CN115768768A - 半乳凝素-3抑制剂 - Google Patents

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CN115768768A CN202180038169.4A CN202180038169A CN115768768A CN 115768768 A CN115768768 A CN 115768768A CN 202180038169 A CN202180038169 A CN 202180038169A CN 115768768 A CN115768768 A CN 115768768A
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王维
B·A·埃尔斯沃思
J·A·巴洛格
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Abstract

本公开内容涉及抑制Gal‑3的式(I)化合物，并且包括可药用盐、包含这类化合物的组合物以及使用和制备这类化合物和组合物的方法。

Description

半乳凝素-3抑制剂
相关申请的交叉参考
本申请要求于2020年5月28日提交的美国临时申请No.63/030,968的优先权权益；该临时申请的内容通过引用整体并入本文。
发明背景
半乳凝素-3(Gal-3)是一种约30KDa的β-半乳糖苷结合凝集素(Cell 76：597-598)，其参与调节炎性和纤维化过程。(Immunological Reviews 230：160-171)。在不受控的炎症和促纤维化情况中，Gal-3促进成纤维细胞增殖和转化并介导胶原蛋白的产生(Circulation 110:3121-3128)。
Gal-3定位于多种细胞部位，例如细胞质、细胞核和细胞表面。Gal-3也由各种细胞类型、主要是巨噬细胞和单核细胞分泌进入血流(J Pharmacol Exp Ther351:336–343)。文献中有多条证据支持Gal-3参与多个器官的纤维化过程的发展，例如肺(AmJ.Respir.Crit.Care Med.185：537-546)、肝脏(PNAS 103:5060-5065)和肾脏(Am.J.Pathol.172:288-298)。Gal-3还已经被确定为心力衰竭的生物标志物，表明Gal-3的调节在治疗心力衰竭方面具有潜在用途(Curr.Heart Fail.Rep.7:1-8)。Gal-3的调节可用于治疗癌症，因为Gal-3参与在血管生成、细胞凋亡和转移途径中起关键作用的细胞生长和分化(Galectin-3C:Human Lectin for Treatment of Cancer.ACS Symposium Series,Vol.1115.第12章,195–23)。最近，Gal-3抑制剂已经被证明在联合免疫疗法中使用时具有积极作用(Galectin Therapeutics.Press Release,2017年2月7日)。
一些公开和专利申请记载了Gal-3的合成抑制剂，它们被探索用作抗纤维化剂。这些途径的最近实例有WO2005113568、WO2005113569、WO2014067986、WO2017080973、WO2016120403、US20140099319、WO2018209255,WO2019067702、WO2019/075045和WO2019/241461。
本公开内容涉及合并了结合Gal-3的部分和E3遍在蛋白质连接酶结合部分的双功能化合物以及它们的使用方法。该双功能化合物可用作Gal-3的降解剂/或抑制剂。
发明描述
本公开内容涉及抑制Gal-3的本发明的化合物，并且包括可药用盐、包含这类化合物的组合物以及使用和制备这类化合物和组合物的方法。
在第一方面，本发明特别提供了式(I)化合物：
Figure BDA0003963213670000021
或其可药用盐，其中：
Ar1独立地是
Figure BDA0003963213670000022
Ar2独立地是苯基或萘基；和其中各个环部分被1至5个选自如下的取代基取代：
氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基；
Ar3独立地是苯基、吡啶基、喹诺酮、异喹啉或苯并噻唑基，其中各个环部分被0至3个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基的取代基取代；
R1和R1a独立地是H或C1-4烷基；
R2独立地是-C(＝O)NR3R4或-OR4；
R3独立地是H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；
R4独立地是-(L1)1-4-L2-C(＝O)NHR5、-(L1)1-4-L2-NHC(＝O)R5、-(L1)1-4-NHC(＝O)-L2-OR5、
Figure BDA0003963213670000023
Figure BDA0003963213670000024
或者，-NR3R4独立地是
Figure BDA0003963213670000025
Figure BDA0003963213670000026
L1独立地是C1-3亚烷基或-C1-3亚烷基-O-；
L2独立地是价键或C1-3亚烷基；
L3独立地是-O-、-CH2-、-CH2O-、-OCH2-或-CH2OCH2-；
Ar4独立地是亚苯基或亚吡啶基；和其中各个环部分被0至2个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代；
R5独立地是
Figure BDA0003963213670000031
R6独立地是H或C1-4烷基；
R7独立地是吲哚基，被0-2个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代；和
Ar5独立地是亚苯基或亚吡啶基；和其中各个环部分被噻唑基取代，所述噻唑基被0-2个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代。
在第二方面，在第一方面的范围内，其中：
Ar1是
Figure BDA0003963213670000032
Ar2独立地是苯基，被1至5个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代；和
Ar3独立地是苯基，被0至3个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基和C3-6环烷基的取代基取代。
在第三方面，在第二方面的范围内，其中：
Ar2独立地是苯基，被1至4个选自F、Cl和Br的取代基取代；
Ar3独立地是苯基，被0至3个选自Cl、CH3、CF3和-OCF3的取代基取代；
R3独立地是H、C1-3烷基或C1-3卤代烷基；
R4独立地是-L1-L2-C(＝O)NHR5、-(L1)1-3-L2-NHC(＝O)R5、-(L1)1-3-NHC(＝O)-L2-OR5、
