CN115869363A - 一种中草药组合物及其在防治生殖衰老中的应用 - Google Patents

Abstract

本申请涉及药物学技术领域，尤其涉及一种中草药组合物及其在防治生殖衰老中的应用。所述药物组合物包括熟地黄、绞股蓝、当归、枸杞子、茯苓、女贞子、黄芪、白芍、丹参、柴胡。本申请发现了一种可以有效延缓卵巢衰老、防治生殖功能衰退的中草药组合物，即通过复配上述药物后，可以有效提高卵巢、输卵管、子宫的功能。本申请提供的中草药组合物在生殖衰老和生育力保护领域具有重要意义。

Description

一种中草药组合物及其在防治生殖衰老中的应用

技术领域

本发明属于中医药领域，涉及一种中草药组合物及其在防治生殖衰老中的应用。

背景技术

随着社会经济的发展和生活方式的改变，人民生活质量得到显著的提高，女性的生殖健康越来越引人关注，它不仅关系到妇女自身的发展与进步，而且影响到其孩子和家人的健康，进而关系到整个民族的素质和社会的稳定。2015年世界卫生组织提出“人人享有生殖保健”。因而在可持续发展已成为全人类共同呼声的今天，保护妇女生殖健康已成为整个社会的共识。生殖健康是生殖系统及其功能和过程所涉及的一切关于身体的、精神的、和社会方面的健康状态，因此生殖衰老不仅造成内分泌紊乱引起全身多系统疾病患病风险增高、使生殖器官功能下降影响生育能力，还会影响女性整体的身心健康。

女性生殖系统主要包括子宫、输卵管及卵巢等，兼具行使生育功能和维持机体内分泌稳态的作用，其在维持女性的全身健康中扮演最为重要的角色之一。子宫位于盆底的膀胱和直肠之间，是产生月经和孕育胎儿的场所。除此之外，最新研究还发现子宫能分泌多种激素维持内分泌平衡，例如前列腺素、胰岛素生殖因子、内皮素、细胞因子等，对维持女性内分泌功能起到不可替代的作用。输卵管位于子宫底两侧，包裹在子宫阔韧带上缘内，自子宫两角分别伸至左右卵巢，是输送卵细胞进入子宫的肌性管道，因此输卵管衰老将影响精卵结合，进而影响女性生育能力。

卵巢具有排卵和激素分泌两大功能。卵巢衰老是指年龄相关的女性卵巢储备/功能逐渐衰退直至衰竭的过程，受遗传、环境、社会心理、行为方式等多因素影响，以卵泡数量和卵子质量下降为基础，最终表现为绝育乃至绝经，并影响全身各个系统，导致相关疾病和综合征的发生发展。除了生育力下降和早绝经外，卵巢衰老引起的内分泌功能紊乱还可增加心血管疾病、骨质疏松、老年性痴呆、肥胖、肿瘤、糖尿病等相关疾病的患病风险，影响全身多个系统和器官，其危害不可小觑。根据卵巢功能衰退的不同阶段，卵巢衰老可表现为卵巢储备功能下降(decreased ovarian reserve，DOR)，卵巢功能不全(premature ovarianinsufficiency，POI)，卵巢早衰(premature ovarian failure，POF)，早绝经和绝经综合征。卵巢衰老若不及时治疗，将会严重影响着女性的生殖健康和生活质量。然而，目前针对卵巢衰老仍缺乏安全、有效的防治策略。

中医认为，中医肾与女性卵巢功能密切相关，主宰女性生殖机能的发育、旺盛与衰退，肾对女性卵巢生理功能的实现起着决定性作用。《医学正传·妇人科》云：“月经全靠肾水施化，肾水既乏，则经血日以干涸，渐而至于闭塞不通”。《傅青主女科》亦云“经水出诸肾”，二者突出强调了肾对于女性月经、生育的重要性。肾虚是卵巢功能下降，出现月经稀少、闭经或绝经、不孕等的基本病理改变。

我国有着5000多年的中药使用历史，中药资源丰富。中医药在治疗女性月经不调、绝经综合征方面已经展现出实力，且安全性更高，易被广大女性患者接受。因目前尚无针对卵巢衰老的成熟的中草药复方，现有的中药复方主要多针对绝经综合征，旨在改善绝经相关症状。因此，中医药在防治卵巢功能衰退方面仍缺乏足够证据，在缓解子宫及输卵管老化方面的研究更是匮乏。近期，一些专利技术(公开号CN107753707A、CN113855771A、CN112618644A)中公开的中药组方，提出能够改善DOR、POF、围绝经期综合征等相关症状，但未报道对女性其他生殖器官的影响。

