CN115851577A - 一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法 - Google Patents
一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115851577A CN115851577A CN202211664563.1A CN202211664563A CN115851577A CN 115851577 A CN115851577 A CN 115851577A CN 202211664563 A CN202211664563 A CN 202211664563A CN 115851577 A CN115851577 A CN 115851577A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- cells
- organoid
- medium
- tissue
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 title claims abstract description 49
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 50
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000012136 culture method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 34
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 20
- 239000012574 advanced DMEM Substances 0.000 claims description 13
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 12
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 claims description 5
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 claims description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 5
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000010008 shearing Methods 0.000 claims description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 abstract description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 abstract description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 abstract description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 2
- 102000015098 Tumor Suppressor Protein p53 Human genes 0.000 description 2
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 2
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 2
- 101100096235 Xenopus laevis sox9-a gene Proteins 0.000 description 2
- 101100096236 Xenopus laevis sox9-b gene Proteins 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000011226 adjuvant chemotherapy Methods 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011255 standard chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法，将经处理后的肿瘤细胞进行平面培养或3D培养，其中，平面培养的方法为：用类器官完全培养基重悬细胞后，接种到细胞培养容器中，培养期间每2‑4天更换一次培养基，一般每7天传代1次，传代时加入胰酶处理。3D培养的方法为：1)、PBS重悬细胞后进行计数，将计数好的细胞与基质胶共混后加入到细胞培养容器中，然后在细胞培养箱中放置10‑30分钟，加入类器官完全培养基，培养期间每5‑7天更换一次培养基，每35‑50天传代1次。本发明能够成功培养骨肿瘤类器官，为肿瘤的发生和发展机制研究、药物筛选及个性化给药策略提供了方便快捷的实验模型和快捷方法。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型构建方法及其培养基。
背景技术
骨肿瘤作为发生于骨骼系统的良性及恶性肿瘤引起了广泛关注。
