CN115876995A - 一种免疫荧光层析动力学检测方法及系统 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种免疫荧光层析动力学检测方法，过程为:将待测样品加到测试卡的样品垫上并开始计时，同时荧光检测装置按照设定时间间隔，连续测量观测区C线和T线的荧光强度值C和T，并计算T/C比值，建立T/C值与时间关系曲线；根据该关系曲线，计算T/C值的一阶导数，以该一阶导数的峰值区间段作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数；预先以同样的方法对不同浓度标准品进行测试，建立标准品反应速率指数k与目标分子浓度c关系标准曲线；根据该标准曲线计算待测样品中目标分子浓度。本发明的速率法较现在临床使用的终点法更为准确、快捷，避免HOOK效应，排除了检测计时不准的影响，受测试卡批次、检测温度的影响较小。

Description

一种免疫荧光层析动力学检测方法及系统

技术领域

本发明属于生物医学体外检测技术领域，具体涉及一种免疫荧光层析动力学检测方法及系统。

背景技术

荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应以及荧光标记技术的膜检测技术。抗原－抗体反应可分为两个阶段，第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，反应很快，几秒钟至几分钟即可完成，但无可见反应；第二阶段为抗原与抗体反应的可见阶段，出现凝集、沉淀、补体结合等反应，这一阶段的反应比较慢，需要几分钟至几十分钟。荧光免疫层析技术以固定有检测线和质控线的条状纤维层析材料为固定相，测试液即液态样品为流动相，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。层析条的一端到另一端依次设置样品垫、结合垫、检测线和质控线。检测线区域包被抗体或包被抗原，质控线区域包被抗抗体，荧光标记抗体或抗原装载于结合垫。流动相移动时，样本中的被测分子首先与负载在结合垫上的荧光标记抗体或抗原结合并带动其流动，随后在检测线区域或质控线区域发生进一步免疫反应。反应完成后，使用荧光分析装置对测试卡进行分析。现有免疫荧光层析检测方法都是采用终点法，在完成层析后的指定时间点对层析结果进行测试，这是因为目前免疫荧光层析测试装置都是采用机械扫描定时采集信号的方式检测荧光强度，只能在某一点进行测试。常用的免疫荧光免疫层析测试均测量的是免疫反应最适期的信号值，其基本过程为：加入样本后，反应确定的时间(一般为10-15分钟)时，扫描反应区域，得到T/C值，以浓度为横坐标，T/C为纵坐标计算出测试结果。

但由于免疫层析的方法学原因，现有方法存在如下问题：

一是可能出现假阴性。这是因为抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应，在抗原抗体比例相当或抗原稍过剩的情况下，反应最彻底，形成的免疫复合物沉淀最多、最大，而当抗原抗体比例超过此范围时，反应速度和沉淀物量都会迅速降低甚至不出现抗原抗体反应，抗原抗体反应曲线表现为倒扣的钩状曲线，称为HOOK效应。但实际测试时，由于被测试物中目标分子浓度未知，当样本中抗原量过大时，当10-15分钟时免疫反应进入后期，可能因为HOOK效应荧光强度下降，造成测试错误，导致假阴性结果。

二是生产工艺问题，产品批次存在差别，导致测试误差较大，变异系数(CV值)可达20％，这种测试目前只能用于POCT的定量、半定量检测，一般用于临床快速筛查。造成这种现象的主要原因有：测试条用的层析材料如硝酸纤维素膜(NC膜)本身具有不均匀性，被测试物如血清、血浆的粘度的变化，以及样品垫、结合垫的的生产工艺差别，都会影响到测试结果。样品流速不均一是CV值大的一个重要原因。

三是不准确定时。免疫反应过程实际上是一个变化的过程，在不同的时间段荧光强度不断变化，故产品说明书强调必须进行准确定时测试，对于自动化仪器可以克服这个问题，但对于手工测试要准确定时很难做到，不准确定时是造成CV值大的因素之一。

此外，采用机械扫描结构的仪器成本较高，测试速度慢，故障率也会增高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种免疫荧光层析动力学检测方法。

