CN115916192A

CN115916192A - 新化合物及其作为治疗活性物质在治疗和/或预防涉及视网膜色素上皮的疾病中的应用

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Publication number: CN115916192A
Application number: CN202080102038.3A
Authority: CN
Inventors: M·斯特格尔; A·穆勒; M·马里格
Original assignee: Endogenetic Therapy Co
Current assignee: Endogenetic Therapy Co
Priority date: 2020-06-19
Filing date: 2020-06-19
Publication date: 2023-04-04
Also published as: IL299160A; MX2022016085A; BR112022025542A2; CA3183057A1; KR20230027186A; JP2023537814A; US20230322749A1; EP4167999A1; EP4167999A4; AU2020454040A1; WO2021257092A1

Abstract

本发明涉及一种新型化合物及其在治疗和/或预防以下疾病中作为治疗活性物质的应用：涉及视网膜色素上皮的疾病，特别是导致视网膜色素上皮萎缩、退化或死亡的疾病，该疾病也可能导致光感受器萎缩或丧失和/或视网膜新生血管形成。

Description

新化合物及其作为治疗活性物质在治疗和/或预防涉及视网膜色素上皮的疾病中的应用

本发明涉及新化合物及其作为治疗活性物质在治疗和/或预防涉及视网膜色素上皮的疾病中的应用，特别是在治疗和/或预防导致视网膜色素上皮细胞萎缩、退化或死亡的疾病中的应用，这些疾病也可能导致光感受器萎缩或丧失和/或视网膜新生血管形成。

涉及视网膜色素上皮(RPE)退化和死亡的一个重要疾病家族是黄斑变性。黄斑变性的特征在于与布鲁赫膜、脉络膜、神经视网膜和/或视网膜色素上皮的异常相关的中心视力的进行性丧失。黄斑描述了直径约为0.3cm至0.5cm的视网膜的中央区域。由于其高密度的视锥细胞，黄斑为阅读、驾驶或识别面孔等活动提供了详细的视觉。

所谓的年龄相关性黄斑变性(AMD)是最普遍的黄斑变性形式，与视野中央部分视力的进行性丧失、色觉变化以及异常的暗适应和敏感性有关。AMD是发达国家不可逆转视力丧失的主要原因，影响了约2％的人。AMD的患病率随着年龄的增长而增加，其病因是多因素的。

导致该疾病及其进展的关键因素中，有功能性RPE细胞的丧失及其基底膜(布鲁赫膜)的变化。RPE是连续的单层细胞，位于感光细胞和脉络膜(视网膜的血液供应)之间。由于RPE细胞通过提供能量和生长因子、清除废物和回收视觉循环的必需化合物对高度代谢的光感受器发挥滋养作用，因此RPE的丧失最终导致光感受器衰竭和丧失。

AMD的两种主要临床表现被描述为干性或萎缩性形式(下文称为干性AMD)和湿性或新生血管形式(下文称为湿性AMD)。干性AMD与中央视网膜或黄斑的萎缩性细胞死亡有关。这些干性AMD患者中约有10-20％进一步发展为第二种形式，称为湿性或新生血管性AMD。在AMD的这些晚期阶段，RPE的萎缩(地图样萎缩)和/或源自脉络膜血管的新血管的发育(新生血管形成)进一步导致光感受器死亡和中央视力丧失。这种对阅读、面部识别和执行许多日常任务至关重要的中心视力的丧失，基本上使患者与周围的世界隔绝。

目前尚无针对干性AMD或其称为地图样萎缩(GA)的晚期形式的批准治疗，尽管目前使用抗VEGF药物(如

)进行治疗，但许多新生血管性AMD患者在法律上是失明的。治疗由潜在RPE损伤引起的干性AMD视力丧失的药理学方法各不相同，但它们都是针对控制被认为最初引起损伤的机制(例如补体系统)，而不是逆转由RPE细胞丧失引起的损伤。正在研究的替代方法涉及诱导多能干细胞或成熟RPE细胞的移植。

玻璃膜疣是在眼睛的布鲁赫膜和视网膜色素上皮细胞之间形成的微小黄色或白色细胞外物质积聚物。玻璃膜疣的存在是年龄相关性黄斑变性的标志。最近对玻璃膜疣的研究表明，炎症和其他免疫介导的过程，特别是补体激活，在早期和晚期AMD的病因学中发挥作用。EP 2 302 076公开了补体旁路的主要抑制剂H因子蛋白(HF1)在玻璃膜疣内积累，并由视网膜色素上皮细胞局部合成，因此提供了以有效减轻患者AMD症状的量减少变异因子H的量或编码因子H的基因表达的药物的施用。

US 9'815'819B2涉及作为治疗或预防AMD的方法调节并优选抑制补体旁路激活的化合物。

WO 2015/138628涉及AAV载体构建体，其能够并优化用于将抗炎肽递送至AMD患者的视网膜。

AU 2019/226198公开了一种产生适合移植的基本上纯化的RPE细胞培养物的方法。

CN 103656742涉及一种用于向AMD患者视网膜进行移植的功能化视网膜色素上皮细胞移植物的制备方法。

RU 2628697公开了一种以方便和稳定的方式从视网膜色素上皮细胞产生细胞层的程序，无需使用人工膜，并且在眼内移植时获得高植入率。

PCT/US19/68768描述了小分子在视网膜营养不良(即色素性视网膜炎)中用于触发源自视网膜干细胞和祖细胞的光感受器的内源性再生的应用。相反，本发明涉及通过刺激色素沉着和/或哺乳动物RPE细胞的生长来治疗和/或预防RPE相关眼病。

在湿性AMD的情况下，在开发可拮抗血管内皮生长因子(抗VEGF)作用的药物方面取得了很大进展。然而，这些治疗并没有解决RPE层的损伤，而只是抑制了新生血管的形成。此外，它们不能治愈，只能有效保持疾病的当前状态。

因此，本发明的问题是提供用于治疗和/或预防RPE相关疾病并且特别是用于治疗AMD的治疗剂。

该问题通过式(I)的化合物解决。进一步的优选实施方式是从属权利要求的主题。

已经表明新的式(I)化合物刺激哺乳动物RPE细胞的色素沉着和/或生长。这种对色素沉着和/或内源性RPE细胞生长的刺激允许进行视网膜的受控修复和再生。因此，可以通过根据本发明的化合物内源性地产生新的健康RPE细胞来预防视力丧失和/或恢复视力。因此，式I化合物可用作治疗和/或预防导致视网膜色素上皮萎缩、死亡或变性的疾病的治疗活性物质，即用作药物。

术语“RPE细胞”在本文中包括任何形式的增殖性和非增殖性视网膜色素上皮细胞，它们可以支持或产生进一步分化的眼功能组织。RPE细胞光滑、有颜色且呈六角形。健康且完全分化的RPE细胞构建黑素小体，其中含有吸光色素黑素。促进健康和功能性RPE细胞分化的化合物因此导致色素沉着的存在。

术语“哺乳动物RPE细胞的生长”代表RPE细胞增殖的受控促进和RPE细胞数量的相应增加。

术语“预防”是指预防或减少与RPE相关疾病相关的体征和症状，特别是黄斑变性导致有患该病风险的受试者视力丧失。在这些受试者中，可能会保留诱发因素，但疾病的体征和/或症状不会出现或需要更长的时间才能发展。此外，它还包括在疾病发生后防止症状进一步恶化。

因此，本发明涉及治疗和/或预防涉及视网膜色素上皮的疾病的方法，其包括施用式(I)化合物

或其药学上可接受的盐、外消旋混合物、相应的对映异构体或，如果适用的话，相应的非对映异构体，

其中：

R₁、R₁₁和R₁₂独立地选自氢、氟、氯、甲氧基、三氟甲基、甲基、二甲基氨基乙氧基和二氟甲氧基，其中R₁、R₁₁和R₁₂中的至少一个不是氢，

B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)的残基

其中，

"*"表示与分子其余部分的连接点，并且

R₂、R₃、R₄、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V独立地选自氢、具有1至3个碳原子的直链或支链烷基、氟、氯、溴、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基和二氟甲氧基。

术语“药学上可接受的盐”代表本发明的化合物能够形成的具有治疗活性的无毒酸盐形式。

在本发明的一个实施方式中，式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的残基在环位置*处的不对称中心具有如下所述的构型，即式(Ii)的化合物

并且B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VII)的残基，

并且R₂、R₃、R₄、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V定义同上。

在本发明的另一实施方式中，式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的残基在环位置*处的不对称中心的构型如下所示，即式(Iii)的化合物

并且B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的残基

因此，残基B可以是未经取代的、单取代的或多取代的。术语“未经取代的”是指B的所有残基都是氢。术语“单取代的”是指B的一个残基不是氢，术语“多取代的”是指B的至少两个残基不是氢。

