CN115887495A - 化学修饰的mRNA转染的皮片或皮瓣及其促进创面愈合的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化学修饰的mRNA(modRNA)转染的皮片或皮瓣及其促进创面愈合的用途。本发明使用modRNA直接转染皮片，发现modRNA可以在皮片中高效表达，将转染modRNA的皮片移植到创面后，显著促进了创面愈合。本发明为modRNA治疗提供了一种简便有效的方法。

Description

化学修饰的mRNA转染的皮片或皮瓣及其促进创面愈合的用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及化学修饰的mRNA转染的皮片或皮瓣及其促进创面愈合的用途。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是全球性最常见的慢性代谢性疾病之一，近年来随着人们生活方式的改变，其患病率呈指数增长，且趋于日益年轻化。据国际糖尿病联盟(IDF,http://www.diabetesatlas.org/)调查显示，2019年全球约4.63亿20-79岁成人患糖尿病(11个人中有1个为糖尿病患者)；预计到2030年，糖尿病患者会达到5.784亿；预计到2045年，糖尿病患者会达到7.002亿。糖尿病难愈合性创面是糖尿病的常见并发症之一，是一种难以痊愈的肢体缺血性溃疡。因其经常伴有严重的感染和慢性炎症，最终可导致患者截肢甚至死亡的严重后果，给患者的健康和生命带来严重的威胁，对家庭、社会造成极为沉重的负担。目前对于糖尿病引起的愈合不良慢性创面的治疗，主要以清创、抗感染及敷料换药等传统治疗方法为主，但这些治疗并不能取得很好疗效，存在着反复感染溃烂，甚至侵蚀损坏骨组织等危害。因此，如何修复糖尿病难愈合性创面仍是一个难题，探索高效、特异的修复糖尿病创面的方法具有重要的临床应用意义。

近年来，随着对mRNA结构的认识不断深入及核酸技术的不断进步，化学合成修饰信使核糖核酸(chemically synthetic modified message RNA,modRNA)兼具稳定性、低免疫原性及良好的蛋白翻译表达能力，是一种新兴的基因载体。modRNA能够有效调控靶细胞的分化、增殖，促进损伤后组织或器官结构及功能的恢复。既往体内外的研究表明，modRNA可以通过瞬时、高效、脉冲式地表达具有生物活性的旁分泌因子，因而，可作为组织修复与再生的一种有效的给药手段。早在2013年，Zangi L及Lui KO等人利用编码VEGF的modRNA来促进心脏祖细胞向血管内皮细胞分化，从而提高心肌细胞的增殖及存活。研究表明皮下注射编码VEGF的modRNA在治疗糖尿病创面愈合和心血管疾病方面显示出巨大的潜力，最新的临床研究表明，modRNA在治疗糖尿病方面具有良好的耐受性和安全性等优点，应用modRNA治疗有希望作为再生方面疾病的重要治疗手段。

然而，通过转染细胞来递送modRNA需要经过皮下点状注射modRNA转染的细胞，过程繁琐。目前未见更简便有效的modRNA递送和治疗方式。

发明内容

本发明第一方面提供一种皮片或皮瓣，所述皮片或皮瓣转染有modRNA。

在一个或多个实施方案中，所述转染的方式为脂质体转染、纳米颗粒介导、粒子轰击、微注射或电穿孔。

在一个或多个实施方案中，所述转染的方式是将皮片或皮瓣浸于含有modRNA的转染液中。

在一个或多个实施方案中，所述modRNA翻译促进创面愈合的蛋白或多肽。在一个优选的实施方案中，所述modRNA为SDF-1α、PDGF、TGF、FGF、EGF、IGF或VEGF modRNA。

在一个或多个实施方案中，所述创面是由切割伤、挫伤、烧伤、化学性灼伤、褥疮或糖尿病导致的皮肤溃疡形成的。

在一个或多个实施方案中，所述皮片为表层皮片、中厚皮片或全厚皮片；所述皮瓣为单纯皮瓣、筋膜皮瓣、复合皮瓣、联合皮瓣或组合组织皮瓣。

本发明第二方面提供一种皮片或皮瓣的处理方法，包含用modRNA转染皮片或皮瓣的步骤。

在一个或多个实施方案中，所述转染的方式为脂质体转染、纳米颗粒介导、粒子轰击、微注射或电穿孔。

在一个或多个实施方案中，所述转染的方式是将皮片或皮瓣浸于含有modRNA的转染液中。

在一个或多个实施方案中，所述modRNA翻译促进创面愈合的蛋白或多肽。在一个优选的实施方案中，所述modRNA为SDF-1α、PDGF、TGF、FGF、EGF、IGF或VEGF modRNA。

