CN115919927A - 一种中药组合物及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种中药组合物及应用，属于中药组合物技术领域；在本发明中制备了可以长期食用且安全性高的中药组合物，所述中药组合物中包含紫苏叶、杭菊和槐花三种药食同源类中药材，所述中药组合物能够有效降低尿酸，进而能够用于制备预防和/或治疗痛风的药品、食品或保健品；所述中药组合物能够显著降低肌酐和尿素氮水平，可以有效改善肾功能，能够制备改善肾功能的相关产品。
Description
技术领域
本发明属于中药组合物技术领域，具体涉及一种中药组合物及应用。
背景技术
痛风是目前我国仅次于糖尿病的第二大代谢性疾病，近年来，随着人们生活水平的提高及饮食结构的改变，谷物食品的减少，肉类海鲜类食品的增多，导致痛风的发病率高居不下且呈年轻化态势。
目前痛风急性发作期的药物治疗，仍以西药口服制剂为主，主要为炎症干扰药及降尿酸药两大类，前者为秋水仙碱、非甾体抗炎药、肾上腺皮质激素类，后者包括尿酸促排药、抑制尿酸生成类。秋水仙碱是治疗痛风尤其是重症急性发作痛风的特效药物，但其毒性反应明显，呕吐、腹泻、痉挛性腹痛是常见的不良反应，治疗有效剂量与其引起胃肠道症状的剂量相近。非甾体抗炎药最常见的副作用是胃肠反应和肾脏损害。前者有消化不良、恶心、上腹痛、溃疡、出血等；后者包括肾病综合征、间质性肾炎、肾乳头坏死和急性肾衰。
中药方剂的使用有着深远的历史，是中医预防和治疗疾病的重要手段之一，利用中药组合物是进行痛风预防和治疗的重要补充。但是，目前中成药在市场上开发相对较少，且均为发病后用药，缺乏安全性高且可长期使用的用于预防和/或治疗痛风的中药组合物。
发明内容
针对现有技术中存在的一些不足，本发明提供了一种中药组合物及应用。本发明中制备了可以长期食用且安全性高的中药组合物，所述中药组合物中包含紫苏叶、杭菊和槐花三种药食同源类中药材，所述中药组合物能够有效降低尿酸，进而预防和/或治疗痛风。
本发明中首先提供了一种中药组合物，所述中药组合物中，以重量份数计，包含紫苏叶10～25份，杭菊10～25份和槐花10～25份。
在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物中，以重量份数计，紫苏叶10份，杭菊24份和槐花22份。
本发明中还提供了上述中药组合物的制备方法，具体包括如下步骤：
将紫苏叶、杭菊和槐花混合后加入10倍量蒸馏水浸泡，然后沸水浴回流多次提取，提取液过滤，然后将滤液浓缩成浸膏，干燥，研磨，得到所述中药组合物。
本发明中还提供了上述中药组合物在制备保健品、药品或食品中的应用。
本发明提供的中药组合物可单独用于预防和/或治疗痛风，也可添加其他辅料制成不同的剂型用于预防和/或治疗痛风，本发明对此不做限定，所述的剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液。
本发明中还提供了一种预防和/或治疗痛风的药品，所述药品包括上述预防和/或治疗痛风的中药组合物和药学上可接受的辅料，所述药学上可接受的辅料为崩解剂、润滑剂、黏合剂和分散剂中的一种或多种。
本发明还提供了一种预防和/或治疗痛风的保健品，所述保健品包括上述预防和/或治疗痛风的中药组合物和药学上可接受的辅料；所述保健品以药食同源类中药材为原材料，经中药现代化标准加工流程，得到高效的新型保健食品，可长期服用。
本发明中还提供了上述中药组合物在制备改善肾功能的产品中的应用。