其技术方案如下：

一种免疫荧光层析动力学检测方法，其过程为：将待测样品加到测试卡的样品垫上并开始计时，同时荧光检测装置按照设定时间间隔_△t，连续测量测试卡观测区C线和T线的荧光强度值C和T，并计算T/C值y，建立y与时间t关系曲线，该曲线的方程为y＝f(t)；

计算T/C值的一阶导数y'＝f'(t)，以该一阶导数的峰值区间段作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数k_s；

预先以同样的方法对标准品进行测试，分别得到标准品反应速率指数k，建立标准品反应速率指数k与目标分子浓度c关系标准曲线方程k＝φ(c)；

将待测样品反应速率指数k_s代入标准曲线方程，计算待测样品中目标分子浓度c_s。

作为优选，上述待测样品反应速率指数k_s取自所述线性反应段内任意时间点的一阶导数值y'，或所述线性反应段内的一阶导数最大值y'_max，或所述线性反应段内一阶导数平均值

作为优选，上述峰值区间段的确定方法为，先确定一阶导数最大值y'_max以及对应的时间点t_max，然后在t_max之前和之后，寻找与y'_max相差在_△k以内的一阶导数值对应的连续时间段，该连续时间段包含t_max时刻在内，该连续时间段即为峰值区间段。

作为优选，上述线性反应段的选取时间在反应计时开始的20～800s内。

作为优选，测试开始后，同步计算一阶导数y'并动态更新，直至发现y'开始下降，即终止测试。

作为优选，上述荧光检测装置为荧光成像装置，包括荧光激发光源、图像采集模块和图像处理模块；

所述图像采集模块包括带有滤光片或滤光膜的镜头、图像传感器；

所述图像传感器的信号输出端连接所述图像处理模块的信号输入端，从而将采集的图像信号传输给所述图像处理模块以进行图像处理；

所述荧光检测装置在进行测量时，所述荧光激发光源发出的激发光照射到所述测试卡观测区，所述测试卡观测区发出的光线进入所述镜头后传输至所述图像传感器，从而在所述图像处理模块生成荧光图像；

所述图像处理模块分别提取荧光图像中对应C线和T线区域的颜色强度，得到荧光强度值C和T。

本发明的目的之二在于提供一种测试系统。其技术方案为：

一种测试系统，包括样品台和荧光成像装置，该荧光成像装置包括荧光激发光源、图像采集模块和图像处理模块；

所述图像采集模块包括带有滤光片或滤光膜的镜头、图像传感器；

所述图像传感器的信号输出端连接所述图像处理模块的图像信号输入端，从而将采集的图像信号传输给所述图像处理模块以进行图像处理；

所述样品台位于所述荧光激发光源的出射光方向上，所述镜头朝向所述样品台；

所述图像处理模块包括存储器、处理器，以及存储在所述存储器上并能够在所述处理器上执行的程序；

所述程序在运行时执行以下处理步骤：

从来自所述图像传感器的图像信号分别识别C线区域和T线区域，提取各区域的像素点的颜色强度值并计算总和，作为荧光强度值C和T，再计算T/C比值。

作为优选，上述测试系统还包括计时器，该计时器的时间信号输出端连接所述图像处理模块的时间信号输入端；

所述程序在运行时还执行如下步骤：根据计算得到的T/C比值以及所述计时器输入的时间信息，生成T/C比值与时间关系曲线方程y＝f(t)；

计算T/C值的一阶导数y'＝f'(t)，确定该一阶导数的峰值区间段，作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数k_s。