在一个或多个实施方案中，所述创面是由切割伤、挫伤、烧伤、化学性灼伤、褥疮或糖尿病导致的皮肤溃疡形成的。

在一个或多个实施方案中，所述皮片为表层皮片、中厚皮片或全厚皮片；所述皮瓣为单纯皮瓣、筋膜皮瓣、复合皮瓣、联合皮瓣或组合组织皮瓣。

本发明第三方面提供如上任意一种实施方案所述的皮片或皮瓣在制备促进创面愈合的产品中的应用。

在一个或多个实施方案中，所述创面是由切割伤、挫伤、烧伤、化学性灼伤、褥疮或糖尿病导致的皮肤溃疡形成的。

在一个或多个实施方案中，所述皮片为表层皮片、中厚皮片或全厚皮片；所述皮瓣为单纯皮瓣、筋膜皮瓣、复合皮瓣、联合皮瓣或组合组织皮瓣。

附图说明

图1：SDF-1αmodRNA转染皮片方式及体内实验设计示意图。

图2：小皮片转染modRNA。通过方法3转染后检测各组小皮片中的GFP荧光强度及通过ImageJ软件量化分析(A,B)。小皮片转染SDF-1αmodRNA后培养基中SDF-1α蛋白浓度检测(C)。

图3：SDF-1αmodRNA转染小皮片后促进大鼠全程皮肤缺损创面愈合。大鼠随机分为对照组，MS6，MS9，Luc+MS6，Luc+MS9，SDF+MS6和SDF+MS9小组(A)。分别在术后0，7，14和21天创面拍照及量化分析创面愈合情况(B-E)。

图4：免疫组化分析创面愈合情况。术后21天各小组取材HE染色情况(A-N)。黑色方框是局部放大情况(黄色标尺：1000μm，黑色标尺：50μm)。

图5：通过移植SDF-1αmodRNA转染的小皮片促进创面血管化而促进其愈合。各组CD31免疫荧光染色情况(A)，以及荧光量化分析(B)。(标尺：200μm)。数据表示均数±标准差(n＝4)，**P＝(0.01–0.05)，***P<0.01vs.对照组。

图6：SDF-1αmodRNA通过促进细胞增殖加速创面愈合。术后21天取材各组创面皮肤组织，Ki67免疫荧光检测细胞增殖情况(A)，TUNEL免疫荧光检测细胞凋亡情况(B)，免疫荧光量化分析情况(C，D)。数据表示均数±标准差(n＝4)，**P＝(0.01–0.05)，***P<0.01vs.对照组，#和##P＝(0.01–0.05)。(标尺：200μm)

图7：小皮片转染modRNA。通过方法1转染后检测各组小皮片中的GFP荧光强度。

图8：小皮片转染modRNA。通过方法2转染后检测各组小皮片中的GFP荧光强度。

图9：小皮片转染modRNA。通过方法4转染后检测各组小皮片中的GFP荧光强度。

图10：对照组与糖尿病组血糖检测情况。

具体实施方式

本申请发明人在广泛而深入的研究的基础上，创新性地想到使用modRNA直接转染皮片，制备得到可表达modRNA的皮片，再将转染后的皮片植入糖尿病难愈性创面，发现可以促进创面的愈合。在此基础上完成了本发明。

本文中，所述“modRNA”为化学合成修饰信使核糖核酸(Chemically SyntheticModified Message RNA)，是指利用化学修饰的碱基在体外合成的mRNA，其可被转入靶细胞中进行蛋白质的翻译表达。

