CN115785197A - 一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法 - Google Patents

Abstract

本说明书提供一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，其中多肽为亲水性多肽，该方法包括：将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液；将所述水溶液与有机碱混合得到中和的水溶液；在不溶于水的有机溶剂中加入所述中和的水溶液后进行搅拌并形成沉淀；以及分离所述沉淀得到产物。上述方法可简单、高效、低成本地对亲水性多肽的三氟乙酸盐进行除盐，适用于工业化生产。

Description

一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法

交叉引用

本申请要求2021年9月9日提交的中国申请202111058092.5的优先权，全部内容通过引用的方式整体并入本文。

技术领域

本说明书涉及多肽纯化领域，特别涉及一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法。

背景技术

多肽是由多个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物，是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，在医疗、卫生、保健、食品、化妆品等领域均有广泛应用。例如GHK(Glycyl-L-histidyl-L-lysine)、HLA-G(KGPPAALTL)、HG1(KW LNALLHHGLNCAKGVLA)等亲水性多肽。其中，GHK是一种活性多肽，存在于人体的血液、唾液、尿液中，具有抗老、抗氧化、除皱的功能。GHK及其修饰后产物被广泛应用于功能性化妆品中，是重要的化妆品功能性活性物。HLA-G是I类主要组织相容性复合体(MHC)的组成部分，可以结合不同抗原，从而将抗原呈递给免疫系统，激活免疫系统。HG1是一种抗菌肽，能够抑制皮肤伤口的细菌，如金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌。因此，研究多肽及其衍生物的合成有着重要的意义。

常用的亲水性多肽合成方法，需要先获得亲水性多肽三氟乙酸盐，再去除三氟乙酸得到亲水性多肽。为了使合成的亲水性多肽达到可以在人用产品中添加的标准，需要提供效率更高、经济性更好并且适于大规模工业生产的去除三氟乙酸的方法。

发明内容

本说明书实施例之一提供一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，其中，所述多肽为亲水性多肽，所述方法包括：将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液；将所述水溶液与有机碱混合得到中和的水溶液；在不溶于水的有机溶剂中加入所述中和的水溶液后进行搅拌并形成沉淀；以及分离所述沉淀得到产物。

在一些实施例中，所述多肽包括GHK、AHK(L-Alanyl-L-histidyl-L-lysine)、HLA-G、HG1或八聚精氨酸(Octa-arginine)。

在一些实施例中，所述水和所述多肽三氟乙酸盐的质量比为(0.1～10):1。

在一些实施例中，所述有机碱选自环己胺、丙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、苯胺、乙醇胺、二甲胺或二乙胺中的至少一种。

在一些实施例中，所述有机碱选自环己胺、丙胺或三乙胺中的至少一种。

在一些实施例中，所述有机碱和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1～5):1。

在一些实施例中，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、正己烷、环戊基甲醚、乙醚或二氯甲烷中的至少一种。

在一些实施例中，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、或二氯甲烷中的至少一种

在一些实施例中，所述有机溶剂与所述多肽三氟乙酸盐的体积-质量比为(10～50)mL:1g。

在一些实施例中，所述有机碱为环己胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述环己胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。

在一些实施例中，所述有机碱为丙胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述丙胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。

在一些实施例中，所述有机碱为三乙胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述三乙胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。

在一些实施例中，还包括对分离的沉淀进行至少一次纯化的步骤。

在一些实施例中，所述纯化步骤包括：将所述分离的沉淀与所述有机溶剂混合，将混合的溶液进行离心得到离心后的沉淀，对所述离心后的沉淀进行干燥。

在一些实施例中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或二氯甲烷中的至少一种。

在一些实施例中，还包括对产物中的三氟乙酸含量进行测定。

在一些实施例中，所述产物中三氟乙酸的含量降低为所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的初始含量的3.4～39％。