Figure BDA0003963213670000041
和
或者，-NR3R4独立地是
Figure BDA0003963213670000042
Figure BDA0003963213670000043
在第四方面，在第二或第三方面的范围内，其中：
Ar2独立地是
Figure BDA0003963213670000044
Figure BDA0003963213670000045
在第五方面，在第一至第四方面的范围内：
Ar3独立地是
Figure BDA0003963213670000046
在第六方面，在第一方面的范围内，其中所述化合物具有式(Ia)：
Figure BDA0003963213670000047
或其可药用盐，其中：
R3独立地是H或-CH2Cl；
R4独立地是-CH2CH2OCH2C(＝O)NHR5、-(CH2CH2O)1-3(CH2)1-2NHC(＝O)R5、-(CH2CH2O)1-3(CH2)2NHC(＝O)CH2OR5、
Figure BDA0003963213670000051
Figure BDA0003963213670000052
或者，-NR3R4独立地是
Figure BDA0003963213670000053
Figure BDA0003963213670000054
R5独立地是
Figure BDA0003963213670000055
Figure BDA0003963213670000056
和
R6独立地是H或CH3。
在另一个实施方案中，R4是H。
在另一个实施方案中，R5独立地是
Figure BDA0003963213670000057
Figure BDA0003963213670000061
在另一个实施方案中，R5独立地是
Figure BDA0003963213670000062
在另一个实施方案中，R6是H。
在另一方面，本发明提供了选自所示例的实施例的化合物或其可药用盐。
除非另有指出，否者这些术语具有如下含义。“烷基”指由1至6个碳组成的直链或支链烷基基团。“环烷基”指由3至7个碳组成的单环环系。具有烃部分的术语(例如烷氧基)包括由1至6个碳组成的对该烃部分而言的直链或支链异构体。“卤素”包括氟、氯、溴和碘。“卤代烷基”和“卤代烷氧基”包括从单卤代到全卤代的所有卤素化异构体。“芳基”指具有5至12个碳原子的单环或双环芳香族环系，其中一个或两个环是芳香性的。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。“杂芳基”指具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至7元单环或8至11元双环芳香族环系。当未指明键合链接位置时，键合可以链接在任意适当的位置，如本领域实践人员所理解的那样。取代基和键合方式的组合仅仅是产生稳定化合物的那些，如本领域实践人员所理解的那样。附加说明和多个附加说明的术语意欲向本领域技术人员澄清键合关系。例如，诸如((R)烷基)的术语指进一步被取代基R取代的烷基取代基。
本发明包括化合物的所有可药用盐形式。可药用盐是其中抗衡离子对化合物的生理活性或毒性没有显著贡献并且照此发挥药理学等效物作用的那些盐。这些盐可以根据普通有机技术、使用市售试剂来制备。一些阴离子盐形式包括乙酸盐、醋硬脂酸盐(acistrate)、苯磺酸盐、溴化物、氯化物、柠檬酸盐、富马酸盐、葡糖醛酸盐(glucouronate)、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和昔萘酸盐(xinofoate)。一些阳离子盐形式包括铵、铝、苄星盐(benzathine)、铋、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、锂、镁、葡甲胺、4-苯基环己胺、哌嗪、钾、钠、氨丁三醇和锌。
一些本发明的化合物以立体异构形式存在。本发明包括化合物的所有立体异构形式，包括对映异构体和非对映体。制备和分离立体异构体的方法是本领域已知的。本发明包括化合物的所有互变异构形式。本发明包括阻转异构体和旋转异构体。
本发明旨在包括在本发明化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的原子。作为一般示例而非限制，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。本发明的同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文所述那些类似的方法、使用适当的同位素标记的试剂代替其它使用的未标记的试剂来制备。这类化合物可具有多种潜在用途，例如作为测定生物活性的标准品和试剂。在稳定的同位素的情况下，这类化合物可具有有利地改变生物学、药理学或药代动力学性质的潜力。
生物学方法
分析缓冲液组合物：25mM HEPES,100mM NaCl,0.005％吐温20,0.05％BSA，在无菌水中制备(所有试剂来自Sigma)。
对照：
阳性对照：100％DMSO(1μL)+His-标记的hGal-3(20μL)+B-ASF(20μL)+抗-His铽抗体(5μL)+Strep d2抗体(5μL)。
阴性对照：100％DMSO(1μL)+His-标记的hGal-3(20μL)+抗-His铽抗体(5μL)+Strep d2抗体(5μL)。
贮备液制备：
Figure BDA0003963213670000071
方案：在384白色Opti板中于室温一式三份进行Gal-3分析，以250-300rpm轻微振摇。由初始储备液制备了2.525X工作储备液浓度的His-标记的重组人Gal-3(hGal-3)和2.525X工作储备液浓度的B-ASF。由工作储备液，将20μLhGal-3(15nM)和20μL B-ASF(15nM)加入板中。在阴性对照中仅加入hGal-3。对于在100％DMSO中的化合物，制备了50x工作储备液的浓度范围。将1μL化合物等分式样加至各孔，每孔与20μL hGal-3预孵育30分钟。然后加入20μLB-ASF，另外孵育1小时。为了检测信号，加入5μL(终浓度1.0nM)铽标记的抗-His抗体，孵育30分钟，然后加入5μL(终浓度20nM)链霉抗生物素d2，另外孵育1小时。采用HTRF筛选方案(激发波长＝340nm,发射波长＝615nm/665nm)在Envision 2104Multilabel Reader上检测分析信号。采用Toolset和Curve Master分析数据。结果在试验部分中报告(IC50,μM)。
CRBN BRET目标参与(hCRBN IC50(μM))
根据制造商的方案，采用FuGENE HD(Promega)将NanoLuc-CRBN融合构建体转染到HEK-293细胞中。简言之，将Nluc-CRBN以1:10(质量/质量)稀释到Transfection CarrierDNA(Promega)中，FuGENE HD与之比例为1:3(μg DNA：μL FuGENE HD)。将一份(体积)DNA：FuGENE HD复合物与20份(体积)HEK-293细胞相结合，混悬的密度为2×105。细胞在37℃/5％CO2下孵育～20小时。转染后，将细胞洗涤，以200,000个细胞/mL重新混悬于不含酚红的OptiMEM(Gibco)中。
