CN115825267A - 高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法 - Google Patents

Abstract

本申请提供一种高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，涉及食品检测技术领域。高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，包括：测定待测葡萄酒中的碳酸甲乙酯的含量，然后根据表示葡萄酒二甲基二碳酸盐添加量与碳酸甲乙酯含量关系的第一标准工作曲线，计算得到所述待测葡萄酒中的二甲基二碳酸盐的含量。本申请提供的高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，稳定性高，灵敏度高，能够满足非法添加二甲基二碳酸盐的检测需求。

Description

高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法

技术领域

本申请涉及食品检测领域，尤其涉及一种高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法。

背景技术

二甲基二碳酸盐(DMDC)，是一种防腐剂，主要作用是抑制微生物的生长和繁殖，以延长食品的保存时间，抑制物质腐败。我国GB 2760-2014允许DMDC在饮料中使用，限量为0.25g/kg，但未规定其在葡萄酒中允许添加使用。欧美多国均对其在葡萄酒中的使用作出规定：FDA规定DMDC在葡萄酒、无醇葡萄酒或低醇葡萄酒限量为200mg/kg。欧盟指令95/2/EC规定DMDC为食品添加剂，允许用于不含酒精的调味饮料，不含酒精的葡萄酒，加入量为250mg/L，但最终产品不得检出DMDC残留。DMDC允许添加在葡萄酒中，不得超过200mg/L，在市场销售的葡萄酒中不得检测出DMDC残留。澳大利亚也规定葡萄酒中DMDC的添加量不得超过200mg/L。因此，进口葡萄酒中存在添加DMDC的风险较高，有必要开展检测。

然而，目前我国尚未建立葡萄酒中DMDC的检测标准方法。

发明内容

本申请的目的在于提供一种高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，以解决上述问题。

为实现以上目的，本申请采用以下技术方案：

一种高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，包括：

测定待测葡萄酒中的碳酸甲乙酯的含量，然后根据表示葡萄酒二甲基二碳酸盐添加量与碳酸甲乙酯含量关系的第一标准工作曲线，计算得到所述待测葡萄酒中的二甲基二碳酸盐的含量。

优选地，测定待测葡萄酒中的碳酸甲乙酯的含量的方法包括：

将所述待测葡萄酒与碳酸二乙酯内标溶液、正己烷混合，然后振荡提取、离心处理；

将上层正己烷提取液用气相色谱质谱联用仪测定得到碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值；

根据表示碳酸甲乙酯浓度与碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积比值的关系的第二标准工作曲线，得到所述待测葡萄酒中的碳酸甲乙酯的含量。

优选地，所述第二标准工作曲线通过以下方法获得：

将空白基质葡萄酒与碳酸甲乙酯标准溶液混合，得到不同浓度的碳酸甲乙酯系列标准工作液；

测定所述碳酸甲乙酯系列标准工作液的碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值，以所述碳酸甲乙酯系列标准工作液的浓度为横坐标，以碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值为纵坐标，拟合得到所述第二标准工作曲线。

优选地，所述气相色谱质谱联用仪中，气相色谱条件包括：

色谱柱为DB-WAX石英毛细管柱，30m×0.25mm×0.25μm；

色谱柱温度程序为：40℃保持5min，然后以10℃/min程序升温至150℃，再以40℃/min升温至250℃，保持5min；

载气为氦气，纯度≥99.999％；流速为1mL/min；

进样口温度为200℃；

进样量为1μL；

进样方式为无分流进样，3min后打开分流阀和隔垫吹扫阀。

优选地，所述气相色谱质谱联用仪中，质谱条件包括：

电离能量为70eV，电力方式为EI，离子源温度为230℃，传输线温度为240℃，测定方式为选择离子监测，溶剂延迟为5min。

优选地，所述碳酸甲乙酯的检出限为0.25mg/L，定量限为0.50mg/L。

优选地，所述第一标准工作曲线通过以下方法获得：

将检测出碳酸甲乙酯的葡萄酒样品与二甲基二碳酸盐标准溶液混合，得到不同浓度的二甲基二碳酸盐系列标准工作液，用气相色谱质谱联用仪测定得到所述二甲基二碳酸盐系列标准工作液的碳酸甲乙酯含量C_m；

