CN115820310A - 一种适用于数字pcr的基础白矿油 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的一种适用于数字PCR的基础白矿油，按照重量百分比，所述基础白矿油包括以下组分：15号白矿油95％—99％、添加剂1％—5％，其中，所述添加剂为EM90或WE09或棕榈酸异丙酯。本发明生成的液滴大小均一、热稳定性好、不蒸发、不融合、不抑制PCR扩增，能够确保后续PCR反应的进行和定量分析。
Description
技术领域
本发明涉及白矿油技术领域，尤其涉及一种适用于数字PCR的基础白矿油。
背景技术
近几年随着技术发展，人们提出并开发了各种均匀液滴生成的方法来实现数字PCR，包括微流体法、液滴过滤法、乳化法等。目前所采用的油相包括的基础油为矿物油、白蜡油、氟化油，这些基础油中需要添加防蒸发剂，添加防蒸发剂虽然能够在一定程度上防止蒸发的问题，但是仍然存在蒸发以及融合现象，液滴不均一、灵敏度低。
发明内容
基于此，本发明提供一种适用于数字PCR的基础白矿油，生成的液滴大小均一、热稳定性好、不蒸发、不融合、不抑制PCR扩增，能够确保后续PCR反应的进行和定量分析。
本发明提供一种适用于数字PCR的基础白矿油，按照重量百分比，所述基础白矿油包括以下组分：15号白矿油95％—99％、添加剂1％—5％，其中，所述添加剂为EM90或WE09或棕榈酸异丙酯。
本发明提供一种制备所述的适用于数字PCR的基础白矿油的方法，所述方法包括：
原料制备。将不同原料分别置于内部含有搅拌机的筒体，利用搅拌机构对密闭筒体的内部原料进行搅拌处理，持续搅拌5分钟。再经过超声10min将原料充分混匀，可按如下所列方案进行处理均可行：1.静置处理：将混匀的油相放置于水平台面，自然静置1-5日评估即可；2.离心处理：将混匀的油相放置于离心机中2000g下离心10min，按测验确认过的刻度以上油相逐一吸出至洁净玻璃瓶中即可；3.紫外处理：将混匀的油相置于紫外房间的水平摇床上进行紫外照射1-2h评估即可。
PCR扩增。对混匀配制好的油相加热到95摄氏度进行预变性处理，并变性5分钟，然后再进行95摄氏度的变性处理15秒。待变性完成后，将温度降低到60摄氏度进行退火处理，并持续退火60秒，持续扩增过程45个循环。
本发明中的有益效果为：
1、本发明选用了15号白矿油，其基本组成为饱和环烷烃结构，芳香烃、含氮、氧、硫等物质近似于零，具有良好的氧化安定性，化学稳定性、光安定性，而且其纯度和馏分是较石蜡油更为精细，纯度较高，流动性能较为稳定。
2、适配比例的15号白矿油和特定添加剂，无需添加防蒸发剂，可以实现无融合、无蒸发现象，使得液滴扩增后形貌无差异，也能降低油相成本。不同型号基础白矿油的沸点不同，相对沸点会有所变化，而沸点与饱和蒸汽压是相反关系，而饱和蒸汽压所述的是在密闭条件中，在一定温度下，与固体或液体处于相平衡的蒸气所具有的压强，当液体的饱和蒸汽压与外界气压相等时，该液体就开始沸腾。温度增高，蒸汽压增高，沸点低的液体无需过高温度就沸腾的蒸汽压就与环境的相等。通过测试不同型号的白矿油，15号白矿油的粘度和闪点十分适合制备基础白矿油，因为运动粘度对于油相流动性影响较大，粘度过小则液滴容易破碎，过高难以形成液滴，而闪点与油本身高温加热有关，不同闪点优化选择下液滴生成也会受到影响。
附图说明
图1为选用的15号白矿油的液滴荧光图片。
图2为选用的15号白矿油经过PCR扩增后的荧光图片。
图3为选用的3号白矿油的液滴荧光图片。
图4为选用的5号白矿油的液滴荧光图片。
图5为选用的7号白矿油的液滴荧光图片。
图6为选用的10号白矿油的液滴荧光图片。
图7为选用的26号白矿油的液滴荧光图片。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
本发明给出以下实施例和对比例，以下实施例和对比例中，各组分的百分比是重量百分比。
以上实施例和对比例按照以下方法进行制备：
原料制备。将不同原料分别置于内部含有搅拌机的筒体，利用搅拌机构对密闭筒体的内部原料进行搅拌处理，持续搅拌5分钟。再经过超声10min将原料充分混匀，可按如下所列方案进行处理均可行：1.静置处理：将混匀的油相放置于水平台面，自然静置1-5日评估即可；2.离心处理：将混匀的油相放置于离心机中2000g下离心10min，按测验确认过的刻度以上油相逐一吸出至洁净玻璃瓶中即可；3.紫外处理：将混匀的油相置于紫外房间的水平摇床上进行紫外照射1-2h评估即可。
PCR扩增。对混匀配制好的油相加热到95摄氏度进行预变性处理，并变性5分钟，然后再进行95摄氏度的变性处理15秒。待变性完成后，将温度降低到60摄氏度进行退火处理，并持续退火60秒，持续扩增过程45个循环。
将以上实施例和对比例进行测试，测试结果：实施例1-15中，液滴完整、大小均一，无融合、无蒸发现象。对比例1-5中，液滴完整度略差，均匀度略差，无融合现象，但是略有蒸发现象。对比例6-8中，液滴完整度很差，均匀度很差，部分有融合现象，蒸发现象明显。对比例9-11中，液滴完整度略差，均匀度略差，部分有融合现象，略有蒸发现象。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种适用于数字PCR的基础白矿油，其特征在于，按照重量百分比，所述基础白矿油包括以下组分：15号白矿油95％—99％、添加剂1％—5％，其中，所述添加剂为EM90或WE09或棕榈酸异丙酯。
2.一种制备如权利要求1所述的适用于数字PCR的基础白矿油的方法，其特征在于，所述方法包括：
原料制备。将不同原料分别置于内部含有搅拌机的筒体，利用搅拌机构对密闭筒体的内部原料进行搅拌处理，持续搅拌5分钟。再经过超声10min将原料充分混匀，可按如下所列方案进行处理均可行：1.静置处理：将混匀的油相放置于水平台面，自然静置1-5日评估即可；2.离心处理：将混匀的油相放置于离心机中2000g下离心10min，按测验确认过的刻度以上油相逐一吸出至洁净玻璃瓶中即可；3.紫外处理：将混匀的油相置于紫外房间的水平摇床上进行紫外照射1-2h评估即可。
PCR扩增。对混匀配制好的油相加热到95摄氏度进行预变性处理，并变性5分钟，然后再进行95摄氏度的变性处理15秒。待变性完成后，将温度降低到60摄氏度进行退火处理，并持续退火60秒，持续扩增过程45个循环。
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