优选地，残基B是未经取代的或单取代的。

优选地，在式(I)化合物的残基B中，残基R₃、R₄、R₃ ^I、R₄ ^I、R₃ ^II、R₄ ^II、R₃ ^III、R₄ ^III、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₃ ^V、R₄ ^V独立地选自氢、氯、氟、甲氧基和乙氧基。

在一个实施方式中，残基R₂、R₃、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₅ ^V是氢，R₄、R₄ ^I、R₄ ^II、R₄ ^III、R₄ ^IV、R₄ ^V选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

在另一实施方式中，在式(I)化合物的单取代残基B中，残基R₂、R₄、R₅、R₂ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V是氢并且R₃、R₃ ^I、R₃ ^II、R₃ ^III、R₃ ^IV、R₃ ^V选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

在另一实施方式中，在本发明化合物中，R₁为氯或甲氧基，R₁₁和R₁₂均为氢，残基B为未经取代或单取代的，优选单取代的。所述化合物表现出突出的生物活性。

在本发明的又一方面，在本发明化合物中，R₁₂为甲基、二氟甲氧基或二甲氨基乙氧基，R₁和R₁₁均为氢，残基B为未经取代的或单取代的。

在本发明的又一方面，在本发明化合物中，R₁为甲基或三氟甲基，R₁₂和R₁₁均为氢，残基B为未经取代或单取代的。

在本发明的另一方面，在本发明的化合物中，R₁和R₁₁相互独立地为氯、氟或甲氧基，R₁₂为氢，残基B为未经取代或单取代的。

本发明的一个实施方式涉及式(Ia)的化合物

其中：

R₁、R₁₁、R₁₂、R₂、R₃、R₄和R₅定义同上。优选地，式Ia中的基团B是未经取代的或单取代的。最优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，并且残基B是未经取代的。

或者优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，残基B是单取代的，其中R₂和R₅是氢，R₃或R₄之一是氢，另一个残基选自氟、氯、甲氧基和乙氧基，即残基B是单取代的，R₃或R₄选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

本发明的另一实施方式涉及式(Ib)的化合物

其中：

R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I和R₅ ^I定义同上。优选地，式Ib中的残基B是未经取代的或单取代的。最优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，并且残基B是未经取代的。

或者优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，残基B是单取代的，其中R₂ ^I和R₅ ^I是氢，R₃ ^I或R₄ ^I之一是氢，另一个残基选自氟、氯、甲氧基和乙氧基，即残基B是单取代的，R₃ ^I或R₄ ^I选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

本发明的另一实施方式涉及式(Ic)的化合物

其中：

R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II和R₅ ^II定义同上。优选地，式Ic中的残基B是未经取代的或单取代的。最优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，并且残基B是未经取代的。

或者优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，残基B是单取代的，其中R₂ ^II和R₅ ^II是氢，R₃ ^II或R₄ ^II之一是氢，另一个残基选自氟、氯、甲氧基和乙氧基，即残基B是单取代的，R₃ ^II或R₄ ^II选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

本发明的另一实施方式涉及式(Id)的化合物

或其药学上可接受的盐、外消旋混合物、相应的对映异构体或，如果适用的话，相应的非对映异构体,

其中：

R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^II和R₅ ^III定义同上。优选地，式Id中的残基B是未经取代的或单取代的。最优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，并且残基B是未经取代的。

或者优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，残基B是单取代的，其中R₂ ^III和R₅ ^III是氢，并且R₃ ^III或R₄ ^III之一是氢，另一个残基选自氟、氯、甲氧基和乙氧基，即残基B是单取代的，R₃ ^III或R₄ ^III选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

本发明的另一实施方式涉及式(Ie)的化合物

其中：

R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV和R₅ ^IV定义同上。优选地，式Ie中的残基B是未经取代的或单取代的。最优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，并且残基B是未经取代的。

或者优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，残基B是单取代的，其中R₂ ^IV和R₅ ^IV是氢，并且R₃ ^IV或R₄ ^IV之一是氢，另一个残基选自氟、氯、甲氧基和乙氧基，即残基B是单取代的，R₃ ^IV或R₄ ^IV选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

本发明的另一实施方式涉及式(If)的化合物

其中：

R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V和R₅ ^V定义同上。优选地，式If中的残基B是未经取代的或单取代的。最优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，并且残基B是未经取代的。

或者优选地，R₁是氯，R₁₁和R₁₂是氢，并且残基B是单取代的，其中R₂ ^V和R₅ ^V是氢，并且R₃ ^V或R₄ ^V之一是氢，另一个残基选自氟、氯、甲氧基和乙氧基，即残基B是单取代的，R₃ ^V或R₄ ^V选自氟、氯、甲氧基和乙氧基。

优选地，式(Ia)的化合物

选自式(I)的化合物，其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂、R₃、R₄和R₅如表1所示：

优选地，式(Ib)的化合物

选自式(I)的化合物，其中，R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I和R₅ ^I如表2所示：

优选地，式(Ic)的化合物

选自式(I)的化合物，其中，R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II和R₅ ^II如表3所示：

优选地，式(Id)的化合物

选自式(I)的化合物，其中，A、R₁、R₁₂、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III和R₅ ^III如表4所示：

优选地，式(Ie)的化合物

选自式(I)的化合物，其中，R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV和R₅ ^IV如表5所示：

优选地，式(If)的化合物

选自式(I)的化合物，其中，R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V和R₅ ^V如表6所示：

通过本发明的下列化合物可以获得特别好的结果：

C*＝对照实验(不存在根据本发明的化合物)。

特别是，化合物(1)和(7)在RPE细胞的色素沉着方面表现出优异的结果。

表8中描述了提供良好活性的其他优选化合物。表述“来自手性HPLC拆分的保留时间较短的对映异构体”是指当应用下文相应的手性分离方法A、B、C、D、E、F、G、H、I和K中描述的条件时，该对映异构体首先在手性HPLC中出来。在本发明的上下文中，保留时间较短的对映异构体也称为“第一对映异构体”，而保留时间较长的对映异构体也称为“第二对映异构体”。

如已经提到的，根据本发明的化合物和根据本发明的组合物刺激RPE细胞的增殖和/或分化。因此，根据本发明的化合物可用于治疗和/或预防RPE相关疾病，特别是来自导致视力丧失的黄斑变性家族的RPE疾病。最优选地，所述疾病是导致视网膜色素上皮细胞萎缩、退化或死亡的疾病，其可能进一步导致视网膜新生血管形成和/或光感受器死亡。

根据本发明的化合物和组合物特别可用于治疗和/或预防选自黄斑变性家族的疾病，该家族由早期年龄相关性黄斑变性(AMD)、干性AMD和地图样萎缩(GA)组成，以及通过诱导RPE细胞的增殖和/或分化来治疗湿性AMD。因此，由于本发明的化合物和组合物，可以通过恢复或再生内源性RPE细胞来逆转疾病引起的RPE细胞损伤，而不仅仅是治疗由RPE细胞功能障碍和/或损伤引起的视力丧失。

本发明的式(I)化合物尤其可用于预防干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)和/或湿性年龄相关性黄斑变性(湿性AMD)的发作，以防止早期AMD到包括湿性AMD或地图样萎缩(GA)的晚期形式的AMD，以减缓和/或预防GA的进展，预防或减少AMD造成的视力丧失，并改善由于先前存在的早期或晚期干性或湿性AMD。它还可以与抗VEGF疗法联合用于治疗新生血管性AMD患者或用于预防新生血管性AMD。

根据本发明的化合物和组合物还可用于治疗和/或预防选自以下的疾病：贝斯特病、常染色体隐性遗传性斑萎蛋白病(ARB)、回旋状萎缩、北卡罗莱纳黄斑营养不良、中枢性Areolar脉络膜营养不良(CACD)、Sorsby黄斑营养不良、家族性显性玻璃膜疣、角质层或基底层状玻璃膜疣、早产儿视网膜病变、近视性变性、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、中央严重视网膜病变、血管样条纹、视网膜脱离、锯齿缘离断、Vogt-Koyanagi-Harada(VKH))、急性后部多灶性鳞状色素上皮病(APMPPE)、持续性鳞状黄斑病变(PPM)、持续鳞状脉络膜视网膜病变(RPC)、匐行性脉络膜炎、匐行样脉络膜炎(多灶性匐行性脉络膜炎)、多发性消逝性白点综合征(MEWDS)或鸟枪弹样视网膜脉络膜病变(白斑性脉络膜视网膜炎)。

根据本发明的化合物和组合物特别可用于治疗和/或预防选自以下的疾病：导致脉络膜新生血管形成或血管渗漏的视网膜疾病。所述视网膜疾病优选选自弓形体病、弓蛔虫病、风疹、白塞病、脉络膜血管瘤、外伤、脉络膜破裂和特发性视网膜炎-血管炎-动脉瘤和神经视网膜炎(IRVAN)。

根据本发明的化合物和组合物特别可用于治疗和/或预防选自以下的疾病：引起视网膜炎症和变性的视网膜疾病，如交感性眼炎、术后炎症或非动脉缺血性视神经病变，以及与全身性疾病相关的视网膜退化，如糖尿病、镰状细胞病或放射性视网膜病变。