检测不添加所述二甲基二碳酸盐标准溶液的所述葡萄酒样品中的碳酸甲乙酯含量C_s，计算C_m与C_s的差值得到所述二甲基二碳酸盐系列标准工作液的实际碳酸甲乙酯含量；

以二甲基二碳酸盐添加量为横坐标、以所述实际碳酸甲乙酯含量为纵坐标，得到所述第一标准工作曲线。

优选地，所述二甲基二碳酸盐标准溶液的制备方法包括：

将二甲基二碳酸盐标准品用丙酮溶解，配制得到目标浓度的标准溶液。

优选地，所述二甲基二碳酸盐系列标准工作液在检测前静置时间不低于7天。

优选地，所述待测葡萄酒为起泡葡萄酒；

所述起泡葡萄酒检测前进行排气操作：将恒温至15-20℃的起泡葡萄酒通过摇动进行放气，直至无气体逸出为止，然后用滤纸过滤备用。

与现有技术相比，本申请的有益效果包括：

本申请提供的高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，利用二甲基二碳酸盐与葡萄酒中的乙醇进行反应，并对其代谢产物碳酸甲乙酯开展检测，进而得到二甲基二碳酸盐的含量；该方法稳定性高，灵敏度高，能够满足非法添加二甲基二碳酸盐的检测需求，特别适用于海关检测使用。该方法有效解决了“由于二甲基二碳酸盐热稳定性极差，使用常规的气相色谱设备无法检测葡萄酒中的二甲基二碳酸盐”的问题，以及“现有标准GB1886.68-2015《食品安全国家标准食品添加剂二甲基二碳酸盐》仅适合较大量添加，不适用于葡萄酒中痕量的二甲基碳酸盐的检测”的问题。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对本申请范围的限定。

图1为葡萄酒提取液GC-MS谱图；

图2为葡萄酒提取液GC谱图；

图3为用柱子HP-INNOWAX进行实验的色谱图；

图4为用柱子DB-WAX进行实验的色谱图；

图5为升温程序优化后葡萄酒加标样品分离色谱图；

图6为碳酸甲乙酯离子碎片图；

图7为内标-碳酸二乙酯离子碎片图；

图8为不同溶剂提取的碳酸甲乙酯绝对回收率柱状图；

图9为使用不同的正己烷溶剂提取体积提取效果柱状图；

图10为不同提取时间提取效果柱状图；

图11为不同去泡方式对碳酸甲乙酯的影响柱状图；

图12为红葡萄酒检出限加标色谱图；

图13为甜白葡萄酒检出限加标色谱图；

图14为起泡葡萄酒检出限加标色谱图；

图15为红葡萄酒定量限加标色谱图；

图16为甜白葡萄酒定量限加标色谱图；

图17为起泡葡萄酒定量限加标色谱图；

图18为红葡萄酒中DMDC添加标准工作曲线；

图19为甜白葡萄酒中DMDC添加标准工作曲线；

图20为起泡葡萄酒中DMDC添加标准工作曲线。

具体实施方式

如本文所用之术语：

“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。

“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。

“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。

下面将结合具体实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

首先，对于研究过程进行说明，具体如下：

1.仪器选择

葡萄酒提取液GC-MS谱图如图1所示，葡萄酒提取液GC谱图如图2所示。

通过实验，发现由于FID是通用的检测器，不具备选择性，虽然通过仪器优化可以实现色谱分离，但定性能力以及抗干扰能力弱，因此后期改用气相色谱质谱法建立方法。

2.仪器条件优化

为了得到最佳峰型和分离效果，配制浓度为10mg/L碳酸甲乙酯工作溶液用于测试，从色谱柱、分流方式、进样口温度、流量、升温程序、质谱条件等方面对仪器检测条件进行优化。