对于BRET测量，将细胞接种在384孔非结合表面板(Corning)中，最终计数为10,000个细胞/孔。化合物以10mM溶解在二甲亚砜(DMSO)中，采用20-50μM的高浓度评估了11个浓度。CRBN探针用于平衡测量，采用约EC50-80的最终浓度。对于活细胞测量，加入20nM CRBN探针。对于活细胞测定条件，将板在37℃/5％CO2下孵育2小时。根据制造商的指南添加NanoBRET NanoGloSubstrate和Extracellular Nanoluc Inhibitor(Promega)。对于裂解细胞测量，向细胞中加入毛地黄皂苷至50ug/mL的终浓度，加入20nM CRBN探针。为了测量透化细胞中的NanoBRET，在检测步骤中省略了细胞外Nluc抑制剂。对于所有BRET实验，使用配备有BRET2 Enh镜、BRET 647nM/75nM带宽和BC703460nM/80nM带宽滤波器的Envision 2015(Perkin Elmer)进行读数。每个读数整合0.5秒。
为了确定化合物效力(IC50)，首先通过等式1将每个稀释系列的BRET比例标准化％抑制值，其中“S”代表样品BRET，“B”代表背景BRET，“T”代表总BRET。在该等式中，背景对照(B)由NanoLuc-CRBN表达细胞组成，无CRBN探针。总BRET比例(T)由NanoLuc-CRBN表达细胞、CRBN探针、等同于当测试化合物时添加的浓度的量的DMSO组成。
Figure BDA0003963213670000091
标准化后，将抑制百分数值绘制为化合物浓度的函数并拟合为等式2。
Figure BDA0003963213670000092
THP-1细胞中的ELISA Gal3降解测定
将源自白血病的一种人单核细胞系THP-1细胞(ATCC，目录号TIB-202)以2E6个细胞/mL在96孔板中铺在200uL/孔的RPMI 1640(ThermoFisher，目录号11835)中。细胞用作为对照的DMSO和各种浓度的化合物处理48小时。处理后，收集培养基。将PBS洗涤的细胞沉淀物在补充有1X蛋白酶抑制剂混合物(Cell Signaling，目录号5872)的裂解缓冲液(CellSignaling，目录号9803)中裂解。根据制造商的说明，通过ELISA测定法(人半乳凝素-3DuoSet ELISA试剂盒，R&D Systems，目录号DY1154)对培养基和细胞裂解物中的Gal3水平进行定量。细胞培养基也用于评估细胞毒性(LDH测定试剂盒，R&D Systems，DY994)。根据细胞Gal3蛋白质水平、采用DMSO作为对照计算了IC50(50％降解的浓度)值。
药物组合物和使用方法
本发明的化合物抑制Gal-3。因此，本发明的另一方面是包含治疗有效量的本发明的化合物或其可药用盐和可药用载体的药物组合物。
本发明的另一方面是用本发明的化合物治疗罹患选自如下的疾病或病症的患者的方法：器官(包括肝脏、肾脏、肺、心脏和皮肤)纤维化、肝脏疾病和病症(包括急性肝炎、慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化、门静脉高压、再生衰竭、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝功能减退和肝血流疾病)、细胞增殖性疾病、癌症和病症(包括实体瘤、实体瘤转移、血管纤维瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、白血病、慢性淋巴细胞白细胞(CLL))和癌细胞侵袭性转移)、炎性疾病和病症(包括银屑病、肾病和肺炎)、胃肠道疾病和病症(包括肠易激惹综合征(IBS)、炎性肠病(IBD)和胰腺分泌异常)、肾脏疾病和病症、泌尿道相关性疾病和病症(包括良性前列腺增生症或与神经性膀胱疾病、脊髓肿瘤、椎间盘突出、脊椎管狭窄相关的症状和衍生自糖尿病的症状)、下泌尿道疾病和病症(包括下泌尿道阻塞)、下泌尿道炎性疾病和病症(包括排尿困难和尿频)、胰腺疾病和病症、异常血管发生相关性疾病和病症(包括动脉阻塞)、硬皮病、脑相关疾病和病症(包括脑梗死和脑出血)、神经性疼痛和周围神经病、眼部疾病和病症(包括年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病、增殖性玻璃体视网膜病(PVR)、瘢痕性类天疱疮和青光眼滤过术瘢痕)。
本发明的另一方面是用于治疗肾纤维化、肺纤维化、肝纤维化、动脉纤维化和系统性硬化病的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗器官(包括肝脏、肾脏、肺、心脏和皮肤)纤维化的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗肝脏疾病和病症(包括急性肝炎、慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化、门静脉高压、再生衰竭、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝功能减退和肝血流疾病)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗细胞增殖性疾病、癌症和病症(包括实体瘤、实体瘤转移、血管纤维瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、白血病、慢性淋巴细胞白细胞(CLL))和癌细胞侵袭性转移)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗炎性疾病和病症(包括银屑病、肾病和肺炎)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗胃肠道疾病和病症(包括肠易激惹综合征(IBS)、炎性肠病(IBD)和胰腺分泌异常)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗肾脏疾病和病症的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗泌尿道相关性疾病和病症(包括良性前列腺增生症或与神经性膀胱疾病、脊髓肿瘤、椎间盘突出、脊椎管狭窄相关的症状和衍生自糖尿病的症状)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗下泌尿道疾病和病症(包括下泌尿道阻塞)、下泌尿道炎性疾病和病症(包括排尿困难和尿频)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗胰腺疾病和病症的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗异常血管发生相关性疾病和病症(包括动脉阻塞)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗脑相关疾病和病症(包括脑梗死和脑出血)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗神经性疼痛和周围神经病的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的另一方面是用于治疗眼部疾病和病症(包括年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病、增殖性玻璃体视网膜病(PVR)、瘢痕性类天疱疮和青光眼滤过术瘢痕)的方法，该方法包括给患者施用本发明的化合物。