本发明中还提供了一种改善肾功能的产品，所述产品的活性成分为上述中药组合物。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
痛风发病是正邪斗争，脾肾功能失调的结果。脾肾二脏清浊代谢紊乱，浊毒内伏，复因劳累，暴饮暴食及外感寒、热、风、湿之邪，在内伤及肝、脾、肾等脏腑。紫苏叶性温，味辛，归肺经、脾经，解表散寒，行气和胃；杭菊性微寒，味甘、苦，归肺经、肝经，具有散风清热、清肝明目和解毒消炎的功效；槐花性微寒，味苦，归肝经、大肠经，具有凉血止血、清肝泻火的功效。痛风发病多为在外感受寒、热、风、湿之邪，在内伤及肝、脾、肾等脏腑。本发明三药相伍，药行于下，采取苦寒、辛温、甘辛配伍原则，以达清热散寒化湿、化瘀通络、调补肝肾之功效。本发明制备的中药组合物药食同源，所述组合以紫苏叶、杭菊和槐花为原料，“十八反与十九畏”的配伍禁忌为基本准则，应用现代药理学和中医学原理而得到。
本发明中，将杭菊、紫苏叶和槐花进行组合并优化组合物配比，通过腹腔注射化学诱导剂氧嗪酸钾建立痛风模型，并评价组合物在体内的降尿酸效果。动物实验结果显示，该中药组合物能够在高尿酸血症小鼠体内显著抑制黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase，XO)和腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase，ADA)活性，同时能够显著降低小鼠体内血清尿酸含量，促进尿酸的排泄，此外，所述中药组合物还能够显著降低小鼠体内肌酐和尿素氮水平，从而呈现显著的降尿酸效果并具有改善肾功能的功效。因此，根据动物模型可以推断，所述中药组合物能够有效预防和/或治疗痛风，并在治疗痛风的同时改善病人的肾功能。
附图说明
图1为组合物A和组合物B的血清尿酸值比较结果图。图中，与空白组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与阳性组相比，+P<0.05，++P<0.01；与组方A高剂量组相比，△P<0.05，△△P<0.01；与组方A中剂量组相比，□P<0.05，□□P<0.01。
图2为杭菊含量对XO抑制活性的影响结果图。
图3为紫苏叶含量对XO抑制活性的影响结果图。
图4为槐花含量对XO抑制活性的影响结果图。
图5为紫苏叶和杭菊含量对XO抑制率的影响结果图(A为响应面图，B为等高线图)。
图6为槐花和杭菊含量对XO抑制率的影响结果图(A为响应面图，B为等高线图)。
图7为紫苏叶和槐花含量对XO抑制率的影响结果图(A为响应面图，B为等高线图)。
图8为不同给药条件下小鼠的血清尿酸的浓度，图中与正常组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与阳性组相比，+P<0.05，++P<0.01。
图9为不同给药条件下小鼠血清中黄嘌呤氧化酶(XO)和腺苷脱氨酶(ADA)的活性，图中，与正常组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与阳性组相比，+P<0.05，++P<0.01。
图10为不同给药条件下小鼠尿尿酸含量，图中，与正常组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与阳性组相比，+P<0.05，++P<0.01。
图11为不同给药条件下小鼠血清中肌酐和尿素氮含量，图中，与正常组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与阳性组相比，+P<0.05，++P<0.01。
