CN115887513A - 无瓣海桑嫩枝叶提取物在制备高尿酸血症药物中的应用 - Google Patents
无瓣海桑嫩枝叶提取物在制备高尿酸血症药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了无瓣海桑嫩枝叶提取物在制备高尿酸血症药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明提供了无瓣海桑嫩枝叶的新用途，筛选出其可能的活性部位(无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物)，以便在制药中进行应用。发明人发现无瓣海桑嫩枝叶的水提物具有显著抑制高尿酸血症所致的尿酸、肌酐及尿素氮水平的升高和肾脏保护作用，表明其可防治高尿酸血症。其中无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对抑制高尿酸血症动物模型的尿酸、肌酐及尿素氮水平的升高最显著，表明其防治高尿酸血症的潜在活性成分在无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物中。另外，本发明的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对人体安全性高，具有一定的开发潜能。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，特别涉及无瓣海桑嫩枝叶提取物在制备高尿酸血症药物中的应用。
背景技术
高尿酸血症(Hyperuricemia)是代谢性疾病(如代谢综合征，糖尿病，血脂异常等)，慢性肾病，心血管疾病和中风的独立危险因素。尿酸是人类嘌呤化合物的终末代谢产物。嘌呤代谢紊乱导致高尿酸血症。本病患病率受到多种因素的影响，与遗传、性别、年龄、生活方式、饮食习惯、药物治疗和经济发展程度等有关。根据近年各地高尿酸血症患病率的报道，目前我国约有高尿酸血症者1.2亿，约占总人口的10％，高发年龄为中老年男性和绝经后女性，但近年来有年轻化趋势。高尿酸血症的病理机制复杂，目前对高尿酸血症的治疗主要是抑制尿酸合成，促进尿酸排泄，如非布司他、苯溴马隆片、别嘌呤醇等。但是使用这些药物的治疗过程中往往会伴随各种副作用，所以在临床上的应用受到了限制。近几年来，中医药在治疗高尿酸血症上有较大的优势，比如用药安全、有效，毒、副作用少，且不易产生耐药性和费用少等优势。
无瓣海桑(Sonneratia apetala)为海桑科海桑属的真红树乔木，原产孟加拉国，自1985年从孟加拉国引入，现广泛分布于中国东南沿海地区。无瓣海桑为中国外来红树林的优势物种，适应能力强，并具有一定药用价值。研究表明，无瓣海桑具有抗菌、抗糖尿病、抗氧化、抗癌、止泻和镇痛等活性，其果实和树皮可用于治疗哮喘、溃疡、肿胀、扭伤和出血等症。另有研究报道，无瓣海桑的根、树皮和叶富含多酚类物质并且有较强的还原能力和抗氧化活性。此外，其果实也具有抗氧化活性。然而目前，国内外对无瓣海桑嫩枝叶的生物活性研究相对较少，尚未见有关于使用无瓣海桑嫩枝叶预防或治疗高尿酸血症的报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供无瓣海桑嫩枝叶提取物在制备高尿酸血症药物中的应用，即提供无瓣海桑嫩枝叶的新用途。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
无瓣海桑嫩枝叶提取物在制备高尿酸血症药物中的应用。
所述的高尿酸血症药物包括治疗和/或预防高尿酸血症的药物。
所述的无瓣海桑嫩枝叶提取物包括但不限于无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏、无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物、无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物和无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物中的至少一种；优选为无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物。
所述的无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏优选通过以下方法制备得到：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入10～20倍的水浸泡后，采用煎煮法提取，过滤并合并提取液得到无瓣海桑嫩枝叶水提物；将无瓣海桑嫩枝叶水提物80℃减压加热蒸发至相对密度为1.20以去除大量水分，再经冷冻真空干燥，即可获得无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏。
所述的10～20倍的水是指水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的10～20倍。
所述的浸泡的时间优选为3～5h；更优选为4h。
所述的煎煮法提取的条件优选为：100℃沸水煎煮提取0.5～1.5h；更优选为100℃沸水煎煮提取1h。
所述的煎煮法提取的次数优选为至少3次；更优选为3次。
所述的过滤优选为用普通纱布过滤。
所述的相对密度是指加热蒸发后得到的无瓣海桑嫩枝叶水提物的密度与加热蒸发掉的水的密度之比。
所述的无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物通过以下方法制备得到：取上述无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏，用20倍的水溶解后，得到无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏液，将无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏液与乙酸乙酯按体积比1:1萃取，弃去水层，重复上述操作，收集并合并乙酸乙酯组分，真空干燥，即得无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物。