所述“皮片”是指一块单纯皮肤，或不含皮下脂肪组织的皮肤。临床常用的皮片分为表层皮片、中厚皮片和全厚皮片三类。所述表层皮片也称刃厚皮片，包括表皮层和极少的真皮乳头层，是最薄的皮片。所述全厚皮片，为三类皮片中最厚的皮片，包括表皮和真皮的全层。所述中厚皮片包括表皮和部分真皮，依据包含真皮多少不同，又分为厚，薄两种。中厚皮片的厚度界于全厚和表层皮片之间。

本文中，所述“皮瓣”为包括表皮、真皮和皮下组织(或浅筋膜)的组织块。根据皮瓣结构、血管方式和皮瓣组织形式分类，包括单纯皮瓣、筋膜皮瓣、复合皮瓣、联合皮瓣和组合组织皮瓣。单纯皮瓣为含皮瓣(表皮和真皮)和浅筋膜(又称皮下组织)的皮瓣。所述筋膜皮瓣为含有皮肤、浅筋膜和深筋膜的皮瓣。复合皮瓣为同一个血管蒂，除皮瓣外还包括其深部或邻部的某些组织。联合皮瓣为同一个血管蒂能切取两个独立的皮瓣，该两个皮瓣可独立或缝成一个皮瓣；也可切成为一个较大皮瓣。所述组合组织皮瓣为不同血管蒂的皮瓣或皮瓣与组织瓣，经吻合血管组合在一起，也称为组合皮瓣。

本发明提供的皮片或皮瓣，所述皮片或皮瓣转染有modRNA。

任意一种modRNA均包含于本发明中。所述modRNA转染到皮片或皮瓣，翻译一种、两种或多种蛋白或多肽。所述“蛋白”和“多肽”在本文中可以互换使用。它们可以是天然存在的，也可以是经人工改造或突变的，但仍然保留了基本活性。在某些实施方案中，所述modRNA翻译促进创面愈合的蛋白或多肽，这些蛋白或多肽包括对皮肤伤口的纤维化、血管化和再上皮化有介导和调控作用的任意一种或多种生物学活性，它们通过趋化作用、促进细胞增殖、促进伤口的血管化、调节细胞外基质的产生和降解、诱导邻近细胞合成细胞因子等任意的途径发挥促进伤口愈合的作用。这些蛋白或多肽包括但不限于SDF-1α、PDGF、TGF、FGF、EGF、IGF、VEGF等。

将modRNA导入皮片的方法可以是以脂质体或纳米颗粒为载体的方法，也可以是其他的物理、化学或生物学手段，例如粒子轰击、微注射、电穿孔等。在本发明的一个实施例中，采用脂质体转染的方式，将modRNA导入皮片。

本发明中，所述皮片和皮瓣，其可以是任意大小的和任意类型的。

本发明提供的一种皮片或皮瓣的处理方法，包含用modRNA转染皮片或皮瓣的步骤。同前所述，所述转染即将modRNA导入皮片的过程，可采用的方法包括但不限于脂质体转染、纳米颗粒介导、粒子轰击、微注射、电穿孔等。

依据以上任意一种实施方案获得的皮片或皮瓣可以作为治疗伤口愈合的产品。在某些实施方案中，所述创伤是指日常的切割伤、挫伤等小面积的创伤，在某些实施方案中，烧伤、化学性灼伤、褥疮和人体表面溃疡(如糖尿病患者的皮肤溃疡)等，因此本发明的创面包括各种诱因导致的皮肤或皮肤连带皮下组织所构成的创面，其既可以是一些容易愈合的创面，也可以是难治或难愈性创面。在某些实施方式中，其为糖尿病性创面，如糖尿病性全层皮肤缺损。

如本文所用，“治疗”被定义为应用或施用于来自患者个体，所述患者个体具有疾病、疾病症状或疾病的诱因，可以达到治愈、愈合、缓解、减轻、改变、补救、改善、改良或影响疾病、疾病症状或疾病诱因的目的。

所述“患者”、“受试者”和“个体”在本文中可互换使用，并且是指待治疗的哺乳动物受试者，优选人类患者。在一些情况下，本发明的方法可用于实验动物、兽医应用和开发针对疾病的动物模型，包括但不限于啮齿动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠，以及非人灵长类。

下文将以具体实施例的方式阐述本发明。应理解，这些实施例仅仅是阐述性的，并非意图限制本发明的范围。实施例中所用到的方法和材料，除非另有说明，否则均为本领域常规的材料和方法。