具体实施方式
下面结合附图以及具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
在以下实施例中，XO抑制活性的测定方法为：根据XO能够催化黄嘌呤生成尿酸，由于尿酸在290nm处有特征吸收峰，通过紫外分光光度计检测尿酸浓度的变化来测定反应体系中XO的酶活性。测定方法为：测定时依次加入PBS溶液、酶溶液、待测样品溶液和黄嘌呤溶液，用紫外分光光度计检测在波长λ＝290nm下300s内每隔10s的吸光值并计算抑制率。计算公式为：
其中：PBS为磷酸盐缓冲液，黄嘌呤氧化酶溶液浓度为50U/L，黄嘌呤溶液浓度180mg/L；
空白组试剂为：500μL PBS、100μL XO酶溶液和400μL黄嘌呤溶液；
样品组试剂为：300μL PBS、100μL XO酶溶液、200μL待测样品溶液和400μL黄嘌呤溶液。
在以下实施例中，ADA抑制活性测定的原理为：根据ADA能催化腺苷脱氨生成肌苷或脱氧次黄苷和氨，由于腺苷在265nm具有特征吸收峰，通过紫外分光光度计检测腺苷的浓度变化来测定反应体系中ADA的酶活性。测定方法为：测定时依次加入PBS溶液、底物腺苷、待测样品溶液与ADA溶液，在波长λ＝265nm下，用紫外分光光度计测定150s内每隔10s的吸光值并计算抑制率。计算公式为：
其中，PBS为磷酸盐缓冲液，ADA酶溶液浓度为0.1mg/ml，腺苷浓度为0.2mg/ml；
空白组试剂为：1000μL PBS、300μL腺苷、100μL ADA和100μL溶剂；
调零组试剂为：1400μL PBS和100μL溶剂；
样品组试剂为：1000μL PBS、300μL腺苷、100μL ADA和100μL样品。
实施例1：中药组合物的筛选和制备
1.中药组合物的筛选：
本实施例中以在国家卫健委、国家市场监督管理总局发布的药食同源目录中的药食同源药材为材料，以黄嘌呤氧化酶(XO)为主要靶点，腺苷脱氨酶(ADA)为次要靶点，筛选出具有较高黄嘌呤氧化酶(XO)和腺苷脱氨酶(ADA)抑制活性的药材，筛选方法如下所示。
精密称取药食同源中药水提物，使用PBS溶解样品，对部分难溶解的样品使用5％(v/v)的甲醇或者DMSO进行溶解，配制成浓度为1mg/mL待筛样品溶液并测定XO和ADA的抑制活性。
通过筛选发现，紫苏叶、杭菊、槐花、夏枯草、覆盆子、橘红和荷叶具有较好的XO抑制活性，在浓度为1mg/mL的浓度下对XO的抑制率分别为69.59％、68.89％、65.04％、43.78％、38.08％、33.35％和32.85％。槐花、紫苏叶、栀子、肉桂、杭菊、党参和淡豆豉具有较好的ADA抑制活性，在浓度为1mg/mL的浓度下对ADA酶的抑制率分别为71.72％、62.27％、61.13％、60.36％、49.02％、48.31％和48.13％。
根据上述筛选结果发现紫苏叶、槐花和杭菊同时具有较好的XO和ADA抑制活性，选取同时具有两种酶抑制活性的药材进行1:1配伍组合物，以别嘌醇为阳性对照，分别测定不同药材配伍提取物的XO抑制活性，测定结果如表1所示：
表1.两味药材配伍提取物XO抑制活性测定结果表
| 两位药材配伍 | 浓度mg/mL | 抑制率％(Mean±SD) |
| 紫苏叶：杭菊 | 1 | 69.11±0.51 |
| 紫苏叶：槐花 | 1 | 68.38±0.37 |
| 杭菊：槐花 | 1 | 67.96±1.48 |
| 别嘌醇 | 0.02 | 65.68±0.12 |
从表1中可以看出，紫苏叶和杭菊进行1:1的配伍对XO酶抑制率相对较高，但是差异并不明显。