所述的水为去离子水；
所述的20倍的水是指水的体积为无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏体积的20倍。
所述的乙酸乙酯优选为分析纯级乙酸乙酯。
所述的重复上述操作的次数优选为至少3次；更优选为3次。
所述的真空干燥的条件优选为：55～65℃真空干燥1～3h；更优选为60℃真空干燥2h。
所述的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物通过以下方法制备得到：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入10～20倍的水浸泡后，采用煎煮法提取，过滤，合并滤液，80℃加热浓缩至相对密度为1.20，得到浓缩液，加2倍浓缩液体积的乙醇，搅匀后，静置过滤得到上清液和无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物。
所述的10～20倍的水是指水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的10～20倍。
所述的浸泡的时间优选为3～5h；更优选为4h。
所述的煎煮法提取的条件优选为：100℃沸水煎煮提取0.5～1.5h；更优选为100℃沸水煎煮提取1h。
所述的煎煮法提取的次数优选为至少3次；更优选为3次。
所述的合并滤液前的过滤优选为用普通纱布过滤。
所述的相对密度是指浓缩液的密度与加热浓缩掉的水的密度之比。
所述的乙醇优选为95％乙醇。
所述的静置过滤优选为4℃静置46～50h，普通滤纸过滤；更优选为4℃静置48h，普通滤纸过滤。
所述的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物通过以下方法制备得到：将上述上清液于60℃减压回收乙醇，得到浸膏，真空干燥浸膏，即为无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物。
一种治疗和/或预防高尿酸血症的药物，包括无瓣海桑嫩枝叶提取物。
所述的治疗和/或预防高尿酸血症的药物还包括药学上可接受的辅料。
所述的治疗和/或预防高尿酸血症的药物的剂型优选为口服制剂；所述的口服制剂包括但不限于口服液、胶囊、滴丸和颗粒剂中的至少一种。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明提供了无瓣海桑嫩枝叶的新用途，筛选出其可能的活性部位(无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物)，以便在制药中进行应用。
(2)发明人通过对无瓣海桑嫩枝叶进行研究，发现无瓣海桑嫩枝叶的水提物具有显著抑制高尿酸血症所致的尿酸、肌酐及尿素氮水平的升高和肾脏保护作用，表明其可防治高尿酸血症。其中无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对抑制高尿酸血症动物模型的尿酸、肌酐及尿素氮水平的升高最显著，表明其防治高尿酸血症的潜在活性成分在无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物中。另外，本发明的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对人体安全性高，具有一定的开发潜能。
附图说明
图1为实验流程图。
图2为不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对小鼠高尿酸血症尿酸、肾脏指数、肌酐和尿素氮水平的影响结果图；其中，图A为不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对小鼠高尿酸血症尿酸水平的影响结果图；图B为不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对小鼠高尿酸血症肾脏指数水平的影响结果图；图C为不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对小鼠高尿酸血症肌酐水平的影响结果图；图D为不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对小鼠高尿酸血症尿素氮水平的影响结果图；(Mean±SD，n＝6)与正常组相比#P<0.01，##P<0.01，与模型组相比*P<0.01，**P<0.01。
图3为不同药物对高尿酸血症所致氧化应激水平影响结果图；其中，图A为不同药物对高尿酸血症过氧化氢酶活性影响结果图；图B为不同药物对高尿酸血症谷胱甘肽还原酶影响结果图；图C为不同药物对高尿酸血症丙二醛影响结果图；图D为不同药物对高尿酸血症超氧化物歧化酶影响结果图；(Mean±SD，n＝6)；与正常组相比#P<0.01，##P<0.01，与模型组相比*P<0.01，**P<0.01。
图4为不同药物对高尿酸血症所致炎症因子水平影响结果图；其中，图A为不同药物对高尿酸血症白介素-1β影响结果图；图B为不同药物对高尿酸血症白介素-6影响结果图；图C为不同药物对高尿酸血症白介素-18影响结果图；图D为不同药物对高尿酸血症肿瘤坏死因子-α影响结果图；(Mean±SD，n＝6)；与正常组相比#P<0.01，##P<0.01，与模型组相比*P<0.01，**P<0.01。
图5为不同药物对高尿酸血症所致肾脏转运体的mRNA表达水平影响结果图；其中，图A为不同药物对高尿酸血症人葡萄糖转运蛋白9mRNA表达水平影响结果图；图B为不同药物对高尿酸血症阴离子转运蛋白1mRNA表达水平影响结果图；图C为不同药物对高尿酸血症尿酸盐转运蛋白1mRNA表达水平影响结果图；(Mean±SD，n＝6)；与正常组相比#P<0.01，##P<0.01，与模型组相比*P<0.01，**P<0.01。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
