CN115895950A - 副干酪乳杆菌smn-lbk在制备含酒精发酵饮品或解酒产品中的应用 - Google Patents
副干酪乳杆菌smn-lbk在制备含酒精发酵饮品或解酒产品中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及微生物发酵技术领域，具体公开了一株副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN‑LBK在制备含酒精发酵饮品或解酒产品中的应用，本发明的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN‑LBK，该菌株具有优良的耐乙醇胁迫能力，将其添加至含酒精发酵饮品中，该菌株存活率较高，活菌数高，可以有效发挥益生菌的功效，同时在该菌发酵而成的解酒发酵乳以及添加该菌的口服液、固体饮料、胶囊和片剂等药品、食品、保健食品中，还可以发挥解酒解毒的功效，同时对于长期饮酒导致的酒精性肝损伤具备显著的缓解作用。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其是涉及一株副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK在制备含酒精发酵饮品或解酒产品中的应用。
背景技术
益生菌是指给予一定数量时能对宿主健康产生有益作用的活的微生物。益生菌由于具有多种生理功效而被广泛应用于多种食品当中，如乳制品、固体饮料以及零食等。已有研究证实，益生菌对于维持胃肠道粘膜稳态，维持肠道免疫功能具有重要的作用；同时，益生菌可通过代谢产生多种生物活性物质如短链脂肪酸，进入血液循环抵达肝脏，调节肝脏健康，发挥保肝护肝的作用，因此，益生菌也逐渐被应用于含酒精食品当中，有利于降低肝脏疾病的风险。
益生菌在食品加工过程中受到多种因素的影响，如温度、pH、氧气等，导致其活菌数的降低。益生菌在含酒精食品中，会由于乙醇胁迫导致益生菌存活率下降，产品中活菌数较低，最终定植在人体肠道内的活菌数量降低，难以发挥较好的益生菌功效。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一株副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK在制备含酒精发酵饮品或解酒产品中的应用。本发明将具有优良的耐乙醇胁迫能力的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK添加至含酒精发酵饮品中，该菌株存活率较高，活菌数高，可以有效发挥益生菌的功效，同时将副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK将其应用于解酒产品发挥解酒的功效。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
本发明提供了一株副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK在制备含酒精发酵饮品或解酒产品中的应用，所述副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，其于2017年7月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2017429，保藏地址为武汉大学。
目前市面现有含酒精发酵饮品中，由于乙醇对益生菌的胁迫，导致益生菌存活率低，大部分益生菌难以抵挡乙醇的胁迫而死亡；而本申请从新疆传统发酵乳制品马奶酒(酸马奶)中筛选出一株副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，该菌株具有优良的耐乙醇胁迫能力，并且，副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK含有6个乙醇脱氢酶基因，其中一个基因adhE是乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双功能酶基因，这极大地增强了该菌的解酒功效，将该菌株应用于含酒精发酵饮品中，其存活率高于目前现有含酒精益生菌饮品，同时将副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK将其应用于解酒产品发挥解酒的功效，对于长期饮酒导致的酒精性肝损伤具备显著的缓解作用。
采用本发明的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK添加至含酒精发酵饮品中，该菌株的活菌数较为稳定，存活率较高，并且，制备的含酒精发酵饮品具有良好的风味和口感，且状态均一稳定，无不良风味。
优选地，上述副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的培养方法，包括以下步骤：
1.菌种活化：
活化采用灭菌MRS液体培养基，将副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK用少量灭菌MRS液体培养基溶解后，按照体积百分比为1％-5％的比例将副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK接种于灭菌MRS液体培养基中，活化24-36小时，得到活化副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌液；MRS液体培养基的灭菌过程为121℃灭菌20min；
2.菌种扩大培养：
将活化副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌液扩大培养两次，菌数量达到108cfu/mL以上；第一次扩大培养是将活化副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK菌液按照体积比1:50接种于5L灭菌MRS液体培养基中培养24-32小时，得到第一次扩大培养菌液；第二次扩大培养是将第一次扩大培养菌液按照体积比1:50接种于100L灭菌MRS液体培养基中培养15-24小时，之后将第二次扩大培养菌液至于4℃保存备用。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述含酒精发酵饮品包括鲜啤酒、果酒、奶啤、开菲尔饮料中的至少一种。优选地，所述含酒精发酵饮品为奶啤、开菲尔饮料。