附图说明

图1为抗原抗体比例递增的条件下，典型的免疫反应曲线；

图2为本发明的速率法检测流程示意图；

图3为测试系统的结构示意图；

图4为图像处理模块的结构示意图；

图5为采用速率法测得的1.65mIU/L标准品溶液的测试曲线，图中蓝色为C反应线动态曲线，黑色为T反应线动态曲线，绿色为T/C值-时间动态曲线；

图6为采用速率法测得的13mIU/L标准品溶液的测试曲线，图例同图5；

图7为采用速率法测得的100mIU/L标准品溶液的测试曲线，图例同图5；

图8为采用速率法测得的1.65mIU/L、13mIU/L和100mIU/L标准品溶液的T/C值-时间动态曲线对比；

图9为采用速率法测得的1.65mIU/L标准品溶液的T/C值-时间动态曲线(蓝色)以及T/C值斜率-时间曲线(红色)，图中仅截取包含a-b期的部分时间段；

图10为采用速率法测得的13mIU/L标准品溶液的T/C值-时间动态曲线(蓝色)以及T/C值斜率-时间曲线(红色)，图中仅截取包含a-b期的部分时间段；

图11为采用速率法测得的100mIU/L标准品溶液的T/C值-时间动态曲线(蓝色)以及T/C值斜率-时间曲线(红色)，图中仅截取包含a-b期的部分时间段；

图12为采用速率法由系列浓度标准溶液测试结果建立的反应速率指数与目标分子浓度关系的双对数坐标拟合标准曲线。

具体实施方式

以下结合实施例和附图对本发明作进一步说明。

免疫反应中，保持抗体量不变，抗原量逐渐递增，检测沉淀物形成量，可以得到如图1的免疫反应曲线。根据参与反应的抗原抗体的比例，曲线大致可以分为三个阶段，包括：抗原量远低于抗体量，抗体过剩，反应曲线表现为抗体过剩带；抗原量与抗体量大致相当，反应曲线表现为等价带；抗原量远多于抗体量，抗原过剩，反应曲线表现为抗原过剩带。

由于免疫反应在测试阶段处于动态变化状态，受反应时间、抗原与抗体的相对反应比例、温度等因素的影响，尽管现有技术检测反应终点时的荧光强度值，采用T/C值的计算方法来进行定量计算，但实际测试中CV相对较大。由于实际测试时样本浓度往往是未知的，因此现有的免疫荧光层析定量分析检测技术中采取的终点法不可靠，在设定的反应终点，T线区免疫反应体系可能处于抗体过剩带、等价带或者抗原过剩带的任意一个状态。因此改进了检测方法。

如图2，一种免疫荧光层析动力学检测方法，过程为：将待测样品加到测试卡的样品垫上并开始计时，同时荧光检测装置按照设定时间间隔_△t，连续测量测试卡观测区C线和T线的荧光强度值C和T，并计算T/C比值y，通过函数拟合的方式建立y与时间t关系曲线和方程y＝f(t)。计算T/C值的一阶导数y'＝f'(t)，以该一阶导数的峰值区间段作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数k_s。预先以同样的方法对不同浓度标准品进行测试，分别得到标准品反应速率指数k，建立标准品反应速率指数k与目标分子浓度c关系标准曲线方程k＝φ(c)；将待测样品反应速率指数k_s代入标准曲线方程，计算待测样品中目标分子浓度c_s。

根据免疫反应动力学原理，T/C值处于稳定增大状态的时间段，免疫反应处于初始阶段，此时检测线区域抗原与抗体的比例差很大，即抗体绝对量远远大于抗原量时，其抗体绝对量变化和抗体免疫活性对反应影响很小，抗原抗体反应速度很快,而且不受到其他因素影响。此时，免疫反应进入到图1中第一阶段的a～b段，即上文所说的线性反应段。本发明采用从抗原抗体开始反应就进行连续测试的方式，获取抗原抗体的反应连续动态信息，在免疫层析反应过程中，开始反应时仅少量目标分子随液体流动到T线区域，因此T线区域抗原与抗体的比例差很大，反应不受到其他因素如温度、PH值、抗体的量的影响，能够真实反应免疫反应状态。并且，该方法的测试结果不受计时准确性的影响，因此，基于本发明的检测方法称为速率法。

所述线性反应段的确定方式为，上述T/C值的一阶导数的峰值区间段的确定方法为，先确定一阶导数最大值y'_max以及对应的时间点t_max，然后在t_max之前和之后，寻找与y'_max相差在_△k以内的一阶导数值对应的连续时间段，该连续时间段包含t_max时刻在内，该连续时间段即为峰值区间段。根据不同的检测对象以及荧光检测装置的仪器调试情况，设定适当地△k值，一般应使△k<0.05，更精密地△k取值为0.01甚至0.001。