本说明书实施例之一还提供了用上述方法获得的亲水性多肽在制备化妆品组合物或药物组合物中的用途。

具体实施方式

如本说明书和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。

在含有多个官能团化合物的合成时，需要选择性地在某一个反应点上进行化学反应，另外的官能团需要被屏蔽起来。因此，在多肽的化学合成中，氨基酸的α-氨基、侧链活性基团等官能团的保护和脱保护至关重要。多肽的化学合成以保护氨基酸为原料合成肽链。保护氨基酸的常用保护基团，如叔丁氧羰基(Boc)、三苯甲基(Trt)、乙酰基(Ac)等，可在三氟乙酸(TFA)介质中脱除并形成多肽的三氟乙酸盐。由于三氟乙酸属于酸性有机溶剂，对细胞具有毒性，需要在多肽合成的后处理中进行转盐或脱盐。

本说明书提供了一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，可通过对多肽三氟乙酸盐的水溶液进行中和、沉淀及沉淀分离，生成除盐的亲水性多肽。在一些实施例中，降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法至少包括以下步骤Ⅰ至步骤Ⅳ。

在步骤Ⅰ中，可将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液。

在一些实施例中，多肽为亲水性多肽。具体的，上述方法可适用于多肽序列中亲水氨基酸所占比例大于50％且可溶于水的多肽。其中，所述亲水氨基酸包括但不限于赖氨酸、精氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸等。例如，亲水性多肽可以包括GHK、AHK、HLA-G、HG1、八聚精氨酸、五胜肽(Pentapeptide-3)、肌肽(L-Carnosine)等。在一些实施例中，多肽为GHK、AHK、HLA-G、HG1或八聚精氨酸。在一些实施例中，多肽为GHK、HLA-G或HG1。

在一些实施例中，可以通过液相合成法制备多肽三氟乙酸盐。液相合成法可首先将一个氨基酸的羧基和另一个氨基酸的氨基被保护基团封闭，然后参与肽键形成的羧基被激活，激活的羧酸受到游离氨基的亲电攻击形成一个封闭的二肽，最后通过水解有选择地除去保护基团而留下一个完整的肽键。其中，保护氨基酸作为合成原料，其主链氨基或侧链保护基团的脱保护剂为三氟乙酸，使得合成产物脱保护后生成多肽三氟乙酸盐。

在一些实施例中，可以通过固相合成法制备多肽三氟乙酸盐。固相合成法可将合成肽链的羧基端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组分经过三氟乙酸脱去氨基保护基，并同过量的活化羧基组分反应接长肽链；重复缩合、洗涤、去保护、中和、洗涤、下一轮缩合的操作，以达到所要合成的肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化等处理，得到所要的多肽。其中，保护氨基酸作为合成原料，其主链氨基或侧链保护基团的脱保护剂为三氟乙酸，使得合成产物脱保护后生成多肽三氟乙酸盐。

在一些实施例中，水和多肽三氟乙酸盐的质量比为(0.1～10):1。水和多肽三氟乙酸盐的质量比可根据多肽三氟乙酸盐的溶解度确定。例如，水和多肽三氟乙酸盐的质量比可约为0.1:1、0.3:1、0.5:1、0.7:1、0.9:1、1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1、6.5:1、7:1、7.5:1、8:1、8.5:1、9:1、9.5:1或10:1，还包括上述端值的组合为特征的任一范围，在此不再赘述。在一些实施例中，为缩减后续处理的时间成本，水和多肽三氟乙酸盐的质量比为(0.1～5):1。

在步骤Ⅱ中，可将所述水溶液与有机碱混合得到中和的水溶液。

多肽三氟乙酸盐呈酸性，与有机碱发生中和反应可生成多肽。例如，在水溶液中，多肽三氟乙酸盐与环已胺发生中和反应，生成多肽、水以及环己胺与三氟乙酸形成的盐。具体的，多肽三氟乙酸盐、有机碱及两者中和反应的产物均可溶于水。以有机溶剂溶解多肽三氟乙酸盐，例如使用甲醇溶解多肽三氟乙酸盐，溶解效果差，可导致中和反应的反应产物析出，部分包裹在析出物中的多肽三氟乙酸盐无法参与中和反应；以水作为溶解多肽三氟乙酸盐的溶剂，可确保后续中和反应的反应产物不会提前析出，有效保障多肽三氟乙酸盐充分反应并生成多肽，有利于后续多肽与非多肽类物质的分离。