本发明提供了一种含酒精发酵饮品或解酒产品的生产方法，采用上述副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK作为发酵菌。
本发明提供了一种含酒精发酵饮品，所述含酒精发酵饮品采用上述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK作为发酵菌制得。
本发明在含酒精发酵饮品中，添加了筛选出来的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK，该菌株有耐乙醇胁迫功效，使得副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK的存活率不会下降，含酒精发酵饮品中活菌数较高，可以较好的发挥益生菌功效。
作为本发明所述含酒精发酵饮品的优选实施方式，所述含酒精发酵饮品包括鲜啤酒、果酒、奶啤、开菲尔饮料中的至少一种。
作为本发明所述含酒精发酵饮品的优选实施方式，所述奶啤由发酵剂发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料加入酿酒酵母和上述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK共同发酵制得；
所述牛奶基质包括以下重量份数的组分：牛奶90-95份、白砂糖5-10份和发酵剂0.007-0.01份；
所述奶啤包括以下重量份数的组分：纯净水50-58.69份、牛奶基质36-45份、白砂糖5-8份、果胶0.3-0.5份、酿酒酵母0.025-0.05份和上述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.05-0.1份。
优选地，发酵剂由嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种组成。
作为本发明所述含酒精发酵饮品的优选实施方式，所述开菲尔饮料由开菲尔发酵剂和上述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料制得；
所述牛奶基质包括以下重量份数的组分：牛奶90-95份、白砂糖5-10份、开菲尔发酵剂0.01-0.015份和如权利要求1所述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.02-0.1份；
所述开菲尔饮料包括以下重量份数的组分：纯净水50-60份、牛奶基质33.5-45份、白砂糖6-8份、果胶0.1-0.5份和羧甲基纤维素钠0.1-0.3份。
在本发明开菲尔饮料中，开菲尔发酵剂由乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种，乳酸乳球菌双乙酰亚种、肠膜明串珠菌肠膜亚种组成，其来源于法国普尔斯公司。
本发明制备的奶啤、开菲尔饮料具有良好的风味和口感，且状态均一稳定，无不良风味；并且，添加的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK活菌数较高，菌株存活率高。
本发明提供了一种一种解酒产品，所述解酒产品包括解酒风味发酵乳、解酒片剂、解酒固体饮料或解酒胶囊中的至少一种。
作为本发明所述解酒产品的优选实施方式，所述解酒风味发酵乳包括以下重量份数的组分：
牛奶88.36-88.46份、白砂糖4份、低聚果糖4份、添加剂3.5-3.6份、维生素C 0.02份和发酵剂0.01份，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.01-0.02份；
所述解酒片剂包括以下重量份数的组分：
山梨醇72份、抗性糊精10份、低聚果糖5份、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK活菌冻干粉5份、葛根粉3份、甜橙粉3份、硬脂酸镁1份、柠檬酸0.5份和维生素C 0.5份。
所述添加剂为a)、b)、c)以下重量份数的配方的任意一种：
a)添加剂由浓缩苹果汁2.5份、浓缩胡萝卜汁0.5份和果胶0.5份组成；
b)添加剂由葛根粉3份、果胶0.5份组成；
c)添加剂由葛根粉3份、果胶0.4份和琼脂0.2份组成。
本发明的解酒产品中含有副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK可以促进产品的解酒性能，同时产品中还加入有低聚果糖，具有促进解酒产品达到更好解酒的效果，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK和低聚果糖复配以提高解酒产品解酒的效果，同时对于长期饮酒导致的酒精性肝损伤具备显著的缓解作用。
在本发明中，解酒产品可以制备成本领域中常规的剂型。
优选地，发酵剂为嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种以质量比为1：1复配获得。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，该菌株从新疆传统发酵乳制品马奶酒(酸马奶)中筛选得到；该菌株具有优良的耐乙醇胁迫能力，将其副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK添加至含酒精发酵饮品中，使得副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的存活率不会下降，含酒精发酵饮品中活菌数较高，可以较好的发挥益生菌功效，同时将副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK将其应用于解酒产品发挥解酒的功效，对于长期饮酒导致的酒精性肝损伤具备显著的缓解作用。
附图说明