(1)色谱柱优化

比较DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)、HP-INNOWAX(30m×0.25mm×0.25μm)和DB-WAX(30m×0.25mm×0.25μm)三种色谱柱分离效果，试验结果标准溶液在DB-5MS柱子上不出峰、在HP-INNOWAX柱子上碳酸甲乙酯峰型不对称、宽峰、拖尾，试验表明使用强极性的DB-WAX柱子色谱分离效果好，且得到的碳酸甲乙酯峰型最佳。

用柱子HP-INNOWAX的色谱图如图3所示，用柱子DB-WAX的色谱图如图4所示。

(2)升温程序优化

升温程序是气相中的重要参数，对物质的分离和分析结果有重大影响。本技术规范测试的样品是葡萄酒，葡萄酒中既有低沸点又有高沸点的组分，因此采用升温程序进行分析。先设置较低初温，让低沸点组分先分离，然后逐步升高柱温，让高沸点组分得到分离。经过优化，最终选择初温40℃保持5min，以10℃/min升至150℃，保持1min；再以40℃/min升至250℃，保持5min。此条件下整个过程耗时约25min，分离效果较好，如下图5所示。

(3)质谱条件的优化

采用标准溶液进行全扫描，找出响应值最大且没有本底干扰的三个离子对，结合Nist谱图给出的碎片，最终分别选择了碳酸甲乙酯(77，45，59)、碳酸二乙酯(91，45，63)，在此条件下，检测中没有出现基质和试剂的干扰，结果如图6(碳酸甲乙酯离子碎片图)和图7(内标-碳酸二乙酯离子碎片图)。

3.提取溶剂的选择

根据碳酸甲乙酯的极性及选用的色谱柱类型，选用了正己烷、乙腈、二硫化碳、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、正戊醇、四氢呋喃等溶剂进行提取，比较溶剂提取效果。其中正丁醇、四氢呋喃溶剂空白在待测组分出峰时间段有大的干扰峰，乙酸乙酯提取空白样品时有本底干扰，正戊醇样品提取液在碳酸二乙酯处有45的碎片干扰，故这四种试剂不选择，采用二硫化碳、正己烷、乙醚、乙腈四种溶剂进行提取，从绝对回收率进行比较，结果如图8所示(不同溶剂提取的碳酸甲乙酯绝对回收率)。

从柱状图可以看出，溶剂二硫化碳和乙醚提取结果较好，但这两种溶剂色谱纯级别较难获取，分析纯级别溶剂空白杂峰较多，且这两种溶剂本身挥发性强，试验过程中容易带来较大误差，因此不考虑这两种溶剂；乙腈提取碳酸甲乙酯绝对回收率不到50％，且极性杂质较多，不选择；正己烷提取结果绝对回收率接近60％，且市面上色谱纯级别正己烷较易获取，溶剂空白纯度高、杂峰少，稳定性好。综上所述，本研究选择色谱纯正己烷作为提取溶剂。

4.内标物的选择

由于碳酸甲乙酯极易挥发，为校正提取和进样分析过程中的损失，降低误差，本研究采用的是内标法，选择与碳酸甲乙酯性质相近的碳酸二乙酯为内标。

5.提取溶剂体积的选择

(1)比较了不同浓缩条件对碳酸甲乙酯回收率的影响：

吸取2mL浓度10mg/L的碳酸甲乙酯(含浓度为10mg/L碳酸二乙酯内标)标准溶液，采用吹氮浓缩方式四种：室温下吹干、室温下吹至1mL、30℃吹干、30℃吹至1mL(吹干后用1mL正己烷溶剂溶解定容)，浓缩后待测组分回收率如下表1所示：

表1四种不同浓缩方法对待测组分的影响

浓缩方式	碳酸甲乙酯回收率％	内标碳酸二乙酯回收率％
			室温吹干	0	0
室温吹剩1mL	72.6	63.4
			30℃吹干	0	0.0
30℃吹剩1mL	69.7	53.4