另外，月经不调和绝经综合征均为表象，生殖衰老是上述临床症状的本质。因此，探索防治生殖衰老的策略，“治本”更为重要和迫切。

发明内容

一方面，本申请提供了一种中草药组合物，包括以下重量份的各物质：

熟地黄4-20份、绞股蓝7-23份、当归1-17份、枸杞子1-17份、茯苓4-20份、女贞子1-11份、黄芪1-11份、白芍1-11份、柴胡1-11份、丹参1-17份。

在一些实施方案中，本申请的女贞子为女贞子(制)。

在一些实施方案中，本申请用果蝇卵巢自然衰老模型、小鼠卵巢自然衰老模型、急性化疗相关卵巢损伤动物模型和小鼠荷瘤模型等反复验证了中草药组合物安全性和有效性。

在一些实施方案中，本申请提供了中草药配方：绞股蓝15g、熟地黄12g、当归9g、白芍6g、丹参9g、黄芪6g、枸杞子9g、女贞子6g、柴胡6g、茯苓12g。

本申请的配方中，君：熟地黄、黄芪；臣：绞股蓝、当归、白芍；佐：枸杞子、女贞子、柴胡；使：茯苓、丹参。

方中绞股蓝功善补气健脾，兼能清热、理气、除湿、活血，可补虚安神；熟地黄补血滋阴，益精填髓，为养血补虚之要药。二者相配，前者益气补虚，后者味厚养血，合用气血双补、滋阴补肾，为君药。

当归既善补血，又能活血，“诚血中之气药，亦血中之圣药也”；白芍酸敛肝阴以养血，和辛散的当归合用，可养血和营、柔肝调经，助君药补益阴血，增强养血调经之效；丹参既功善活血祛瘀，性微寒而缓，能祛瘀生新不伤正，善调经水，还善凉血清心而能除烦安神、消结散痈；黄芪善补脾肺之气，有“补气之长“的美称，通过补气有助于生血。四者共用，能增强补血活血、祛瘀通经的作用，使气血调和，经候如期，为臣药。

枸杞子补精益气、强盛阴道；女贞子能补养肝肾之阴，惟药力平和；二者滋补肝肾，安五脏，养精神；柴胡疏肝解郁、升举阳气，治妇人血热烧经，能调月经；茯苓既可健脾和中而利肾水、泄肾浊，又可宁心安神，助真阴得复其位。四者相配，补而不滞，滋而不腻，补血滋阴之效力彰，共为佐药。

方中黄芪益气补脾与熟地黄滋阴补肾相配，前者大补元气，后者味厚养血，合用气血双补，为君药；绞股蓝补虚安神，可大补肺脾之气，益气生血，当归、白芍养血和营、柔肝调经，助熟地黄补益阴血，三者共为臣药；枸杞子、女贞子滋补肝肾，柴胡疏肝解郁、升举阳气，与益气健脾药配伍，补而不滞，滋而不腻，为佐药；茯苓既可健脾和中而利肾水、泄肾浊，又可宁心安神，助真阴得复其位，为使药。全方共奏益气养血、疏肝补肾之功。行中有补，补中有疏，标本同治，使经水自调。用于卵巢衰老属肝肾阴虚、脾肾阳虚、心肾不交、肾虚精亏、肾虚肝郁等证候者。

综上，上述中草药配方具有疏肝补肾，养血调经之功效。主肾虚肝郁，经来断续，或前或后，行而不畅，有块，色正常，少腹胀痛，或乳房胀痛连及两胁。妇女卵巢功能衰退见上述证候者。

在一些实施方案中，所述中草药组合物包括以下重量份的各物质：

熟地黄9-15份、绞股蓝12-18份、当归6-12份、枸杞子6-12份、茯苓9-15份、女贞子3-9份、黄芪3-9份、白芍3-9份、柴胡3-9份、丹参6-12份；在一些实施方案中，包括以下重量份的各物质：熟地黄12份、绞股蓝15份、当归9份、枸杞子9份、茯苓12份、女贞子6份、黄芪6份、白芍6份、柴胡6份、丹参9份。

一方面，本申请还提供了所述的中草药组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)按照重量份准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加5-15倍量水煎煮2至3次，每次1-2小时，获得煎液；

3)合并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量。

在一些实施方案中，步骤2)中，将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时。

一方面，本申请还提供了所述的中草药组合物在制备延缓/缓解卵巢衰老的药物中的应用。

一方面，本申请还提供了述的中草药组合物在制备治疗/缓解卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve，DOR)的药物中的应用。

一方面，本申请还提供了所述的中草药组合物在制备治疗/缓解早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency，POI)的药物中的应用。