本申请实施例中：尿酸是利用尿酸测定试剂盒测定；肌酐是利用肌酐测定试剂盒测定；尿素氮是利用尿素氮测定试剂盒测定；过氧化氢酶是利用过氧化氢酶测定试剂盒进行测定；谷胱甘肽还原酶是利用谷胱甘肽还原酶测定试剂盒进行测定；丙二醛是利用丙二醛测定试剂盒进行测定；超氧化物歧化酶是利用超氧化物歧化酶测定试剂盒进行测定；上述试剂盒若非特别说明均购于南京建成生物工程研究所，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行。白介素-1β是利用小鼠白介素-1β测定试剂盒进行测定；白介素-6是利用小鼠白介素-6测定试剂盒进行测定；白介素-18是利用小鼠白介素18检测试剂盒进行测定；肿瘤坏死因子-α是利用小鼠肿瘤坏死因子α试剂盒进行测定；上述试剂盒若非特别说明均购于上海酶联生物科技有限公司，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行。mRNA的测定是利用南京诺维赞生物科技股份有限公司的mRNA试剂盒测定。
非布司他购买于上海源叶生物科技有限公司；次黄嘌呤、氧嗪酸钾购买于Sigma-Aldrich公司；黄嘌呤购买于大连美仑生物技术有限公司。
实施例1：不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对高尿酸血症的影响
1.实验材料
1.1试剂
黄嘌呤(纯度：99％)、氧嗪酸钾(纯度：97％)、次黄嘌呤(纯度：99％)购自Sigma-Aldrich(美国)贸易有限公司；非布司他(FBX，纯度：98％)购自源叶生物有限公司；羧甲基纤维素钠(CMC-Na)购自Sigma-Aldrich(美国)贸易有限公司。无瓣海桑嫩枝叶采集于广州南沙湿地公园，阴干后贮存。
1.2试剂及试药的配制
0.5wt％CMC-Na溶液配制：称取3.0g CMC-Na溶于600mL生理盐水中，混匀即得0.5wt％CMC-Na溶液；
300mg/kg次黄嘌呤溶液配制：称取3.0g次黄嘌呤，溶于100mL 0.5wt％CMC-Na溶液中，混匀即得30mg/mL次黄嘌呤溶液；实验中，灌胃给药(次黄嘌呤溶液)剂量为0.1mL/10g，药物(次黄嘌呤溶液)浓度为30mg/mL，则小鼠给药剂量为300mg/kg。
300mg/kg氧嗪酸钾溶液配制：称取3.0g氧嗪酸钾，溶于100mL 0.5wt％CMC-Na溶液中，混匀即得30mg/mL氧嗪酸钾溶液；实验中，灌胃给药(氧嗪酸钾溶液)剂量为0.1mL/10g，药物(氧嗪酸钾溶液)浓度为30mg/mL，则小鼠给药剂量为300mg/kg。
20mg/kg苯溴马隆溶液配制：称取0.2g苯溴马隆，溶于100mL 0.5wt％CMC-Na溶液中，混匀即得2mg/mL苯溴马隆溶液；实验中，灌胃给药(苯溴马隆溶液)剂量为0.1mL/10g，药物(苯溴马隆溶液)浓度为2mg/mL，则小鼠给药剂量为20mg/kg。
10mg/kg非布司他溶液配制：称取0.1g非布司他，溶于100mL 0.5wt％CMC-Na溶液中，混匀即得1mg/mL非布司他溶液；实验中，灌胃给药(非布司他溶液)剂量为0.1mL/10g，药物(非布司他溶液)浓度为1mg/mL，则小鼠给药剂量为10mg/kg。
1.3实验仪器
SHIMADZU分析天平，广州湘仪机电设备有限公司；PL-203电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；EOS M3微单相机，日本Canon公司。
1.4实验动物
SPF级Kunming小鼠，雄性，18-22g，购于广州中医药大学实验动物中心(伦理审查编号：20210331003)。实验动物分笼饲养，适应性饲养7天，实验期间自由饮水和进食。饲养环境温度为22±2℃，相对湿度为60％，每天12小时光照和12小时黑夜循环。
2.实验方法
本发明利用高尿酸血症的动物模型，对不同方法提取的无瓣海桑嫩枝叶提取物进行药效评价，得出其含有活性成分的组分在无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物中；接着同样利用高尿酸血症的动物模型，对无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物防治高尿酸血症的机制进行研究。具体实验流程如图1所示，具体实验方法如下：
2.1不同提取方法制备无瓣海桑嫩枝叶提取物
(1)水提法可以将植物体内的大部分有效成分提取出来，故采用水提法对无瓣海桑嫩枝叶的活性成分进行提取。无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏的制备工艺如下：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入20倍(水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的20倍)的水浸泡4h后，采用100℃沸水煎煮提取3次，每次时间为1h，普通纱布过滤并合并提取液得到无瓣海桑嫩枝叶水提物；将无瓣海桑嫩枝叶水提物于80℃减压加热蒸发至相对密度为1.20以去除大量水分，再经冷冻真空干燥，即可获得无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏。经计算，无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏的得率为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶的4.23％。
(2)无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物由以下方法制得：取适量(1)得到的无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏，用20倍(去离子水的体积为无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏体积的20倍)的去离子水溶解后，得到无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏液，将无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏液与乙酸乙酯(分析纯)按体积比1:1萃取，弃去水层，重复3次，收集并合并乙酸乙酯组分，60℃真空干燥2h，即得无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物；无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物的得率为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶质量的0.19％。