图1为本发明副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的形态图(图1-A为副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的菌落图；图1-B为副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的电镜图)。
图2为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK干预酒精性肝损伤大鼠肝损伤组织病理切片图(往左往后数，第一列、第二列的右下标为200μm，第三列的右下标为50μm，右下标不清楚不影响本专利的实质内容，其中数据表示为平均值±标准差，n＝4只)。
图3为酒精性肝损伤大鼠模型的体重变化图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
在以下实施例和对比例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
在以下实施例和对比例中，开菲尔发酵剂由乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种，乳酸乳球菌双乙酰亚种、肠膜明串珠菌肠膜亚种组成，其来源于法国普尔斯公司。
实施例1、本发明副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的保藏信息
本实施例提供一株副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，其于2017年7月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2017429，保藏地址为中国武汉大学。副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的具体形态参考图1。副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 16S r RNA基因序列如SEQ IDNO：1所示。副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双功能基因序列如SEQ ID NO：2所示。
实施例2、副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的培养
1、本实施例提供了副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的培养方法，包括以下步骤：
1)菌种活化：
活化采用灭菌MRS液体培养基，将副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK用少量灭菌MRS液体培养基溶解后，按照体积百分比为1％-5％的比例将副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK接种于灭菌MRS液体培养基中，活化24-36小时，得到活化副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌液；MRS液体培养基的灭菌过程为121℃灭菌20min；
2)菌种扩大培养：
将活化副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌液扩大培养两次，菌数量达到108cfu/mL以上；第一次扩大培养是将活化副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK菌液按照体积比1:50接种于5L灭菌MRS液体培养基中培养24-32小时，得到第一次扩大培养菌液；第二次扩大培养是将第一次扩大培养菌液按照体积比1:50接种于100L灭菌MRS液体培养基中培养15-24小时，之后将第二次扩大培养菌液至于4℃保存备用。
2、副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK活菌悬液的制备：
在无菌环境下，将副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK以1％的接种量接种于MRS肉汤培养基中，置37℃培养24-36h，出现明显浑浊即可；用接种环取均匀后的MRS肉汤新鲜培养物，平板分区梯度划线，于MRS梯度平板上，置37℃培养36-48h，以检验菌种活化情况；用接种环挑取MRS平板的菌落，接种到MRS肉汤培养基内，置37℃培养24h；取新鲜的MRS肉汤培养物，接种MRS琼脂斜面上，置37℃培养24-36h，即为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌种斜面，取副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK菌种斜面，接种到MRS肉汤培养基中，置37℃培养18h，离心(3500g，4℃，5min)，倒掉上清液，用等体积生理盐水重悬后制成每1mL含活菌数3.0×108CFU/mL的活菌悬液。
3、副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK灭菌悬液的制备：将上述活菌悬液置于恒温水浴锅中，68℃水浴30min，获得副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK灭菌悬液。
实施例3、一种含酒精的奶啤及其制备方法
本实施例的奶啤由发酵剂发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料加入酵母和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK共同发酵制得。
其中，牛奶基质的组分及重量份数如下：
牛奶91.99份、白砂糖8份和发酵剂(嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种1：1)0.01份；