在其它实施方式中，本发明涉及用于治疗和/或预防涉及视网膜色素上皮的疾病的药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的载体和/或佐剂；和式(I)的化合物

其中：

R₁、R₁₁和R₁₂独立地选自氢、氟、氯、甲氧基、三氟甲基、甲基和二氟甲氧基，其中R₁、R₁₁和R₁₂中的至少一个不是氢，

B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)的残基，

其中，

"*"表示与分子其余部分的连接点，并且

R₂、R₃、R₄、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V独立地选自氢、具有1至3个碳原子的直链或支链烷基、氟、氯、溴、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基和二氟甲氧基，

作为治疗性活性物质和药学上可接受的载体和/或佐剂用于治疗和/或预防涉及视网膜色素上皮的疾病。

其中：

B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)的残基，

其中，

"*"表示与分子其余部分的连接点，并且

条件是如果

a)R₁₁是氢，并且

b)R₁和R₁₂中的一个选自氟、氯和甲氧基、三氟甲基、甲基和二氟甲氧基，而R₁和R₁₂中的另一个是氢，则

B是式(IV)或(VII)的残基

作为治疗性活性物质。

根据本发明的化合物或组合物可以单独或与一种或多种另外的治疗剂组合施用于患者。如本文所用，“患者”包括哺乳动物，如人、非人灵长类动物、大鼠、小鼠、兔、野兔、狗、猫、马、牛和猪，优选人。

根据本发明的药物组合物可以包含一种或多种另外的治疗剂。

在本发明的一个优选实施方式中，所述药物组合物包括药学上可接受的载体和/或辅料；和如上所定义的式(I)的化合物，优选式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)或(If)的化合物。最优选地，其包含如上表1、表2、表3、表4、表5、表6、表7和表8所公开的式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)或(If)的化合物。

优选地，这样的药物组合物提供控释特性。本文中的术语“控释药物组合物”是指任何组合物或剂型，其包含本发明的化合物并且被配制成在施用该剂型后所提供的药理学反应持续时间比在施用包含相同量的相同药物的相应速释组合物后通常经历的更长。控释可能会延长至几个月，具体取决于所使用的基质。优选地，根据本发明的化合物的释放发生长达12个月的时间，最优选长达6个月的时间。这种控释制剂提高了患者的舒适度并显著降低了成本。

用于根据本发明的药物组合物的基质材料可包含疏水性释放控制剂。其优选但不限于聚醋酸乙烯分散体、乙基纤维素、醋酸纤维素、丙酸纤维素(低、中或高分子量)、醋酸丙酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素、三醋酸纤维素、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)和聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)、诸如蜂蜡、巴西棕榈蜡、石蜡、微晶蜡和地蜡等蜡类；诸如鲸蜡硬脂醇、硬脂醇、鲸蜡醇、肉豆蔻醇等脂肪醇，和诸如单硬脂酸甘油酯等脂肪酸酯类；单油酸甘油酯、乙酰化单甘油酯、三硬脂精、三棕榈精、鲸蜡基酯蜡、棕榈酸硬脂酸甘油酯、山萮酸甘油酯或氢化植物油。

本发明的化合物可以通过多种途径递送至眼睛，其包括但不限于局部应用于眼睛或通过眼内注射进入例如玻璃体、视网膜下(感光器间)或结膜下空间；局部插入或注射到眼睛周围的组织中；通过口服途径或通过皮下、静脉内或肌肉内注射全身施用；或通过导管或植入物。最优选地，本发明的化合物通过眼内注射递送。局部眼用组合物的实例是滴眼剂、软膏、凝胶、溶液和悬浮液。

本发明的化合物可以在病症发作之前施用以防止其发生，如在眼科手术期间、病理病症发作后立即或在急性或长期病症发生期间。

根据预期的施用方式，本发明的化合物可以掺入任何药学上可接受的剂型，例如包括溶液、悬浮液和乳剂在内的液体、片剂、栓剂、丸剂、胶囊剂、粉末剂等，优选适合单次施用精确剂量的剂型，或适合连续控制施用的缓释剂型。最优选的是液体。

液体可药用剂型可以是例如溶液、悬浮液或乳剂，优选地，悬浮液在载体中包含本发明的化合物和可选的药物辅助剂，例如水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、透明质酸、乙醇、DMSO等，从而形成溶液或悬浮液。如果需要，待施用的药物组合物还可以含有少量无毒辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等。这种助剂的典型实例是乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺、乙酸钠和油酸三乙醇胺。

本发明还涉及一种治疗和/或预防RPE相关疾病的方法，包括施用式(I)的化合物，优选(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)和(If)的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋混合物、相应的对映异构体或，如果适用的话，相应的非对映异构体至患有视网膜疾病的患者，以便以有效治疗视网膜疾病的量递送至患者的眼睛。式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)和(If)的化合物在上文有详细定义。

在其它实施方式中，本发明涉及式(I)的新化合物

或其药学上可接受的盐、外消旋混合物、相应的对映异构体或，如果适用的话，相应的非对映异构体，作为治疗活性物质，

其中：

B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)的残基，

其中，

"*"表示与分子其余部分的连接点，并且

在本发明的其它实施方式中，本发明涉及式(I)的新化合物，其中，式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的残基在环位置*处的不对称中心具有如下所示的构型，

并且B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VII)的残基，

并且R₂、R₃、R₄、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V定义同上，

条件是如果

a)R₁₁是氢，并且

B是式(IV)或(VII)的残基。

在本发明的一个实施方式中，涉及(Ia)的化合物

选自表11所示的式(Ia)化合物，其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂、R₃、R₄和R₅：

在本发明的其它实施方式中，涉及(Ib)的化合物

选自表12所示的式(Ia)化合物，其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I和R₅ ^I

在本发明的其它实施方式中，涉及(Ic)的化合物

选自表13所示的式(Ia)化合物，其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II和R₅ ^II：

在本发明的其它实施方式中，涉及(Id)的化合物

选自表14所示的式(Ia)化合物，其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III和R₅ ^III：

在本发明的其它实施方式中，涉及(Ie)的化合物

选自表15所示的式(Ie)化合物，其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV和R₅ ^IV：

在本发明的其它实施方式中，涉及(If)的化合物

选自表16所示的式(If)化合物，其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V和R₅ ^V：

如已经提到的，可以表明根据本发明的化合物和根据本发明的组合物刺激RPE细胞的增殖和/或分化。因此，它们适用于治疗和/或预防RPE相关疾病，特别是来自导致视力丧失的黄斑变性家族的RPE疾病。

通过本发明的下列化合物可以获得特别好的结果：

在本发明的一个优选实施方式中，所述药物组合物包括药学上可接受的载体和/或辅料；和如上所定义的式(I)的化合物，优选式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)或(If)的化合物。最优选地，它包含如上表11、表12、表13、表14、表15、表16和表17公开的式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)或(If)的化合物。

实验部分

细胞培养

从加利福尼亚大学圣巴巴拉分校获得的诱导多能干细胞来源的胎儿RPE(iPSC-fRPE)细胞是从人类胎儿RPE细胞中产生的，这些细胞被分离并重新编程为iPSC，然后根据细胞标记进行分化和分类以收集RPE祖细胞。小瓶在干冰上冷冻运输并储存在-80℃。

对于表型筛选，将iPSC-fRPE细胞解冻并在具有N1VA培养基的Matrigel包被的烧瓶中培养，所述N1VA培养基保护补充有2.2g/L碳酸氢钠、0.25mg/ml牛磺酸、0.02μg/ml氢化可的松、0.013μg/ml三碘甲状腺原氨酸、0.1μg/ml硫辛酸、1％MEM非必需氨基酸、1％青霉素/链霉素、2％Neurocult SM1补充剂和1％N1补充剂的1XMEM溶液。对于最初的培养物，在孵育的前24小时，将2μM Thiazovivin添加到培养基中，之后将培养基更换为新鲜的N1VA培养基，在37℃和5％CO2条件下再孵育三天。

化合物筛选

iPSC-fRPE细胞用N1VA培养基以每孔10,000个细胞的密度接种在Matrigel包被的96孔板中，并在用终浓度为5μM的0.1％DMSO中的测试化合物处理之前培养24小时。每个测试板的内部对照是(a)0.1％DMSO作为阴性对照和(b)0.1％DMSO+10ng/ml人重组bFGF(STEMCELL)作为阳性对照。为了鉴定促进RPE色素沉着的命中，将细胞保持32天，并根据培养基更换方案用含有测试或对照化合物的培养基处理(图1)。通过使用Cytation5成像读取器(BIOTEK)测量510nm处的吸光度来量化色素沉着程度。将归一化吸光度终点增加超过每板平均DMSO读数三个标准偏差的化合物视为命中。最后报告相对于板内部DMSO对照的色素沉着值。