一方面，本申请还提供了所述的中草药组合物在制备治疗/缓解早绝经的药物中的应用。

一方面，本申请还提供了所述的中草药组合物在制备治疗/缓解绝经综合征的药物中的应用。

一方面，本申请还提供了所述的中草药组合物在制备治疗/缓解卵巢早衰(premature ovarian failure，POF)的药物中的应用。

一方面，本申请提供了所述的中草药组合物在制备治疗/缓解子宫衰老、或输卵管衰老的药物中的应用。

一方面，本申请提供了所述的中草药组合物在制备改善子宫功能衰退、或输卵管功能衰退药物中的应用。

在一些实施方案中，所述的药物的剂型为注射剂、口服制剂或外用制剂。

在一些实施方案中，所述剂型为口服制剂；在一些实施方案中，所述制剂还包括药学上可接受的药用载体；在一些实施方案中，所述药用载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂和润滑剂中的一种或几种。

一方面，本申请还提供了一种防治卵巢、输卵管、或子宫功能衰退的中草药草组合物，包括所述的中草药组合物及药学上可接受的药用载体。

附图说明

图1为人群药效测试中FSH的结果；

图2为人群药效测试中AMH的结果；

图3为人群药效测试中AFC的结果；

图4为本发明实施例提供的雌性果蝇用药组(TJAOA101)与其对照组(Control)的产卵数目对比情况；

图5为本发明提供的给药期间小鼠卵巢功能的检测结果；其中，A为小鼠卵巢HE染色结果，B为小鼠规律动情周期百分比结果，C与D均为本发明提供的光学显微镜下，小鼠卵泡的计数结果。A和B中的NC为空白对照组，CTX为单纯造模组，TJAOA101为中药组合物用药组。

图6为实施例3中不同处理组小鼠输卵管HE染色图；

图7为实施例3中不同处理组小鼠子宫HE染色图。

具体实施方式

以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案，具体实施例不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。

术语：

化疗：是化学药物治疗的简称，通过使用化学治疗药物杀灭癌细胞达到治疗目的。在临床上化疗药物也有不同的种类，根据其作用机制不同，可以分为烷化剂，抗代谢类，抗生素类，抗肿瘤药物，植物类抗肿瘤药物，激素类抗肿瘤药物，以及杂类的药物等。大部分患者需要联合使用两种以上的化疗药物治疗的，也包括口服化疗药物以及静脉用药等，另外，部分患者也可以采取介入的方式通过动脉灌注药物。

CTX：环磷酰胺，是进入人体内被肝脏或肿瘤内存在的过量的磷酰胺酶或磷酸酶水解，变为活化作用型的磷酰胺氮芥而起作用的氮芥类衍生物。

本文所用的“治疗”是采取任何动作以预防或延迟疾病的发作，以改善一种或多种症状或并发症，诱导或延长缓解，以延迟复发、再发或恶化，或以其他方式改善或稳定受试者的疾病状态或疾病风险。通常，治疗是预防性治疗，旨在延迟或预防疾病或与疾病相关的任何症状或并发症的发作。

实施例1

一种中草药组合物(TJAOA101)，在所述组合物中，所述含量分别为熟地黄12g、绞股蓝15g、当归9g、枸杞子9g、茯苓12g、女贞子(制)6g、黄芪6g、白芍6g、柴胡6g、丹参9g。

所述中草药组合物的制备方法：

1)按照比例准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时；

3)并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量。

药效测试

1)分析有效率的指标：AMH；FSH；AFC。

AMH指的是抗米勒管激素，主要是进行卵巢储备功能的评估，可以预测对控制下卵巢刺激(cos)反应，可以帮助预测绝经。从女性从婴儿时起，尤其是AMH与年龄呈正相关，随着年龄增长逐渐上升，在16岁左右AMH水平达到高峰，此后会保持一个稳定的高水平。直到25岁以后AMH与年龄呈负相关，随着年龄增长而逐渐下降，直到绝经后无法检测。

FSH，促卵泡成熟激素FSH：是垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种糖蛋白激素，其主要功能是卵巢的卵泡发育和成熟。

AFC，窦卵泡计数，AFC就是指在女性双侧卵巢中，那些直径达到2-9mm的卵泡总数。

2)各指标判断标准：

AMH/FSH/AFC：判定有效的标准如下：

若治疗后FSH结果小于上述疾病诊断的临界最低值，认为有效；或者治疗前AMH或AFC小于诊断临界最低值，用药后大于疾病诊断的临界最低值，也判定为有效；或上述指标改善超过50％，认为有效。

3)测试人群：14人。平均年龄为35.1岁，均为自愿参加，且均为卵巢功能下降的女性(DOR及POI)。

4)服药方法及用药时间：一日服用两次，一次两袋，早上在早餐前半小时服用，晚上在临睡前半小时服用，连续服用3个月。可将其加到200ml左右的温水中服用。注意避免经期服用本方。