本发明的化合物可用于治疗和/或预防Gal-3在其中起作用的病症。
本发明的化合物可用于制备药剂，所述药剂用于治疗和/或预防其中抑制Gal-3的生理活性是有用的病症，例如其中Gal-3受体参与、牵涉在疾病的病因学或病理学中或者与疾病的至少一种症状相关的疾病。
本发明的化合物可以单独使用，与其它本发明的化合物组合使用，或者与一种或多种、优选一种至两种其它活性剂组合使用。
“治疗有效”指提供有意义的患者益处所需的活性剂的量，如病患领域的实践人员所理解的那样。
“患者”指遭受痛苦和适于疗法的人，如本领域实践人员所理解的那样。
“治疗”、“疗法”、“方案”和相关术语如本领域实践人员所理解的那样进行使用。
本发明的化合物通常作为包含治疗有效量的本发明的化合物或其可药用盐和可药用载体的药物组合物给出，其可以含有常规的赋形剂。治疗有效量是提供有意义的患者益处所需的量。可药用载体是常规已知的具有可接受的安全性的那些。组合物涵盖所有常规的固体和液体形式，包括胶囊、片剂、锭剂(losenges)和粉末以及液体混悬剂、糖浆剂、酏剂(elixers)和溶液剂。组合物采用常规配制技术制备，通常使用用于组合物的常规赋形剂(例如粘合剂和湿润剂)和载体(例如水和醇)。参见例如Remington’s PharmaceuticalSciences,第17版,Mack出版公司,伊斯顿,PA(1985)。
固体组合物通常以剂量单位配制，优选每个剂量提供约1至1000mg活性成分的组合物。剂量的一些实例有1mg、10mg、100mg、250mg、500mg和1000mg。通常，其它抗逆转录病毒药物将存在于与临床使用的该类药物相似的单位范围内。通常，这是0.25-1000mg/单位。
液体组合物经常是剂量单位范围。通常，液体组合物的单位剂量范围为1-100mg/mL。剂量的一些实例有1mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL和100mg/mL。
本发明涵盖所有常规施用方式；优选口服和胃肠外方法。通常，给药方案与临床使用的其它药物相似。通常，每日剂量为每天1-100mg/kg体重。通常，更多的化合物是需要口服，较少是胃肠外。然而，具体的给药方案将由医生根据合理的医学判断来确定。
化学方法
对本领域技术人员来说显而易见的是，本公开不限于上述说明性实(施)例，并且可以以其它具体形式体现而不背离其基本属性。因此，实(施)例应在所有方面考虑为说明性和非限制性的，对所附权利要求、而不是前述实(施)例进行参考，因此所有在权利要求的含义和范围内的变化旨在被包含在内。
LCMS分析在偶联有Waters TUV和SQ质量检测器的Waters Acquity UPLC系统上进行(柱：BEH C18 2.1x50mm；流动相A：含0.05％TFA的水；流动相B：含0.05％TFA的乙腈；梯度：2-98％B，历经1.6分钟；流速：0.8mL/min)；HPLC分析在偶联有SPD-10AV UV检测器的Shimadzu LC10-AT HPLC系统上进行(柱YMC S5 Combiscreen ODS 4.6x50mm；流动相A：5:95乙腈:水，含0.1％TFA；流动相B：95:5乙腈:水，含0.1％TFA；梯度：历经40分钟0-100％B，然后1分钟保持在100％B；流速：1mL/min)；制备型HPLC纯化在偶联有SPD 20UV检测器的Shimadzu LC-8制备型HPLC系统上进行。详细条件在实验操作中记载。
制备方法
中间体1.2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酸
Figure BDA0003963213670000131
向(4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-醇(WO 2019067702)(0.80g,1.128mmol)在THF(22mL)中的0℃溶液中一次性加入氢化钠(60％油分散液)(0.090g,2.255mmol)。混合物于0℃搅拌15分钟，然后历经1分钟加入在THF(4mL)中的2-溴代乙酸乙酯(0.150mL,1.353mmol)。混合物于0℃搅拌50分钟，然后用EtOH(2mL)淬灭。混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水(2x40mL)和盐水(40mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。在真空下除去溶剂，得到2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸乙基酯和2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸的2:1比例的混合物(0.881g)。历经1分钟于室温向该混合物(0.881g)在THF(35mL)中的溶液中加入在水(7mL)中的氢氧化锂(0.106g,4.43mmol)。混合物于室温搅拌1.5小时，然后在真空下浓缩至约7mL的体积。残余物用水(15mL)稀释，用1N HCl溶液酸化至pH 5-6。通过抽滤收集不溶性产物,2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(0.807g,1.051mmol,93％产率)，为白色固体，于50℃在真空下干燥。LCMS(M+H)+＝766.9。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.76-12.41(m,1H),9.28(s,1H),8.19-8.08(m,1H),8.07(d,J＝8.5Hz,1H),7.98(br d,J＝8.3Hz,1H),7.83(d,J＝8.3Hz,2H),7.44-7.32(m,5H),5.55(s,1H),5.48(dd,J＝10.6,3.4Hz,1H),4.89(br t,J＝9.6Hz,1H),4.65(d,J＝9.1Hz,1H),4.44(d,J＝3.3Hz,1H),4.08(br d,J＝11.6Hz,1H),3.95(br d,J＝12.1Hz,2H),3.83(s,1H),3.64(br d,J＝11.6Hz,1H),2.34(s,3H).