(3)无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物通过以下方法制备得到：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入20倍(水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的20倍)的水浸泡4h后，采用100℃沸水煎煮提取3次，每次1h，普通纱布过滤，合并滤液，80℃加热浓缩至相对密度(相对密度是指浓缩液的密度与加热浓缩掉的水的密度之比)为1.20，得到浓缩液，加2倍浓缩液体积的乙醇(95％乙醇)，搅匀后，置于4℃静置48h，普通滤纸过滤得到上清液和无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物；无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物的得率为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶质量的1.67％。
(4)无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物的制备：将(3)得到的上清液于60℃减压回收乙醇，得到浸膏，真空干燥浸膏，即为无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物。无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物的得率为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶质量的2.39％。
2.2不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对小鼠高尿酸血症尿酸、肾脏指数、肌酐和尿素氮的影响水平
实验开始前取SPF级雄性Kunming小鼠，称重，按体重随机分为正常组，模型组，苯溴马隆组(20mg/kg)，非布司他组(10mg/kg)，无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏组(即水提物组，对应无瓣海桑嫩枝叶原植物剂量为4.65g/kg)，无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物组(即水提醇沉-上清组，对应无瓣海桑嫩枝叶原植物剂量为4.65g/kg)，无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物组(即水提醇沉-沉淀组，对应无瓣海桑嫩枝叶原植物剂量为4.65g/kg)，无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物组(即乙酸乙酯组，对应无瓣海桑嫩枝叶原植物剂量为4.65g/kg)，每组8只。分组后，标号，再称量各小鼠体重，记录并计算相应给药体积(0.1mL/10g)。
除正常组给予0.5wt％CMC-Na溶液，其余各组灌胃300mg/kg的次黄嘌呤，腹腔注射300mg/kg的氧嗪酸钾进行造模，造模一小时后给药；除正常组和模型组给予0.5wt％CMC-Na溶液，其他组均给予相应的药物防治，连续7天。
最后一天灌胃给药2h后，各小鼠安乐处死，取血，取出肾脏放入多聚甲醛固定。测定血清尿酸、肌酐和尿素氮水平。
2.3不同剂量的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对高尿酸血症所致氧化应激水平影响
实验开始前取SPF级雄性Kunming小鼠，称重，按体重随机分为正常组，模型组，苯溴马隆组(20mg/kg)，非布司他组(10mg/kg)，无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物低、中、高剂量组(即水提醇沉-上清低、中、高剂量组，分别对应无瓣海桑嫩枝叶原植物剂量为2.33g/kg、4.65g/kg、6.99g/kg)，每组8只。给药、取材操作同2.2。取材后，测定肾脏氧化应激和炎症水平，测定肾脏转运体的mRNA表达水平。
2.4统计学处理
各数据以均数±标准差(mean±SD)表示，应用Graphpad Prism 8软件制图，SPSS22.0软件进行统计学分析，各组间差异比较，采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，方差齐时，组间两两多重比较采用LSD法；方差不齐时，组间两两多重比较采用Dunnett’s T3法，以P<0.05为标准，表示有显著性差异。正常组与模型组的比较，采用独立样本T检验(Student's t test)。与正常组相比，##：P<0.01；与模型组相比，*：P<0.05，**：P<0.01。
3.实验结果
3.1不同提取方法得到的无瓣海桑嫩枝叶提取物对小鼠高尿酸血症尿酸、肾脏指数、肌酐和尿素氮水平的影响