本实施例中还将表1中所述XO酶抑制率最高的紫苏叶和杭菊作为基础成分，分别将槐花、夏枯草、栀子、肉桂、党参和淡豆豉与基础成分进行1：1：1配伍并测定提取物的XO抑制活性，来进一步的筛选出中药组合物，测定结果如图2所示：
表2.三味药材配比的XO抑制活性测定结果表
| 三味药材配伍 | 浓度mg/mL | 抑制率％(Mean±SD) |
| 紫苏叶：杭菊：槐花 | 1 | 70.11±0.56 |
| 紫苏叶：杭菊：夏枯草 | 1 | 66.96±0.22 |
| 紫苏叶：杭菊：栀子 | 1 | 57.56±0.78 |
| 紫苏叶：杭菊：肉桂 | 1 | 50.91±0.57 |
| 紫苏叶：杭菊：党参 | 1 | 52.59±0.57 |
| 紫苏叶：杭菊：淡豆豉 | 1 | 46.44±0.25 |
| 别嘌醇 | 0.02 | 65.65±0.51 |
由表2的结果可知，紫苏叶：杭菊：槐花的1:1:1提取物的XO抑制活性最高，紫苏叶和杭菊的基础上增加夏枯草、栀子、肉桂、党参和淡豆豉后XO抑制活性均相应的降低。
本实施例中还将表2中XO抑制活性最高的紫苏叶、杭菊和槐花作为基础成分，分别将夏枯草、栀子、肉桂、党参和淡豆豉与基础成分进行1：1：1：1配伍并测定提取物的XO抑制活性，来进一步的来筛选出中药组合物，测定结果如表3所示：
表3.四味药材配比的XO抑制活性测定结果表
| 四味药材配伍 | 浓度mg/mL | 抑制率％(Mean±SD) |
| 紫苏叶：杭菊：槐花：夏枯草 | 1 | 68.11±0.29 |
| 紫苏叶：杭菊：槐花：栀子 | 1 | 53.96±0.51 |
| 紫苏叶：杭菊：槐花：肉桂 | 1 | 50.33±0.37 |
| 紫苏叶：杭菊：槐花：党参 | 1 | 46.52±0.62 |
| 紫苏叶：杭菊：槐花：淡豆豉 | 1 | 45.29±0.77 |
| 别嘌醇 | 0.02 | 65.05±0.21 |
由表3结果可知，紫苏叶：杭菊：槐花：夏枯草的1：1：1：1提取物的XO抑制活性最高，但活性相较于紫苏叶：杭菊：槐花的提取物活性降低。在紫苏叶、杭菊和槐花的基础上增加夏枯草、栀子、肉桂、党参和淡豆豉后抑制活性均相应的降低。
本实施例中还对上述组合物进行ADA抑制活性的评价，以槲皮素为阳性对照，分别测定不同药材最优配伍提取物提取物的ADA抑制活性，测定结果如表4所示：
表4.四种组合物的ADA抑制活性测定结果表
| 药材配伍 | 浓度mg/mL | 抑制率％(Mean±SD) |
| 紫苏叶：杭菊 | 1 | 66.11±0.31 |
| 紫苏叶：杭菊：槐花 | 1 | 72.11±0.19 |
| 紫苏叶：杭菊：槐花：夏枯草 | 1 | 68.22±0.58 |
| 紫苏叶：杭菊：槐花：栀子 | 1 | 68.96±0.14 |
| 槲皮素 | 0.1 | 67.73±0.27 |
由表4可知，将紫苏叶、杭菊和槐花进行等比例的配伍的中药组合物对体外腺苷脱氨酶有较好的抑制活性，而紫苏叶、杭菊、槐花和夏枯草，紫苏叶、杭菊、槐花和栀子进行等比例的配伍的中药组合物对体外腺苷脱氨酶的抑制活性接近，为次之。
本实施例中筛选出两种组合物，分别为：以紫苏叶、杭菊和槐花等比例配伍的中药组合物——组合物A和以紫苏叶、杭菊、槐花和夏枯草进行等比例的配伍的中药组合物——组合物B。
具体制备方法如下所述：
组合物A：以重量分数计，所述中药组合物中包含紫苏叶10g，杭菊10g，槐花10g。所述中药组合物按照如下方式制备：将10g紫苏叶、10g杭菊和10g槐花混合后加入10倍量蒸馏水浸泡1h，然后沸水浴回流提3次，然后将滤液浓缩成浸膏，50℃干燥，待完全干燥后将其充分研磨成为粉末，得到所述组合物A。