中间体2.3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003963213670000141
步骤1.3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
将2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲基酯(1.00g,3.65mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮,HCl(0.721g,4.38mmol)、三乙胺(0.712mL,5.11mmol)在甲醇(15mL)中的混合物于室温搅拌24小时，然后于70℃加热8小时。混合物在真空下浓缩至干。向残余物中加入水(50mL)，将非均匀混合物于室温搅拌10分钟。通过抽滤收集不溶性物质。滤饼混悬于二乙醚(80mL)中，于室温搅拌1小时。通过抽滤收集不溶性物质，于50℃在真空下干燥，得到预期产物,3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.634g,2.192mmol,60.1％产率)，为黄褐色固体。LCMS(M+H)+＝290.1.
步骤2.3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
将3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg,0.346mmol)和10％Pd/C(36.8mg,0.035mmol)在甲醇(10mL)和四氢呋喃(3mL)中的混合物于室温在H2气囊提供的H2下搅拌1.5小时。通过抽滤除去固相，滤液在真空下浓缩至干。残余物于50℃在真空下干燥，得到预期产物,3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(90mg,0.347mmol,100％产率)，为驼色固体。LCMS(M+H)+＝260.1.
中间体3.3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-甲基哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003963213670000151
步骤1.1-甲基-3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
于0℃向3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(315mg,1.089mmol)在DMF(5mL)中的溶液中一次性加入氢化钠(60％分散液)(87mg,2.178mmol)。混合物于0℃搅拌30分钟，然后加入碘甲烷(0.136mL,2.178mmol)。混合物于室温搅拌2小时，然后反应物用冰水(0.5mL)淬灭。所得混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(2x15mL)和盐水(15mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法(24g硅胶,固体装载,10-60％乙酸乙酯/己烷)分离出预期产物,1-甲基-3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(129mg,0.425mmol,39.1％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝304.3.
步骤2.3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-甲基哌啶-2,6-二酮
将1-甲基-3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(129mg,0.425mmol)和10％Pd/C(45.3mg,0.043mmol)在甲醇(10mL)和四氢呋喃(3mL)中的混合物在H2气囊提供的H2下于室温搅拌1.5小时。通过抽滤除去固相，滤液在真空下浓缩至干。残余物于50℃在真空下干燥，得到预期产物,3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-甲基哌啶-2,6-二酮(105mg,0.384mmol,90％产率)，为驼色固体。LCMS(M+H)+＝274.3.
中间体4.3-(6-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003963213670000152
步骤1.3-(6-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
将2-(溴甲基)-5-硝基苯甲酸甲基酯(1.00g,3.65mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮,HCl(0.721g,4.38mmol)和三乙胺(0.712mL,5.11mmol)在甲醇(15mL)中的混合物于75℃搅拌7.5小时。混合物在真空下浓缩至干。向残余物中加入水(80mL)，非均匀混合物于室温搅拌10分钟。通过抽滤收集不溶性物质。滤饼混悬于二乙醚(100mL)中，于室温搅拌1小时。通过抽滤收集不溶性物质，于50℃在真空下干燥，得到预期产物,3-(6-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.548g,1.895mmol,51.9％产率)，为黄褐色固体。LCMS(M+H)+＝289.9.
步骤2.3-(6-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
将3-(6-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(548mg,1.895mmol)和10％Pd/C(202mg,0.189mmol)在甲醇(45mL)和四氢呋喃(12.5mL)中的混合物在H2气囊提供的H2下于室温搅拌1.5小时。通过抽滤除去催化剂，滤液在真空下浓缩至干。残余物于50℃在真空下干燥，得到预期产物,3-(6-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(491mg,1.894mmol,100％产率)，为驼色固体。LCMS(M+H)+＝259.9.
实施例1.2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)乙酰胺
Figure BDA0003963213670000171
步骤1.(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)氨甲酸叔丁基酯
将2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)乙酸(1.319g,6.02mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.20g,4.63mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(2.021mL,11.57mmol)、1-丙烷膦酸酐(2.209g,6.94mmol)在DMF(20mL)中的混合物于100℃搅拌8小时。在真空下除去挥发物。残余物加入水中，用二氯甲烷(2x50mL)萃取。合并的萃取物经无水Na2SO4干燥。通过ISCO色谱法采用硅胶柱和0-5％甲醇/氯仿作为洗脱剂分离出预期产物,(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)氨甲酸叔丁基酯(1.289g,59％)，为灰白色固体。LCMS(M+H)+＝461.3.
步骤2.2-(2-氨基乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酰胺
于室温向(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)氨甲酸叔丁基酯(55mg,0.119mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中一次性加入氯化氢在1,4-二噁烷中的4N溶液(1.5mL,6.00mmol)。混合物于室温搅拌1小时。在真空下除去挥发物，得到预期产物,2-(2-氨基乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酰胺,HCl(48mg,0.121mmol,101％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝361.3.
步骤3.2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)乙酰胺
将2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(68mg,0.089mmol)、2-(2-氨基乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酰胺,HCl(47.5mg,0.120mmol)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)(52.9mg,0.120mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.062mL,0.354mmol)在DMF(2mL)中的混合物于室温搅拌3小时。混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(15mL)、5％盐酸(15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机溶液经无水MgSO4干燥，在真空下浓缩至干，得到粗产物,2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)乙酰胺(105mg,2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)乙酰胺(105mg,0.095mmol,107％产率)，为驼色固体。LCMS(M+H)+＝1109.6.