可用于中和多肽三氟乙酸盐的有机碱的非限制性实施例包括但不限于环己胺、丙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、苯胺、乙醇胺、二甲胺、二乙胺、四甲基乙二胺、三甲胺、N-甲基吗啉、N,N-二甲基氨基吡啶、二氮杂双环辛烷(DABCO)、二氮杂双环壬烯(DBN)、二氮杂双环十一烯(DBU)等。在一些实施例中，有机碱选自环己胺、丙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、苯胺、乙醇胺、二甲胺和二乙胺中的一种或多种。在一些实施例中，有机碱选自环己胺、丙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、苯胺和乙醇胺中的一种或多种。在一些实施例中，有机碱选自环己胺、丙胺或三乙胺中的一种或多种。

为控制所述中和的水溶液中多肽的性状，在一些实施例中，有机碱和多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1～5):1。具体的，有机碱和多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比过高可导致多肽性状变差，例如变为油状，不利于后续处理及使用。例如，有机碱和多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1或5:1。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，在此不再赘述。在一些实施例中，为使多肽保持良好的性状，有机碱和多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。

在步骤Ⅲ中，可在不溶于水的有机溶剂中加入中和的水溶液后进行搅拌并形成沉淀。

在所述中和的水溶液中包含多肽以及有机碱与三氟乙酸形成的盐，还可能包含未反应的有机碱。向所述中和的水溶液中加入不溶于水的有机溶剂，该不溶于水的有机溶剂可溶解上述有机碱和有机碱与三氟乙酸形成的盐，而难以溶解或不溶解上述亲水性多肽，从而有效分离中和的水溶液中的多肽与非多肽类物质。

在一些实施例中，不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正己烷和环戊基甲醚中的一种或多种。例如，将乙酸乙酯加入所述中和的水溶液中，有机碱以及有机碱与三氟乙酸形成的盐可溶于乙酸乙酯，多肽不溶于乙酸乙酯，使得多肽在乙酸乙酯中形成沉淀。在一些实施例中，不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正己烷和环戊基甲醚中的一种或多种。

在一些实施例中，搅拌时长为20min～60min。具体的，搅拌可使多肽充分沉淀，防止多肽结块，并使有机碱与三氟乙酸形成的盐充分溶解于有机溶剂中，因此，搅拌时长及搅拌效果可影响多肽与非多肽类物质的分离效果。例如，搅拌时长为20min、30min、40min、50min或60min。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，在此不再赘述。

在一些实施例中，有机溶剂与多肽三氟乙酸盐的体积-质量比为(10～50)mL:1g。具体的，为使中和的水溶液中的有机碱与三氟乙酸形成的盐充分溶解于有机溶剂中，可基于有机碱与三氟乙酸形成的盐在有机溶剂中的溶解度确定有机溶剂与多肽三氟乙酸盐的体积-质量比。例如，有机溶剂与多肽三氟乙酸盐的体积-质量比为10mL:1g、15mL:1g、20mL:1g、25mL:1g、30mL:1g、35mL:1g、40mL:1g、45mL:1g或50mL:1g。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，在此不再赘述。

在步骤Ⅳ中，可分离沉淀得到产物。

在一些实施例中，可通过对步骤Ⅲ制得的形成沉淀的溶液进行离心、抽真空干燥得到分离的沉淀，分离的沉淀即为产物。在一些实施例中，还可对分离的沉淀进行一次或多次纯化，一次或多次纯化的沉淀即为产物；对于纯化的次数，本实施例未做限制。

在一些实施例中，纯化步骤可进一步包括：

步骤Ⅳ-Ⅰ，将分离的沉淀与不溶于水的有机溶剂混合得到混合的溶液。具体的，对分离的沉淀进行重悬，使可能残留在沉淀中的杂质，包括有机碱以及有机碱与三氟乙酸形成的盐，重新溶解于有机溶剂中。