本发明化合物的制备

式(I)的化合物可以通过下述方法以及有机化学领域已知的合成方法或本领域普通技术人员熟悉的修改来制备。本文所用的原料可商购或可通过本领域已知的常规方法制备，诸如标准参考书中描述的那些方法，如“Compendium of Organic Synthetic Methods，第I-XIN卷”(与Wiley-Interscience一起出版，ISSN：1934-4783)。优选的方法包括但不限于下述那些。

这些方案是可用于合成本发明化合物的代表性方法和支持性实施例。它们不以任何方式限制本发明的范围。

一般方法-合成

方法1：

方案1：

其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂、R₃、R₄和R₅如式I中所述。

通式Ia的化合物(方案1)可以通过使用本领域化学家已知的方法使通式VIII的化合物与通式IX的羧酸反应来制备。

方法2

方案2：

其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I和R₅ ^I如式I中所述。

通式Ib的化合物(方案2)可以通过使用本领域化学家已知的方法使通式VIII的化合物与通式X的羧酸反应来制备。

方法3：

方案3：

其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II和R₅ ^II如式I中所述。

通式Ic的化合物(方案3)可通过使用本领域化学家已知的方法使通式VIII的化合物与通式XI的羧酸反应来制备。

方法4：

方案4：

其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III和R₅ ^III如式I中所述。

通式Id的化合物(方案4)可以通过使用本领域化学家已知的方法使通式VIII的化合物与通式XII的羧酸反应来制备。

方法5：

方案5：

其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV和R₅ ^IV如式I中所述。

通式Id的化合物(方案5)可以通过使用本领域化学家已知的方法使通式VIII的化合物与通式XIII的羧酸反应来制备。

方法6：

方案6：

其中R₁、R₁₁、R₁₂、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V和R₅ ^V如式I中所述。

通式Ie的化合物(方案6)可以通过使用本领域化学家已知的方法使通式VIII的化合物与通式XIV的羧酸反应来制备。

方法7：

方案7：

其中R₁、R₁₂和R₁₁如式I中所述。

通式VIII的化合物(方案7)可以使用本领域化学家已知的方法通过还原通式XVII的化合物中的硝基来制备。通式XVII的化合物可以由通式XV的醛通过在诸如对甲苯磺酰甲基异氰化物(XVI)等试剂的存在下在诸如碳酸钾等碱的存在下反应来制备。

方法8：

方案8：

其中R₁、R₁₁和R₁₂如式I所述，R₂₀和R₂₁均为羟基或与硼原子一起形成4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷基团。

通式I的化合物(方案8)可以由通式XIX和XX的化合物在诸如四(三苯基膦)钯(0)等钯催化剂和诸如碳酸钾等碱的存在下或有机合成领域化学家已知的反应条件来制备。通式XIX的化合物可以通过使用本领域化学家已知的方法使通式XVIII的化合物与通式IX-XIV的羧酸反应来制备。

分析方法

在5mm外径的管[Wilmad NMR管(Sigma-Aldrich)，5mm薄壁，7”长]中在DMSO-d₆/CD₃OD/CDCl₃溶液中在300.0K记录1H NMR光谱并在Bruker Avance NMRS-400上以400MHz收集1小时。化学位移(δ)相对于CDCl3(CDCl3＝7.26ppm)、DMSO-d₆(DMSO-d6＝2.5ppm)、CD₃OD(CD₃OD＝3.3ppm)，以ppm表示。CDCl₃、DMSO-d₆和CD₃OD中的化学位移是相对于四甲基硅烷(TMS，＝0.00ppm)的，并以ppm表示。

分析型HPLC

分析型HPLC方法A：Chromegabond WR C18(3cm x 3.2mm，3μ)色谱柱，流速为1.5mL/min。作为流动相，使用0.02％TFA的水溶液(流动相C)和0.02％TFA的CH3CN(流动相D)，梯度从90％C和10％D开始，在3分钟内变为10％C和90％D，然后在4.0分钟内变为90％C和10％D，并保持恒定直至5.1分钟。

分析型HPLC方法B：Restek Ultra AQ C18(30x2.1mm，3u)色谱柱，流速为1.5mL/min。作为流动相，使用0.05％HCOOH水溶液(流动相A)和CH3CN(流动相B)，梯度从98％A和2％B开始保持0.75分钟，然后在1.5分钟内变为90％A和10％B，在3.0分钟内进一步变为2％A和98％B，将此流动相组成保持长达4.0分钟，最后在5.0分钟时回到初始状态。

分析型HPLC方法C：色谱柱-YMC TRIART C18(33x2.1mm，3u)，(流动相：95％[0.01％HCOOH水溶液]和5％[0.01％HCOOH的CH3CN溶液]保持0.50分钟，然后在3.0分钟内变为99％[0.01％HCOOH水溶液]和1％[0.01％HCOOH的CH3CN溶液]，保持此流动相组成长达4.0分钟，最后在4.10分钟内回到初始条件，保持此流动相组成长达4.50分钟)。流量＝1.0ml/min。

制备型HPLC

制备型HPLC方法A：使用具有SunFire C18 Prep Guard Cartridge，100A，10μm，19mm x 10mm的Waters Sunfire C18 OBD制备柱，100A，5μm，19mm x 100mm。去离子水(A相)和HPLC级甲醇(B相)用作洗脱液。

制备型HPLC方法B：配备YMC Triart C18(250x21.2mm，5μ)柱的Waters自动纯化仪器在室温下以16mL/min的流速运行。样品用20mM碳酸氢铵水溶液(流动相A)和乙腈(流动相B)洗脱，梯度曲线最初为70％A和30％B，然后在3分钟内为45％A和55％B，在20分钟内变为20％A和80％B，然后在21分钟内变为5％A和95％B，并保持恒定2分钟。浓缩纯级分得到最终产物。

手性分离方法

手性分析方法

手性分离方法A：使用Agilent Prep-HPLC完成分离，色谱柱：Regis Reflect C-Amylose A，含有直链淀粉三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(250x30mm，5μ)，流速：35g/min，流动相：35％CO₂+65％(0.1％NH₃的甲醇溶液)，ABPR：100巴，温度：35℃。

手性分离方法B：使用Agilent Prep-HPLC完成分离，色谱柱：Daicel ChiralpakIG(250x20 mm)，含有固定在5μm二氧化硅上的三(3-氯-5甲基苯基氨基甲酸酯)取代的直链淀粉；流量：25g/min，流动相：45％CO₂+55％(0.1％NH₃的甲醇溶液)，ABPR：120巴，温度：35℃。

手性分离方法C：分离使用以下完成：色谱柱：Regis Reflect C-Amylose A，含有直链淀粉三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(250x30mm，5μ)，流动相：40％CO₂+60％(0.1％氨的甲醇溶液)，流速：25.0g/min，运行时间：10分钟，波长：220nm，ABPR：110巴，温度：35℃。

手性分离方法D：使用Agilent Prep-HPLC完成分离，色谱柱：Chiralpak IG(250x30mm，5μ)，流速：35g/min，流动相：35％CO₂+65％(0.1％NH₃的甲醇溶液)，ABPR：100巴，温度：35℃。

手性分离方法E：使用Agilent Prep-HPLC完成分离，色谱柱：Chiralpak IG(250x30mm，5μ)，流速：25g/min，流动相：60％CO₂+40％(0.1％NH₃的甲醇溶液)，ABPR：100巴，温度：35℃。

手性分离方法F：使用Agilent Prep-HPLC完成分离，色谱柱：Chiralpak IG(250x30mm，5μ)，流速：25g/min，流动相：45％CO₂+55％(0.1％NH₃的甲醇溶液)，ABPR：120巴，温度：35℃。

手性分离方法G：分离使用色谱柱完成：Chiralpak AD-H(4.6x250mm，5μ)；流动相：100％EtOH；流速：0.5ml/min；柱温：24℃；波长：286nm。

手性制备方法

手性分离方法H：使用涂有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的DaicelChiralpak AD-H(250×20mm×5μm)柱进行；流动相：己烷-IPA-MeOH，70-15-15；流速：12mL/min；柱温：24℃；波长：210nm、225nm、254nm。

手性分离方法I：使用涂有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的DaicelChiralpak AD-H(250×20mm×5μm)柱进行；流动相：己烷-IPA-MeOH，70-15-15；流速：12mL/min；柱温：24℃；波长：215nm、280nm。

手性分离方法K：使用涂有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的DaicelChiralpak AD-H(250×20mm×5μm)柱进行；流动相：EtOH，流速：10mL/min；柱温：24℃；波长：286nm。