步骤4.2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)乙酰胺
将2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)乙酰胺(105mg,0.089mmol)和70％乙酸(4mL)的混合物于70℃加热10小时。冷却至室温后，将混合物用甲醇稀释，上样到制备型HPLC(柱:SunfireC18 OBD 5u 30x100mm。溶剂A:90％H2O-10％甲醇-0.1％TFA；溶剂B:10％甲醇-90％H2O0.1％TFA.起始％B:25；最终％B:100.梯度时间:15Min)。合并正确的级分，在真空下浓缩，用饱和NaHCO3溶液碱化至pH 8，用二氯甲烷(4x30mL)萃取。合并的萃取物经无水Na2SO4干燥。在真空下除去溶剂，得到预期产物,2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)乙酰胺(51mg,0.049mmol,55.0％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1021.8。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.81(d,J＝1.4Hz,1H),7.99(dd,J＝16.9,1.0Hz,1H),7.93(dd,J＝11.1,8.4Hz,1H),7.88-7.80(m,2H),7.72(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),7.65-7.56(m,3H),5.17(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),5.14-5.09(m,1H),5.02-4.94(m,1H),4.55-4.44(m,3H),4.11(dd,J＝6.6,2.8Hz,1H),4.08(dd,J＝2.5,1.4Hz,2H),3.99(d,J＝15.1Hz,1H),3.71-3.62(m,4H),3.59-3.50(m,2H),3.41-3.35(m,1H),3.30-3.23(m,1H),2.98-2.89(m,1H),2.85-2.78(m,1H),2.53(qd,J＝13.2,4.7Hz,1H),2.45(d,J＝1.1Hz,3H),2.21(dtt,J＝12.7,5.2,2.4Hz,1H)。hGal-3 IC50＝0.082μM；hCRBN IC50＝0.78μM.
实施例2.4-((2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003963213670000201
步骤1.(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苄基)氨甲酸叔丁基酯
将4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯甲酸(116mg,0.463mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg,0.386mmol)、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(183mg,0.482mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.269mL,1.543mmol)在DMF(4mL)中的混合物于室温搅拌7天。混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(2x20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法(24g硅胶,固体装载,1-6％MeOH/CH2Cl2)分离出预期产物,(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苄基)氨甲酸叔丁基酯(107mg,0.217mmol,56.3％产率)，为驼色固体。LCMS(M+H)+＝493.1。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.99(s,1H),10.51(s,1H),8.15(s,1H),7.94(br d,J＝8.3Hz,2H),7.84(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,1H),7.50(br t,J＝6.1Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,2H),5.11(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.48(d,J＝17.1Hz,1H),4.38-4.29(m,1H),4.22(br d,J＝6.1Hz,2H),2.99-2.86(m,1H),2.66-2.57(m,1H),2.44-2.38(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.41(s,9H).
步骤2.4-(氨基甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
历经1分钟于室温向(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苄基)氨甲酸叔丁基酯(104mg,0.211mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷中的4N溶液(5mL,20.00mmol)。混合物于室温搅拌1小时，然后在真空下浓缩至干，得到4-(氨基甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,HCl(101mg,0.235mmol,112％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝393.1.
步骤3.4-((2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(75mg,0.098mmol)、4-(氨基甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,HCl(35mg,0.082mmol)、BOP(57.8mg,0.131mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.071mL,0.408mmol)在DMF(3mL)中的混合物于室温搅拌2小时。混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(2x20mL)、0.5N HCl溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法(24g硅胶,固体装载,0-6％甲醇/二氯甲烷)分离出预期产物,4-((2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(66mg,0.058mmol,70.8％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1141.1.
步骤4.4-((2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-((2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(66mg,0.058mmol)在70％乙酸(4mL)中的混合物于70℃加热18小时。溶液用甲醇稀释，上样至制备型HPLC(柱:Phenomenex Luna AXIA5u C18 30.0x100。溶剂A:90％H2O-10％甲醇-0.1％TFA；溶剂B:10％甲醇-90％H2O 0.1％TFA.起始％B:25；最终％B:100.梯度时间:15Min)。合并正确的级分，在真空下浓缩，用二氯甲烷(4x40mL)萃取。合并的萃取物经无水Na2SO4干燥。在真空下除去溶剂，得到预期产物,4-((2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)甲基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(34mg,0.032mmol,54.7％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1053.1。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.81(s,1H),8.17(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.92-7.86(m,2H),7.80(d,J＝8.0Hz,3H),7.78-7.74(m,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,2H),7.21(d,J＝8.3Hz,2H),5.21-5.11(m,2H),5.03(br t,J＝9.5Hz,1H),4.59-4.48(m,3H),4.40-4.33(m,1H),4.29-4.22(m,1H),4.14(d,J＝2.5Hz,1H),4.04(br d,J＝14.9Hz,1H),3.78(d,J＝15.1Hz,1H),3.74-3.69(m,1H),3.69-3.61(m,2H),2.99-2.88(m,1H),2.86-2.77(m,1H),2.54(qd,J＝13.2,4.5Hz,1H),2.45(s,3H),2.25-2.18(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.109μM；hCRBN IC50＝0.269μM.
实施例3.4-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003963213670000231
步骤1.4-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)苯甲酸乙基酯
于室温历经1分钟向4-羟基苯甲酸乙基酯(0.300g,1.805mmol)、反式-3-羟基环丁基)氨甲酸叔丁基酯(0.423g,2.257mmol)和三苯膦(0.710g,2.71mmol)在甲苯(10mL)中的混合物中加入偶氮二甲酸二异丙基酯(DIAD)(0.533mL,2.71mmol)。所得溶液于105℃加热16小时。冷却至室温后，反应物溶液用乙酸乙酯(50mL)稀释，加入硅胶(5g)。在真空下除去挥发物。残余物接受ISCO色谱法(80g硅胶,10-35％乙酸乙酯/己烷)，得到4-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)苯甲酸乙基酯(0.595g,1.774mmol,98％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝336.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.95-7.82(m,2H),7.21(br d,J＝8.0Hz,1H),7.03-6.89(m,2H),4.48(t,J＝7.0Hz,1H),4.28(q,J＝7.2Hz,2H),3.80-3.63(m,1H),2.79(td,J＝9.1,7.3Hz,2H),2.02-1.98(m,2H),1.39(s,9H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H).