试验结果表明，采用在浓缩过程中碳酸甲乙酯损失及其严重，因此本申请不采用浓缩。

(2)比较不同提取体积的提取效果

量取10.0mL葡萄酒空白样品，加入碳酸甲乙酯浓度10mg/L(内标碳酸二乙酯浓度10mg/L)，分别用2.5mL，5.0mL，7.5mL，10mL正己烷溶剂提取，比较不同体积提取效果，结果如图9所示(每组中，左侧为碳酸甲乙酯峰面积，右侧为碳酸二乙酯峰面积)。

结果表明2.5mL提取所得峰面积最大，响应值最高，为提升方法灵敏度，本申请选择2.5mL正己烷作为溶剂提取体积。

6.提取时间的选择

量取10.0mL葡萄酒空白样品，加入碳酸甲乙酯浓度10mg/L(内标碳酸二乙酯浓度10mg/L)，用2.5mL正己烷提取。采用涡旋震荡提取1min，往复振荡提取5min、10min和15min，比较不同时间的提取效果，结果如图10所示(每组中，左侧为碳酸甲乙酯峰面积，右侧为碳酸二乙酯峰面积)。结果表明方法不同提取方法没有显著差异，最终选择了往复振荡10min的提取时间。

7.起泡葡萄酒去泡方式的影响

取10mL葡萄酒，添加10mg/L碳酸甲乙酯，比较了振荡后用定量滤纸过滤去泡和超声5min去泡对碳酸甲乙酯的影响，用两种处理方式得到的碳酸甲乙酯响应值结果如图11所示。结果表明不同去泡方式对碳酸甲乙酯影响没有显著差异，本研究最终选用振荡后滤纸过滤的方式。

8.标准溶液有效期的验证

本实验考察了碳酸甲乙酯和碳酸二甲酯化合物的有效期。由于这两个化合物均属于极易挥发的物质，因此选择-20℃保存标准储备溶液1000mg/L标准储备溶液，每月重新配置一新标准溶液，与储存的标准溶液同时进行分析，持续三个月，结果表明，三个月内，标准溶液保持稳定。

9.方法的定量限与检出限

按照测定条件进行加标实验，按前述优化条件下进样六次，分别获得六次进样的信噪比，以优于10倍信噪比为对应目标物的质量浓度为方法的定量限(LOQ)，方法的定量限为0.5mg/L。在各葡萄酒基质中添加0.25mg/L碳酸甲乙酯，验证检出限，均满足3倍信噪比的要求。各基质中在检出限和定量限浓度加标谱图见图12(红葡萄酒，检出限0.25mg/L)、图13(甜白葡萄酒，检出限0.25mg/L)、图14(起泡葡萄酒，检出限0.25mg/L)、图15(红葡萄酒，定量限0.5mg/L)、图16(甜白葡萄酒，定量限0.5mg/L)、图17(起泡葡萄酒，定量限0.5mg/L)。

实施例

本实施例提供一种高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，具体如下：

1.碳酸甲乙酯检测样品前处理方法

1.1葡萄酒

准确吸取10mL(精确到0.1mL)葡萄酒样品，于50mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入100μL碳酸二乙酯内标溶液(1000mg/L)，加入2.5mL正己烷，振荡提取10min，5000r/min离心5min，吸取上层正己烷提取液，待检测。

1.2起泡葡萄酒

准确吸取10mL(精确到0.1mL)除二氧化碳的起泡葡萄酒(将恒温至15～20℃的起泡葡萄酒约300mL倒入锥形瓶中，盖上盖子，轻轻摇动，开盖放气，再盖上盖子反复操作，直至无气体逸出为止，用单层中速滤纸过滤备用。)，于50mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入100μL碳酸二乙酯内标溶液(1000mg/L)，加入2.5mL正己烷，振荡提取10min，5000r/min离心5min，吸取上层正己烷提取液，待检测。