一般合成程序

偶联程序A：将羧酸(1.1mmol)和N-羟基苯并三唑的DMSO溶液(100g/L，2mL，1.5mmol)置于小瓶中，然后加入苯胺衍生物(1mmol)。如果胺以盐酸盐的形式使用，则还添加Et₃N(1mmol)。将反应混合物在振荡器中搅拌30分钟，并加入EDC(1.2mmol)。装入所有试剂后，将小瓶密封并在摇床中搅拌1小时。如果形成澄清溶液，则将小瓶在室温下放置24小时。否则，将反应混合物在超声浴中保持24小时(应避免强烈加热)。如果观察到反应混合物强烈变稠以致搅拌无效，则可以一次性添加0.2mLDMSO。通过LC-MS分析粗反应混合物，然后进行色谱纯化。使用配备DAD和质谱检测器的Agilent 1260Infinity系统进行纯化。

中间体的合成

5-(2-甲氧基-4-硝基苯基)噁唑的制备

向2-甲氧基-4-硝基苯甲醛(3.00g，16.6mmol)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中加入1-(异氰基甲烷)磺酰基-4-甲基苯(3.80g，19.9mmol)，然后加入K2CO3(8.00g，58.0mmol)并将反应混合物加热至80℃持续2小时。反应完成后，将反应物料倒入饱和NaHCO3溶液(20mL)中并提取至乙酸乙酯(3x100mL)中。有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩得到粗品，其通过快速硅胶色谱纯化(在30％乙酸乙酯的己烷溶液中洗脱)得到5-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-1,3-噁唑(2.1g，57％)。LCMS：221(M+H)。

3-甲氧基-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺的制备

向5-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-1,3-噁唑(1.00g，4.52mmol)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中加入氯化锡(^II)(5.14g，27.1mmol)并在0℃滴加浓HCl(6mL)溶液，然后在室温下搅拌6小时。反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)稀释，用乙酸乙酯(3x200mL)提取，有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到3-甲氧基-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺的粗品(700mg，81％)。LCMS：191(M+H)。

5-(2-氯-4-硝基苯基)-1,3-噁唑的制备

向2-氯-4-硝基苯甲醛(3g，16.16mmol)和1-(异氰甲烷)磺酰基-4-甲基苯(4.1g，21.0mmol)在MeOH(30mL)中的搅拌溶液中加入K₂CO₃(8.9g，64.66mmol)并将反应混合物加热至80℃持续2小时。反应完成后，将反应物质倒入饱和NaHCO₃溶液(20mL)中并用乙酸乙酯(2×50mL)提取。有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩得到粗品，其通过快速硅胶色谱纯化(在30％乙酸乙酯的己烷溶液中洗脱)得到5-(2-氯-4-硝基苯基)-1,3-噁唑(2.1g，57％)。LCMS：225.2(M+H)。

3-氯-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺的制备

向5-(2-氯-4-硝基苯基)-1,3-噁唑(3g，13.4mmol)在EtOH(40mL)中的搅拌溶液中加入氯化锡(^II)二水合物(12.08g，53.57mmol)并在0℃滴加浓HCl(5mL)溶液，并将反应混合物在80℃搅拌30分钟。反应完成后，使用2N NaOH溶液中和反应物质并用乙酸乙酯(2×50mL)提取。有机层用水彻底洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到3-氯-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺(1.5g，57％)。LCMS：195(M+H)。

5-(2-氟-4-硝基苯基)-1,3-噁唑的制备

向2-氟-4-硝基苯甲醛(5g，29.56mmol)和1-(异氰基甲烷)磺酰基-4-甲基苯(7.5g，38.43mmol)在MeOH(35mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(16.3g，118.27mmol)并将反应混合物加热至80℃持续2小时。反应完成后，将反应物质倒入饱和NaHCO3溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(2x50mL)提取。有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩得到粗品，其通过快速硅胶色谱纯化(在30％乙酸乙酯的己烷溶液中洗脱)得到5-(2-氟-4-硝基苯基)-1,3-噁唑(2.5g，40％)。LCMS：209.2(M+H)。

3-氟-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺的制备

向5-(2-氟-4-硝基苯基)-1,3-噁唑(700mg，3.36mmol)在EtOH(35mL)中的搅拌溶液中加入氯化锡(II)二水合物(3.03g，13.46mmol)并在0℃滴加浓HCl(2mL)溶液，并将反应混合物在80℃搅拌30分钟。反应完成后，将反应物质用2N NaOH溶液中和并用乙酸乙酯(2x50mL)提取。用水彻底洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩以获得3-氟-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺(350mg，53％)。LCMS：179(M+H)。

5-(2-甲基-4-硝基苯基)噁唑的制备

向2-甲基-4-硝基苯甲醛(1.02g，6.05mmol)和1-(异氰基甲烷)磺酰基-4-甲基苯(1.36g，7.05mmol)在MeOH(25mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(1.67g，12.1mmol)并将反应混合物加热至回流持续2h。TLC显示原料消耗完后，将反应混合物冷却至室温，减压蒸发溶剂，将残余物用饱和NaHCO₃水溶液(20mL)处理，并用乙酸乙酯(3×30mL)提取。有机层用水(30mL)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到粗品，将其通过快速柱层析纯化得到5-(2-甲基-4-硝基苯基)噁唑(1.2g，91％)。

3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯胺的制备

在室温下向5-(2-甲基-4-硝基苯基)噁唑(1.1g，5.39mmol)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中加入氯化锡(^II)二水合物(4.08g，21.5mmol)。将混合物冷却至0℃并浓缩。滴加HCl(3.0mL)。然后将反应混合物在80℃搅拌0.5小时。TLC显示反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO₃水溶液(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×30mL)提取。合并有机层，用水(20mL)、盐水(15mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。通过柱层析法纯化粗品以获得3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯胺(610mg，65％)。

5-(3-甲基-4-硝基苯基)噁唑的制备

向3-甲基-4-硝基苯甲醛(2.01g，12.1mmol)和1-(异氰基甲烷)磺酰基-4-甲基苯(2.6g，13.3mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中加入K₂CO₃(3.34g，24.2mmol)并将反应混合物加热至回流持续2小时。TLC显示原料完全消耗后，将反应冷却至室温，减压蒸发溶剂，将残余物用饱和NaHCO3水溶液(40mL)处理，并用乙酸乙酯(3x40mL)提取。合并有机层，用水(30mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。使用二氧化硅通过柱层析法纯化粗品以获得5-(3-甲基-4-硝基苯基)噁唑(1.9g，76％)。

2-甲基-4-(噁唑-5-基)苯胺的制备

在室温下向5-(3-甲基-4-硝基苯基)噁唑(1.8g，5.39mmol)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中加入雷尼镍(2.0g)。将反应混合物在H2气氛下搅拌18小时。原料完全消耗后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩。将粗品通过柱层析纯化以获得2-甲基-4-(噁唑-5-基)苯胺(1.3g，84％)。

LCMS:174.7(M+H)

5-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)噁唑的制备

向4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲醛(2.0g，9.13mmol)和1-(异氰基甲烷)磺酰基-4-甲基苯(2.05g，10.5mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中加入K₂CO₃(2.52g，18.26mmol)并将反应混合物加热回流持续2小时。TLC显示原料消耗完后，将反应混合物冷却至室温，减压蒸发溶剂，将残余物用饱和NaHCO₃水溶液(20mL)处理，并用乙酸乙酯(3×30mL)提取。用水(30mL)、盐水(20mL)洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到粗品，将其通过柱层析纯化得到5-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)噁唑(1.66g，72％)。

4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯胺的制备

在室温下向5-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)噁唑(1.545g，5.99mmol)在乙醇(30mL)中的搅拌溶液中加入氯化锡(^II)二水合物(5.40g，23.95mmol)。将混合物冷却至0℃并滴加浓HCl(3.5mL)。然后将反应混合物在80℃搅拌2.0小时。TLC显示反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO₃水溶液(70mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并有机层，用水(40mL)、盐水(30mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。粗品通过柱色谱法纯化以获得4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯胺(1.13mg，83％)。

色满-3-碳酰氯的制备

在0℃向色满-3-羧酸(750mg，4.21mmol)的无水二氯甲烷(10mL)溶液中加入亚硫酰氯(0.45mL，6.32mmol)，然后加入DMF(催化)。添加后，将反应混合物升温至室温并加热至回流持续2.0小时。将反应物质冷却至室温，减压蒸发溶剂，并真空干燥。

N-(4-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)色满-3-甲酰胺的制备

在0℃将色满-3-碳酰氯的无水二氯甲烷(10mL)溶液加入4-溴-2-(二氟甲氧基)苯胺(600mg，2.521mmol)和三乙胺(1.1mL，7.563mmol)的混合物的无水二氯甲烷(10mL)溶液中。添加后，反应在3小时内缓慢升温至室温。反应用二氯甲烷(5mL)稀释，用水(10mL)和盐水(15mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到粗品。通过柱层析纯化粗品以获得N-(4-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)色满-3-甲酰胺(520mg，62％)。