5)测试方法

受试人群分别在治疗前、治疗后月经来潮的第2至5天于武汉同济医院空腹查血清FSH，AMH及妇科B超下检测双侧AFC总数。

4)结果

如图1所示，FSH：14人中4人达到有效，有效率28.6％。

如图2所示，AMH：14人中有4人达到有效，有效率28.6％。

如图3所示，AFC：14人中6人有效，有效率42.9％。

总有效率为71.4％(10/14)。

因目前尚无针对卵巢衰老的成熟的中草药复方，现有的中药复方主要多针对绝经综合征，旨在改善绝经相关症状。查阅资料，一项研究提示，源自《黄帝内经》的名方坤泰胶囊改善DOR的有效率为47％(补肾疏肝方联合艾灸神阙穴治疗肾虚肝郁型卵巢早衰的临床研究)。因此，本申请的药物有效率是比较高的。

5)药物安全性测试

受试人群分别在治疗前、治疗后月经来潮的第2至5天于武汉同济医院空腹查肝肾功能。

如表1所示

表1

实施例2

S1，制备黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)w¹¹¹⁸(以下简称“果蝇”)的食物

配方：蒸馏水12L，酵母210g，玉米面900g，大豆粉120g，琼脂100g，糖浆800mL，10％尼泊金丁酯150mL，左氧氟沙星30mL。

分别将用蒸馏水溶解好的酵母、玉米面、大豆粉以及琼脂倒入锅中，搅匀。边搅拌边加入800mL糖浆，然后搅拌30min后，以2300W功率加热，煮1.5小时后停火加入150mL尼泊金丁酯及30mL左氧氟沙星，放置2min后倒管。

S2，黑腹果蝇的扩繁

将果蝇培养于新配置的食物中，每管平均放置20对雌雄果蝇。待三龄幼虫化蛹后，移出成蝇并处死，收集8h内羽化未交配的成蝇，雌雄分开，各400只，随机分为4组。培养于食物中备用。

S3，制备含有相应浓度的食物

将此中草药组合物(TJAOA101)溶液充分混匀后取100μL均匀铺洒于小管食物表面，使其充分浸透入食物表面，深度大概为1cm，并放置至表面干燥的状态。

S4，饲养条件

于温度为(25±1)℃，湿度为65％，交替12h的光、暗恒温恒湿培养箱内培养，每2d更换新鲜食物并记录果蝇死亡状况，直至全部死亡。

S5，药物治疗

总共4组，分别是空白对照组(Control)、绞股蓝组(GP)、不含绞股蓝的中草药复方组(Chinese herb compound without GP，CHC)，以及本次申请的复方TJAOA101组(GP+CHC)。每组均设置有100只开始实验。所有组别每隔一天均更换新鲜食物。

空白对照组为不加任何药物；

GP组为单独添加绞股蓝提取液；

CHC组，为不含绞股蓝的其他中草药组合；

TJAOA101组为单独施用本中药组合药物。

S6，产卵数目计数：

每组5管，每管20只，对照组不加任何药物。每隔一天更换一次相应浓度的食物，在每个时间点每组随机选取4只雌性果蝇与2只年轻雄性果蝇进行交配，统计每组的4只雌性果蝇的总产卵数目。

得到如图4所示的结果，结果显示：对于雌性果蝇，在羽化1天至死亡施用TJAOA101可以在不同时间段有效增加雌性果蝇的产卵数目，提高雌性果蝇的卵巢功能。

实施例3

化疗导致的卵巢损伤，是实验研究中常见且得到公认的卵巢损伤模型，基于此模型研究的治疗方式对多种卵巢损伤因素的治疗均具有借鉴意义。具体的，通过给与受试哺乳动物体一定剂量的CTX溶液以诱导产生化疗性卵巢损伤，并对受试哺乳动物体给与含有效剂量的本中药组合物(TJAOA101)及单纯对照组的受试哺乳动物体给与生理盐水，连续给药一段时间后检测受试哺乳动物体的卵巢功能，结果发现含有效剂量的TJAOA101有利于减轻化疗药物所致的卵巢功能衰退。

本发明所述应用方法包括以下步骤：

S1，制备化疗性卵巢损伤C57BL/6小鼠模型：

避光条件下，用生理盐水配置浓度为10mg/ml的CTX溶液，充分混匀溶解；称取小鼠体重，根据CTX给予120mg/kg的量计算每只小鼠注射量；

左手固定小鼠，右手吸取相应量CTX溶液腹腔注射入小鼠体内；空白对照组给予相应量的生理盐水，其余过程与模型建立相同；

S2，药物治疗：

化疗前灌胃给予TJAOA101组小鼠此中药组合物400mg/kg共14天，化疗后继续给予相应剂量此中药组合物14天，空白对照组和单纯造模组小鼠给予相同体积生理盐水。