所述牛奶基质的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖搅拌至完全溶解，65℃，20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至43℃后，加入发酵剂搅拌均匀，43℃发酵5h，冷却后熟12h，即得到牛奶基质。
所述含酒精的奶啤的组分及重量份数如下：
纯净水55.7份、牛奶基质36份、白砂糖8份、果胶0.3份、酿酒酵母0.05份和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.05份。
上述含酒精的奶啤的制备方法，包括以下步骤：
将纯净水加热至70℃，加入白砂糖和果胶充分溶解混合，加入牛奶基质搅拌，加热至65℃，15MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至37℃以下，加入活化的酿酒酵母和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，置于35℃培养箱培养12h，10MPa均质，灌装，2-6℃冷藏后熟12h，即得到含酒精的奶啤。
实施例4、一种含酒精的奶啤及其制备方法
本实施例的奶啤由发酵剂发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料加入酵母和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK共同发酵制得。
其中，牛奶基质的组分及重量份数如下：
牛奶90份、白砂糖5份、和发酵剂(嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种1：1)0.01份；
所述牛奶基质的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖搅拌至完全溶解，65℃，20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至43℃后，加入发酵剂搅拌均匀，43℃发酵5h，冷却后熟12h，即得到牛奶基质。
所述含酒精的奶啤的组分及重量份数如下：
纯净水58.69份、牛奶基质36份、白砂糖8份、果胶0.3份、酿酒酵母0.05份和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.05份。
上述含酒精的奶啤的制备方法，包括以下步骤：
将纯净水加热至70℃，加入白砂糖和果胶充分溶解混合，加入牛奶基质搅拌，加热至65℃，15MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至37℃以下，加入活化的酿酒酵母和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，置于35℃培养箱培养12h，10MPa均质，灌装，2-6℃冷藏后熟12h，即得到含酒精的奶啤。
实施例5、一种含酒精的奶啤及其制备方法
本实施例的奶啤由发酵剂发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料加入酵母和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK共同发酵制得。
其中，牛奶基质的组分及重量份数如下：
牛奶95份、白砂糖10份和发酵剂(嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种1:1)0.07份；
所述牛奶基质的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖搅拌至完全溶解，65℃，20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至43℃后，加入发酵剂搅拌均匀，43℃发酵5h，冷却后熟12h，即得到牛奶基质。
所述含酒精的奶啤的组分及重量份数如下：
纯净水50份、牛奶基质45份、白砂糖5份、果胶0.5份、酿酒酵母0.025份和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.1份。
上述含酒精的奶啤的制备方法，包括以下步骤：
将纯净水加热至70℃，加入白砂糖和果胶充分溶解混合，加入牛奶基质搅拌，加热至65℃，15MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至37℃以下，加入活化的酿酒酵母和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，置于35℃培养箱培养12h，10MPa均质，灌装，2-6℃冷藏后熟12h，即得到含酒精的奶啤。
实施例6、一种含酒精的开菲尔饮料
本实施例的含酒精的开菲尔饮料由开菲尔发酵剂和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料制得；
其中，牛奶基质的组分及重量份数如下：
牛奶90份、白砂糖10份、开菲尔发酵剂0.01份和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK 0.02份；
所述牛奶基质的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖搅拌至完全溶解，65℃、20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至35℃，加入开菲尔发酵剂和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK搅拌均匀，32℃发酵15h，冷却后熟12h，即得到牛奶基质。
所述含酒精的开菲尔饮料的组分及重量份数如下：
纯净水60份、牛奶基质33.5份、白砂糖6份、果胶0.3份和羧甲基纤维素钠0.2份。
上述含酒精的开菲尔饮料的制备方法，步骤如下：
将纯净水加热至70℃，加入白砂糖、果胶和羧甲基纤维素钠充分溶解混合，95℃杀菌300s，冷却至30℃加入牛奶基质搅拌，15MPa均质，灌装，2-6℃冷藏后熟12h，即得到含酒精的开菲尔饮料。
实施例7、一种含酒精的开菲尔饮料
