CN115944569A - 一种中药复方脂质立方液晶及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药复方脂质立方液晶及其制备方法和应用,属于日用化工产品技术领域。所述中药复方脂质立方液晶包括中药复方提取物、两性脂质分子和稳定剂;其中中药复方组合物由以下成分组成:毛蕊花1~2份、牛至2~10份、紫珠2~15份、蓍草2~10份和百脉根2~15份。中药混合物经冷冻超微粉碎,分别进行物理‑酶法‑化学提取。针对提取物水溶性差,利用率低等问题,制备中药复方脂质体立方液晶制剂。本发明选取的中药配方具有抑杀马拉色菌和抗炎之功效,制备的脂质体立方液晶可极大发挥中草药的生物活性,可以减少去屑洗发水中吡罗克酮乙醇胺盐(OCT)原药的使用量,同时可以有效改善吡罗克酮乙醇胺盐(OCT)造成的头皮敏感问题,市场推广前景巨大。
Description
技术领域
本发明属于化妆品领域,具体涉及一种中药复方脂质立方液晶及其制备方法和应用。
背景技术
吡硫鎓锌,INCI名称Zinc Pyrithione(ZPT),常作为抗屑洗发水添加成分之一。但是,欧盟计划从化妆品限用物质清单和化妆品批准使用防腐剂清单中移除ZPT,同时将其列入化妆品禁用物质清单进行监管。吡罗克酮乙醇胺盐(OCT),其对真菌、霉菌有广谱杀灭作用,对脚、手癣有良好的治疗功效。吡啶酮乙醇胺盐是到目前为止,是唯一可用于免洗类发用品的去屑止痒剂,在化妆品中也可作防腐剂,在香皂中作杀菌剂,并且有增稠性。其独特性能主要表现在去屑机理独特,刺激性低,不会引起脱发、断发,安全性优于同类去屑止痒产品。它的优点是温和,刺激性低,对环境友好。但缺点也很明显:量少时其去屑的效果有限,量大又会造成头皮敏感问题。
天然药物植物成分具有来源广泛、不良反应发生率低、不易产生耐药性等优点,被广泛地应用于治疗各类疾病。研究发现,在植物中提取的药物因毒副作用小使其具有广阔的前景。毛蕊花为玄参科毛蕊花属植物毛蕊花(Verbascum thapsus L.)的全草,分布于新疆、江苏、浙江、四川、云南、西藏,具有清热解毒,止血散瘀之功效;牛至(Origanum vulgareL.)为唇形科、牛至属多年生草本芳香植物,生于路旁、山坡、林下及草地,海拔500-3600米,全草入药,可预防气阻食滞、食积腹胀、腹泻,治疗皮肤搔痒及水肿等症;紫珠(Callicarpabodinieri Levl.)是马鞭草科、紫珠属落叶灌木,根或全株入药,能通经和血,治月经不调、白带、产后血气痛、感冒风寒,调麻油外用,治缠蛇丹毒;蓍草中国植物志正名为云南蓍(Achillea wilsoniana)是菊科,蓍属植物多年生草本全草具有解毒消肿,止血,止痛的功能;百脉根(Lotus corniculatus Linn.)为豆科、百脉根属多年生草本植物,其提取物具有保湿、抗菌抗炎、清热解毒等多种药理学作用。但中草药提取物存在水溶和醇溶问题,正常情况下直接使用存在利用率低等问题,目前生物利用率较低。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种中药提取物的制备方法及其应用。
一种中药复方脂质立方液晶,包括如下质量份数的组分:
进一步的,所述中药复方提取物采用毛蕊花、牛至、紫珠、蓍草和百脉根经提取制备而成;所述的两性脂质分子为甘油单油酸酯、植烷三醇、脱水山梨醇单油酸酯中的一种;所述稳定剂为泊洛沙姆F127、聚氧乙烯蓖麻油、聚乙二醇、吐温-80中的一种。
本发明还提供上述中药复方脂质立方液晶的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备中药复方提取物
S1.中药原料冷冻超微粉碎后,加入2-4倍重量的水,混合均匀后,于超声下处理;
S2.向处理后的混合物中加入混合酶,调节pH至4.5~5.5,混合均匀后,酶解12~24h;
S3.向酶解液中加入乙醇至浓度为70%,升温至60-80℃,回流提取2~6h,趁热过滤,合并滤液;
(2)制备中药复方脂质立方液晶
L1.将两性脂质分子加入到中药复方提取物中,超声,并升温至60℃,使其完全溶解,作为A相;