步骤Ⅳ-Ⅱ，对所述混合的溶液进行离心后得到离心后的沉淀。具体的，离心使沉淀与可能残留的杂质分离。

步骤Ⅳ-Ⅲ，对离心后的沉淀进行干燥得到纯化的沉淀。具体的，干燥可使有机溶剂完全挥发，进一步减少沉淀中可能残留的杂质，保证产物纯度。

通过上述方法对多肽三氟乙酸盐进行除盐可有效控制产物中三氟乙酸盐的含量。在一些实施例中，采用离子色谱法检进行检测，产物中三氟乙酸盐含量为0.1％～20％。例如，产物中三氟乙酸盐含量为0.1％、0.3％、0.5％、0.7％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，在此不再赘述。

在一些实施例中，采用离子色谱法检进行检测，产物中三氟乙酸的含量降低为多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的初始含量的3.4～39％。具体的，多肽三氟乙酸盐是指步骤Ⅰ中的未进行除盐处理的多肽三氟乙酸盐。例如，产物中三氟乙酸盐的含量降低为多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的初始含量的3.4％、3％、3.5％、4％、6％、8％、10％、12％、14％、16％、18％、20％、25％、30％、35％或39％。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，在此不再赘述。

本发明还提供了亲水性多肽在制备化妆品组合物或药物组合物中的用途，其中亲水性多肽使用前述方法获得。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

多肽样品纯度的检测

采用高效液相色谱法(岛津LC-20AB系统，色谱柱为Inertsil ODS-3，5u，120A，250x4.6mm；移动相A为0.1％TFA水，移动相B为0.1％TFA乙腈，梯度为25分钟内5％至65％B，并以A/B(95:5)再平衡10分钟；流速为1.0ml/min，柱温37℃，检测器为SPD-20A二极管阵列检测器)分析多肽样品的纯度。按面积归一化法进行测定。

多肽样品三氟乙酸含量的检测

采用离子色谱法(Thermo AQUION RFIC阳离子色谱仪，色谱柱为DionexIonPaoAS11-HC 4×250mm，淋洗液为30mM的氢氧化钾溶液，抑制器电流为75mA，流速为1.0ml/min，柱温30℃，检测器为电导检测器)分析多肽样品中三氟乙酸含量。精密量取供试品溶液及对照品溶液各25ul注入离子色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。

降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法

a)将7.48g多肽三氟乙酸盐加入到100mL的离心管中，加入5mL的水，室温搅拌至完全溶解，获得多肽三氟乙酸盐的水溶液。

b)根据不同实施例的配方表，向步骤a)所得多肽三氟乙酸盐的水溶液中滴加配方量的有机碱，室温搅拌使其充分反应，获得中和的水溶液。

c)根据不同实施例的配方表，将200mL有机溶剂加入到600mL烧杯中，将步骤b)所得中和的水溶液滴加入有机溶剂中，边加边搅拌，加入完成后继续搅拌30min，使多肽充分析出，其他成分充分溶解，获得含沉淀的混合液。

d)将步骤c)所得含沉淀的混合液倒入离心管中，3000rmp/min离心3min。离心完成后，弃去上清液，保留沉淀；向沉淀中加入50mL有机溶剂进行重悬，再3000rmp/min离心3min，弃去上清液，保留沉淀；将所得沉淀放入真空干燥箱中干燥5h，得到产物，即多肽样品。

实施例1.GHK样品

制备GHK样品(自制)。采用前述降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，取GHK三氟乙酸盐制备GHK样品，即样品1至样品21，对应配方参见表1。取GHK三氟乙酸盐作为空白组样品1。

表1配方及三氟乙酸含量检测结果

采用前述多肽样品三氟乙酸含量的检测方法对空白组样品1及GHK样品的三氟乙酸含量进行检测，样品1至样品21以及空白组样品1的三氟乙酸含量检测结果见表1。空白组样品1为未进行后处理的GHK三氟乙酸盐样品。以水作为溶剂溶解GHK三氟乙酸盐的溶剂，使用不同的有机碱进行中和，并且用乙酸乙酯进行GHK析出分离而制得GHK样品1至样品21。根据上述结果可知，与空白组样品1相比，样品1至样品21的除盐效果显著，样品1至样品21中三氟乙酸的含量降低为空白组样品1中三氟乙酸含量的3.4～38.6％。