5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)噁唑的制备

向3-甲氧基-4-硝基苯甲醛(2.5g，13.80mmol)和甲苯磺酰基甲基异氰化物(3.1g，15.87mmol)在MeOH(60mL)中的搅拌溶液中加入K₂CO₃(3.8g，27.60mmol)并将反应混合物加热至回流持续2h。通过TLC检测起始原料消耗后，将反应混合物冷却至室温，减压蒸发溶剂，将残余物用饱和NaHCO₃水溶液(40mL)处理，并用乙酸乙酯(3×40mL)提取。有机层用水(40mL)、盐水(30mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到粗产物，将其用二氯甲烷/己烷研磨得到5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)噁唑(2.4g，78％)。

2-硝基-5-(噁唑-5-基)苯酚的制备

在0℃在N₂下向5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)噁唑(2.0g，9.09mmol)在无水二氯甲烷(50mL)中的搅拌溶液中加入BBr₃(1M在二氯甲烷中，22.7mL，22.72mmol)。将所得混合物升温至室温并搅拌2小时。通过TLC检测起始材料消耗后，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭并在室温下搅拌30分钟。过滤反应混合物并用二氯甲烷(2×25mL)洗涤固体。滤液用水(30mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。使用硅胶通过柱层析法纯化粗品以获得作为固体的2-硝基-5-(噁唑-5-基)苯酚(1.7g，90％)。N-二甲基-2-(2-硝基-5-(噁唑-5-基)苯氧基)乙胺的制备

2-硝基-5-(噁唑-5-基)苯酚(1.65g，8.01mmol)、二甲基氨基乙基氯盐酸盐(1.9g，13.2mmol)、K2CO3(6.6g，47.7mmol)、碘钾(215mg，1.29mmol)和DMF(35mL)的混合物在100℃加热2小时。反应通过TLC监测(部分原料未反应)，将反应混合物冷却至室温并浓缩。残留物用饱和NH4Cl水溶液(20mL)稀释，用乙酸乙酯(3x50mL)提取，有机层用水(50mL)、盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。粗品通过柱层析纯化以获得作为固体的N,N-二甲基-2-(2-硝基-5-(噁唑-5-基)苯氧基)乙胺。

2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯胺的制备

向N,N-二甲基-2-(2-硝基-5-(噁唑-5-基)苯氧基)乙胺(725mg，2.62mmol)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中加入氯化锡(^II)二水合物(2.95g，13.08mmol)并将反应混合物加热至65-70℃持续1.5小时。TLC检测到原料消耗完后，将反应混合物冷却至室温，用饱和Na2CO3水溶液(45mL)碱化，用二氯甲烷(60mL)稀释，水相用二氯甲烷(3x30mL)提取。合并有机层，经Na2SO4干燥，并减压浓缩。将粗品通过柱层析纯化以获得2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯胺(575mg，86％)。

5-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)噁唑的制备

向4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲醛(2.0g，9.13mmol)和甲苯磺酰基甲基异氰化物(2.05g，10.5mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中加入K₂CO₃(2.52g，18.26mmol)并将反应混合物加热至回流持续2小时。TLC显示原料消耗完后，将反应混合物冷却至室温，减压蒸发溶剂，将残余物用饱和NaHCO₃水溶液(20mL)处理，并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。有机层用水(30mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到粗产物，将其通过柱层析纯化得到作为固体的5-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)噁唑(1.66g，72％)。

4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯胺的制备

在室温下向5-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)噁唑(1.545g，5.99mmol)在乙醇(30mL)中的搅拌溶液中加入氯化锡(^II)二水合物(5.40g，23.95mmol)。将混合物冷却至0℃并滴加浓HCl(3.5mL)。然后将反应混合物在80℃搅拌2.0小时。TLC显示反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3水溶液(70mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并有机层，用水(40mL)、盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。通过柱层析法纯化粗品以获得4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯胺(1.13g，83％)。

N-(4-溴-3-氯-5-氟苯基)色满-3-甲酰胺的制备

在0℃将色满-3-碳酰氯的无水二氯甲烷(10mL)溶液加入4-溴-3-氯-5-氟苯胺(300mg，1.34mmol)和三乙胺(0.56mL，4.00mmol)的混合物的无水二氯甲烷(10mL)的溶液中。添加后，反应在3小时内缓慢升温至室温。反应用二氯甲烷(10mL)稀释，用水(10mL)和盐水(15mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到粗品。通过柱层析纯化粗品得到作为固体的N-(4-溴-3-氯-5-氟苯基)色满-3-甲酰胺(280mg，49％)。

N-(4-溴-3-氯-2-氟苯基)色满-3-甲酰胺的制备

在0℃将色满-3-碳酰氯的无水二氯甲烷(10mL)溶液加入4-溴-3-氯-2-氟苯胺(600mg，2.673mmol)和三乙胺(1.1mL，8.02mmol)的混合物的无水二氯甲烷(10mL)的溶液中。添加后，反应在3小时内缓慢升温至室温。通过TLC监测反应混合物。最大转化率后，将反应混合物用二氯甲烷(5mL)稀释，用水(10mL)和盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，减压浓缩以获得粗N-(4-溴-3-氯-2-氟苯基)色满-3-甲酰胺。通过柱层析纯化粗品得到作为固体的N-(4-溴-3-氯-2-氟苯基)色满-3-甲酰胺(320mg，31.2％)。

化合物(1)：第一(-)-N-(3-氯-4-(1,3-噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在室温下向3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺(100mg，0.51mmol)和色烷-3-羧酸(109mg，0.61mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.26mL)和HATU(392mg，1.03mmol)，反应在室温下搅拌16小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-氯-4-(1,3-噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(34mg，18％)。使用手性分离方法C通过手性色谱分离外消旋产物以产生化合物(1)，其特征在于保留时间＝4.76min(首先从柱洗脱)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.73min；MS：355(M+H)。

[α]D²⁵＝-7.57(589nm，c＝0.49，DMSO)。

化合物(2)：第二(+)-N-(3-氯-4-(1,3-噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在室温下向3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺(100mg，0.51mmol)和色烷-3-羧酸(109mg，0.61mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.26mL)和HATU(392mg，1.03mmol)，反应在室温下搅拌16小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-氯-4-(1,3-噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(34mg，18％)。使用手性分离方法C通过手性色谱分离外消旋产物以产生化合物(2)，其特征在于保留时间＝6.04分钟(第二个从柱洗脱)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.73min；MS：355(M+H)。

[α]D²⁵＝+5.83(589nm，c＝0.55，DMSO)。

化合物(3)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)异色烷-3-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A，从异色烷-3-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备标题化合物(产率33％)。

MS：355.0(M+H)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.25(s，1H)，8.53(s，1H)，8.11(d，J＝1.7Hz，1H)，7.84(dd，J＝8.7，1.9Hz，1H)，7.79(d，J＝8.7Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.25–7.18(m，3H)，7.16–7.09(m，1H)，5.04–4.85(m，2H)，4.48–4.37(m，1H)，3.19–2.95(m，2H)。

化合物(4)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-4-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A，从3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-4-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备标题化合物(产率12％)。

MS：355.0(M+H)。

化合物(5)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酰胺

将3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺(110mg，0,567mmol)、2,3-二氢-1H-茚-1-羧酸(105mg，0,595mmol)和N-羟基苯并三唑(85mg，0,624mmol)的混合物溶解在1ml无水二甲基乙酰胺中并冷却至-10℃。然后加入106mg(0.68mmol)1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺，并将混合物在室温下搅拌16小时。加入30ml水，过滤所得沉淀物，用10ml水洗涤三次，用3ml异丙醇洗涤一次，用10ml己烷洗涤两次。然后将其在50℃的空气中干燥。获得110mg(产率55％)。

MS：353.0(M+H)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.37(s，1H)，8.52(s，1H)，8.04(d，J＝2.0Hz，1H)，7.78(d，J＝8.7Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.65(dd，J＝8.7，2.0Hz，1H)，7.18–7.00(m，4H)，2.94(d，J＝7.8Hz，2H)，2.89–2.72(m，3H)，2.18–2.01(m，1H)，1.87–1.69(m，1H)。

化合物(6)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-2,3-二氢-1H-茚-1-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A，从2,3-二氢-1H-茚-1-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备标题化合物(产率9％)。

MS：339.0(M+H)。

化合物(7)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A，从2,3-二氢-1H-茚-2-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备标题化合物(产率14％)。

MS：339.2(M+H)。

化合物(8)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-甲氧基色烷-3-甲酰胺

在室温下向3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺(200mg，1.03mmol)和6-甲氧基-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-3-羧酸(278.76mg，1.34mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.52mL)和HATU(784mg，2.06mmol)，并将反应在室温下搅拌16小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-甲氧基色满-3-甲酰胺(143mg，36％)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.73min；MS：385.2(M+H)。

化合物(9)：N-(3-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-4-甲酰胺

在室温下向3-氟-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺(150mg，0.84mmol)和3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-4-羧酸(195.21mg，1.09mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.44mL)和HATU(640mg，1.68mmol)，并将反应在室温下搅拌16小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-4-甲酰胺(102mg，35％)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.50min；MS：339.2(M+H)。

