CN115777715A - 硫酸羟氯喹在预防植物病毒acmv上的应用及其方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开硫酸羟氯喹在预防植物病毒ACMV上的应用及其方法。本发明将封口膜袋套在植物叶片上，注入硫酸羟氯喹溶液，使得植物叶片浸泡在硫酸羟氯喹溶液中一定时间即可。低浓度的硫酸羟氯喹溶液对ACMV病毒有预防作用，为植物病毒的防治提供了新思路。
Description
技术领域
本发明属于农业医药领域，涉及硫酸羟氯喹在预防植物病毒ACMV上的应用及其方法。
背景技术
在农业生产中，植物病毒病是仅次于真菌的第二大类植物病害，有“植物癌症”之称。植物病毒品种多、分布广、繁殖快，因此防治困难。病毒能破坏细胞的代谢活动，引起植物的生理变化，常导致作物的产量和质量降低，严重时甚至使植物死亡。在农业生产中，世界各地大多数作物都不同程度地遭受到植物病毒的侵害。
非洲木薯花叶病毒(African cassava mosaic virus，简称ACMV)，又名木薯花叶病毒或木薯潜隐病毒，主要通过烟粉虱进行传播，且传毒能力十分强悍。木薯在整个生长繁殖期间均会遭受木薯花叶病毒病，受到侵染后木薯会出现“系统花叶”的典型症状，通常表现为叶片变形收缩、植株矮化和叶片斑驳退绿等，严重时植株死亡，产量大幅下降。
目前，在植物病毒病的防治途径中，除筛选抗病品种外，控制病毒最直接、最有效的方法是施用化学药剂。然而，相关研究和开发还不够成熟，目前尚未有特效药用以防治植物病毒病，更没有广谱的抗病毒剂。现有抗病毒剂的预防效果一般也只有40％-80％，远远无法满足农业生产的实际需求，目前广泛使用的传统农药也暴露出不少社会安全问题。
硫酸羟氯喹是一种由4-羟基喹啉构成的抗疟疾药，主要用于类风湿关节炎，青少年慢性关节炎，盘状和系统性红斑狼疮等人类疾病的治疗，临床应用较安全。
本发明测试了硫酸羟氯喹对植物病毒ACMV的预防效果并得到较好的结果，本发明使硫酸羟氯喹用于植物病毒的防治成为可能，为植物病毒的防治提供新的思路。
发明内容
本发明的第一个目的在于针对现有技术的不足，提供硫酸羟氯喹在预防植物病毒ACMV上的应用，使用无毒无害化学药剂硫酸羟氯喹进行实验，旨在克服传统防治药剂的缺陷，从而发现一种高效、安全的植物抗病毒剂。
为实现以上技术目的，本发明采用如下技术方案：
硫酸羟氯喹在预防植物病毒ACMV上的应用，其中所述硫酸羟氯喹具有如下化学式结构：
本发明的第二个目的是提供一种预防或治疗植物ACMV病毒的药物，包含活性成分硫酸羟氯喹。
作为优选，还包括其他药学上可接受的载体。
本发明的第三个目的是提供一种预防植物感染ACMV病毒的方法，包括将封口膜袋套在植物叶片上，注入硫酸羟氯喹溶液，使得植物叶片浸泡在硫酸羟氯喹溶液中一定时间即可。
作为优选，所述植物的施药阶段为6叶龄。
作为优选，所述硫酸羟氯喹的浓度为2-4mg/ml。
作为优选，所述硫酸羟氯喹处理时间为24h。
本发明的有益效果为：
本发明测试了硫酸羟氯喹对植物病毒ACMV的预防效果并得到较好的结果，本发明使硫酸羟氯喹用于植物病毒的防治成为可能，为植物病毒的防治提供新的思路。
(1)本发明抑毒效果较好，扩大了生物农药试剂的选择范围。
(2)本发明具有生产成本低、安全无毒等特点。
附图说明
图1为用药剂处理烟草叶片的过程；
图2为经不同浓度硫酸羟氯喹处理的烟草变化图；其中：a:药剂浓度2mg/ml；b:药剂浓度4mg/ml；c:阴性对照；
图3为ACMV的qRT-PCR检测量；其中：实验组A：4mg/ml；实验组B：2mg/ml。
具体实施方式
如前所述，鉴于现有技术的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，提出了本发明的技术方案，其主要是依据至少包括：本发明硫酸羟氯喹将其作为病毒ACMV抑制剂，能够实现成本低、安全无毒的优势。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