相对于其他恶性肿瘤，骨肉瘤的发病率低，约为每100万人中有2-3人，但却已成为导致青少年死亡的前五位肿瘤之一。骨肉瘤目前主要采用“新辅助化疗-肿瘤广泛切除术-术后辅助化疗”的治疗模式，虽然随着规范化疗的推广、手术技术的提高，骨肉瘤患者的生存率得到了显著的改善，5年生存率提高到了60-70％，但是仍有30-40％的患者发生转移并对化疗药物耐药最终死亡，患者的5年生存率平台期近30年未有提升。
由于临床试验和监管要求的日益复杂，新的抗癌药物的成本在过去几年里飙升。考虑到肿瘤学的所有适应症，进入临床开发阶段的药物中，只有1/15能获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准。临床前癌症模型对患者的可转译性等因素导致了从实验到临床的低成功率。肿瘤类器官作为一种新的肿瘤临床前模型系统，允许个体患者的肿瘤体外繁殖，较好地再现原发肿瘤的体内特征及异质性，而且所需形成时间短、传代稳定，弥补了传统肿瘤模型的缺陷，为肿瘤的发生和发展机制研究、药物筛选及个性化给药策略提供了方便快捷的方法。
但是，骨肉瘤类器官培养方法及其培养基仍旧缺乏。
发明内容
本发明所要解决的技术问题为：提供了一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型构建方法及其培养基。
本发明的技术方案为：一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法，包括如下步骤：
(1)新鲜肿瘤组织用预冷的无菌PBS清洗，然后用预冷的含Normocin的AdvancedDMEM/F-12培养基清洗；
(2)将组织剪碎后，加入1.5-4倍组织体积的组织消化液将剪碎组织重悬，在37℃、55-90rpm条件下消化20-50分钟；
(3)消化后，加入含血清的PBS溶液，1200-1400rpm离心，收集离心产物；
(4)加入1.5-4倍离心产物体积的DNase-I重悬并在37℃孵育3-5分钟，加入含血清的PBS溶液，1200-1400rpm离心，收集离心产物；
(5)加入1.5-4倍离心产物体积红细胞裂解液重悬并在冰上孵育1-3分钟，随后将悬液过100μm细胞筛，得到细胞悬液，将细胞悬液离心弃去上清；
(6)进行平面培养或3D培养，其中，
平面培养的方法为：
a、用类器官完全培养基重悬细胞后，接种到细胞培养容器中，培养期间每2-4天更换一次培养基，一般每4-7天传代1次，传代时加入胰酶处理。
3D培养的方法为：
1)、PBS重悬细胞后进行计数，将计数好的细胞与基质胶共混后加入到细胞培养容器中，然后在细胞培养箱(37℃，5％-7％ CO2)中放置10-30分钟，加入类器官完全培养基，培养期间每5-7天更换一次培养基，每35-50天传代1次，传代时加入TrypLE Express处理；
所述的类器官完全培养基由Advanced DMEM/F-12培养基为溶剂配成，添加成分如下：
进一步地，所述的组织消化液由DMEM/F-12为溶剂配成，每10mL组织消化液含如下成分：
进一步地，所述的基质胶使用预冷的PBS稀释，其中基质胶母液体积∶PBS体积为1∶0～1∶3。
进一步地，在步骤(6)3D培养中，细胞密度为1000-100000个/点，接种体积为50μL/点，每容器接种个数为1-6个。
本发明还公开了一种类器官完全培养基，它以Advanced DMEM/F-12培养基基础，添加如下成分构成：
(1)平面培养优势：可以健康扩增，适合高通量，操作简便，成本低；局限性：缺乏机基质成分，肿瘤细胞组装成类器官后易从孔板脱落，类器官尺寸有限。
(2)3D培养优势：可以健康扩增，适合高通量；提供基质成分；保持组织地自然微环境和细胞空间结构。
(3)培养基优势：将已报道的Wnt 3a-conditioned medium更换成用rh-Wnt-3a蛋白配置，无需另行培养工程化的细胞株收集含Wnt 3a的上清液制备Wnt 3a-conditionedmedium，使得类器官培养基制备条件稳定，Wnt 3a成分及含量可控。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明能够成功培养骨肿瘤类器官，为肿瘤的发生和发展机制研究、药物筛选及个性化给药策略提供了方便快捷的实验模型和快捷方法。
附图说明
图1为本发明的骨肉瘤单细胞样本图。
图2为本发明的类器官完全培养基与含丙酮酸钠高糖培养基在骨肉瘤类器官平面培养下的效果图。
图3为本发明3D培养的骨肉瘤类器官样本图。
图4为本发明平面培养和3D培养得到的骨肉瘤类器官的H&E染色的组织形态学分析以及骨肿瘤ki67、sox9、vimentin、TP53的免疫组织学分析图。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。
Advanced DMEM/F-12培养基：购自Gibco，货号12634010，与经典DMEM/F-12相比，血清添加量可减少50–90％，而细胞生长速率或形态无变化，更适于配置无血清的类器官培养基。
Y-27632：购自Sigma，货号Y0503
Glutamax：购自Gibco，货号35050061
B-27不含维生A：购自Gibco，货号12587010
rh-Wnt-3a蛋白：购自R&D，货号5036-WN-010
A83-01：购置Tocris，货号2939
实施例1
本发明选取了3例临床样本进行基于单细胞的骨肿瘤类器官培养，包括如下步骤：
(1)取下的新鲜肿瘤组织用预冷的无菌PBS清洗2遍，用预冷的Advanced DMEM/F-12培养基(含100μg/mLNormocin)清洗3遍；