S3，卵巢储备功能检测：

小鼠卵巢同福尔马林固定后送连续切片，每隔80μm取一张卵巢切片进行HE染色，光学显微镜下计数各级卵泡；结果如图5中的A显示在光学显微镜下，NC组和TJAOA101组小鼠卵巢切片多见始基卵泡和生长卵泡，而CTX组小鼠卵巢切片所见以闭锁卵泡为主。图5中的C及D显示，经过TJAOA101处理的小鼠的始基卵泡和生长卵泡数目较CTX组显著更高，同时闭锁卵泡数目有所下降。(PMF为始基卵泡；PF为初级卵泡、SF为次级卵泡、ANF为窦卵泡，三者合称生长卵泡；ATF为闭锁卵泡)

S4，卵巢内分泌检测：

连续十天用生理盐水蘸取小鼠阴道分泌物进行动情周期检测；图5中的B可以看出，TJAOA101组小鼠动情周期更规律，统计所得动情周期规律比例更高。

S5，输卵管HE染色：

小鼠输卵管同福尔马林固定后送连续切片，每隔80μm取一张卵巢切片进行HE染色，光学显微镜下拍照观察；结果如图6中的A显示在光学显微镜下，各组小鼠输卵管形态改变情况，可见TJAOA101组较CTX组在输卵管形态、肌层厚度等显著改善。

S6，子宫HE染色：

小鼠子宫同福尔马林固定后送连续切片，每隔80μm取一张卵巢切片进行HE染色，光学显微镜下拍照观察；结果如图7中的A显示在光学显微镜下，NC组和TJAOA101组小鼠输子宫组织切片腺体较多，而CTX组小鼠卵巢切片所见腺体明显减少且体积增大，为衰老表现。

实施例4

病例1：

患者程XX，女，33岁，2021年11月22日初次就诊。

主诉：月经紊乱1年余

现病史：2021年1月起月经周期变频，半月来潮一次伴量少，月经第三天性激素六项结果显示：血清泌乳素25.48ng/ml，卵泡生成素36.01mIU/ml，促黄体生成素6.16mIU/ml，睾酮19.36ng/dl，孕酮0.82ng/ml，雌二醇36.45pg/ml，抗米勒管激素0.7ng/ml。双侧窦卵泡数AFC 5。LMP 2021.11.22。

既往史：无殊。

初步诊断：卵巢储备功能减退(DOR)

服用3月TJAOA101后，于月经第三天复查，卵巢功能结果显示：血清泌乳素12ng/ml，卵泡生成素10mIU/ml，促黄体生成素6.6mIU/ml，睾酮25.31ng/dl，孕酮0.5ng/ml，雌二醇28.46pg/ml，抗米勒管激素0.9ng/ml。双侧窦卵泡数AFC 7。嘱咐患者定期随诊。

病例2：

患者贾X，女，39岁，2021年11月16日初次就诊。

主诉：停经4月，月经不规则1年。

现病史：平素月经规律，5/30，经量中。近一年周期17-35天，今年5月停经2月，后自然来称号。LMP：7-8，PMP：6-14。甲状腺功能检查未见异常。月经第三天性激素六项结果显示：血清泌乳素6.18ng/ml，卵泡生成素43.83mIU/ml，促黄体生成素31.4mIU/ml，睾酮30.91ng/dl，孕酮0.67ng/ml，雌二醇91.53pg/ml，抗米勒管激素<0.06ng/ml。双侧窦卵泡数AFC 1。

既往史：无殊。

初步诊断：早发性卵巢功能不全(POI)

服用3月TJAOA101后，于月经第三天复查，卵巢功能结果显示：血清泌乳素12.5ng/ml，卵泡生成素8.82mIU/ml，促黄体生成素8.31mIU/ml，睾酮52.07ng/dl，孕酮2.22ng/ml，雌二醇27.77pg/ml，抗米勒管激素0.11ng/ml。双侧窦卵泡数AFC 3。嘱咐患者定期随诊。

对比例

对比例1

与实施例1相比，除了剔除熟地黄以外，其它条件同实施例1。

对比例2

与实施例1相比，除了剔除绞股蓝以外，其它条件同实施例1。

对比例3

与实施例1相比，除了剔除当归以外，其它条件同实施例1。

对比例4

与实施例1相比，除了剔除枸杞子以外，其它条件同实施例1。

对比例5

与实施例1相比，除了剔除茯苓以外，其它条件同实施例1。

对比例6

与实施例1相比，除了剔除女贞子以外，其它条件同实施例1。

对比例7

与实施例1相比，除了剔除黄芪以外，其它条件同实施例1。

对比例8

与实施例1相比，除了剔除白芍以外，其它条件同实施例1。

对比例9

与实施例1相比，除了剔除丹参以外，其它条件同实施例1。

对比例10

与实施例1相比，除了剔除柴胡以外，其它条件同实施例1。

试验例1

1.试验方法：

将130只动情周期正常的C57BL/6雌性大鼠随机分为空白组(n＝10)、CTX组(n＝10)、TJAOA101组(n＝10)、对比例1-10组(各组n＝10)。