采用前述多肽样品纯度的检测方法对部分GHK样品进行纯度检测。其中，空白组样品1的纯度为94.2％；样品1的纯度为92.6％，样品4的纯度为92.3％、样品8的纯度为93.6％、样品10的纯度为86.9％、样品13的纯度为93.5％、样品16的纯度为93.9％、样品19的纯度分别为89.4％。样品1、4、8、10、13、16和19的纯度均高于85％，其中样品1、4、8、13和16的纯度高于90％。

对部分GHK样品进行收率统计。具体的，样品1的收率为67.8％，样品7的收率为69.9％。

实施例2.GHK样品

制备GHK样品(自制)。采用前述降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，取GHK三氟乙酸盐制备GHK样品，即样品22至样品33，对应配方参见表2。

表2配方及三氟乙酸含量检测结果

采用前述多肽样品三氟乙酸含量的检测方法对GHK样品的三氟乙酸含量进行检测，样品22至样品33的三氟乙酸含量检测结果见表2。以水作为溶解GHK三氟乙酸盐的溶剂，使用环己胺或丙胺进行中和，并且用不同的有机溶剂进行GHK析出分离而制得GHK样品，即样品22至样品33。根据上述检测结果可知，样品22至样品33的除盐效果显著，样品22至样品33中三氟乙酸的含量降低为实施例1的空白组样品1中三氟乙酸含量的12.4～20.8％。

实施例3.GHK样品

制备GHK样品(自制)。采用前述降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，取GHK三氟乙酸盐制备GHK样品，即样品34至样品36，对应配方参见表3。

制备对照组样品。取7.48g GHK三氟乙酸盐，加入甲醇100ml，加入200ml乙酸乙酯，溶解，加入二乙胺8ml，白色沉淀析出，抽滤，收集滤饼，滤饼用乙酸乙酯50ml打浆30min，抽滤，收集滤饼，旋干得到GHK对照组样品。

表3配方及三氟乙酸含量检测结果

采用前述多肽样品三氟乙酸含量的检测方法对对照组样品及GHK样品的三氟乙酸含量进行检测，样品34至样品36和对照组样品的三氟乙酸含量检测结果见表3。对照组样品使用有机溶剂甲醇溶解GHK三氟乙酸盐，且在溶解后先加入有机溶剂，再加入有机碱，使生成的GHK析出。样品34至样品36使用水溶解GHK三氟乙酸盐，且在溶解后先加入有机碱，再加入有机溶剂，使生成的GHK析出。根据上述检测结果可知，样品34至样品36的除盐效果显著。样品34至样品36中三氟乙酸的含量降低为实施例1的空白组样品1中三氟乙酸含量的34.4～39％，而对照组样品中三氟乙酸的含量降低为实施例1的空白组样品1中三氟乙酸含量的67.1％，样品34至样品36的上述降低幅度是对照组样品降低幅度的1.9～2倍。在降低GHK三氟乙酸盐中三氟乙酸含量方面，样品34至样品36的效果明显优于对照组样品。

实施例4.HLA-G样品

制备HLA-G样品(自制)。采用前述降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，取HLA-G三氟乙酸盐制备HLA-G样品，即样品37，对应配方参见表4。取HLA-G三氟乙酸盐作为空白组样品2。

表4配方及三氟乙酸含量检测结果

采用前述多肽样品三氟乙酸含量的检测方法对空白组样品2及样品37的三氟乙酸含量进行检测，空白组样品2及样品37的三氟乙酸含量检测结果见表4。根据上述结果可知，与空白组样品2相比，样品37中三氟乙酸的含量对比空白组样品2大幅减小，样品37中三氟乙酸的含量降低为空白组样品2中三氟乙酸含量的31.8％。