2.气相色谱质谱仪仪器参数

将样品前处理后所得溶液需通过气相色谱质谱联用仪测定，仪器参数如下：

2.1气相色谱参考条件

色谱柱：

DB-WAX石英毛细管柱，30m×0.25mm(id)×0.25μm，或相当者；

色谱柱温度程序：

40℃保持5min，然后以10℃/min程序升温至150℃，再以40℃/min升温至250℃，保持5min；

载气：氦气，纯度≥99.999％；

流速：1mL/min；

进样口温度：200℃；

进样量:1μL；

进样方式：无分流进样，3min后打开分流阀和隔垫吹扫阀。

2.2质谱参考条件

电离能量：70eV；

电力方式：EI；

离子源温度：230℃；

传输线温度：240℃；

测定方式：选择离子监测(SIM)；

溶剂延迟：5min。

监测离子(m/z)：见表2。

表2碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯的保留时间和监测离子

3.定量测定

3.1标准工作曲线的制作

准确吸取10 mL(精确到0.1mL)空白基质葡萄酒，于50 mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，分别加入适量碳酸甲乙酯标准溶液，使葡萄酒中碳酸甲乙酯浓度为0.5 mg/L，1.0 mg/L，5.0 mg/L，10.0 mg/L，30.0 mg/L，按上述步骤进行处理、测定。以碳酸甲乙酯系列标准工作液的浓度为横坐标，以碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线。

本申请建立了三种不同葡萄酒的标准工作曲线，见表3。

表3方法线性方程及相关系数

3.2试样溶液的测定

将试样溶液注入气相色谱-质谱联用仪中，记录试样中碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值，根据标准曲线得到待测液中碳酸甲乙酯的浓度。

本申请在通过在干红葡萄酒、甜白葡萄酒、起泡葡萄酒中分别添加不同浓度的碳酸甲乙酯，并进行检测，由表3所示标准曲线计算得到试样中碳酸甲乙酯的含量，结果见表4。

表4葡萄酒添加碳酸甲乙酯的实验

4.方法定量限

碳酸甲乙酯的检出限为0.25mg/L，定量限为0.50mg/L。

5.二甲基二碳酸添加量的确定

如果从葡萄酒中检出碳酸甲乙酯，即可推断该葡萄酒非法添加了二甲基二碳酸盐。此时,可以通过在同一支葡萄酒中添加二甲基二碳酸盐,通过测定产生的碳酸甲乙酯含量，从而推导出原有葡萄酒中二甲基二碳酸盐的添加量。

5.1所需试剂

5.1.1二甲基二碳酸盐(C₄H₆O₅，CAS号：128-44-9)，纯度≥99.0％；或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.1.2二甲基二碳酸盐标准溶液(1000mg/L)：确称取适量的二甲基二碳酸盐标准品，用丙酮溶解，配制成1000mg/L的标准储备液，在-20℃保存，有效期3个月。

5.2分析步骤

5.2.1准确吸取10mL(精确到0.1mL)检测出碳酸甲乙酯的葡萄酒样品(或经脱气后的葡萄酒样品)，于50mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入50mg/L，100mg/L，150mg/L，200mg/L的二甲基二碳酸盐标准溶液，盖好离心管盖，在10℃放置1周以上。所得葡萄酒样品，按照1～4所描述的方法，分析碳酸甲乙酯含量(C_m)。

5.2.2不添加二甲基二碳酸盐，按照1～4所描述的方法分析碳酸甲乙酯含量，此含量作为空白(C_s)。

5.3二甲基二碳酸盐添加量的计算

使用5.2.1的检测所得碳酸甲乙酯含量，扣除5.2.2检测的碳酸甲乙酯含量，以二甲基二碳酸盐添加量为横坐标，以不同二甲基二碳酸盐添加量的碳酸甲乙酯扣除本地后的结果(C_m-C_s)为纵坐标标准工作曲线。