一种中草药组合物(TJAOA101)，在所述组合物中，所述含量分别为熟地黄12g、绞股蓝15g、当归9g、枸杞子9g、茯苓12g、女贞子6g、黄芪6g、白芍6g、柴胡6g、丹参9g；对比例1-10组中每组药物各减少一味药，分别为熟地黄、绞股蓝、当归、枸杞子、茯苓、女贞子、黄芪、白芍、柴胡和丹参。

所述中草药组合物的制备方法：

1)按照比例准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时；

3)并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量。

化疗前灌胃TJAOA101组小鼠、对比例1-10组各自的中药组合物400mg/kg共14天，化疗后继续给予相应剂量此中药组合物14天，空白对照组和CTX组小鼠给予相同体积生理盐水。在灌胃给药结束24h后，经眼球动脉取血，在动情间期分别检测血清中FSH、AMH和雌二醇(E2)的含量。

2.统计方法：

利用SPSS 22.0软件进行统计分析，所有计量资料(FSH,AMH,E₂)均采用均值±标准差表示，采用单因素方差方法分析各组间差异。当各组间的方差齐时，均值间的比较采用SNK法检验，而方差不齐时，均值间的比较采用Dunnett法检验。设定P<0.05为差异具有统计学意义。

3.试验结果：

和空白组相比，CTX组FSH水平均明显升高，E₂、AMH水平均明显降低(P<0.05)；和CTX组相比，各给药组FSH水平均明显降低，E₂、AMH水平均明显增加(P<0.05)。各给药组组间比较的结果显示，TJAOA101组E₂、AMH水平的升高效果最为明显。详见表2。

表2各组治疗结束后各组大鼠血清中FSH、AMH、E2水平的比较

注：*与空白组比较，P<0.05；#与CTX组比较，P<0.05；

对比例11

CN107753707A已公开专利说明书第0008段记载的，在所述组合物中，所述含量分别为当归11份、白芍13份、生地黄24份、山药24份、山茱萸15份、女贞子15份、柴胡10份、龙胆草14份、黄柏13份、菟丝子14份、茯苓7份、泽泻17份、红花8份、川芎11份。

对比例12

CN113855771A已公开专利说明书第0027段记载的，在所述组合物中，所述含量分别为地黄21份、黄精15份、桑寄生15份、续断15份、女贞子15份、枸杞子15份、丹参15份、郁金12份、当归15份、鸡血藤15份、骨碎补15份、鳖甲21份、葛根15份、升麻9份。

对比例13

CN112618644A已公开专利组实例2，在所述组合物中，所述含量分别为熟地黄30份、当归15份、白芍15份、山萸肉15份、杜仲6份、白术15份、茯苓9份、续断6份、炙甘草7份、黄芪10份、党参10份、大枣8份、阿胶6份、巴戟天10份、菟丝子10份、牛膝10份、山药15份和芡实10份。

试验例2

1.试验方法：

将60只动情周期正常的C57BL/6雌性大鼠随机分为空白组(n＝10)、CTX组(n＝10)、TJAOA101组(n＝10)、对比例11——CN107753707A已公开专利组(1组)(n＝10)、对比例12——CN113855771A已公开专利组(2组)(n＝10)、对比例13——CN112618644A已公开专利组(3组)(n＝10)。

所述中草药组合物的制备方法：

1)按照比例准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时；

3)并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量。

化疗前灌胃TJAOA101组小鼠、1组、2组和3组各自的中药组合物400mg/kg共14天，化疗后继续给予相应剂量此中药组合物14天，空白对照组和CTX组小鼠给予相同体积生理盐水。在灌胃给药结束24h后，经眼球动脉取血，在动情间期分别检测血清中FSH、AMH和雌二醇(E2)的含量。

2.统计方法：

利用SPSS 22.0软件进行统计分析，所有计量资料(FSH,AMH,E₂)均采用均值±标准差表示，采用单因素方差方法分析各组间差异。当各组间的方差齐时，均值间的比较采用SNK法检验，而方差不齐时，均值间的比较采用Dunnett法检验。设定P<0.05为差异具有统计学意义。

3.试验结果：

和空白组相比，CTX组FSH水平均明显升高，E₂、AMH水平均明显降低(P<0.05)；和CTX组相比，各给药组FSH水平均明显降低，E₂、AMH水平均明显增加(P<0.05)。各给药组组间比较的结果显示，TJAOA101组E₂、AMH水平的升高效果最为明显。详见表3。

表3各组治疗结束后各组大鼠血清中FSH、AMH、E2水平的比较

注：*与空白组比较，P<0.05；#与CTX组比较，P<0.05；

对比例14

1.试验方法：

将40只动情周期正常的C57BL/6雌性大鼠随机分为空白组(n＝10)、CTX组(n＝10)、TJAOA101组(n＝10)、对比例11——CN107753707A已公开专利组(1组)(n＝10)。