上述待测样品反应速率指数k_s取自所述线性反应段内任意时间点的一阶导数值y'，或所述线性反应段内的一阶导数最大值y'_max，或所述线性反应段内一阶导数平均值

根据不同的被测物以及样本粘度，根据C线能被仪器稳定检测出的时间为反应开始计时点。所述线性反应段的选取时间在反应计时开始的30～800s内。

为节省时间，测试开始后，同步计算一阶导数y'并动态更新，直至发现y'开始下降，即下降至y'_max-△k，即终止测试。此时，反应已经越过一阶导数的峰值，因此本次测试已有的测试数据足以确定线性反应段，满足计算要求。

所述荧光检测装置的总的测量持续时间一般在12min以内。由于测试加样后，液体顺着测试卡流动到T线和C线有一定时间差，因此，可以从检测到C线荧光强度跃迁增强开始，取这之后的时间段为有效测量时间。

所述荧光检测装置的测量时间间隔_△t满足0.01s≤_△t≤10s；或者更优选地，0.01s≤_△t≤0.1s，或0.1s≤_△t≤0.5s，或0.5s≤_△t≤2s，或2s≤_△t≤5s，或5s≤_△t≤10s。

更为密集地采集数据，能够获得更多信息，从而使建立的T/C值与时间关系曲线更为平滑。一般地，荧光检测装置的测量时间间隔_△t在0.1s～2s。

与现有常见地免疫荧光层析分析仪采用机械扫描不同，本实施例中，荧光检测装置为荧光成像装置。如图3和4，基于该荧光成像装置的测试系统包括：样品台1和荧光成像装置，该荧光成像装置包括荧光激发光源2、图像采集模块3和图像处理模块4。所述图像采集模块3包括带有滤光片或滤光膜的镜头3a、图像传感器3b。所述图像传感器3b的信号输出端连接所述图像处理模块4的图像信号输入端，从而将采集的图像信号传输给所述图像处理模块4以进行图像处理。

本发明使用荧光成像装置代替机械扫描，一次拍照能够获取测试卡整个观测区的荧光图像，因而极大地提高采样频率，实现荧光强度实时检测。

如图3，所述样品台1位于所述荧光激发光源2的出射光方向上，所述镜头3a朝向所述样品台1。所述图像处理模块4包括存储器4a、处理器4b，以及存储在所述存储器4a上并能够在所述处理器4b上执行的程序。所述程序在运行时执行以下处理步骤：

从来自所述图像传感器3b的图像信号分别识别C线区域和T线区域，提取各区域的像素点的颜色灰度值并计算总和，作为荧光强度值C和T，再计算T/C比值。

图像处理技术为现有成熟技术，在此不再详述。

更进一步地，为便于准确计时，该测试系统还包括计时器5，该计时器5的时间信号输出端连接所述图像处理模块4的时间信号输入端。所述程序在运行时还执行如下步骤：根据计算得到的T/C比值以及所述计时器5输入的时间信息，生成T/C比值与时间关系曲线，计算T/C值的一阶导数y'＝f'(t)，确定该一阶导数的峰值区间段，作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数k_s。

在自动化测试系统中，还设置控制器，该控制器用于控制荧光激发光源2、图像采集模块3、图像处理模块4和计时器5工作。具体地，所述荧光检测装置在进行测量时，控制器控制所述荧光激发光源2按照设定的测量时间间隔_△t发出的脉冲激发光，激发光照射到所述测试卡观测区，所述测试卡观测区发出的光线进入所述镜头3a，并经滤光后传输至所述图像传感器3b，或滤光后进入所述镜头3a，从而在所述图像处理模块4生成荧光图像。所述图像处理模块4分别提取荧光图像中对应C线和T线区域的颜色强度，得到荧光强度值C和T。