本实施例的含酒精的开菲尔饮料由开菲尔发酵剂和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料制得；
其中，牛奶基质的组分及重量份数如下：
牛奶90份、白砂糖8份、开菲尔发酵剂0.01份和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK 0.02份；
所述牛奶基质的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖搅拌至完全溶解，65℃、20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至35℃，加入开菲尔发酵剂和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK搅拌均匀，32℃发酵15h，冷却后熟12h，即得到牛奶基质。
所述含酒精的开菲尔饮料的组分及重量份数如下：
纯净水60份、牛奶基质34.49份、白砂糖5份、果胶0.5份和羧甲基纤维素钠0.1份。
上述含酒精的开菲尔饮料的制备方法，步骤如下：
将纯净水加热至70℃，加入白砂糖、果胶和羧甲基纤维素钠充分溶解混合，95℃杀菌300s，冷却至30℃加入牛奶基质搅拌，15MPa均质，灌装，2-6℃冷藏后熟12h，即得到含酒精的开菲尔饮料。
实施例8、一种含酒精的开菲尔饮料
本实施例的含酒精的开菲尔饮料由开菲尔发酵剂和副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料制得；
其中，牛奶基质的组分及重量份数如下：
牛奶90份、白砂糖5份、开菲尔发酵剂0.015份和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK 0.1份；
所述牛奶基质的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖和低聚果糖搅拌至完全溶解，65℃、20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至35℃，加入开菲尔发酵剂和副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK搅拌均匀，32℃发酵15h，冷却后熟12h，即得到牛奶基质。
所述含酒精的开菲尔饮料的组分及重量份数如下：
纯净水50份、牛奶基质45份、白砂糖8份、果胶0.1份和羧甲基纤维素钠0.3份。
上述含酒精的开菲尔饮料的制备方法，步骤如下：
将纯净水加热至70℃，加入白砂糖、果胶和羧甲基纤维素钠充分溶解混合，95℃杀菌300s，冷却至30℃加入牛奶基质搅拌，15MPa均质，灌装，2-6℃冷藏后熟12h，即得到含酒精的开菲尔饮料。
实施例9、一种含副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的解酒风味发酵乳
本实施例的风味发酵乳由发酵剂和副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK共同发酵后制得。
其中，各组分及重量份数如下：
牛奶88.46份、白砂糖4份、低聚果糖4份、浓缩苹果汁2.5份、浓缩胡萝卜汁0.5份、果胶0.5份、维生素C 0.02份和发酵剂(按照质量比为1：1的嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种组成)0.01份，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.01份；
所述解酒风味发酵乳的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖等其它原料搅拌至完全溶解，65℃，20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至43℃后，加入发酵剂及副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK搅拌均匀，43℃发酵5h，破乳搅拌，灌装，冷却后熟12h，即得到风味发酵乳。
实施例10、一种含副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的解酒风味发酵乳
本实施例的解酒风味发酵乳由发酵剂和副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK共同发酵后制得。
其中，各组分及重量份数如下：
牛奶88.36份、白砂糖4份、低聚果糖4份、葛根粉3份、果胶0.5份、维生素C 0.02份和发酵剂(按照质量比为1：1的嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种组成)0.01份，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.02份；
所述解酒风味发酵乳的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖等其它原料搅拌至完全溶解，65℃，20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至43℃后，加入发酵剂及副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK搅拌均匀，43℃发酵5h，破乳搅拌，灌装，冷却后熟12h，即得到风味发酵乳。
实施例11、一种含副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的解酒热处理风味发酵乳(常温酸奶)
本实施例的解酒热处理风味发酵乳由发酵剂和副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK共同发酵后制得。
其中，各组分及重量份数如下：