化合物(10)：N-(3-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在室温下向3-氟-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺(100mg，0.56mmol)和3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-3-羧酸(130.7mg，0.73mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.29mL)和HATU(427mg，1.12mmol)，并将反应在室温下搅拌16小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(70mg，36％)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.62min；MS：339.2(M+H)。

化合物(11)：N-(3-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-甲氧基色烷-3-甲酰胺

在室温下向3-氟-4-(1,3-噁唑-5-基)苯胺(150mg，0.84mmol)和6-甲氧基-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-3-羧酸(227.86mg，1.09mmol)在DMF(1.5mL)的搅拌溶液中加入DIPEA(0.44mL)和HATU(640.5mg，1.68mmol)，并将反应在室温下搅拌16小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-甲氧基色烷-3-甲酰胺(121mg，38％)，

分析型HPLC方法A.Rt：1.64min；MS：369.3(M+H)，

化合物(12)：N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-4-甲酰胺

在室温下向3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯胺(75mg，0.395mmol)和3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-4-羧酸(105.3mg，0.592mmol)在DMF(3mL)的搅拌溶液中加入DIPEA(0.15mL)和HATU(226mg，0.592mmol)，并将反应在室温下搅拌12小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-4-甲酰胺(60.07mg，44％)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.42min；MS：351.2(M+H)。

化合物(13)：N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在室温下向3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯胺(75mg，0.395mmol)和3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-3-羧酸(105.3mg，0.592mmol)在DMF(3mL)的搅拌溶液中加入DIPEA(0.15mL)和HATU(226mg，0.592mmol)，并将反应在室温下搅拌12小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(77.6mg，56％)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.59min；MS：351.2(M+H)。

化合物(14)：6-甲氧基-N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在室温下向3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯胺(75mg，0.395mmol)和6-甲氧基-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-3-羧酸(123.1mg，0.592mmol)在DMF(3mL)的搅拌溶液中加入DIPEA(0.15mL)和HATU(226mg，0.592mmol)，并将反应在室温下搅拌12小时。反应完成后，通过制备型HPLC纯化反应混合物以获得6-甲氧基-N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(72.3mg，48％)。

分析型HPLC方法A.Rt：1.55min；MS：381.2(M+H)。

化合物(15)：第一N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法K对外消旋N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(化合物(13))进行手性分离。使用手性分离方法G鉴定第一N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺，Rt：9.09min。

MS：351.25(M+H)。

化合物(16)：第二N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法K对外消旋N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(化合物(13))进行手性分离。使用手性分离方法G鉴定第一N-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺，Rt：10.85min。

MS：351.25(M+H)。

化合物(17)：N-(3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在0℃将在无水二氯甲烷(10mL)中新鲜制备的色满-3-碳酰氯溶液添加到3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯胺(500mg，2.87mmol)和三乙胺(1.25mL，8.61mmol)在无水二氯甲烷(10mL)的混合物中。添加完成后，反应在3小时内缓慢升温至室温。通过TLC监测反应，在最大转化率(部分起始原料仍未反应)后，用二氯甲烷(5mL)稀释，用水(10mL)和盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并减压浓缩。将粗产物通过柱层析纯化，然后用MTBE研磨以获得N-(3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(240mg，25％)。

分析型HPLC方法B.Rt：2.47min，LCMS：335.08(M+H)。

化合物(18)：第一N-(3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法A手性分离外消旋N-(3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(化合物(17))，获得标题化合物(65.6mg)，其特征在于保留时间＝5.41。(第一个从色谱柱中洗脱的化合物)

化合物(19)：第二N-(3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法A手性分离外消旋N-(3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺(化合物(17))，获得标题化合物(75.6mg)，其特征在于保留时间＝11.73min。(第二个从色谱柱中洗脱的化合物)

化合物(20)：N-(2-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

在0℃将在无水二氯甲烷(10mL)中新鲜制备的色满-3-碳酰氯溶液添加到3-甲基-4-(噁唑-5-基)苯胺(500mg，2.87mmol)和三乙胺(1.25mL，8.61mmol)在无水二氯甲烷(10mL)的混合物中。添加完成后，反应在3小时内缓慢升温至室温。通过TLC监测反应，在最大转化率(部分起始原料仍未反应)后，用二氯甲烷(5mL)稀释，用水(10mL)和盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并减压浓缩。将粗产物通过柱层析纯化，然后用MTBE研磨以获得N-(2-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(210mg，22％)。

分析型HPLC方法B.Rt：2.56min，LCMS:335.1

化合物(21)：第一N-(2-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法A手性分离化合物(20)，获得(69.9mg)，其特征在于保留时间＝5.41min。(第一洗脱化合物)

化合物(22)：第二N-(2-甲基-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法A手性分离化合物(20)，获得(73.2mg)，其特征在于保留时间＝11.73min。(第二洗脱化合物)

化合物(23)：N-(2-(二氟甲氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

在氩气下向N-(4-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)色满-3-甲酰胺(400mg，1.01mmol)在1,4-二氧杂环己烷/水(20mL，2:1)的搅拌溶液中加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噁唑(255mg，1.31mmol)和Na₂CO₃(213mg，2.02mmol)。将反应混合物用氩气脱气20分钟。然后加入Pd(PPh₃)₄(58mg，0.05mmol)，混合物用氩气脱气5分钟。将反应混合物密封并在800℃搅拌10小时。在原料消耗最大后，将反应混合物冷却至室温，用水(5.0mL)稀释，并用EtOAc(2×50mL)提取。合并有机层，用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并减压蒸发。粗产物经柱层析纯化，得到外消旋N-(2-(二氟甲氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(152mg，39％)。

分析型HPLC方法B.Rt：2.50min，LCMS：387(M+H)。

化合物(24)：第一N-(2-(二氟甲氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

使用手性分离方法C手性分离外消旋N-(2-(二氟甲氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺化合物(23)，获得化合物(24)(44.9mg)，其特征在于保留时间＝6.64min。(第一洗脱化合物)

化合物(25)：第二N-(2-(二氟甲氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

使用手性分离方法C手性分离外消旋N-(2-(二氟甲氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺化合物(23)，获得化合物(25)(47.0mg)，其特征在于保留时间＝8.67min。(第二洗脱化合物)

化合物(26)：第一N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-氟色烷-3-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A，从6-氟色烷-3-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备外消旋化合物。

MS：373.0(M+H)。

使用手性分离方法H完成外消旋N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-氟色烷-3-甲酰胺化合物的手性分离，以获得化合物(26)，其特征在于保留时间＝10.9min。(第一洗脱化合物)

化合物(27)：第二N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-氟色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法H完成外消旋N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-6-氟色烷-3-甲酰胺化合物的手性分离，以获得化合物26，其特征在于保留时间＝18.9min。(第二洗脱化合物)

化合物(28)：外消旋N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-7-氟色烷-3-甲酰胺

使用偶联程序A，由7-氟色烷-3-羧酸(1.1mmol)和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备外消旋化合物。外消旋产物通过制备型HPLC方法纯化(511mg，71％产率)。

MS：373.0(M+H).

化合物(29)：第一N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-7-氟色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法I完成外消旋N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-7-氟色烷-3-甲酰胺化合物的手性分离，以获得化合物26(100.3mg)，其特征在于保留时间＝11.5min。(第一洗脱化合物)

化合物(30)：第二N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-7-氟色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法I完成外消旋N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-7-氟色烷-3-甲酰胺化合物的手性分离，以获得化合物26(87.1mg)，其特征在于保留时间＝15.8min。(第二洗脱化合物)

化合物(31)：6-氯-N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A由6-氯色烷-3-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备标题化合物(产率16％)。

MS：389.0(M+H)。

化合物(32)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-6,8-二氟色烷-3-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A由6,8-二氟色烷-3-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备标题化合物(产率18％)。

MS：391.0(M+H).

¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ10.58(s，1H)，8.52(s，1H)，8.01–7.97(m，1H)，7.79(d，J＝8.6Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.61(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)，7.14–7.06(m，1H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，4.54–4.48(m，1H)，4.16–4.08(m，1H)，3.13–3.08(m，1H)，3.08–3.00(m，2H)。

化合物(33)：N-(3-氯-4-(噁唑-5-基)苯基)-5-甲氧基色烷-3-甲酰胺

使用偶联程序A和制备型HPLC方法A由5-甲氧基色烷-3-羧酸和3-氯-4-(噁唑-5-基)苯胺制备标题化合物(产率：16.6％)。

MS：385.0(M+H)

化合物(34)：N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

在0℃向2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯胺(535mg，2.16mmol)和三乙胺(0.9mL，6.50mmol)在无水二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入色满-3-碳酰氯在无水二氯甲烷(10mL)中的溶液。添加后，反应在3小时内缓慢升温至室温。通过TLC监测反应。在最大转化率后(部分原料仍未反应)，将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，用水(30mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。粗混合物通过柱层析纯化以获得作为固体的外消旋N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(410mg，45％)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.03min；MS：408.2(M+H)。

化合物(35)：第一N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

使用手性分离方法D对外消旋N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(化合物(34))进行手性分离。第一N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺在4.16min首先洗脱(83.8mg)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.03min；MS：408.2(M+H)。

化合物(36)：第二N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

使用手性分离方法D对外消旋N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(化合物(34))进行手性分离。第二N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺在7.89min首先洗脱(56.3mg)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.03min；MS：408.2(M+H)。

化合物(37)：外消旋N-(4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在0℃向4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯胺(600mg，2.63mmol)和三乙胺(1.1mL，7.90mmol)在无水二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入色满-3-碳酰氯在无水二氯甲烷(10mL)中的溶液。添加后，反应在3小时内缓慢升温至室温。通过TLC监测反应。在最大转化率后(部分原料仍未反应)，将反应混合物用二氯甲烷(5mL)稀释，用水(20mL)和盐水(15mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩。将粗品通过柱层析纯化以获得作为固体的外消旋N-(4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯基)色满-3-甲酰胺(350mg，35％)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.79min；MS：389.1(M+H)。

化合物(38)：第一N-(4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法E对外消旋N-(4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯基)色满-3-甲酰胺进行手性分离。第一N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺在2.69min洗脱(70.2mg)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.79min；MS：389.1(M+H)。

化合物(39)：第二N-(4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯基)色烷-3-甲酰胺

使用手性分离方法E对外消旋N-(4-(噁唑-5-基)-3-(三氟甲基)苯基)色满-3-甲酰胺进行手性分离。第二N-(2-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺在3.24min洗脱(71.6mg)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.79min；MS：389.1(M+H)。

_{化合物(40)}：第二N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

在氩气下向N-(4-溴-3-氯-2-氟苯基)色满-3-甲酰胺(100mg，0.260mmol)在1,4-二氧杂环己烷/水(6mL，2:1)中的搅拌溶液中加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噁唑(66mg，0.338mmol)和Na₂CO₃(55mg，0.521mmol)。将反应混合物用氩气脱气20分钟。然后加入Pd(dppf)C_l2-二氯甲烷复合物(10.6mg，0.013mmol)并用氩气脱气5分钟。将反应混合物密封并在80℃搅拌8.0小时。将反应混合物冷却至室温，用水(5.0mL)稀释，并用EtOAc(2×30mL)提取。合并有机层，用水和盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并减压蒸发。将粗品通过柱层析纯化以得到作为固体的外消旋N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(20mg，20％)。

使用手性分离方法F对外消旋N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺进行手性分离。第二N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺在5.25min第二个洗脱(21.6mg)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.78min；MS：373.1(M+H)。

化合物(41)：第一N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺

在氩气下向N-(4-溴-3-氯-2-氟苯基)色满-3-甲酰胺(100mg，0.260mmol)在1,4-二氧杂环己烷/水(6mL，2:1)中的搅拌溶液中加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噁唑(66mg，0.338mmol)和Na₂CO₃(55mg，0.521mmol)。将反应混合物用氩气脱气20分钟。然后加入Pd(dppf)Cl₂-二氯甲烷复合物(10.6mg，0.013mmol)并用氩气脱气5分钟。将反应混合物密封并在80℃搅拌8.0小时。将反应混合物冷却至室温，用水(5.0mL)稀释，并用EtOAc(2×30mL)提取。合并有机层，用水和盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并减压蒸发。将粗品通过柱层析纯化以获得作为固体的外消旋N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(20mg，20％)。

使用手性分离方法F对外消旋N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺进行手性分离。第一N-(3-氯-5-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺在4.78min首先洗脱(21.9mg)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.78min；MS：373.1(M+H)。

化合物(42)：N-(3-氯-2-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色烷-3-甲酰胺

在氩气下向N-(4-溴-3-氯-2-氟苯基)色满-3-甲酰胺(100mg，0.260mmol)在1,4-二氧杂环己烷/水(6mL，2:1)中的搅拌溶液中加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噁唑(66mg，0.338mmol)和Na₂CO₃(55mg，0.521mmol)。将反应混合物用氩气脱气20分钟。然后加入Pd(dppf)Cl₂-二氯甲烷复合物(10.6mg，0.013mmol)并用氩气脱气5分钟。将反应混合物密封并在80℃搅拌8.0小时。将反应混合物冷却至室温，用水(5.0mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×30mL)提取。合并有机层，用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压蒸发。将粗品通过柱层析纯化以获得作为固体的N-(3-氯-2-氟-4-(噁唑-5-基)苯基)色满-3-甲酰胺(化合物42)(19mg，19％)。

分析型HPLC方法C.Rt：2.75min；MS：373.1(M+H)。

Claims

1.一种治疗和/或预防涉及视网膜色素上皮的疾病的方法，其包括施用式(I)的化合物

或其药学上可接受的盐、外消旋混合物、相应的对映异构体或，如果适用的话，相应的非对映异构体，其中：

B选自式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的残基，

其中，

"*"表示与分子其余部分的连接点，并且

R₂、R₃、R₄、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V独立地选氢、具有1至3个碳原子的直链或支链烷基、氟、氯、溴、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基和二氟甲氧基。

2.如权利要求1所述的方法，其中，在式(I)的化合物中，式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)残基的环位置*处的不对称中心具有式(Ii)的化合物中描绘的构型，

并且B、R₁、R₁₁、R₁₂、R₂、R₃、R₄、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V定义同上。

3.如权利要求1所述的方法，其中，在式(I)的化合物中，式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)残基的环位置*处的不对称中心具有式(Iii)的化合物中描绘的构型

4.如权利要求1所述的方法，其中，残基B是未经取代的或单取代的。

5.如权利要求1所述的方法，其中，在式(I)的化合物中，R₃、R₄、R₃ ^I、R₄ ^I、R₃ ^II、R₄ ^II、R₃ ^III、R₄ ^III、R₃ ^IV、R₄ ^IV、R₃ ^V、R₄ ^V独立地选自氢、氯、氟、甲氧基和乙氧基。

6.如权利要求5所述的方法，其中，在式(I)的化合物中，R₃、R₃ ^I、R₃ ^II、R₃ ^III、R₃ ^IV、或R₃ ^V选自氟和氯，并且R₂、R₄、R₅、R₂ ^I、R₄ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₄ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₄ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₄ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₄ ^V、R₅ ^V全部是氢。

7.如权利要求5所述的方法，其中，在式(I)的化合物中，R₄、R₄ ^I、R₄ ^II、R₄ ^III、R₄ ^IV、或R₄ ^V选自甲氧基和乙氧基，并且R₂、R₃、R₅、R₂ ^I、R₃ ^I、R₅ ^I、R₂ ^II、R₃ ^II、R₅ ^II、R₂ ^III、R₃ ^III、R₅ ^III、R₂ ^IV、R₃ ^IV、R₅ ^IV、R₂ ^V、R₃ ^V、R₅ ^V全部是氢。

8.如权利要求1所述的方法，其中，式(I)化合物选自化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46和47：

9.如权利要求1所述的方法，其中，所述视网膜细胞通过视网膜色素上皮细胞的增殖和/或分化而再生。

10.如权利要求1所述的方法，其中，所述视网膜疾病选自导致视网膜色素上皮细胞萎缩、退化或死亡的疾病。

11.如权利要求10所述的方法，其中，所述视网膜疾病选自早期年龄相关性黄斑变性、干性年龄相关性黄斑变性、地图样萎缩(GA)和湿性年龄相关性黄斑变性。

12.如权利要求11所述的方法，其中，所述视网膜疾病是干性年龄相关性黄斑变性。

13.如权利要求10所述的方法，其中，所述视网膜疾病选自Best病、常染色体隐性遗传性斑萎蛋白病(ARB)、回旋状萎缩、北卡罗莱纳黄斑营养不良、中枢性Areolar脉络膜营养不良(CACD)、Sorsby黄斑营养不良、家族性显性玻璃膜疣、角质层或基底层状玻璃膜疣、早产儿视网膜病变、近视性变性、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、中央严重视网膜病变、血管样条纹、视网膜脱离、锯齿缘离断、Vogt-Koyanagi-Harada(VKH)、急性后部多灶性鳞状色素上皮病(APMPPE)、持续性鳞状黄斑病变(PPM)、持续鳞状脉络膜视网膜病变(RPC)、匐行性脉络膜炎、匐行样脉络膜炎(多灶性匐行性脉络膜炎)、多发性消逝性白点综合征(MEWDS)或鸟枪弹样视网膜脉络膜病变(白斑性脉络膜视网膜炎)、弓形体病、弓蛔虫病、风疹、白塞病、脉络膜血管瘤、外伤、脉络膜破裂和特发性视网膜炎-血管炎-动脉瘤和神经视网膜炎(IRVAN)、交感性眼炎、术后炎症或非动脉性缺血性视神经病变以及与诸如糖尿病、镰状细胞病或放射性视网膜病变等全身性疾病相关的视网膜变性。

14.式(I)的化合物