组合物B：以重量分数计，所述中药组合物中包含紫苏叶10g，杭菊10g，槐花10g，夏枯草10g。所述中药组合物按照如下方式制备：将10g紫苏叶、10g杭菊、10g槐花和10g夏枯草混合后加入10倍量蒸馏水浸泡1h，然后沸水浴回流提3次，然后将滤液浓缩成浸膏，50℃干燥，待完全干燥后将其充分研磨成为粉末，得到所述组合物B。
2.预防和/或治疗痛风功效的验证：
本实施例中还以小鼠为实验动物，建立了高尿酸血症模型，来验证本发明中制备的预防和/或治疗痛风中药组合物的功效，具体验证方法如下所示：
(1)实验动物：
将90只SPF级昆明雄性小鼠(20±2g)，由甘肃省药品检验研究院提供，许可证编号：SYXK(甘)2021-0003，将上述SPF级昆明雄性小鼠饲养于SPF级实验动物管理中心，饲养条件为在20±2℃、相对湿度55±5％、12h明/暗循环。饲养时，饲料、垫料均由甘肃省药品检验研究院提供，小鼠自由饮食和饮水。
(2)实验分组：
将上述雄性昆明小鼠随机分为9组，每组10只小鼠，分别将其作为空白对照组、模型组、阳性组、组合物A高剂量组、组合物A中剂量组、组合物A低剂量组、组合物B高剂量组、组合物B中剂量组和组合物B低剂量组。将氧嗪酸钾分散于0.5％(w/w)的羧甲基纤维素钠溶液中，除空白对照组外，其他组别每天按小鼠体重腹腔注射给药，给药剂量300mg/kg，以此诱导小鼠形成高尿酸血症。空白对照组给予同剂量0.5％(w/w)的羧甲基纤维素钠溶液。
诱导小鼠形成高尿酸血症后，空白组和模型组灌胃同等容积0.5％(w/w)羧甲基纤维素钠溶液，阳性组灌胃5mg/kg的别嘌醇，组合物A高剂量组、组合物A中剂量组和组合物A低剂量组分别按4000mg/kg、2000mg/kg和1000mg/kg进行灌胃组合物A，组合物B高剂量组、组合物B中剂量组和组合物B低剂量组分别按4000mg/kg、2000mg/kg和1000mg/kg进行灌胃组合物B，重复7天。图1为组合物A和组合物B的血清尿酸值比较结果图。由图1可以看出，模型组血清尿酸显著高于空白组(P<0.01)，说明试验中采用腹腔注射300mg/kg氧嗪酸钾能够成功诱导小鼠建立高尿酸血症模型。与模型组相比较，阳性组、组合物A的高中低剂量组和组合物B的高剂量组能够显著降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平(P<0.05)，组合物B的中低剂量组降尿酸水平与模型组相比无显著差异。组合物A的高剂量组降低血清尿酸的能力与阳性药相比没有显著性差异。组合物A的高剂量组和中剂量组降尿酸效果显著高于组合物B高剂量组的降尿酸效果(P<0.01)。基于此实验结果，将紫苏叶、槐花和杭菊作为组合物的组成进行进一步的优化配比。
实施例2：中药组合物的优化
本实施例中分别改变中药组合物中紫苏叶、槐花和杭菊含量，并测定不同含量紫苏叶、槐花和杭菊下制备的中药组合物的XO抑制活性，以此来优化中药组合物中各组分的用量。
(1)不同的杭菊含量对XO抑制活性的影响：
在实施例1制备的中药组合物的基础上保持紫苏叶、槐花的含量不变，将杭菊在组合物中的含量设置成5g、15g、25g、35g四个梯度，然后制备成中药组合物。
分别将上述得到的中药组合物配制成1mg/mL的溶液进行XO抑制活性测定，测定结果如图2所示。