牛奶88.36份、白砂糖4份、低聚果糖4份、葛根粉3份、果胶0.4份、琼脂0.2份、维生素C 0.02份和发酵剂(按照质量比为1：1的嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种组成)0.01份，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.01份；
所述解酒热处理风味发酵乳的制备方法，包括以下步骤：
将标准化后的鲜牛奶预热至60℃，加入白砂糖等其它原料搅拌至完全溶解，65℃，20MPa均质，95℃杀菌300s，冷却至43℃后，加入发酵剂及副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK搅拌均匀，43℃发酵5h，破乳搅拌，加热至72℃杀菌30s，冷却至20℃灌装，冷却至2-6℃后熟12h，即得到热处理风味发酵乳。
实施例12、一种含副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的解酒片剂
其中，各组分及重量份数如下：
山梨醇72份，抗性糊精10份，低聚果糖5份，副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK活菌冻干粉5份，葛根粉3份，甜橙粉3份，硬脂酸镁1份，柠檬酸0.5份，维生素C 0.5份。
所述解酒片剂制备方法，包括以下步骤：
将所述原料混合均匀，过80目筛，然后使用压片机进行压片，形成解酒片剂。
对比例1
与实施例3相比，使用现有的副干酪乳酪杆菌LP01(来自法国普尔斯公司)替换副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，奶啤的其余组分及制备方法与实施例3相同。
对比例2
与实施例6相比，使用现有的副干酪乳酪杆菌LP01(来自法国普尔斯公司)替换副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，开菲尔饮料的其余组分及制备方法与实施例6相同。
对比例3
与实施例3相比，使用副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的重量份数为0.5份，奶啤的其余组分及制备方法与实施例3相同。
对比例4
与实施例6相比，使用副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK的重量份数为0.5份，开菲尔饮料的其余组分及制备方法与实施例3相同。
对比例5
与实施例3相比，奶啤不含有副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，奶啤的其余组分及制备方法与实施例3相同。
对比例6
与实施例9相比，使用现有的副干酪乳酪杆菌LP01(来自法国普尔斯公司)替换副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，解酒风味发酵乳的其余组分及制备方法与实施例9相同。
对比例7
与实施例11相比，使用现有的副干酪乳酪杆菌LP01(来自法国普尔斯公司)替换副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，热处理风味发酵乳的其余组分及制备方法与实施例11相同。
对比例8
与实施例12相比，使用现有的副干酪乳酪杆菌LP01(来自法国普尔斯公司)替换副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，解酒片剂的其余组分及制备方法与实施例12相同。
对比例9
与实施例9相比，去掉解酒风味发酵乳中低聚果糖，其余组分及制备方法与实施例9相同。
试验例一、产品中活菌数稳定性实验
将实施例3-8以及对比例1-5的产品(奶啤和开菲尔饮料)为测试样品在2-6℃条件下，定期取样测定产品的活菌数。根据食品安全国家标准GB4789.35-2016测定产品中活菌数情况，结果见表1。
表1
从表1的数据可知，加入本发明筛选出的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillusparacasei)SMN-LBK的活菌数高于副干酪乳酪杆菌LP01，证明副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK具有良好的耐乙醇胁迫能力，在含酒精饮品中存活率更高。
试验例二、感官评价实验
对实施例3-8及对比例1-5提供的含酒精发酵饮品进行口感和风味品评实验。主要感官评价项目：组织状态、色泽、口感、酸甜度、风味等。参加实验人数共20人，分别对实施例3-8及对比例1-5的产品进行感官评定。感官评分标准见表2，各产品的评价结果见表3。
表2感官评分标准
| 评分项目 | 评分标准 | 得分 |
| 色泽 | 具有含酒精饮品特有色泽 | 20 |
| 组织状态 | 组织状态均一稳定，无沉淀 | 20 |
| 风味 | 含酒精发酵产品特有的香味，无异味 | 20 |
| 口感 | 细腻、滑爽 | 20 |
| 酸甜度 | 酸甜比例恰当 | 20 |
| 总分 | --- | 100 |
表3含酒精发酵饮品感官和风味品评结果
感官评定结果表明：本发明实施例3-8制备的含酒精益生菌饮品具有良好的风味和口感，且状态均一稳定，无不良风味。
试验例三、解酒效果测试
解酒效果：
实验人群：选取50名志愿者年龄在25-40岁之间。
实验均选用52度酱香型白酒，饮酒的量比平时承受的酒量多一半，在饮酒前和饮酒后分别饮用实施例9-12及对比例6-9制备的解酒风味发酵乳各一次250ml或解酒片剂各1片，然后入睡约8小时。醒来后对比以往与同样饮酒程度下不服用该解酒风味发酵乳和解酒片剂时的主观感受是否有明显的改善，分三个程度。
显效：明显不再头晕、头痛、呕吐等，精气神恢复正常；
有效：上述症状有一定程度的改变；
无效：上述症状没有明显改变；
服用方法：取上述实施例9-12及对比例6-9制备的发酵乳一瓶(250ml)直接饮用或片剂一片(5g)。
表4解酒效果
| 实施例 | 无效 | 有效 | 显效 | 总有效率 |
| 实施例9 | 1 | 7 | 42 | 98％ |
| 实施例10 | 2 | 11 | 37 | 96％ |
| 实施例11 | 5 | 7 | 38 | 90％ |
| 实施例12 | 5 | 18 | 27 | 90％ |