(2)将组织剪碎成不大于1mm3的小块后，加入2倍组织体积的组织消化液将剪碎组织重悬，在37℃、55rpm条件下，P0 1、P0 2、P0 3分别消化20、35、50分钟；所述的组织消化液由DMEM/F-12为溶剂配成，每10mL消化液含各成分如下：
(3)消化后，加入2倍体积含5％血清的PBS溶液，1400rpm离心5分钟收集离心产物；
(4)加入2倍离心产物体积0.1mg/mL的DNase-I重悬并在37℃孵育5分钟，加入2倍体积含5％血清的PBS溶液，1400rpm离心4分钟收集离心产物；
(5)加入2倍离心产物体积红细胞裂解液重悬并在冰上孵育3分钟，随后将悬液过100μm细胞筛，得到细胞悬液；
(6)将细胞悬液离心弃去上清，用类器官完全培养基重悬细胞后，接种到6孔板中；所述的类器官完全培养基由Advanced DMEM/F-12培养基配成，添加成分如下：
(7)培养期间每3天更换一次培养基，培养基体积2mL；
(8)一般每7天传代1次，1：3传代，传代时每孔加入1mL胰酶处理5分钟，加ADMEM/F12培养基5mL，1400rpm离心4分钟。
本实施例的骨肉瘤单细胞培养结果如图1所示。
实施例2
如图2所示，本发明选取了1例临床样本的获取单细胞，在3次传代扩增后，用第3代细胞进行骨肿瘤类器官平面培养，并尝试了不同培养基。具体包括如下步骤：
(1)取下的新鲜肿瘤组织用预冷的无菌PBS清洗3遍，用预冷的Advanced DMEM/F-12培养基(含100μg/mLNormocin)清洗3遍；
(2)将组织剪碎成不大于1mm3的小块后，加入3倍组织体积的组织消化液(配方同实施例1)将剪碎组织重悬，在37℃、55rpm条件下消化40分钟；
(3)消化后，加入1倍体积含5％血清的PBS溶液，1400rpm离心5分钟收集离心产物；
(4)加入2倍离心产物体积0.1mg/mL的DNase-I重悬并在37℃孵育3分钟，加入1倍体积含5％血清的PBS溶液，1400rpm离心5分钟收集离心产物；
(5)加入1.5倍离心产物体积红细胞裂解液重悬并在冰上孵育1分钟，随后将悬液过100μm细胞筛，得到细胞悬液；
(6)将细胞悬液离心弃去上清，类器官完全培养基(配方同实施例1)重悬细胞后，接种到6孔板中；
(7)培养期间每3天更换一次培养基；
(8)每7天传代1次，传代时每孔加入1mL胰酶处理。
(9)取收集的第3代细胞，类器官完全培养基(配方同实施例1)或含丙酮酸钠高糖培养基重悬细胞后，以200万细胞/孔接种到6孔板中。所述的含丙酮酸钠高糖培养基配置方式如下：
(10)培养期间每3天更换一次培养基；
(11)一般每7天传代1次，1：3或1：4传代，传代时每孔加入1mL胰酶处理，加ADMEM/F12培养基5mL或高糖DMEM培养基，1400rpm离心5分钟。
如图2所示，本发明的类器官完全培养基培养的骨肿瘤类器官明显生长状态良好且组装明显，经过一定时间可以培养出实心圆球状或不规则形状的类器官；而含丙酮酸钠高糖培养基培养的类器官细胞几乎观察不到类器官组装。
实施例3
如图3所示，本发明选取了1例临床样本的获取单细胞，在3次传代扩增后，用第3代细胞进行骨肿瘤类器官3D培养，具体包括如下步骤：
(1)取下的新鲜肿瘤组织用预冷的无菌PBS清洗2遍，用预冷的Advanced DMEM/F-12培养基(含100μg/mL Normocin)清洗2遍；
(2)将组织剪碎成不大于1mm3的小块后，加入2倍组织体积的组织消化液(配方同实施例1)将剪碎组织重悬，在37℃、55rpm条件下消化40分钟；
(3)消化后，加入1.5倍体积含5％血清的PBS溶液，1400rpm离心5分钟收集离心产物；
(4)加入2倍离心产物体积0.1mg/mL的DNase-I重悬并在37℃孵育3分钟，加入2倍体积含5％血清的PBS溶液，1400rpm离心5分钟收集离心产物；
(5)加入2倍离心产物体积红细胞裂解液重悬并在冰上孵育3分钟，随后将悬液过100μm细胞筛，得到细胞悬液；
(6)培养期间每3天更换一次培养基；
(8)一般每7天传代1次，传代时每孔加入1mL胰酶处理。
(9)取收集的第3代细胞，将细胞悬液离心弃去上清，PBS重悬细胞后进行计数，将计数好的细胞与PBS稀释的基质胶共混(基质胶体积：PBS体积＝1：1)，然后以4万/50μL/点接种到24孔板中，细胞培养箱中放置30分钟，加入类器官完全培养基1mL；所用的类器官完全培养基由Advanced DMEM/F-12培养基配成，添加成分如下：
(10)培养期间每7天更换一次培养基；
(11)每46天传代1次，1：3或1：4传代，传代时每孔加入0.5mL TrypLE Express处理，加Advanced DMEM/F-12培养基2mL，1400rpm离心5分钟。
如图3所示，在类器官培养基培养条件下，骨肿瘤类器官模型3D构建方法中，经过一定时间培养，可培养出纤维状的类器官；随着培养继续，肿瘤细胞进一步增殖组装，可以培养出实心圆球状或不规则形状的类器官，且在实心结构边缘可看到明显的新生肿瘤细胞。
图4为本发明培养出来的类器官的H&E染色的组织形态学分析图，以及骨肿瘤ki67、sox9、vimentin、TP53的免疫组织学分析，证明了体外培养的类器官与患者体内肿瘤组织在组织学形态和蛋白表达上高度一致。
Claims (5)
1.一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)新鲜肿瘤组织用预冷的无菌PBS清洗，然后用预冷的含Normocin的Advanced DMEM/F-12培养基清洗；