第一方面，硫酸羟氯喹在预防植物病毒ACMV上的应用，其中所述硫酸羟氯喹具有如下化学式结构：
第二方面，提供一种预防或治疗植物ACMV病毒的药物，包含活性成分硫酸羟氯喹。
作为优选，还包括其他药学上可接受的载体。
第三方面，提供一种预防植物感染ACMV病毒的方法，包括将封口膜袋套在植物叶片上，注入硫酸羟氯喹溶液，使得植物叶片浸泡在硫酸羟氯喹溶液中一定时间即可。对本氏烟进行预防实验，用硫酸羟氯喹溶液处理后接种ACMV病毒。观察本氏烟的发病症状并用qRT-PCR检测病毒的复制量。
作为优选，所述硫酸羟氯喹的浓度为2-4mg/ml。
此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可通过商业途径购买得到。
实施例1药剂处理后进行病毒接种
(1)称取适量硫酸羟氯喹固体，分别用蒸馏水配置浓度为2mg/ml、4mg/ml的溶液。
(2)选取长势均匀的6叶期本氏烟，每株选择2-3片健康叶片，用封口膜包裹，在封口膜袋中分别注入适量4mg/ml、2mg/ml的硫酸羟氯喹溶液(以下称实验组A、实验组B)，使叶片浸没于药剂中(图1)。
(3)在人工培养室中培养24小时后，揭去封口膜。在叶片上撒上薄薄的一层石英砂，用摩擦接种的方法给每株植株接种10μlACMV病毒，接种放置黑暗处暗处理一晚。
(4)每组实验设置3次重复，另设清水处理作为对照组。
实施例2表型观察和荧光定量检测
(1)在接种后7天、14天观察记录发病状况(见图2，表1)。
(2)14天后采集系统叶样品，提取DNA，用ACMV检测引物和本氏烟内参引物进行qRT-PCR检测病毒的相对复制量(结果见图3)。引物序列见表2所示。
表1.各处理组ACMV发病率
表2.qRT-PCR引物序列
从图2可知，在接种第7天，阴性对照组叶片已经出现了轻微的褪绿小斑，接种叶卷曲，这是ACMV病毒发病的典型症状。实验组均无明显卷叶和发病斑，生长状态良好。14天时，阴性对照组出现明显发病斑，且新叶卷曲较严重，实验组出现轻微卷叶，无明显发病斑。
用2-ΔΔCt法对定量结果进行分析(图3)，以阴性对照植株作参照，实验组的病毒复制量明显比阴性对照组低，说明硫酸羟氯喹的保护活性较好，能有效抑制病毒的复制，该结果与表型相符。同时，用不同浓度的硫酸羟氯喹处理后，病毒复制量均极低，说明低浓度的硫酸羟氯喹就能有效抑制病毒的复制，显示了其对植物病毒ACMV良好的预防作用。
在我国双生病毒入侵风险较大的地区或发现田间存在ACMV病毒传播的昆虫介体时，在病毒侵染之前以及病毒侵染初期施用硫酸羟氯喹，可有效抑制病毒的传播，减弱病毒症状的作用，这是该药剂首次检测到对植物病毒ACMV有较好的防治效果。
Claims (7)
1.硫酸羟氯喹在预防植物病毒ACMV上的应用，其特征在于所述硫酸羟氯喹具有如下化学式结构：
2.一种预防或治疗植物ACMV病毒的药物，其特征在于包含活性成分硫酸羟氯喹。
3.根据权利要求2所述的一种预防或治疗植物ACMV病毒的药物，其特征在于还包括其他药学上可接受的载体。
4.一种预防植物感染ACMV病毒的方法，其特征在于将封口膜袋套在植物叶片上，注入硫酸羟氯喹溶液，使得植物叶片浸泡在硫酸羟氯喹溶液中一定时间。
5.根据权利要求4所述的一种预防植物感染ACMV病毒的方法，其特征在于所述硫酸羟氯喹溶液的浓度为2-4mg/ml。
6.根据权利要求4或5所述的一种预防植物感染ACMV病毒的方法，其特征在于所述硫酸羟氯喹处理时间为24h。
7.根据权利要求4所述的一种预防植物感染ACMV病毒的方法，其特征在于植物叶片为6叶龄。
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