TJAOA101和CN107753707A已公开专利中相同的药物分别为当归，白芍，女贞子，柴胡和茯苓。特色中药组合物即指TJAOA101和CN107753707A组药物组合均去除两者相同部分单药后的其他药物组合。TJAOA101特色中药组合物为熟地黄12g、绞股蓝15g、枸杞子9g、黄芪6g和丹参9g；CN107753707A 1组特色中药组合物为生地黄24份、山药24份、山茱萸15份、龙胆草14份、黄柏13份、菟丝子14份、泽泻17份、红花8份、川芎11份。

所述中草药组合物的制备方法：

1)按照比例准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时；

3)并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量。

化疗前灌胃TJAOA101组小鼠和1组各自的特色中药组合物400mg/kg共14天，化疗后继续给予相应剂量此中药组合物14天，空白对照组和CTX组小鼠给予相同体积生理盐水。在灌胃给药结束24h后，经眼球动脉取血，在动情间期分别检测血清中FSH、AMH和雌二醇(E2)的含量。

2.统计方法：

利用SPSS 22.0软件进行统计分析，所有计量资料(FSH,AMH,E₂)均采用均值±标准差表示，采用单因素方差方法分析各组间差异。当各组间的方差齐时，均值间的比较采用SNK法检验，而方差不齐时，均值间的比较采用Dunnett's T3法检验。设定P<0.05为差异具有统计学意义。

3.试验结果：

和空白组相比，CTX组FSH水平均明显升高，E₂、AMH水平均明显降低(P<0.05)；和CTX组相比，各给药组FSH水平均明显降低，E₂、AMH水平均明显增加(P<0.05)。各给药组组间比较的结果显示，TJAOA101组E₂、AMH水平的升高效果最为明显。详见表4。表4TJAOA101组与CN107753707A特色药物部分治疗结束后各组大鼠血清中FSH、AMH、E2水平的比较

对比例15

1.试验方法：

将40只动情周期正常的C57BL/6雌性大鼠随机分为空白组(n＝10)、CTX组(n＝10)、TJAOA101组(n＝10)、对比例12——CN113855771A已公开专利组(2组)(n＝10)。

TJAOA101和CN113855771A已公开专利中相同的药物分别为熟地黄，女贞子，枸杞子，丹参和当归。特色中药组合物即指TJAOA101和CN113855771A药物组合均去除两者相同部分单药后的其他药物组合。TJAOA101特色中药组合物为绞股蓝15g、茯苓12g、黄芪6g、白芍6g、柴胡6g；CN113855771A特色中药组合物为黄精15份、桑寄生15份、续断15份、郁金12份、鸡血藤15份、骨碎补15份、鳖甲21份、葛根15份、升麻9份。

所述中草药组合物的制备方法：

1)按照比例准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时；

3)并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量。

化疗前灌胃TJAOA101组小鼠和2组各自的特色中药组合物400mg/kg共14天，化疗后继续给予相应剂量此中药组合物14天，空白对照组和CTX组小鼠给予相同体积生理盐水。在灌胃给药结束24h后，经眼球动脉取血，在动情间期分别检测血清中FSH、AMH和雌二醇(E2)的含量。

2.统计方法：

利用SPSS 22.0软件进行统计分析，所有计量资料(FSH,AMH,E₂)均采用均值±标准差表示，采用单因素方差方法分析各组间差异。当各组间的方差齐时，均值间的比较采用SNK法检验，而方差不齐时，均值间的比较采用Dunnett'sT3法检验。设定P<0.05为差异具有统计学意义。

3.试验结果：

和空白组相比，CTX组FSH水平均明显升高，E2、AMH水平均明显降低(P<0.05)；和CTX组相比，各给药组FSH水平均明显降低，E2、AMH水平均明显增加(P<0.05)。各给药组组间比较的结果显示，TJAOA101组E2、AMH水平的升高效果最为明显。详见表5。

表5TJAOA101组与CN113855771A特色药物部分治疗结束后各组大鼠血清中FSH、AMH、E2水平的比较

对比例16

1.试验方法：

将40只动情周期正常的C57BL/6雌性大鼠随机分为空白组(n＝10)、CTX组(n＝10)、TJAOA101组(n＝10)、对比例13——CN112618644A已公开专利组(3组)(n＝10)。

TJAOA101和CN112618644A已公开专利中相同的药物分别为熟地黄，当归，白芍，茯苓和黄芪。特色中药组合物即指TJAOA101和CN112618644A药物组合均去除两者相同部分单药后的其他药物组合。TJAOA101特色中药组合物为绞股蓝15g、枸杞子9g、女贞子6g、柴胡6g、丹参9g；CN112618644A组特色中药组合物为山萸肉15份、杜仲6份、白术15份、续断6份、炙甘草7份、党参10份、大枣8份、阿胶6份、巴戟天10份、菟丝子10份、牛膝10份、山药15份和芡实10份。