采用前述多肽样品纯度的检测方法对空白组样品2及样品37进行纯度检测。其中，空白组样品2的纯度为96.28％；样品37的纯度为96.22％，样品37的纯度高于90％。

对HLA-G样品进行收率统计。具体的，样品37的收率为73.67％。

实施例5.HG1样品

制备HG1样品(自制)。采用前述降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，取HG1三氟乙酸盐制备HG1样品，即样品38，对应配方参见表5。取HG1三氟乙酸盐作为空白组样品3。

表5配方及三氟乙酸含量检测结果

采用前述多肽样品三氟乙酸含量的检测方法对空白组样品3及样品38的三氟乙酸含量进行检测，空白组样品3及样品38的三氟乙酸含量检测结果见表5。根据上述结果可知，与空白组样品3相比，样品38中三氟乙酸的含量对比空白组样品3大幅减小，样品38中三氟乙酸的含量降低为空白组样品3中三氟乙酸含量的34.8％。

采用前述多肽样品纯度的检测方法对空白组样品3及样品38进行纯度检测。其中，空白组样品3的纯度为98.89％；样品38的纯度为98.70％，样品38的纯度高于90％。

对HG1样品进行收率统计。具体的，样品38的收率为88.04％。

本说明书所披露的一种基于多肽三氟乙酸盐生成的方法，可能带来的有益效果包括但不限于：(1)使用水作为溶解多肽三氟乙酸盐的溶剂，多肽三氟乙酸盐、有机碱以及两者中和反应的产物均可溶于水，以使多肽三氟乙酸盐充分反应，提高除盐的效果；(2)利用多肽、有机碱、有机碱与三氟乙酸形成的盐的不同溶解性，使用有机溶剂混合进行中和后的水溶液，快速分离多肽与非多肽类物质；(3)使用本说明书的方法对多肽三氟乙酸盐进行处理，可使处理获得的产物中三氟乙酸的含量降低为未处理的多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的3.4～39％；(4)本说明书的方法可简单、高效、低成本地对亲水性多肽的三氟乙酸盐进行除盐，处理效率高于使用高效液相制备仪器，适用于工业化生产。需要说明的是，不同实施例可能产生的有益效果不同，在不同的实施例里，可能产生的有益效果可以是以上任意一种或几种的组合，也可以是其他任何可能获得的有益效果。

本领域的技术人员应当理解，以上实施例仅为说明本发明，而不对本发明构成限制。凡在本发明的精神和原则内所作的任何修改、等同替换和变动等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (18)

1.一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，其中，所述多肽为亲水性多肽，其特征在于，所述方法包括：

将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液；

将所述水溶液与有机碱混合得到中和的水溶液；

在不溶于水的有机溶剂中加入所述中和的水溶液后进行搅拌并形成沉淀；以及分离所述沉淀得到产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽选自GHK、AHK、HLA-G、HG1或八聚精氨酸。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水和所述多肽三氟乙酸盐的质量比为(0.1～10):1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机碱选自环己胺、丙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、苯胺、乙醇胺、二甲胺或二乙胺中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述有机碱选自环己胺、丙胺、或三乙胺中的至少一种。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述有机碱和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1～5):1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、正己烷、环戊基甲醚、乙醚或二氯甲烷中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或二氯甲烷中的至少一种。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂与所述多肽三氟乙酸盐的体积-质量比为(10～50)mL:1g。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机碱为环己胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述环己胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机碱为丙胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述丙胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机碱为三乙胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述三乙胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括对分离的沉淀进行至少一次纯化的步骤。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述纯化步骤包括：将所述分离的沉淀与所述有机溶剂混合，将混合的溶液进行离心得到离心后的沉淀，对所述离心后的沉淀进行干燥。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或二氯甲烷中的至少一种。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，还包括对产物中的三氟乙酸含量进行测定。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述产物中三氟乙酸的含量降低为所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的初始含量的3.4～39％。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法获得的产物在制备化妆品组合物或药物组合物中的用途。