结果如图2所示，高尿酸血症可致高尿酸血症模型组小鼠尿酸、肾脏指数、肌酐和尿素氮水平显著升高；苯溴马隆、非布司他、无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏组以及无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物均可以显著改善这些指标，说明无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏和无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物具有防治高尿酸血症所致尿酸升高，且可改善尿酸所致肾脏损伤的作用；其无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物和无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物也可降低尿酸、肌酐和尿素氮水平，但是结果没有显著性差异，无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物可显著降低尿酸和改善肾脏损伤，差异具有显著性，说明无瓣海桑嫩枝叶的活性成分可能存在于无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物中。
3.2不同剂量的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对高尿酸血症所致氧化应激水平影响
图3的结果表明，高尿酸血症可致氧化应激相关过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和超氧化物歧化酶的活性降低，可致丙二醛水平升高；苯溴马隆、非布司他及无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物可以提高氧化应激相关酶的活性，同时也可降低丙二醛水平；无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物呈剂量依赖关系，中、高剂量组与阳性药(苯溴马隆、非布司他)的效果接近。
3.3不同剂量的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对高尿酸血症所致炎症因子水平影响
结果表明，如图4所示，高尿酸血症可致肾脏炎症因子(白介素-1β、白介素-6、白介素-18和肿瘤坏死因子-α)水平升高；苯溴马隆、非布司他及无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物可以降低炎症因子水平；无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物降低效果呈剂量依赖关系，中、高剂量组与阳性药(苯溴马隆、非布司他)的效果接近。
3.4不同剂量的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物对高尿酸血症所致肾脏转运体的mRNA表达水平影响
结果表明(图5)，高尿酸血症可致肾脏转运体人葡萄糖转运蛋白9和尿酸盐转运蛋白1的mRNA表达升高，阴离子转运蛋白1的mRNA表达降低，而苯溴马隆及无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物可以改善相关转运体的mRNA表达，结果具有显著性差异。
实施例2：含有无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物的用于治疗和/或预防高尿酸血症的药物的制备
无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏的制备工艺如下：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入20倍(水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的20倍)的水浸泡4h后，采用100℃沸水煎煮提取3次，每次时间为1h，普通纱布过滤并合并提取液得到无瓣海桑嫩枝叶水提物；将无瓣海桑嫩枝叶水提物于80℃减压加热蒸发至相对密度(即加热蒸发后得到的无瓣海桑嫩枝叶水提物的密度与加热蒸发掉的水的密度之比)为1.20以去除大量水分，再经冷冻真空干燥，即可获得无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏。
无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物的制备：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入20倍的(水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的20倍)水浸泡4h后，采用100℃沸水煎煮提取3次，每次1h，普通纱布过滤，合并滤液，80℃加热浓缩至相对密度(相对密度是指浓缩液的密度与加热浓缩掉的水的密度之比)为1.20，得到浓缩液，加2倍浓缩液体积的乙醇(95％乙醇)，搅匀后，置于4℃静置48h，普通滤纸过滤得到上清液；将上清液于60℃减压回收乙醇，得到浸膏，真空干燥浸膏，即为无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物。无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物的得率为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶质量的2.39％。
例1(口服液)
称取100g无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物，加入增溶剂吐温80，和一定比例的乙醇，充分搅匀；然后加入甜菊甙、山梨酸钾等适宜附加剂(如矫味剂、抑菌剂、抗氧化剂、着色剂)，溶解均匀，滤过澄清，将内容物装入口服液玻璃瓶中，灭菌。规格为每瓶含无瓣海桑嫩枝叶3g的口服液，每瓶净含量10mL。口服，用于防治高尿酸血症。
例2(口服液)
称取100g无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物，加入增溶剂吐温80，和一定比例的乙醇，充分搅匀；然后加入甜菊甙、苯甲酸等适宜附加剂(如矫味剂、抑菌剂、抗氧化剂、着色剂)，溶解均匀，滤过澄清，将内容物装入口服液玻璃瓶中，灭菌。规格为每瓶含无瓣海桑嫩枝叶5g的口服液，每瓶净含量10mL。口服，用于防治高尿酸血症。
例3(口服液)