(2)将组织剪碎后，加入1.5-4倍组织体积的组织消化液将剪碎组织重悬，在37℃、55-90rpm条件下消化20-50分钟；
(3)消化后，加入含血清的PBS溶液，1200-1400rpm离心，收集离心产物；
(4)加入1.5-4倍离心产物体积的DNase-I重悬并在37℃孵育3-5分钟，加入含血清的PBS溶液，1200-1400rpm离心，收集离心产物；
(5)加入1.5-4倍离心产物体积红细胞裂解液重悬并在冰上孵育1-3分钟，随后将悬液过100μm细胞筛，得到细胞悬液，将细胞悬液离心弃去上清；
(6)进行平面培养或3D培养，其中，
平面培养的方法为：
a、用类器官完全培养基重悬细胞后，接种到细胞培养容器中，培养期间每2-4天更换一次培养基，每4-7天传代1次，传代时加入胰酶处理；
3D培养的方法为：
1)、PBS重悬细胞后进行计数，将计数好的细胞与基质胶共混后加入到细胞培养容器中，然后在细胞培养箱37℃，CO2浓度5％-7％条件下放置10-30分钟，加入类器官完全培养基，培养期间每5-7天更换一次培养基，每35-50天传代1次，传代时加入TrypLE Express酶处理；
所述类器官完全培养基由Advanced DMEM/F-12培养基为溶剂配成，添加成分如下：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述组织消化液由DMEM/F-12为溶剂配成，每10mL组织消化液添加如下成分：
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的基质胶使用预冷的PBS稀释，其中基质胶母液体积∶PBS体积为1∶0～1∶3。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤(6)3D培养中，细胞密度为1000-100000个/点，接种体积为50μL/点，每容器接种个数为1-6个。
5.一种类器官完全培养基，其特征在于，所述类器官完全培养基以Advanced DMEM/F-12培养基为基础，添加如下成分构成：
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211664563.1A CN115851577A (zh) | 2022-12-23 | 2022-12-23 | 一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211664563.1A CN115851577A (zh) | 2022-12-23 | 2022-12-23 | 一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115851577A true CN115851577A (zh) | 2023-03-28 |
Family
ID=85654264
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211664563.1A Pending CN115851577A (zh) | 2022-12-23 | 2022-12-23 | 一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115851577A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116836934A (zh) * | 2023-08-31 | 2023-10-03 | 北京大橡科技有限公司 | 骨肉瘤类器官培养液、培养试剂组合及培养方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111808817A (zh) * | 2020-07-24 | 2020-10-23 | 上海昊佰生物科技有限公司 | 一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基 |
| CN113897336A (zh) * | 2020-06-22 | 2022-01-07 | 厦门博创盛世生物技术有限公司 | 一种wrn条件培养基的制备方法及应用 |
| CN114921413A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-08-19 | 创芯国际生物科技(广州)有限公司 | 一种骨肉瘤类器官培养基及培养方法 |
-
2022
- 2022-12-23 CN CN202211664563.1A patent/CN115851577A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113897336A (zh) * | 2020-06-22 | 2022-01-07 | 厦门博创盛世生物技术有限公司 | 一种wrn条件培养基的制备方法及应用 |
| CN111808817A (zh) * | 2020-07-24 | 2020-10-23 | 上海昊佰生物科技有限公司 | 一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基 |