实施例

实施例1：

1材料与方法：

1.1编码SDF-1αmodRNA的构建

从美国国立生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation,NCBI)网站中查找到相应的SDF-1α的编码序列(Coding Sequence,CDS)序列如SEQ ID NO:1所示。

在CDS序列前后添加5’和3’非翻译区和120个重复A序列的polyA尾巴等序列，得到的序列如SEQ ID NO:2所示，之后插入到PUC57质粒载体；将上述质粒转化到DH5α大肠杆菌中扩增；提取质粒并使用限制性内切酶(XhoI，Thermo，ER0691)将质粒线性化，对所需片段进行PCR扩增；PCR的产物体外转录(T7体外转录试剂盒，Invitrogen，AMB13345)，转录过程中mRNA上的UTP用N1甲基假尿苷(TriLink BioTechnologies，N-1081-5)替代，对mRNA进行ARCA帽子类似物加帽(NEB，S1411S)，得到的SDF-1αmodRNA的序列如SEQ ID NO:3所示(加帽等修饰未示出)，然后对体外转录的产物进行纯化和磷酸化(NEB，M0289S)修饰，并通过Nanodrop和生物分析仪进行RNA浓度和质量控制。

用于预实验的GFP modRNA的构建方法同上，仅用如SEQ ID NO:4所示的GFP CDS序列替换SDF-1αCDS序列。

1.2小皮片的制取

首先取刚出生的SD大鼠，脱颈处死后，取背部皮肤，生理盐水漂洗3次，碘伏浸泡10min，再次用生理盐水漂洗3次，最后置于含有双抗的PBS溶液中备用。取出乳鼠皮肤，用手术刀片裁成0.25*0.25cm大小的小皮片，置于0.25％中性蛋白酶溶液中，37℃摇床过夜后，取出小皮片，用显微镊分离上皮与皮下组织，取上皮组织备用。

1.3小皮片转染modRNA

Opti-MEM培养基：厂家Gibco，货号31985070；Lipofectamine MessengerMAX：厂家Invitrogen，货号LMRNA015。

取备用小皮片置于96孔板中(每孔1片)，按照如下转染体系现配现用转染液：

方法1：2μl体系配制

A管：2μl GFP modRNA+98μl optiMEM B管：5μl MAX+95μl optiMEM

方法2：4μl体系配制

A管：4μl GFP modRNA+96μl optiMEM B管：10μl MAX+90μl optiMEM

方法3：6μl体系配制

A管：6μl GFP modRNA+94μl optiMEM B管：15μl MAX+85μl optiMEM

方法4：8μl体系配制

A管：8μl GFP modRNA+92μl optiMEM B管：20μl MAX+80μl optiMEM

A管和B管室温静置5min，A+B管混合后配成转染液室温静置25min，每孔加入100μl转染液，分别转染2/4/8/12/24/48/72h后，取出小皮片，置于荧光显微镜下观察转染效果。确定最佳转染时间与转染剂量后，按照上述方法转染SDF-1αmodRNA。

1.4糖尿病难愈性创面构建

选取体重在200-250g健康SPF级雄性SD大鼠，适应性饲养1周，大鼠随机分笼，自由饮水，标准饲料喂养，并保持饲养室通风良好、环境清洁、光照充足、湿度适宜。大鼠禁食(不禁水)12h，模型组一次性左下腹腔注射STZ 60mg/kg(STZ用预冷的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液以2％浓度溶解)建立2型糖尿病动物模型，正常组给予等体重剂量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。造模72h后，于大鼠尾静脉取血，使用血糖仪及配套血糖试纸进行随机血糖检测。当血糖≥16.7mmol/L，并出现多饮多食多尿症状时，符合糖尿病诊断标准，判定为糖尿病大鼠。造模成功后，每日观察大鼠状态变化，记录其进食量和饮水量，每周测量体重，每2周测定血糖一次。大鼠糖尿病模型建立成功后4周进行全层皮肤缺损模型的构建。在无菌条件下大鼠背部正中用剪刀作直径大小2cm全层皮肤缺损创面，剪去皮下筋膜，按照不同分组植入小皮片(图1)。按照创面不同处理方式分为4组，分别是对照组(Control组，无任何处理)、MS组(创面植入未转染的小皮片)、MS+Luc组(创面植入转染空白modRNA皮片即LuciferasemodRNA)、MS+SDF组(创面植入转染SDF-1αmodRNA皮片)，同时按照植入皮片6张和9张的数量不同又可分为MS6、MS9、MS+Luc6、MS+Luc9、MS+SDF6、MS+SDF9，共6小组。