称取100g无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物，加入增溶剂吐温80，和一定比例的乙醇，充分搅匀；然后加入木糖醇、山梨酸钾等适宜附加剂(如矫味剂、抑菌剂、抗氧化剂、着色剂)，溶解均匀，滤过澄清，将内容物装入口服液玻璃瓶中，灭菌。规格为每瓶含无瓣海桑嫩枝叶5g的口服液，每瓶净含量10mL。口服，用于防治高尿酸血症。
例4(胶囊剂)
取无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏1000g，加入乳糖754g、淀粉964g混合均匀，用7％的淀粉浆270g作为粘合剂，湿法制粒，烘干，加入硬脂酸镁12g混匀，填充至1号胶囊制成10000粒，每粒胶囊内含无瓣海桑嫩枝叶1.5g，每粒净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例5(胶囊剂)
取无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏800g，加入乳糖980g、淀粉1254g混合均匀，用7％的淀粉浆350g作为粘合剂，湿法制粒，烘干，加入硬脂酸镁16g混匀，填充至1号胶囊制成10000粒，每粒胶囊内含无瓣海桑嫩枝叶1.5g，每粒净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例6(胶囊剂)
取无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物1000g，加入乳糖754g、淀粉964g混合均匀，用7％的淀粉浆270g作为粘合剂，湿法制粒，烘干，加入硬脂酸镁12g混匀，填充至1号胶囊制成10000粒，每粒胶囊内含无瓣海桑嫩枝叶1.5g，每粒净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例7(胶囊剂)
取无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物800g，加入乳糖980g、淀粉1254g混合均匀，用7％的淀粉浆350g作为粘合剂，湿法制粒，烘干，加入硬脂酸镁16g混匀，填充至1号胶囊制成10000粒，每粒胶囊内含无瓣海桑嫩枝叶1.5g，每粒净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例8(滴丸)
取无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏300g，加入适量泊洛沙姆作为基质，适量液体石蜡为冷却剂；滴制法制成含有每丸含无瓣海桑嫩枝叶1.5g的滴丸，每丸净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例9(滴丸)
取无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏300g，加入适量聚氧乙烯单硬脂酸酯作为基质，适量液体石蜡为冷却剂；滴制法制成含有每丸含无瓣海桑嫩枝叶1.5g的滴丸，每丸净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例10(滴丸)
取无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏300g，加入适量PEG4000作为基质，适量二甲基硅油为冷却剂；滴制法制成含有每丸含无瓣海桑嫩枝叶1.5g的滴丸，每丸净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例11(滴丸)
取无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物300g，加入适量泊洛沙姆作为基质，适量液体石蜡为冷却剂；滴制法制成含有每丸含无瓣海桑嫩枝叶1.5g的滴丸，每丸净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例12(滴丸)
取无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物300g，加入适量聚氧乙烯单硬脂酸酯作为基质，适量液体石蜡为冷却剂；滴制法制成含有每丸含无瓣海桑嫩枝叶1.5g的滴丸，每丸净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例13(滴丸)
取无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物300g，加入适量PEG4000作为基质，适量二甲基硅油为冷却剂；滴制法制成含有每丸含无瓣海桑嫩枝叶1.5g的滴丸，每丸净重2g。口服，用于防治高尿酸血症。
例14(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量淀粉、微晶纤维素、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
例15(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量蔗糖粉、交联羧甲基纤维素钠、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
例16(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量糊精、交联羧甲基纤维素钠、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
例17(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量乳糖、交联羧甲基纤维素钠、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
例18(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量淀粉、微晶纤维素、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