图2为杭菊含量对XO抑制活性的影响结果图，从图中可以看出，当杭菊的含量为25g时XO的抑制率最高，随着杭菊含量的提高，XO抑制率出现先升高，后下降的趋势，且下降趋势较为平稳，这可能是因为不同中药进行组合物煎煮是一个药物有效成分溶出的复杂过程，增加杭菊的配伍量并与另外两种药进行煎煮时，并不能增加配伍杭菊在浸膏中XO酶抑制活性成分的溶出，可能糖的溶出增加导致有效成分溶出发生变化。这说明杭菊在25g配伍时进行煎煮，其所得浸膏的XO酶抑制活性最大。
因此，中药组合物中杭菊的最佳含量为25g。
(2)不同的紫苏叶含量对XO抑制活性的影响：
在实施例1制备的中药组合物的基础上保持杭菊、槐花的含量不变，将紫苏叶在组合物中的含量设置成5g、15g、25g、35g四个梯度，然后制备成中药组合物。
分别将上述得到的中药组合物配制成1mg/mL的溶液进行XO抑制活性测定，测定结果如图3所示。
图3为紫苏叶含量对XO抑制活性的影响结果图，从图中可以看出，紫苏叶的含量为15g时XO的抑制率最高，随着紫苏叶含量的提高，XO抑制率出现先升高后下降的趋势，这说明紫苏叶在15g配伍时进行煎煮，其所得浸膏的XO酶抑制活性最大。
因此，中药组合物中紫苏叶的最佳含量为15g。
(3)不同的槐花含量对XO抑制活性的影响：
在实施例1制备的中药组合物的基础上保持杭菊、紫苏叶的含量不变，将槐花在组合物中的含量设置成5g、15g、25g、35g四个梯度，然后制备成中药组合物。
分别将上述得到的中药组合物配制成1mg/mL的溶液进行XO抑制活性测定，测定结果如图4所示。
图4为槐花含量对XO抑制活性的影响结果图，从图中可以看出，当槐花的含量为25g时XO的抑制率最高，随着槐花含量的提高，XO抑制率出现先升高，后下降的趋势，且下降的趋势较为平缓。
因此，中药组合物中槐花的最佳含量为25g。
根据上述结果，本实施例中制备了含有25g杭菊、15g紫苏叶和25g槐花的最优单因素中药组合物，然后以别嘌醇为对照，分别测定了杭菊、紫苏叶、槐花以及最优单因素中药组合物的XO抑制活性，测定结果如表5所示。
表5.不同配方下的XO抑制活性
| 序号 | 样品 | 浓度mg/mL | 抑制率％(Mean±SD) |
| 1 | 别嘌醇(阳性对照) | 0.02 | 65.88±0.13 |
| 2 | 杭菊 | 1 | 68.89±0.81 |
| 3 | 紫苏叶 | 1 | 69.16±0.19 |
| 4 | 槐花 | 1 | 65.04±0.28 |
| 5 | 最优单因素中药组合物 | 1 | 72.77±0.54 |
从表5中可以看出，经过单因素实验优化的中药组合物整体的XO抑制活性均比单一中药提取物活性有不同程度的提升，证实了该组合物可用于后期进一步的深入研究。
(4)响应面分析法优化组合物设计：
本实施例中还根据上述单因素试验的结果，以XO抑制活性为依据，选取组合物中杭菊、紫苏叶和槐花三味药，采用Box-Benhnken的中心组合实验设计原理，用DesignExpert软件设计正交试验，以确定中药组合物最优配比，结果如图5-图7所示。
综合图5至7，利用Design Expert软件进行优化获得1组XO抑制率较高的中药组合物，其组成为：杭菊24g、紫苏叶10g、槐花22g，此时预测的XO抑制率为(80.26±0.16)％。
本实施例中还以实施例1中的中药组合物杭菊25g、紫苏叶15g、槐花25g作为未优化组，由杭菊24g、紫苏叶10g、槐花22g组成的中药组合物作为优化组，别嘌醇作为对照组，分别来测定XO抑制活性，测定结果如表6所示。
表6.不同配方中药组合物的XO抑制活性
从表6中可以看出，单因素优化和响应面优化后组合物的XO抑制活性分别为72.77％和81.63％，并达到了模型预测值80.26％，优化后的XO抑制率比优化前提高了8.86％。