| 对比例6 | 21 | 18 | 11 | 78％ |
| 对比例7 | 17 | 15 | 18 | 64％ |
| 对比例8 | 22 | 15 | 13 | 56％ |
| 对比例9 | 12 | 8 | 30 | 76％ |
由表4的结果可知，实施例9-12制备的发酵乳和解酒片剂具有解酒的效果，对比例6-9的发酵乳和片剂在解酒方面均不及实施例9-12的发酵乳和解酒片剂，说明在发酵乳和片剂中添加副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，可以增加发酵乳和片剂解酒效果。
试验例四、副干乳酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN—LBK产乙醇脱氢酶实验
取副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN—LBK菌株(实验组)、副干酪乳酪杆菌K9菌株(对照1)、鼠李糖乳杆菌LGG(对照2)分别按5％的接种量接入MRS培养基中，37℃静置培养12h，离心取菌体，用PBS(7.4)缓冲液洗涤菌体2次，再用提取液重悬菌体，冰浴超声破碎(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间30min)；然后16000g,4℃，离心20min去上清进行酶活力测定。各试剂的组分参照Solarbio乙醛脱氢酶活性检测试剂盒说明书。
空白管：在96孔板(UV板)中依次加入20μL蒸馏水、160μL试剂一和20μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。ΔA空白管＝A1-A2(空白管只需做1—2个)。
测定管：在96孔板(UV板)中依次加入20μL上清液、160μL试剂一和20μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。ΔA测定管＝A3-A4。
活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟氧化1μmol NADH为1个酶活单位。ADH(U/mL)＝[(ΔA测定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷V样÷T＝2.68×(ΔA测定管–ΔA空白管)
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm；V反总：反应体系总体积，200μL＝2×10-4L；106：单位换算系数，1mol＝1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL＝0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；细胞数量：以万计。乙醇脱氢酶活性检测试剂盒检测结果：如表5所示。
表5
| 菌株 | 酶活(U/mL) |
| 副干酪乳酪杆菌SMN-LBK | 4.53 |
| 副干酪乳酪杆菌K9 | 1.29 |
| 副干酪乳酪杆菌LP01 | 1.32 |
酶活检测结果可见，副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌株的乙醇脱氢酶酶活远高于副干酪乳酪杆菌K9和副干酪乳酪杆菌LP01。
试验例五、副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK产乙醛脱氢酶实验
取副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌株(实验组)、副干酪乳酪杆菌K9菌株(对照1)、副干酪乳酪杆菌LP01(对照2)分别按5％的接种量接入MRS培养基中，37℃静置培养12h，离心取菌体，用PBS(7.4)缓冲液洗涤菌体2次，再用提取液重悬菌体，冰浴超声破碎(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间30min)；然后10000g,4℃，离心20min去上清进行酶活力测定。各试剂的组分参照Solarbio乙醛脱氢酶活性检测试剂盒说明书，测定体系如下6所示：
表6
| 试剂名称 | 空白管 | 测定管 |
| 样本 | 0 | 40 |
| 蒸馏水 | 100 | 60 |
| 试剂一 | 60 | 60 |
| 试剂二 | 20 | 20 |
| 试剂三 | 4 | 4 |
| 试剂四 | 6 | 6 |
| 试剂五 | 10 | 10 |
在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定30s时的吸光值A1，迅速置于37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴或培养箱1min(酶标仪有控温功能可将温度调至37℃或25℃)，拿出迅速擦干测定90s时的吸光值A2，计算ΔA测定管＝A2测定-A1测定，ΔA空白管＝A2空白-A1空白，ΔA＝ΔA测定管-ΔA空白管。(空白管需做1-2次)
ALDH酶活(U/mL)＝ΔA÷(ε×d)×109×V反总÷V样÷T＝804×0.6×ΔAε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm；V反总：反应体系总体积，2×10- 4L；V样：反应体系中样本体积，0.04mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，需自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，1min；109：单位换算系数，1mol＝109nmol。
乙醛脱氢酶活性检测试剂盒检测结果：如表7所示。
表7
| 菌株 | 酶活(U/mL) |
| 副干酪乳杆菌SMN-LBK | 78.52 |
| 副干酪乳杆菌K9 | 28.36 |
| 副干酪乳杆菌LP01 | 25.35 |