步骤2.4-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)苯甲酸
于室温历经1分钟向4-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)苯甲酸乙基酯(300mg,0.894mmol)在四氢呋喃(20mL)和甲醇(5mL)中的溶液中加入在水(5mL)中的氢氧化锂(129mg,5.37mmol)。混合物于室温搅拌70小时，然后在真空下浓缩至约5mL的体积。残余物用水(15mL)稀释，用1N HCl酸化至pH＝5-6。通过抽滤收集沉淀产物,4-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)苯甲酸(258mg,0.839mmol,94％产率)，为白色固体，于50℃在真空下干燥。LCMS(M+H)+＝308.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.80-12.47(m,1H),7.94-7.81(m,2H),7.21(br d,J＝8.0Hz,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),4.47(quin,J＝7.1Hz,1H),3.77-3.65(m,1H),2.86-2.72(m,2H),2.08-1.92(m,2H),1.39(s,9H).
步骤3.(顺式-3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)环丁基)氨甲酸叔丁基酯
将4-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)苯甲酸(122mg,0.398mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(86mg,0.332mmol)、HATU(151mg,0.398mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.232mL,1.327mmol)的混合物于室温搅拌4天。混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(2x20mL)和饱和NaHCO3溶液(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法分离出预期产物,(顺式-3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)环丁基)氨甲酸叔丁基酯(68mg,0.124mmol,37.4％产率)，为白色固体(40g硅胶,固体装载,1-8％MeOH/CH2Cl2)。LCMS(M+H)+＝308.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),10.39(s,1H),8.14(s,1H),7.96(d,J＝8.8Hz,2H),7.83(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),7.22(br d,J＝8.0Hz,1H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.56-4.43(m,2H),4.38-4.28(m,1H),3.79-3.67(m,1H),3.00-2.87(m,1H),2.86-2.75(m,2H),2.67-2.58(m,1H),2.45-2.36(m,1H),2.06-1.97(m,3H),1.39(s,9H).
步骤4.4-(顺式-3-氨基环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
于室温历经1分钟向(顺式-3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)环丁基)氨甲酸叔丁基酯(68mg,0.124mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷中的4N溶液(4mL,16.00mmol)。混合物于室温搅拌1小时，然后在真空下浓缩至干，得到4-(顺式-3-氨基环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺盐酸盐(66mg,0.136mmol,110％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝449.1.
步骤5.4-(顺式-3-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(60.8mg,0.079mmol)、4-(顺式-3-氨基环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,HCl(32mg,0.066mmol)、BOP(43.8mg,0.099mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(0.058mL,0.330mmol)在DMF(2mL)中的混合物于室温搅拌2小时。混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(2x20mL)、0.5N HCl溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法(12g硅胶,固体装载,0-6％甲醇/二氯甲烷)分离出预期产物,4-((1S,3s)-3-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(47mg,0.039mmol,59.5％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1197.6.
步骤6.4-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-(顺式-3-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(47mg,0.039mmol)在70％乙酸(1.5mL)中的混合物于75℃加热15小时。溶液用甲醇稀释，上样至制备型HPLC(柱:Phenomenex Luna AXIA 5uC18 21.2x100。溶剂A:90％H2O-10％甲醇-0.1％TFA；溶剂B:10％甲醇-90％H2O 0.1％TFA.起始％B:25；最终％B:100.梯度时间:15Min)。合并正确的级分，在真空下浓缩，用二氯甲烷(4x30mL)萃取。合并的萃取物经无水Na2SO4干燥。在真空下除去溶剂，得到预期产物,4-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(28mg,0.025mmol,63.0％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1109.4。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.82(s,1H),8.16(s,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.97-7.93(m,2H),7.91-7.88(m,2H),7.82-7.79(m,1H),7.77-7.74(m,1H),7.70-7.66(m,2H),6.96-6.92(m,2H),5.20-5.13(m,2H),4.99(br t,J＝9.6Hz,1H),4.58-4.46(m,4H),4.14(d,J＝2.8Hz,1H),3.95-3.85(m,2H),3.74-3.63(m,4H),2.99-2.88(m,1H),2.87-2.73(m,3H),2.53(qd,J＝13.3,4.5Hz,1H),2.47(s,3H),2.24-2.17(m,1H),2.01(dt,J＝10.9,8.6Hz,1H),1.94-1.86(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.070μM；hCRBN IC50＝0.126μM.
实施例4.5-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
Figure BDA0003963213670000271
步骤1.5-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)吡啶甲酸甲基酯
于室温历经1分钟向5-羟基吡啶甲酸甲基酯(0.488g,3.19mmol)、反式-3-羟基环丁基)氨甲酸叔丁基酯(0.716g,3.82mmol)和三苯膦(1.254g,4.78mmol)在甲苯(18mL)中的混合物中加入偶氮二甲酸二异丙基酯(DIAD)(0.941mL,4.78mmol)。所得溶液于105℃加热15小时。冷却至室温后，反应物溶液用乙酸乙酯(60mL)稀释，加入硅胶(5g)。在真空下除去挥发物。残余物接受ISCO色谱法(80g硅胶,20-65％乙酸乙酯/己烷)，得到5-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)吡啶甲酸甲基酯(0.820g,2.54mmol,80％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝323.0。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝2.8Hz,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,1H),7.41(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.23(br d,J＝8.0Hz,1H),4.57(br t,J＝7.0Hz,1H),3.84(s,3H),3.78-3.64(m,1H),2.90-2.74(m,2H),2.10-1.94(m,2H),1.38(s,9H).