1.5 Western blot分析蛋白的表达

取组织样本放匀浆器中，低温匀浆；加入裂解液在冰上放置15min，4℃下3000r/min离心5min，超声裂解3次，每次5s，再次4℃下12000r/min离心30min，取上清。以BSA为标准，用Bradford法对上清进行蛋白定量。取20μg蛋白样品，10％SDS-PAGE电泳，100V转膜1.5h至硝酸纤维素薄膜，室温下封闭液中封闭2h；一抗4℃过夜，二抗室温下孵育2h。洗膜后，曝光并用图像分析测定各带吸光度(A)值作定量分析。

1.6免疫荧光技术检测蛋白表达

分别取上述各组的创面组织，放在预先制备好的锡箔纸模具中，模具中充满OCT包埋剂，迅速置于液氮中，冰冻切片机切片，丙酮固定20-30min后，PBS清洗，0.5％H₂O₂稀释的甲醇室温下20min，灭活内源性酶，PBS清洗3次。10％山羊血清封闭37℃下作用30min。PBS洗3次，一抗稀释液4℃过夜。PBS清洗3次，二抗37℃孵育2h，PBS洗3次，DAPI核染5min，PBS洗3次，抗荧光淬灭剂封片后，荧光显微镜下观察。

1.7用qRT-PCR技术检测相关基因的表达

取各组创面组织充分匀浆；用Trizol试剂抽提总RNA，取总RNA 5μL，在20μL逆转录体系中合成cDNA，以5μL cDNA为模板加入靶基因上下游引物，在50μL体系中进行PCR扩增。

1.8创面愈合率计算

在术后第7、14、21天分别取各组的大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后拍照记录创面愈合情况，然后将照片用Image J软件分析，并分别计算拍照影像各组创面愈合率。创面愈合率＝(创面总面积-创面未愈合面积)/创面总面积×100％。

1.9免疫组化染色

按照既往实验方法，分别取术后21天各组创面组织进行组化、染色。

2.0数据统计分析

所有数据以均数±标准差(SD)表示。所有统计分析均采用SPSS 20.0统计学分析，采用单因素方差分析比较对照组和治疗组数据，非参数结果采用Kruskal-Wallis H检验进行比较。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1体外实验优化小皮片转染化学修饰的SDF-1αmRNA的表达

为了优化化学修饰SDF-1αmRNA在小皮片中的表达和转染效率，在前期的研究基础上，我们设计并评估了四种不同的转染体系。首先我们构建GFP modRNA，发现当GFP modRNA含量从2μl增加到6μl时(图2A，图7-9)，小皮片中的细胞转染效率显著提高。然而，当GFPmodRNA的含量增加到8μl时，结果显示，与6μl的GFP modRNA相比，GFP modRNA的转染效率降低，观察到GFP蛋白的荧光平均强度信号下降。为了进一步验证转染时间与转染效果的关系，我们在荧光显微镜下观察不同时期GFP转染的效果。6μl modRNA转染体系在前24h随着转染时间的延长，其转染效果增强，并在24h达到峰值，随后GFP的荧光表达量随着时间的延长逐渐下降(图2B)。本研究结果与前期实验结果一致。我们利用6μl modRNA转染体系以同样的方式进行SDF-1αmodRNA转染，在转染后立即用ELISA法检测SDF-1α的分泌量。在转染空白对照组(luciferase modRNA)的小皮片中，SDF-1α只在基本水平上表达，而SDF-1α在转染了SDF-1αmodRNA 48h后浓度显著升高(图2C)。结果表明，用SDF-1αmodRNA转染小皮片后，SDF-1α蛋白的表达量最高。

