.0 ~5.0）：（150 ~200）。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

在将化合物3纯品与3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯反应得到化合物4粗品过程中，化合物3与三乙胺和3-马来酰亚胺丙酸羟基琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1.0：（4.0 ~6.0）：（1.1 ~1.5）。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

在将化合物4纯品与化合物5缩合反应得到化合物（I）粗品过程中，化合物5与化合物4和L-抗坏血酸、磷酸氢二钠的摩尔比为1：（ 1.05~ 1.25）：（ 0.10~0.25 ）：（0.50 ~ 0.80）。