本实施例中还以实施例2中的中药组合物由杭菊24g、紫苏叶10g、槐花22g组成的中药组合物作为优化组，槲皮素作为对照组，分别来测定腺苷脱氨酶抑制活性，测定结果如表7所示。
表7.中药组合物优化配比后的腺苷脱氨酶抑制活性
实施例3：预防和/或治疗痛风中药组合物功效的验证
本实施例中以小鼠为实验动物，建立了高尿酸血症模型，来验证制备的预防和/或治疗痛风中药组合物的功效。所述中药组合物的配方为杭菊24g、紫苏叶10g、槐花22g，具体验证方法如下所示。
(1)实验动物和实验分组：
实验动物：
将72只SPF级昆明雄性小鼠(20±2)g，由甘肃省药品检验研究院提供，许可证编号：SYXK(甘)2021-0003)，将上述SPF级昆明雄性小鼠饲养于SPF级实验动物管理中心，饲养条件为在20±2℃、相对湿度55±5％、12h明/暗循环。饲养时，饲料、垫料均由甘肃省药品检验研究院提供，小鼠自由饮食和饮水。
(2)实验分组：
将上述雄性昆明小鼠随机分为6组，每组12只小鼠，分别将其作为空白对照组、模型组、阳性组、高剂量组、中剂量组和低剂量组。将氧嗪酸钾分散于0.5％(w/w)的羧甲基纤维素钠溶液中，除空白对照组外，其他组别每天按小鼠体重腹腔注射给药，给药剂量300mg/kg，以此诱导小鼠形成高尿酸血症。空白对照组给予同计量的0.5％(w/w)的羧甲基纤维素钠溶液。
诱导小鼠形成高尿酸血症后，对空白组和模型组灌胃同等容积0.5％(w/w)羧甲基纤维素钠溶液，阳性组灌胃5mg/kg的别嘌醇，高剂量组、中剂量组和低剂量组分别按4000mg/kg、2000mg/kg和1000mg/kg进行灌胃，重复7天。
(2)预防和/或治疗痛风中药组合物功效的验证：
在实验第3天和第7天所有组灌胃给药1h后，分别眼眶静脉丛采血0.1mL，凝血后2500g离心15min，收集血清，测定血清尿酸含量，测定结果如图8所示。
从图8中可以看出，在实验的第3天和最后一天采集的血清样本，模型组血清尿酸均显著高于空白组(P<0.01)，说明试验中采用腹腔注射300mg/kg氧嗪酸钾能够成功诱导小鼠建立高尿酸血症模型。在两次的采样中，阳性对照组中血尿酸水平均显著低于模型组(P<0.01)，说明阳性对照药物能够降低血清尿酸，造模剂量合理。在实验第3天和第7天，与模型组相比，高中低剂量组的降尿酸效果较为显著(P<0.05)；与阳性组相比，高剂量组降尿酸效果和阳性组相当(P>0.05)，中剂量组和低剂量组降尿酸效果显著低于阳性组(P<0.01)。此外，实验第3天时高剂量组降尿酸效果显著优于低剂量组(P<0.01)，实验第7天时高剂量组降尿酸效果显著优于低剂量组和中剂量组(P<0.01)。
XO和ADA是嘌呤代谢中负责合成尿酸的关键酶，通过检测血清中XO和ADA的活性可以反应组合物在体内的活性，从图9(A)可以看出，模型组小鼠在连续7天腹腔注射氧嗪酸钾后，XO活性相较于正常组显著升高(P<0.01)。经过7天的治疗干预后，阳性组和高中剂量组小鼠血清中XO活性显著低于模型组小鼠(P<0.01)，低剂量组显著低于模型组(P<0.05)，且高中剂量组和阳性组之间不显著(P>0.05)，低剂量组抑制XO活性效果显著低于阳性组和高剂量组(P<0.01)。图9(B)结果显示，模型组小鼠在连续7天腹腔注射氧嗪酸钾后ADA活性相较于正常组显著升高(P<0.01)，与模型组相比较，阳性组和高中低剂量组的ADA活性显著降低(P<0.01)，高剂量组降低ADA活性效果优于阳性组，且阳性组与高中低剂量组之间无显著差异。这说明本发明所述中药组合物的提取物能在体内抑制XO和ADA活性，减少尿酸的生成，从而降低高尿酸小鼠的血清尿酸水平。