图像处理模块4可以是能够运行上述程序的计算机。为展示测试结果，计算机连接有显示器。控制器可以由计算机软件和控制电路组成。

测试系统可以集成设计。在样品台1上设置检测开关，检测开关识别到有测试卡放置到样品台1上时，发出识别信号到控制器，控制器发出指令给计时器5，计时器5开始计时。当然，也可以从测试系统检测到C线荧光强度跃迁增强开始，作为计时零点。

为提高测试效果，所述荧光激发光源2可以为激光线光源，其照射到测试卡观测区的光斑呈直线状，光斑沿着观测区的层析液前进方向同时照亮T线和C线区域。这样，整个观测区的激发光强度一致，有利于提高测试准确性。

以免疫层析检测促甲状腺激素(TSH)为例，说明本方法(速率法)的原理及效果。

实验材料与仪器：TSH标准品(国家标准物质资源平台，平台编号：D028267规格：3.12mIU/支)

促甲状腺激素(TSH)免疫荧光层析测试卡，购自广州万孚生物技术股份有限公司。测试卡由试纸条、塑料盒组成。试纸条上的主要成份有:样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC板及其他试纸条支持物。其中硝酸纤维素膜上包被有TSH单克隆抗体和羊抗兔IgG,标记垫含有荧光标记TSH单克隆抗体和兔IgG。样本稀释液主要成分为磷酸盐缓冲液(PBS)。

速率法的测试仪器为实验室自制，结构如上述测试系统。

终点法使用干式荧光免疫分析仪，购自广州万孚生物技术股份有限公司，产品号FS-205。按照厂家说明书进行测试。

(一)不同浓度样本的免疫荧光层析反应及反应速率指数-浓度关系曲线建立测试过程为：

(1)运行测试系统，取若干TSH测试卡放置到样品台1上，按说明书要求，分别吸取75ul标准品到样品稀释管中，混匀，配制为0.07mIU/L、0.47mIU/L、1.65mIU/L、4.3mIU/L、0.47mIU/L、6.5mIU/L、13mIU/L、42.6mIU/L、100mIU/L的一系列梯度浓度标准溶液；

(2)吸取75ul标准溶液到测试卡加样孔中，通过仪器精确定时，连续测试16min；

(3)按每秒一张的频次采集荧光图像，并连续计算出C区和T区的荧光强度，计算出T/C值，生成C线动态曲线、T线动态曲线、T/C值与时间关系曲线，以及T/C值的斜率变化曲线；

(4)确定线性反应段，确定某次测试的T/C值作为反应速率指数k，用于浓度计算。

图5～7示出1.65mIU/L、13mIU/L、100mIU/L三个浓度的测试曲线。不同浓度样品测试结果显示，T线荧光强度先增大后趋于稳定。对于低浓度(1.65mIU/L)样品，在测试的时间段内C线荧光强度始终低于T线荧光强度，但在持续增大。对于中浓度(13mIU/L)样品，初始阶段T线荧光强度大于C线荧光强度，后期C线荧光强度增大至大于T线荧光强度。对于高浓度(100mIU/L)样品，C线荧光强度很快增大至大于T线荧光强度。

三种样品的T/C值与时间关系曲线如图8所示。从图中可以看出，测得的T/C值与时间点关系密切。由于终点法采用常规机械扫描，该方法是以15分钟时的T/C值作为测量值，并带入预先建立的T/C值-浓度曲线方程计算，因此是否准确定时测试直接影响到测试结果的准确性。同时，其T/C值-浓度曲线是以反应终点T/C值和浓度值为曲线坐标，本身也存在测试结果不够准确的问题。

本发明的速率法是建立与T/C值相关的反应速率指数k与浓度关系的测试方法。如图9～11所示，虽然三个实验组分别使用不同浓度的样品进行测试，但可以发现，无论哪种浓度的样品，在反应初期即抗原抗体反应第一阶段的a-b期，其T/C值相对时间的斜率变化有一段直线区，即T/C值相对时间的斜率保持稳定。反应的a-b期即为本发明所说的线性反应段。不同在于，低浓度样品测试结果显示，T/C值相对时间的斜率即一阶导数y'在前期增大，中期保持稳定，后期缓慢减小；而中浓度和高浓度样品测试结果显示，一阶导数y'在反应前期迅速达到最大值，后期逐渐减小。