酶活检测结果可见，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK菌株的乙醛脱氢酶酶活远高于副干酪乳杆菌K9和副干酪乳杆菌LP01。
试验例六、酒精性肝损伤大鼠模型的建立
选取38只雌性SD大鼠，随机分成饲料对照组8只，模型组30只，适应期结束后，给予大鼠灌胃不同浓度乙醇溶液，每天2次，间隔8h左右，灌胃容积10mL/kg体重，第1-2天，灌胃30°乙醇溶液；第3-4天，灌胃40°乙醇溶液；第5-10天，灌胃50°乙醇溶液，连续10天，于末次造模结束次日，模型组取动物进行相关指标检测以确保模型建立成功。造模期间记录大鼠体重变化。结果发现，大鼠活动性差，毛发粗糙，精神状态萎靡，模型组大鼠体重增加明显减缓，模型建立成功(图3)。
试验例七、副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK干预酒精性肝损伤大鼠
酒精性肝损伤模型建立2天后，实验组A和实验组B分别灌胃实施例2副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK灭活菌悬液和实施例2副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK活菌悬液，1次/天，10mL/kg体重，模型对照组以同样的方式给予等量生理盐水，连续20天。同时在干预12天内将模型组及实验组大鼠饲料更换为含5％乙醇的液体饲料，对照组给予对应的不含乙醇的对照饲料。在干预12天后，将饲料更换为维持饲料。
实验结束后，大鼠血清中ALT，AST以及肝脏中MDA，GSH和TG含量的测定按照生化试剂盒的方法进行测定。
组织病理学评估方法：对福尔马林固定的脑组织进行石蜡包埋、切片、苏木精和伊红染色(H&E)染色，在显微镜下观察炎症浸润、粘膜层厚度等组织学改变。
实验过程中发现，灭活或活的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK可以有效缓解酒精性肝损伤大鼠的肝脏系数，同时缓解大鼠肝脏组织病理损伤(图2)，并缓解ALT和AST等生化指标的升高，使得大鼠肝脏功能接近于对照组。
表8肝脏重量及其肝脏系数的影响
表9生化指标的变化
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK在制备含酒精发酵饮品或解酒产品中的应用，其特征在于，所述副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK，其于2017年7月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2017429，保藏地址为武汉大学。
2.一种含酒精发酵饮品或解酒产品的生产方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK作为发酵菌。
3.一种含酒精发酵饮品，其特征在于，所述含酒精发酵饮品采用如权利要求1所述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK作为发酵菌制得。
4.如权利要求3所述的含酒精发酵饮品，其特征在于，所述含酒精发酵饮品包括鲜啤酒、果酒、奶啤、开菲尔饮料中的至少一种。
5.如权利要求4所述的含酒精发酵饮品，其特征在于，所述奶啤由发酵剂发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料加入酿酒酵母和如权利要求1所述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK共同发酵制得。
6.如权利要求5所述的含酒精发酵饮品，其特征在于，所述牛奶基质包括以下重量份数的组分：牛奶90-95份、白砂糖5-10份和发酵剂0.007-0.01份；
所述奶啤包括以下重量份数的组分：纯净水50-58.69份、牛奶基质36-45份、白砂糖5-8份、果胶0.3-0.5份、酿酒酵母0.025-0.05份和如权利要求1所述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.05-0.1份。
7.如权利要求4所述的含酒精发酵饮品，其特征在于，所述开菲尔饮料由开菲尔发酵剂和如权利要求1所述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK发酵牛奶基质后经过胶体水溶液二次配料制得。
8.如权利要求7所述的含酒精发酵饮品，其特征在于，所述牛奶基质包括以下重量份数的组分：牛奶90-95份、白砂糖5-10份、开菲尔发酵剂0.01-0.015份和如权利要求1所述的副干酪乳酪杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK0.02-0.1份；
所述开菲尔饮料包括以下重量份数的组分：纯净水50-60份、牛奶基质33.5-45份、白砂糖6-8份、果胶0.1-0.5份和羧甲基纤维素钠0.1-0.3份。
9.一种解酒产品，其特征在于，所述解酒产品包括解酒风味发酵乳、解酒片剂、解酒固体饮料或解酒胶囊中的至少一种。
10.如权利要求9所述的解酒产品，其特征在于，
所述解酒风味发酵乳包括以下重量份数的组分：
牛奶88.36-88.46份、白砂糖4份、低聚果糖4份、添加剂3.5-3.6份、维生素C 0.02份和发酵剂0.01份，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK 0.01-0.02份；
所述解酒片剂包括以下重量份数的组分：
山梨醇72份、抗性糊精10份、低聚果糖5份、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK活菌冻干粉5份、葛根粉3份、甜橙粉3份、硬脂酸镁1份、柠檬酸0.5份和维生素C 0.5份；
所述添加剂为a)、b)、c)以下重量份数的配方的任意一种：
a)添加剂由浓缩苹果汁2.5份、浓缩胡萝卜汁0.5份和果胶0.5份组成；
b)添加剂由葛根粉3份、果胶0.5份组成；
c)添加剂由葛根粉3份、果胶0.4份和琼脂0.2份组成。
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