L2.将稳定剂溶于水中,加热至60℃使其溶解,混合均匀,作为B相;
L3.将A相缓慢滴加至B相中,搅拌,高压均质,得到所述中药复方脂质立方液晶。
进一步的,步骤S1中所述中药原料包括质量份数的组分:毛蕊花1~2份、牛至2~10份、紫珠2~15份、蓍草2~10份和百脉根2~15份。
进一步的,步骤S1中所述超声的功率为300-600W,超声时间20-40min。
进一步的,步骤S2中所述混合酶为纤维素酶、果胶酶和蛋白酶,三者酶活比为(3~5):(2~4):(1~3),混合酶总加入量为植物原料质量的0.5~2%。
进一步的,步骤L1中所述超声的功率为300-600W,超声时间10-20min。
进一步的,步骤L3中所述高压均质的压力为50-100MPa,均质次数2-3次。
进一步的,所述方法包括如下步骤:将中药毛蕊花1~2份、牛至2~10份、紫珠2~15份、蓍草2~10份和百脉根2~15份经冷冻超微粉碎后,加入2-4倍重量的水,混合均匀后,于超声下处理;向处理后的混合物中加入混合酶,混合酶为纤维素酶、果胶酶和蛋白酶,三者酶活比为(3~5):(2~4):(1~3),混合酶总加入量为植物原料重量的0.5~2%,调节pH至4.5~5.5,混合均匀后,酶解12~24h;向酶解液中加入乙醇至浓度为70%,升温至60-80℃,回流提取2~6h,趁热过滤,合并滤液,制备中药复方提取物。将两性脂质分子甘油单油酸酯、植烷三醇、脱水山梨醇单油酸酯中的一种加入到中药复方提取物中,超声,超声的功率为300-600W,超声时间20-40min并升温至60℃,使其完全溶解,作为A相;将稳定剂泊洛沙姆F127、聚氧乙烯蓖麻油、聚乙二醇、吐温-80中的一种溶于水中,加热至60℃使其溶解,混合均匀,作为B相;将A相缓慢滴加至B相中,在压力为50-100MPa条件下,均质2-3次,得到中药复方脂质立方液晶。
本发明还提供上述中药复方脂质立方液晶在个护产品中的应用,所述中药复方脂质立方液晶减少去屑洗发水中吡罗克酮乙醇胺盐的使用量,改善吡罗克酮乙醇胺盐造成的头皮敏感问题。
进一步的,所述个护产品包括膏霜类、乳液类、油类、水类、凝胶类、手工皂类和粉类。
有益效果
脂质纳米立方晶是两亲性脂质和表面活性剂在水中自发形成的双连续相的立方液晶的纳米分散体系,是含有水和脂质双连续相的蜂窝状结构。该体系具有独特的三维双连续网格结构,内含互相连通的亲水通道,可以增溶或分散不同极性和尺寸的药物分子,具有较好的生物相容性,所含有的双亲性脂质可促进药物穿透生物膜。脂质纳米立方液晶由于其独特的作用机制,可作为难溶性、稳定性差、生物利用度低的药物载体,成为提高难溶性药物生物利用度的新工具。
本发明选取的中药复方毛蕊花、牛至、紫珠、蓍草和百脉根,具有抑杀马拉色菌和抗炎之功效,制备成脂质体立方液晶可极大发挥中草药的生物活性,可以减少去屑洗发水中吡罗克酮乙醇胺盐(OCT)原药的使用量,同时可以有效改善吡罗克酮乙醇胺盐(OCT)造成的头皮敏感问题,市场推广前景巨大。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解,下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明,但是本发明不仅限于此。
实施例1~3
将中药毛蕊花、牛至、紫珠、蓍草和百脉根经冷冻超微粉碎后,加入3倍重量的水,混合均匀后,于超声下处理;向处理后的混合物中加入混合酶,混合酶为纤维素酶、果胶酶和蛋白酶,三者酶活比为4:3:2,混合酶总加入量为植物原料重量的0.5%,调节pH至5.5,混合均匀后,酶解12h;向酶解液中加入乙醇至浓度为70%,升温至60℃,回流提取2h,趁热过滤,合并滤液,制备中药复方提取物。将两性脂质分子加入到中药复方提取物中,超声,超声的功率为300W,超声时间20min并升温至60℃,使其完全溶解,作为A相;将稳定剂溶于水中,加热至60℃使其溶解,混合均匀,作为B相;将A相缓慢滴加至B相中,在压力为60MPa条件下,均质3次,得到中药复方脂质立方液晶。其中,实施例1的中药复方提取物、两性脂质分子、稳定剂和水的质量比为40:3:2:30;实施例2的中药复方提取物、两性脂质分子、稳定剂和水的质量比为60:8:3:50;实施例3的中药复方提取物、两性脂质分子、稳定剂和水的质量比为55:6:4:28。