尿酸在肾脏排泄不足是导致高尿酸血症的另一主要原因，在实验第6天给药后，采用代谢笼连续采集6小时的尿液，用全自动生化分析仪测定尿尿酸含量。图10显示高尿酸血症小鼠的尿尿酸含量变化。与正常组相比较，模型组显著降低了尿液中尿酸水平(P<0.01)，阳性组和模型组之间尿尿酸含量无差异；与模型组和阳性组相比，组合物高剂量组能够显著升高(P<0.01)尿液中尿酸水平，提示组合物能促进高尿酸血症小鼠尿酸的排泄。
小鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平是反映小鼠肾损伤程度的重要参数。由图11(A)可以看出，与空白组相比，模型组血清肌酐水平明显升高(P<0.01)，阳性组以及高、中、低剂量组显著低于模型组(P<0.05)，阳性组与组合物的高中低剂量组无显著性差异(P>0.05)，高中低剂量组之间也无显著性差异。图11(B)显示，模型组血清尿素氮水平显著高于空白组(P<0.05)，与模型组相比，阳性组和高剂量组血清尿素氮水平显著降低(P<0.01)，而中低剂量组不显著(P>0.05)，说明组合物具有明显改善高尿酸血症小鼠肾功能的作用。
综上，本发明的中药组合物能够在高尿酸血症小鼠体内显著抑制黄嘌呤氧化酶和腺苷脱氨酶活性，同时能够显著降低小鼠体内血清尿酸含量，促进高尿酸血症小鼠尿酸的排泌，从而呈现明显的降尿酸效果，并对肾功能具有一定的改善作用。
所述实施例为本发明的优选的实施方式，但本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员能够做出的任何显而易见的改进、替换或变型均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种中药组合物，其特征在于，所述中药组合物中各组分以重量份数计，包括紫苏叶10～25份，杭菊10～25份和槐花10～25份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物中，以重量份数计，紫苏叶10份，杭菊24份和槐花22份。
3.权利要求1或2中任一项所述中药组合物的制备方法，其特征在于，
将紫苏叶、杭菊和槐花混合后加入蒸馏水浸泡，然后沸水浴回流多次提取，提取液过滤，然后将滤液浓缩成浸膏，干燥，研磨，得到所述中药组合物。
4.权利要求1或2中任一项所述中药组合物在制备预防和/或治疗痛风的产品中的应用。
5.一种预防和/或治疗痛风的产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1所述中药组合物和药学上可接受的辅料。
6.根据权利要求5所述的预防和/或治疗痛风的产品，其特征在于，所述产品具体为药品、保健品和食品。
7.根据权利要求5所述的预防和/或治疗痛风的产品，其特征在于，所述药学上可接受的辅料为崩解剂、润滑剂、黏合剂和分散剂中的一种或多种。
8.根据权利要求6所述的预防和/或治疗痛风的产品，其特征在于，所述药品的剂型为胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液。
9.权利要求1或2任一项所述中药组合物在制备改善肾功能的产品中的应用。
10.一种改善肾功能的产品，其特征在于，所述产品的活性成分为权利要求1或2任一项所述中药组合物。
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