因此，如何确定反应的a-b期即为决定本方法测试准确性的关键。本实施例中，选择T/C值与时间的关系曲线斜率值即一阶导数y'变化不超过2％的反应阶段为a-b期。

标准曲线建立：

使用上述系列梯度浓度标准溶液作为检测样品的测试结果，确定反应速率指数k，取反应速率指数k的对数log(k)与浓度c的对数log(c)，于双对数坐标系下绘制散点图，通过三次多项式曲线拟合得到反应速率指数-目标分子浓度标准曲线及函数方程，如图12所示，得到的函数方程为:

y＝a+bx，a＝1.74，b＝1.36；

其中y＝log(c)，x＝log(k)。

测试时，根据测得的待测样品反应速率指数k_s，代入上述方程计算出浓度。

(二)速率法和终点法检测血清样品中TSH浓度

取临床检测确认的高、正常和低浓度TSH血清样品，分别采用速率法和终点法进行测试。

(1)准确性测试

取同一血清样品(4.1mIU/L)，按照上述方法进行测试。速率法得到的反应速率指数k_s代入反应速率指数-目标分子浓度标准曲线方程，计算TSH浓度。再与终点法测得的TSH浓度对比，发现两种方法检测结果的相关系数为99.1％。对比结果表明速率法检测结果是准确的。

(2)重复性测试

分别使用不同浓度的血清样品进行测试，每种样品使用一种方法重复检测5次，计算变异系数，如表1。可以看出，速率法检测结果更为稳定，重复性更好。

表1速率法与终点法检测结果CV值对比

(3)反应的最短测试时间

比较两种方法最终确定的a-b期出现时间，即最短有效测试时间，结果如表2所示。可以看出，速率法能够更快给出测试结果，特别是样品浓度相对较高的情况下，速率法测试时间远少于终点法。

表2速率法与终点法检测结果有效测试时间对比

(4)不同实验条件下的测试

用同一个标准曲线和同一样品(4.1mIU/L)，使用不同批次的测试卡或不同效期的测试卡，或在不同温度条件下进行速率法验证测试，比较测得的样品浓度CV值。对于3个不同批次的测试卡，CV＝9.8％；对于3个不同效期的测试卡，CV＝10.5％；使用同一批次的测试卡分别在10℃、25℃、39℃进行测试，CV＝6.5％。该验证测试结果表明，使用速率法进行测试，能够较好地克服测试卡生产工艺导致的偏差以及检测温度条件的影响，具有优异地稳定性。因此，在大批量检测时，使用速率法能够较好地克服测试卡批次差异和温度条件的变化，检测结果可信度高。

本发明的有益效果：

(1)本发明的速率法使用抗原抗体反应初始阶段的荧光强度数据，能够大大降低样本浓度差异带来的检测结果偏差，更真实的反应出抗原抗体反应的真实情况，在较大的样本浓度范围内都保持较高准确性，避免HOOK效应导致的假阴性问题；

(2)采用速率与浓度为反应曲线，检测结果准确性与反应时间无关，排除了现有技术中层析测试结果受检测时间影响的问题；

(3)缩短了测试时间，特别是在样品浓度相对较高的情况下；

(4)由于受测试卡批次偏差、检测温度的影响较小，受抗体绝对数量影响较小，所以对检测试剂盒的反应环境要求不高，对生产工艺要求也相对减低，有助于大大降低生产成本；

(5)测试仪器简单化，成本和体积也大为降低。

最后需要说明的是，上述描述仅仅为本发明的优选实施例，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不违背本发明宗旨及权利要求的前提下，可以做出多种类似的表示，这样的变换均落入本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种免疫荧光层析动力学检测方法，其过程为：将待测样品加到测试卡的样品垫上并开始计时，同时荧光检测装置按照设定时间间隔_△t，连续测量测试卡观测区C线和T线的荧光强度值C和T，并计算T/C值y，建立y与时间t关系曲线，该曲线的方程为y＝f(t)；

计算T/C值的一阶导数y'＝f'(t)，以该一阶导数的峰值区间段作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数k_s；