表1各成分及重量配比
在实施例1-3的基础上进行对比例测试:
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于:原料中不含植物提取物。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于:原料中不含毛蕊花。
对比例3
本对比例与实施例1的区别在于:植物提取物中不含牛至。
对比例4
本对比例与实施例1的区别在于:植物提取物中不含紫珠。
对比例5
本对比例与实施例1的区别在于:植物提取物中不含蓍草和百脉根。
对比例6
本对比例与实施例1的区别在于:植物提取物未进行冷冻超微粉碎,采用普通粉碎。
对比例7
本对比例与实施例1的区别在于:植物提取物进行水煎提取。
对比例8
本对比例与实施例1的区别在于:未采用超声步骤。
对比例9
本对比例与实施例1的区别在于:未采用酶解步骤。
对比例10
本对比例与实施例1的区别在于:未采用乙醇提取步骤。
含有实施例1~3和对比例1~10的植物提取物性能评价如下:
一、刺激性评价
材料:玉米醇溶蛋白(国药)。
仪器:RET/T控制型搅拌器(德国IKA);K9860全自动定氮仪(济南海能仪器有限公司)。
测试方法:玉米醇溶蛋白法
方法原理:几乎完全不溶于水的玉米醇溶蛋白(zein)与表面活性剂相互作用,其水溶性加大,较强刺激性的表面活性剂比弱刺激表面活性剂更易溶解zein。因此根据水溶液中表面活性剂作用前后氮含量的变化情况,测定出zein与表面活性剂作用后的溶解度,而所溶解的zein中的含氮量(zein值单位以g/L计)与表面活性剂引起的皮肤刺激性成正比,由此可以了解表面活性剂刺激性的大小。
实验方法:取待测的洗发水,配成活性物质量分数为10%的溶液,再加一定量的zein,在25℃搅拌2h,然后过滤。滤液用微量凯氏定氮法测得氮的质量分数(A)。用同样的方法可测得不加zein的表面活性剂溶液中氮的质量分数(B)。
zein值=A-B
zein值用溶液中所含氮的g数表示,N g/L。
判断依据:Zein>4强刺激性;2<Zein<4低刺激性;Zein<2无刺激性。
检测结果相关数据如下表所示:
从上表中可看出,本发明采用的提取方法可以避免中草药原料中的刺激性。
二、抗炎活性评价
1、透明质酸酶抑制实验
仪器与试剂:UV-265型紫外分光光度计;透明质酸酶,Sigma公司;透明质酸钠,Solarbio公司;CaCl2、乙酰丙酮、埃尔利试剂,国药集团化学试剂有限公司。
方法:采用Elson-Morgan法进行测定,取0.1mL 0.25mmol/L的CaCl2溶液和0.5mL透明质酸酶液,37℃保温培养20min;加入样品液0.5mL,继续在37℃,保温培养20min;加入0.5mL透明质酸钠液,37℃保温30min,常温放置5min;加入0.1mL 0.4mol/L的NaOH溶液和0.5mL乙酰丙酮溶液,置于沸水浴中加热15min后立即用冰水进行冷却5min;加入埃尔利试剂1.0mL,并用3.0mL无水乙醇进行稀释,放置20min显色,用分光光度计测定其吸光度值。
式中:A为对照溶液(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)的吸光度(ABS值);B为对照空白溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液);C为试样溶液ABS值;D为试样空白溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。实验时先对A组试样进行450nm~700nm范围的波长扫描,以确定最大吸收波长,然后以去离子水作为参比,在该最大吸收波长处分别进行ABS值测定。
检测结果如下表:
2、对巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用