2.2小皮片转染SDF-1αmodRNA对大鼠全层皮肤缺损模型创面愈合有促进作用

为了进一步检验小皮片转染SDF-1αmodRNA后对大鼠全层皮肤缺损愈合的影响。与对照组相比，糖尿病组血糖水平升高(图10)。在每只大鼠背部皮肤上制作直径2cm的全层皮肤创面，并立即拍摄创面开放区域(图3A)。随后对创面进行不同类型的治疗，在移植过程中对创面进行拍照观察，并使用Image j进行分析。各组均未见渗液、脓性引流等感染迹象。与其他各组相比，SDF+MS 9组在治疗后第7天创面面积较小(图3B-C)。Luc+MS 9组与SDF+MS 6组创面面积大小无统计学差异，且治疗14d后SDF+MS 9组创面面积小于SDF+MS 6组(图3D)。治疗后21天左右，SDF+MS 9组几乎所有的创面均已愈合，而其他各组，特别是对照组，仍未愈合(图3E)。结果表明，小皮片转染SDF-1αmodRNA后可促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面的愈合。此外，在H&E染色中，SDF+MS 9组的表达与其他组有差异。此外，SDF+MS 9组创面在术后21天出现新表皮形成和明显的血管化(图4A-G)。此外，Masson三色染色显示，SDF+MS组胶原纤维密集排列，密集染色，尤其是SDF+MS 9组，其他组胶原纤维排列不规则，松散排列(图4H-N)。

2.3 SDF-1αmodRNA转染小皮片后可促进血液灌注，抑制细胞凋亡

在随后的实验中我们评估了转染SDF-1αmodRNA的皮肤促进伤口愈合的效果。CD31免疫染色用于检测创面的血管生成状态，因为创面愈合需要新血管化(图5A)。DAPI和CD31染色结果表明，SDF-1α可显著增加创面新生血管数量，提示SDF-1α可促进创面愈合，促进血管生成。定量分析发现，SDF-1α处理组的荧光强度高于对照组，MS9和Luc+MS 9处理组的荧光强度显著高于对照组。而MS6与对照组的荧光强度无统计学差异，Luc+MS6与对照组的荧光强度无统计学差异(图5B)。此外，免疫荧光分析显示，转染SDF-1αmodRNA的小皮片在术后21天比对照组细胞增殖增加，而对照组细胞凋亡(图6A-D)。基于这些结果，SDF-1α转染小皮片后，使得皮片中的成纤维细胞有效分泌SDF-1α，表明这些细胞在伤口愈合中发挥关键作用。

3结论

本研究提供了一份具备可行性及科学性的研究报告，以探索研究modRNA疗法作为治疗全层皮肤缺损的潜在有效方法。重要的是，modRNA首次被证实在适当的浓度和转染时间可以有效地转染到皮肤组织中。我们的研究表明，modRNA与小皮片的组合治疗促进全层皮肤缺损的糖尿病模型组织的皮肤再生。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种皮片或皮瓣，其特征在于，所述皮片或皮瓣转染有modRNA。

2.根据权利要求1所述的皮片或皮瓣，其特征在于，所述转染的方式为脂质体转染、纳米颗粒介导、粒子轰击、微注射或电穿孔。

3.根据权利要求1所述的皮片或皮瓣，其特征在于，所述转染的方式是将皮片或皮瓣浸于含有modRNA的转染液中。

4.根据权利要求1所述的皮片或皮瓣，其特征在于，所述modRNA翻译促进创面愈合的蛋白或多肽。

5.根据权利要求4所述的皮片或皮瓣，其特征在于，所述modRNA为SDF-1α、PDGF、TGF、FGF、EGF、IGF或VEGF modRNA。

6.根据权利要求1所述的皮片或皮瓣，其特征在于，所述创面是由切割伤、挫伤、烧伤、化学性灼伤、褥疮或糖尿病导致的皮肤溃疡形成的。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述皮片为表层皮片、中厚皮片或全厚皮片；所述皮瓣为单纯皮瓣、筋膜皮瓣、复合皮瓣、联合皮瓣或组合组织皮瓣。

8.一种皮片或皮瓣的处理方法，其特征在于，包含用modRNA转染皮片或皮瓣的步骤。

9.权利要求1-7任意一种皮片或皮瓣在制备促进创面愈合的产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述创面是由切割伤、挫伤、烧伤、化学性灼伤、褥疮或糖尿病导致的皮肤溃疡形成的。

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