预先以同样的方法对标准品进行测试，分别得到标准品反应速率指数k，建立标准品反应速率指数k与目标分子浓度c关系标准曲线方程k＝φ(c)；

将待测样品反应速率指数k_s代入标准曲线方程，计算待测样品中目标分子浓度c_s。

2.根据权利要求1所述的免疫荧光层析动力学检测方法，其特征在于：所述待测样品反应速率指数k_s取自所述线性反应段内任意时间点的一阶导数值y'，或所述线性反应段内的一阶导数最大值y'_max，或所述线性反应段内一阶导数平均值

3.根据权利要求1或2所述的免疫荧光层析动力学检测方法，其特征在于：所述峰值区间段的确定方法为，先确定一阶导数最大值y'_max以及对应的时间点t_max，然后在t_max之前和之后，寻找与y'_max相差在_△k以内的一阶导数值对应的连续时间段，且该连续时间段包含t_max时刻在内，该连续时间段即为峰值区间段。

4.根据权利要求3所述的免疫荧光层析动力学检测方法，其特征在于：所述线性反应段的选取时间在反应计时开始的20～800s内。

5.根据权利要求3所述的免疫荧光层析动力学检测方法，其特征在于：测试开始后，同步计算一阶导数y'并动态更新，直至发现y'开始下降，即终止测试。

6.根据权利要求1或2所述的免疫荧光层析动力学检测方法，其特征在于：所述荧光检测装置的测量时间间隔_△t满足0.01s≤_△t≤10s。

7.根据权利要求1或2所述的免疫荧光层析动力学检测方法，其特征在于：所述荧光检测装置的测量时间间隔_△t满足0.1s≤_△t≤2s。

8.根据权利要求1或2所述的免疫荧光层析动力学检测方法，其特征在于：所述荧光检测装置为荧光成像装置，包括荧光激发光源(2)、图像采集模块(3)和图像处理模块(4)；

所述图像采集模块(3)包括带有滤光片或滤光膜的镜头(3a)、图像传感器(3b)；

所述图像传感器(3b)的信号输出端连接所述图像处理模块(4)的信号输入端，从而将采集的图像信号传输给所述图像处理模块(4)以进行图像处理；

所述荧光检测装置在进行测量时，所述荧光激发光源(2)发出的激发光照射到所述测试卡观测区，所述测试卡观测区发出的光线进入所述镜头(3a)后传输至所述图像传感器(3b)，从而在所述图像处理模块(4)生成荧光图像；

所述图像处理模块(4)分别提取荧光图像中对应C线和T线区域的颜色强度，得到荧光强度值C和T。

9.一种测试系统，其特征在于：包括样品台(1)、和荧光成像装置，该荧光成像装置包括荧光激发光源(2)、图像采集模块(3)和图像处理模块(4)；

所述图像采集模块(3)包括带有滤光片或滤光膜的镜头(3a)、图像传感器(3b)；

所述图像传感器(3b)的信号输出端连接所述图像处理模块(4)的图像信号输入端，从而将采集的图像信号传输给所述图像处理模块(4)以进行图像处理；

所述样品台(1)位于所述荧光激发光源(2)的出射光方向上，所述镜头(3a)朝向所述样品台(1)；

所述图像处理模块(4)包括存储器(4a)、处理器(4b)，以及存储在所述存储器(4a)上并能够在所述处理器(4b)上执行的程序；

所述程序在运行时执行以下处理步骤：

从来自所述图像传感器(3b)的图像信号分别识别C线区域和T线区域，提取各区域的像素点的颜色强度值并计算总和，作为荧光强度值C和T，再计算T/C比值。

10.根据权利要求9所述的测试系统，其特征在于：还包括计时器(5)，该计时器(5)的时间信号输出端连接所述图像处理模块(4)的时间信号输入端；

所述程序在运行时还执行如下步骤：根据计算得到的T/C比值以及所述计时器(5)输入的时间信息，生成T/C比值与时间关系曲线方程y＝f(t)；

计算T/C值的一阶导数y'＝f'(t)，确定该一阶导数的峰值区间段，作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数k_s。

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