试剂及仪器:SW-CJ-2FD型双人单面超净台(苏州净化设备有限公司)、MCO-15AC型CO2恒温培养箱(日本Sanyo公司)、DMI3000型倒置相差显微镜(美国Leica公司)、SynergyLX型连续波长酶标仪(美国Bio-Tek公司)、LDZX-30KB型高压灭菌锅(上海申安医疗器械厂)、LP502型电子天平(常熟市衡器厂);IL-6、TNF-αELISA试剂盒(杭州联科生物技术有限公司)
方法:细胞培养:将RAW264.7细胞复苏,以含5%胎牛血清、1%双抗(青霉素和链霉素)的DMEM高糖培养基置于37℃、5%CO2培养,待细胞融合度达70%~80%时进行传代,然后进行后续实验。将细胞以1×105mL-1接种于96孔板中或以8×105mL-1接种于6孔板,加入含相应药物的培养基,培养6h;弃去培养基,加入含相应药物和10μg/m L脂多糖的培养基,继续培养18h,后进行ELISA检测。
检测结果如下表:
3、二甲苯致小鼠耳肿胀抗炎实验
试剂及仪器:二甲苯(广东光华化学厂有限公司)
方法:SPF级昆明种(KM)小鼠35只,雄性,体重18~22g,每组5只。每隔15min滴涂1次植物提取物,连续3次。第3次滴涂30min后,每只小鼠左耳涂二甲苯0.05mL致炎,右耳作对照。致炎后30min,将小鼠颈部脱臼处死,剪下双耳,用直径为8mm的打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片,称重,计算肿胀度:左耳片重量-右耳片重量;
以左右耳片重量之差计算炎症肿胀指标:(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度×100%。
检测结果如下表:
以上结果表明,采用本发明方法制备的中药复方脂质立方液晶具有较好的抗炎功效。
三、抑菌效果评价
试剂:氯化钠、葡萄糖、酵母抽提物、葡萄糖、吐温-80(国药集团化学试剂有限公司);琼脂、胰蛋白胨(日本制药株式会社);蛋白胨、酵母浸膏(南京茂捷微生物科技有限公司);单硬脂酸甘油酯(西陇科学)。
仪器:CB-1300V垂直层流洁净工作台(青岛海尔特种电器有限公司);YP3002电子天平(上海佑科仪器仪表有限公司);LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂);MQT-60R震荡培养箱(上海旻泉仪器有限公司)。
培养基与菌种:金黄色葡萄球菌、马拉色菌由南京野生植物资源综合利用研究院提供。
LB培养基:1g胰蛋白胨、0.5g酵母抽提物、1g氯化钠、2g琼脂、100mL蒸馏水。
马拉色菌固体培养基:葡萄糖40g/L,琼脂14g/L,蛋白胨10g/L,酵母浸膏0.1g/L,单硬脂酸甘油酯2.5g/L,吐温-80 2mg/L,橄榄油20g/L,加蒸馏水溶解后高压灭菌。
方法:抑菌圈:将已灭菌的固体培养基倒入培养皿中,供试菌种均匀的涂布在培养基上,静置10min。已灭菌的6mm抑菌圈放置在培养基上,取10μL样品打在抑菌圈上。静置10min。放置培养箱中37℃培养24h,测量其抑菌直径。
最小抑菌浓度(MIC):取96孔板,11孔作生长对照孔,12孔作为空白对照孔。
分别加入中药提取物和吡罗克酮乙醇胺盐(OCT),将上述96孔板置于32℃培养箱培养12h,裸眼观察以抑制该菌生长的最小药物浓度作为MIC值。
棋盘法:在无菌96孔板上以二维棋盘的方式,以纵向、横向两个方向对联用的两种药物分别进行倍比稀释。以中药提取液4×MICa~1/16×MICa的浓度分别与OCT 4×MICb~
1/16×MICb的浓度进行联合(每孔中加入两种药液各50μL),在每孔加入100μL已经稀释好的马拉色菌菌悬液,放于37℃恒温培养箱中培养24h。
药物联合用药以抑菌浓度指数为判定标准:FICI=MICA/MICa+MICB/MICb。FICI≤0.5时,两药作用方式为协同;0.5<FICI≤1时,两药作用方式为相加;1<FICI≤2时,两药作用方式为无关;FICI>2时,两药作用方式为拮抗。
1、中药提取物与吡罗克酮乙醇胺盐(OCT)联合给药抑菌评价
(1)MIC结果如下表所示
药物名称 | MIC(mg/mL) |
吡罗克酮乙醇胺盐(OCT) | 0.07813 |