结果如图18、图19和图20所示。

根据标准工作曲线推算出葡萄酒中二甲基二碳酸盐的添加量，结果如表5所示。

表5实测样品中二甲基二碳酸盐的添加量

为了证明加入碳酸二乙酯可以显著提升方法的回收率与精密度，特进行不增加碳酸二乙酯的情况下的对照实验，结果如下表6。

表6不增加碳酸二乙酯的情况下的对照实验(加标0.5mg/L)

由上表6可知，加入碳酸二乙酯可以显著提升方法的回收率与精密度。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的范围。

此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本申请的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本申请的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

Claims (10)

1.一种高灵敏检测葡萄酒中二甲基二碳酸盐的方法，其特征在于，包括：

测定待测葡萄酒中的碳酸甲乙酯的含量，然后根据表示葡萄酒二甲基二碳酸盐添加量与碳酸甲乙酯含量关系的第一标准工作曲线，计算得到所述待测葡萄酒中的二甲基二碳酸盐的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，测定待测葡萄酒中的碳酸甲乙酯的含量的方法包括：

将所述待测葡萄酒与碳酸二乙酯内标溶液、正己烷混合，然后振荡提取、离心处理；

将上层正己烷提取液用气相色谱质谱联用仪测定得到碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值；

根据表示碳酸甲乙酯浓度与碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积比值的关系的第二标准工作曲线，得到所述待测葡萄酒中的碳酸甲乙酯的含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第二标准工作曲线通过以下方法获得：

将空白基质葡萄酒与碳酸甲乙酯标准溶液混合，得到不同浓度的碳酸甲乙酯系列标准工作液；

测定所述碳酸甲乙酯系列标准工作液的碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值，以所述碳酸甲乙酯系列标准工作液的浓度为横坐标，以碳酸甲乙酯和碳酸二乙酯色谱峰面积的比值为纵坐标，拟合得到所述第二标准工作曲线。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述气相色谱质谱联用仪中，气相色谱条件包括：

色谱柱为DB-WAX石英毛细管柱，30m×0.25mm×0.25μm；

色谱柱温度程序为：40℃保持5min，然后以10℃/min程序升温至150℃，再以40℃/min升温至250℃，保持5min；

载气为氦气，纯度≥99.999％；流速为1mL/min；

进样口温度为200℃；

进样量为1μL；

进样方式为无分流进样，3min后打开分流阀和隔垫吹扫阀。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述气相色谱质谱联用仪中，质谱条件包括：

电离能量为70eV，电力方式为EI，离子源温度为230℃，传输线温度为240℃，测定方式为选择离子监测，溶剂延迟为5min。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述碳酸甲乙酯的检出限为0.25mg/L，定量限为0.50mg/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一标准工作曲线通过以下方法获得：

将检测出碳酸甲乙酯的葡萄酒样品与二甲基二碳酸盐标准溶液混合，得到不同浓度的二甲基二碳酸盐系列标准工作液，用气相色谱质谱联用仪测定得到所述二甲基二碳酸盐系列标准工作液的碳酸甲乙酯含量C_m；

检测不添加所述二甲基二碳酸盐标准溶液的所述葡萄酒样品中的碳酸甲乙酯含量C_s，计算C_m与C_s的差值得到所述二甲基二碳酸盐系列标准工作液的实际碳酸甲乙酯含量；

以二甲基二碳酸盐添加量为横坐标、以所述实际碳酸甲乙酯含量为纵坐标，得到所述第一标准工作曲线。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述二甲基二碳酸盐标准溶液的制备方法包括：

将二甲基二碳酸盐标准品用丙酮溶解，配制得到目标浓度的标准溶液。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述二甲基二碳酸盐系列标准工作液在检测前静置时间不低于7天。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述待测葡萄酒为起泡葡萄酒；

所述起泡葡萄酒检测前进行排气操作：将恒温至15-20℃的起泡葡萄酒通过摇动进行放气，直至无气体逸出为止，然后用滤纸过滤备用。

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