所述中草药组合物的制备方法：

1)按照比例准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时；

3)并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量。

化疗前灌胃TJAOA101组小鼠和2组各自的特色中药组合物400mg/kg共14天，化疗后继续给予相应剂量此中药组合物14天，空白对照组和CTX组小鼠给予相同体积生理盐水。在灌胃给药结束24h后，经眼球动脉取血，在动情间期分别检测血清中FSH、AMH和雌二醇(E2)的含量。

2.统计方法：

采用SPSS 22.0进行统计分析。所有计量资料均采用均值±标准差表示采用单因素方差分析各组间均值的差异，方差齐时，均值间的比较采用SNK法检验，方差不齐时，均值间的比较采用Dunnett's T3法检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

3.试验结果：

和空白组相比，CTX组FSH水平均明显升高，E2、AMH水平均明显降低(P<0.05)；和CTX组相比，各给药组FSH水平均明显降低，E2、AMH水平均明显增加(P<0.05)。各给药组组间比较的结果显示，TJAOA101组E2、AMH水平的升高效果最为明显。详见表6。

表6TJAOA101组与CN112618644A组特色药物部分治疗结束后各组大鼠血清中FSH、AMH、E2水平的比较

对比例17

1.试验方法：

将40只动情周期正常的C57BL/6雌性大鼠随机分为空白组(n＝10)、CTX组(n＝10)、GP组(n＝10)、GP皂苷(n＝10)。

化疗前GP组小鼠灌胃绞股蓝原液400mg/kg，GP皂苷组小鼠灌胃绞股蓝皂苷400mg/kg共14天，化疗后继续给予相应剂量药物14天，空白对照组和CTX组小鼠给予相同体积生理盐水。在灌胃给药结束24h后，经眼球动脉取血，在动情间期分别检测血清中FSH、AMH和雌二醇(E2)的含量。

2.统计方法：

采用SPSS 22.0进行统计分析。所有计量资料均采用均值±标准差表示采用单因素方差分析各组间均值的差异，方差齐时，均值间的比较采用SNK法检验，方差不齐时，均值间的比较采用Dunnett's T3法检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

3.试验结果：

和空白组相比，CTX组FSH水平均明显升高，E2、AMH水平均明显降低(P<0.05)；和CTX组相比，各给药组FSH水平均明显降低，E2、AMH水平均明显增加(P<0.05)。各给药组组间比较的结果显示，GP组E2、AMH水平的升高效果较GP皂苷组更为明显。详见表7。

表7治疗结束后各组大鼠血清中FSH、AMH、E2水平的比较

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Claims (10)

1.一种中草药组合物，其特征在于，包括以下重量份的各物质：熟地黄4-20份、绞股蓝7-23份、当归1-17份、枸杞子1-17份、茯苓4-20份、女贞子1-11份、黄芪1-11份、白芍1-11份、柴胡1-11份、丹参1-17份。

2.如权利要求1所述的中草药组合物，其特征在于，包括以下重量份的各物质：

熟地黄9-15份、绞股蓝12-18份、当归6-12份、枸杞子6-12份、茯苓9-15份、女贞子3-9份、黄芪3-9份、白芍3-9份、柴胡3-9份、丹参6-12份；

优选地，包括以下重量份的各物质：熟地黄12份、绞股蓝15份、当归9份、枸杞子9份、茯苓12份、女贞子6份、黄芪6份、白芍6份、柴胡6份、丹参9份。

3.如权利要求1-2任一所述的中草药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)按照重量份准备各物质；

2)将步骤1)准备的各物质加5-15倍量水煎煮2至3次，每次1-2小时，获得煎液；

3)合并煎液，静置、滤过；

4)滤液浓缩至适量；

优选地，步骤2)中，将步骤1)准备的各物质加10倍量水煎煮2至3次，每次1.5小时。

4.如权利要求1-2任一所述的中草药组合物在制备延缓/缓解卵巢衰老的药物中的应用。

5.如权利要求1-2任一所述的中草药组合物在制备治疗/缓解卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)的药物中的应用。

6.如权利要求1-2任一所述的中草药组合物在制备治疗/缓解早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)的药物中的应用。

7.如权利要求1-2任一所述的中草药组合物在制备治疗/缓解早绝经或绝经综合征的药物中的应用。

8.权利要求1-2任一所述的中草药组合物在制备治疗/缓解卵巢早衰(prematureovarian failure，POF)的药物中的应用。

9.权利要求1-2任一所述的中草药组合物在制备治疗/缓解子宫衰老、或输卵管衰老的药物中的应用。

10.权利要求1-2任一所述的中草药组合物在制备改善子宫功能衰退、或输卵管功能衰退药物中的应用。

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