中药脂质立方液晶 | 1.25 |
(2)植物组合物与吡罗克酮乙醇胺盐(OCT)单用和联合抑菌作用结果如下表所示:
由以上结果可知,中药脂质立方液晶和吡罗克酮乙醇胺盐(OCT)对马拉色菌均具有良好的抑菌作用,而两者联合使用具有相加的作用,可减少OCT的使用量,减轻OCT的缺陷。
2、马拉色菌抑菌测试
对本发明实施例和对比例所述的洗发水进行马拉色菌抑菌测试,供试菌种为糠秕马拉色菌,浓抑菌圈直径(mm)如下表所示。
组别 | 抑菌直径(mm) |
实施例1 | 16.8 |
实施例2 | 17.2 |
实施例3 | 18.3 |
对比例1 | 9.5 |
对比例2 | 9.1 |
对比例3 | 11.2 |
对比例4 | 12.0 |
对比例5 | 10.5 |
对比例6 | 10.2 |
对比例7 | 8.7 |
对比例8 | 11.2 |
对比例9 | 10.6 |
对比例10 | 11.5 |
从上表中可看出,采用本发明方法制备的中药复方脂质立方液晶对马拉色菌具有显著的抑菌作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰,皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (10)
2.根据权利要求1所述一种中药复方脂质立方液晶,其特征在于,所述中药复方提取物采用毛蕊花、牛至、紫珠、蓍草和百脉根经提取制备而成;所述的两性脂质分子为甘油单油酸酯、植烷三醇、脱水山梨醇单油酸酯中的一种;所述稳定剂为泊洛沙姆F127、聚氧乙烯蓖麻油、聚乙二醇、吐温-80中的一种。
3.根据权利要求1或2所述中药复方脂质立方液晶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备中药复方提取物
S1.中药原料冷冻超微粉碎后,加入2-4倍重量的水,混合均匀后,于超声下处理;
S2.向处理后的混合物中加入混合酶,调节pH至4.5~5.5,混合均匀后,酶解12~24h;
S3.向酶解液中加入乙醇至浓度为70%,升温至60-80℃,回流提取2~6h,趁热过滤,合并滤液;
(2)制备中药复方脂质立方液晶
L1.将两性脂质分子加入到中药复方提取物中,超声,并升温至60℃,使其完全溶解,作为A相;
L2.将稳定剂溶于水中,加热至60℃使其溶解,混合均匀,作为B相;
L3.将A相缓慢滴加至B相中,搅拌,高压均质,得到所述中药复方脂质立方液晶。
4.根据权利要求3中所述中药复方脂质立方液晶的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述中药原料包括质量份数的组分:毛蕊花1~2份、牛至2~10份、紫珠2~15份、蓍草2~10份和百脉根2~15份。
5.根据权利要求3中所述中药复方脂质立方液晶的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述超声的功率为300-600W,超声时间20-40min。
6.根据权利要求3中所述中药复方脂质立方液晶的制备方法,其特征在于,步骤S2中所述混合酶为纤维素酶、果胶酶和蛋白酶,三者酶活比为(3~5):(2~4):(1~3),混合酶总加入量为植物原料质量的0.5~2%。
7.根据权利要求3中所述中药复方脂质立方液晶的制备方法,其特征在于,步骤L1中所述超声的功率为300-600W,超声时间10-20min。
8.根据权利要求3中所述中药复方脂质立方液晶的制备方法,其特征在于,步骤L3中所述高压均质的压力为50-100MPa,均质次数2-3次。
9.权利要求1所述中药复方脂质立方液晶在个护产品中的应用,其特征在于,所述中药复方脂质立方液晶减少去屑洗发水中吡罗克酮乙醇胺盐的使用量,改善吡罗克酮乙醇胺盐造成的头皮敏感问题。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述个护产品包括膏霜类、乳液类、油类、水类、凝胶类、手工皂类和粉类。
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