| CN114921413A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-08-19 | 创芯国际生物科技(广州)有限公司 | 一种骨肉瘤类器官培养基及培养方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AINA HE, 等: "Organoid culture system for patient-derived lung metastatic osteosarcoma", MEDICAL ONCOLOGY, vol. 37 * |
| 黄少兵: "3D组织工程建立快速原位骨肉瘤动物模型的实验研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑, pages 059 - 43 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116836934A (zh) * | 2023-08-31 | 2023-10-03 | 北京大橡科技有限公司 | 骨肉瘤类器官培养液、培养试剂组合及培养方法 |
| CN116836934B (zh) * | 2023-08-31 | 2023-11-24 | 北京大橡科技有限公司 | 骨肉瘤类器官培养液、培养试剂组合及培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106967672B (zh) | 一种肺及肺癌组织培养方法以及用其构建肺癌小鼠动物模型方法 | |
| CN106834212B (zh) | 一种用于肺组织3d培养的培养基 | |
| EP3130668B1 (en) | In-vitro expansion of erythroid cells | |
| Peehl et al. | Clonal growth characteristics of adult human prostatic epithelial cells | |
| CN103865876A (zh) | 一种肿瘤细胞原代培养的方法 | |
| CN111876386A (zh) | 一种乳腺癌类器官的培养方法以及和肿瘤相关成纤维细胞的共培养方法 | |
| CN111808817A (zh) | 一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基 | |
| CN111690615B (zh) | 一种鼻咽癌类器官专用培养基及无支架培养方法 | |
| CN112080471B (zh) | 顺铂耐药肺癌类器官及其培养方法、培养用培养基和用途 | |
| CN113106065B (zh) | 一种结直肠癌类器官与肝脏类器官共培养模型及其构建方法 | |
| CN113423816A (zh) | 一种用于干细胞大规模制备的三维培养方法 | |
| CN112852714B (zh) | 构建原位原发肺癌动物模型的方法 | |
| CN113278588A (zh) | 一种口腔鳞癌类器官培养基以及培养方法 | |
| CN115851577A (zh) | 一种基于单细胞的骨肉瘤类器官模型的构建方法 | |
| CN114075539B (zh) | 构建原位原发膀胱癌动物模型的方法 | |
| CN110106150B (zh) | 一种滑膜肉瘤细胞系hSS-005R的制备方法及应用 | |
| EP1743024B1 (en) | Method of expanding cord blood cells | |
| CN112813028A (zh) | 一种用于结直肠癌类器官培养的培养液及其制备方法 | |
| CN115094022B (zh) | 肺癌成纤维细胞与肺癌类器官共培养模型的构建方法 | |
| US20110206735A1 (en) | Tumorigenic CancerStemCells, Methods of Isolating and Using the Same | |
| CN111172110A (zh) | 一种脐带血cik细胞的培养方法 | |
| CN116590232A (zh) | 一种甲状腺癌类器官、培养基及培养方法 | |
| CN110172448B (zh) | 一种滑膜肉瘤细胞系hSS-005R及其子代细胞系 | |
| CN116536264A (zh) | 一种结肠癌类器官无血清专用培养基 | |
| CN114480250A (zh) | 构建原位原发胃癌动物模型的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 100035 No. 31 East Xinjiekou street, Beijing, Xicheng District Applicant after: BEIJING Research Institute OF TRAUMATOLOGY AND ORTHOPAEDICS Applicant after: Beijing Jishuitan Hospital Affiliated to Capital Medical University Address before: 100035 No. 31 East Xinjiekou street, Beijing, Xicheng District Applicant before: BEIJING Research Institute OF TRAUMATOLOGY AND ORTHOPAEDICS Applicant before: BEIJING JISHUITAN Hospital |
|
| CB02 | Change of applicant information |