例19(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量蔗糖粉、交联羧甲基纤维素钠、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
例20(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量糊精、交联羧甲基纤维素钠、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
例21(颗粒剂)
称取1000g无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物加入到适量β-环糊精中制成包合物，加入适量乳糖、交联羧甲基纤维素钠、淀粉浆，混合均匀，逐渐加入乙醇和水，制成颗粒，进行分装。规格为每包含无瓣海桑嫩枝叶5g的颗粒剂，每包净重7g。开水冲服，口服，用于防治高尿酸血症。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.无瓣海桑嫩枝叶提取物在制备高尿酸血症药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的高尿酸血症药物包括治疗和/或预防高尿酸血症的药物。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的无瓣海桑嫩枝叶提取物包括无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏、无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物、无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物和无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的无瓣海桑嫩枝叶提取物为无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏通过以下方法制备得到：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入10～20倍的水浸泡后，采用煎煮法提取，过滤并合并提取液得到无瓣海桑嫩枝叶水提物；将无瓣海桑嫩枝叶水提物80℃减压加热蒸发至相对密度为1.20以去除大量水分，再经冷冻真空干燥，即可获得无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏；
所述的无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物通过以下方法制备得到：取上述无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏，用20倍的水溶解后，得到无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏液，将无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏液与乙酸乙酯按体积比1:1萃取，弃去水层，重复上述操作，收集并合并乙酸乙酯组分，真空干燥，即得无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物通过以下方法制备得到：取干燥后的无瓣海桑嫩枝叶，加入10～20倍的水浸泡后，采用煎煮法提取，过滤，合并滤液，80℃加热浓缩至相对密度为1.20，得到浓缩液，加2倍浓缩液体积的乙醇，搅匀后，静置过滤得到上清液和无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物；
所述的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物通过以下方法制备得到：将上述上清液于60℃减压回收乙醇，得到浸膏，真空干燥浸膏，即为无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉上清液提取物。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，
所述的无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏的制备方法中：
所述的10～20倍的水是指水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的10～20倍；
所述的浸泡的时间为3～5h；
所述的煎煮法提取的条件为：100℃沸水煎煮提取0.5～1.5h；
所述的煎煮法提取的次数为至少3次；
所述的相对密度是指加热蒸发后得到的无瓣海桑嫩枝叶水提物的密度与加热蒸发掉的水的密度之比；
所述的无瓣海桑嫩枝叶乙酸乙酯提取物的制备方法中：
所述的水为去离子水；
所述的20倍的水是指水的体积为无瓣海桑嫩枝叶水提物浸膏体积的20倍；
所述的乙酸乙酯为分析纯级乙酸乙酯；
所述的重复上述操作的次数为至少3次；
所述的真空干燥的条件为：55～65℃真空干燥1～3h。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，
所述的无瓣海桑嫩枝叶水提醇沉沉淀提取物的制备方法中：
所述的10～20倍的水是指水的体积为干燥后的无瓣海桑嫩枝叶体积的10～20倍；
所述的浸泡的时间为3～5h；
所述的煎煮法提取的条件为：100℃沸水煎煮提取0.5～1.5h；
所述的煎煮法提取的次数为至少3次；
所述的相对密度是指浓缩液的密度与加热浓缩掉的水的密度之比；
所述的乙醇为95％乙醇。
9.一种治疗和/或预防高尿酸血症的药物，其特征在于，包括无瓣海桑嫩枝叶提取物。
10.根据权利要求9所述的治疗和/或预防高尿酸血症的药物，其特征在于，所述的治疗和/或预防高尿酸血症的药物还包括药学上可接受的辅料；
所述的治疗和/或预防高尿酸血症的药物的剂型为口服制剂；
所述的口服制剂包括口服液、胶囊、滴丸和颗粒剂中的至少一种。
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