步骤2.5-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)吡啶甲酸
于室温历经1分钟向5-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)吡啶甲酸甲基酯(812mg,2.52mmol)在四氢呋喃(50mL)和甲醇(12mL)中的溶液中加入在水(12mL)中的氢氧化锂(362mg,15.11mmol)。混合物于50℃加热2.5小时，然后在真空下浓缩至约5mL的体积。残余物用1N HCl酸化至pH＝5-6，通过抽滤收集沉淀产物,5-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)吡啶甲酸(650mg,2.108mmol,84％产率)，为白色固体，于50℃在真空下干燥。LCMS(M+H)+＝309.0.
步骤3.(顺式-3-((6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)吡啶-3-基)氧基)环丁基)氨甲酸叔丁基酯
将5-(顺式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)吡啶甲酸(114mg,0.370mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(80mg,0.309mmol)、HATU(147mg,0.386mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.216mL,1.234mmol)的混合物于室温搅拌48小时。混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(2x15mL)和盐水(15mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法(40g硅胶,固体装载,0-8％甲醇/二氯甲烷)分离出预期产物,(顺式-3-((6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)吡啶-3-基)氧基)环丁基)氨甲酸叔丁基酯(56mg,0.102mmol,33.0％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝550.2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),10.79(s,1H),8.35(d,J＝2.8Hz,1H),8.26(s,1H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.98(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.71(d,J＝8.3Hz,1H),7.53(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.25(br d,J＝8.0Hz,1H),5.11(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),4.62(br t,J＝6.9Hz,1H),4.48(d,J＝17.3Hz,1H),4.39-4.27(m,1H),3.81-3.69(m,1H),3.01-2.89(m,1H),2.85(br d,J＝6.9Hz,2H),2.67-2.58(m,1H),2.47-2.37(m,1H),2.11-1.98(m,3H),1.39(s,9H).
步骤4.5-(顺式-3-氨基环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
于室温历经1分钟向((1s,3s)-3-((6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)吡啶-3-基)氧基)环丁基)氨甲酸叔丁基酯(55mg,0.100mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷中的4N溶液(3mL,12.00mmol)。混合物于室温搅拌4小时，然后在真空下浓缩至干，得到5-(顺式-3-氨基环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺,2HCl(57mg,0.109mmol,109％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝450.1.
步骤5.5-((顺式-3-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
将2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(88mg,0.114mmol)、5-(顺式-3-氨基环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺,2HCl(57mg,0.099mmol)、BOP(70.3mg,0.159mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.104mL,0.596mmol)在DMF(3mL)中的混合物于室温搅拌2小时。混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(2x20mL)、0.5N HCl溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。除去溶剂，得到预期产物,5-((顺式)-3-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(109mg,0.091mmol,92％产率)，为驼色固体。
步骤6.5-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
将5-(顺式-3-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(109mg,0.091mmol)在70％乙酸(6mL)中的混合物于70℃加热18小时。溶液用甲醇稀释，上样至制备型HPLC(柱:Phenomenex Luna AXIA 5uC18 21.2x100。溶剂A:90％H2O-10％甲醇-0.1％TFA；溶剂B:10％甲醇-90％H2O 0.1％TFA.起始％B:28；最终％B:100.梯度时间:15Min)。合并正确的级分，在真空下浓缩，用二氯甲烷(4x40mL)萃取。合并的萃取物经无水Na2SO4干燥。在真空下除去溶剂，得到预期产物,5-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(49mg,0.042mmol,46.1％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1110.0。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.82(s,1H),8.28(d,J＝2.8Hz,1H),8.24(s,1H),8.18(d,J＝8.8Hz,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.92-7.80(m,4H),7.69-7.64(m,2H),7.40(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),5.21-5.13(m,2H),5.00(br t,J＝9.8Hz,1H),4.61-4.48(m,4H),4.14(d,J＝2.8Hz,1H),3.95-3.87(m,2H),3.74-3.63(m,4H),2.99-2.89(m,1H),2.89-2.77(m,3H),2.60-2.50(m,1H),2.47(s,3H),2.25-2.18(m,1H),2.10-2.01(m,1H),1.96-1.87(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.081μM；HCRBNIC50＝0.174μM.
实施例5和6.5-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺，和
5-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-((R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
Figure BDA0003963213670000301
在下文所述的手性SFC条件下分离5-(顺式-3-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰氨基)环丁氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(实施例3)(44mg)，得到实施例4(20mg,0.018mmol,45.0％产率)和实施例5(18.5mg,0.016mmol,41.6％产率)。两种产物均为白色固体。
仪器:Thar 350
柱:Chiral IC(3X25cm,5微米)
柱温:40℃
流速:130/min
流动相:CO2/[MeOH/CH3CN＝50:50]＝35/65
背压:100巴
进样体积:2.0mL(浓度＝4mg/mL)
检测器波长:220nm
实施例5:LCMS(M+H)+＝1110.1。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.82(s,1H),8.28(brs,1H),8.24(s,1H),8.18(br d,J＝8.0Hz,1H),7.99(d,J＝9.1Hz,1H),7.93-7.79(m,4H),7.66(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),5.21-5.13(m,2H),5.00(br t,J＝9.6Hz,1H),4.61-4.47(m,4H),4.14(d,J＝2.8Hz,1H),3.97-3.85(m,2H),3.72-3.65(m,4H),2.99-2.89(m,1H),2.88-2.76(m,3H),2.60-2.50(m,1H),2.47(s,3H),2.21(dtd,J＝12.7,5.2,2.2Hz,1H),2.10-2.00(m,1H),1.97-1.87(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.084μM；hCRBNIC50＝0.039μM.
实施例6:LCMS(M+H)+＝1110.1。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.82(s,1H),8.28(d,J＝2.5Hz,1H),8.24(s,1H),8.18(d,J＝8.8Hz,1H),7.99(d,J＝9.1Hz,1H),7.92-7.80(m,4H),7.66(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),5.21-5.13(m,2H),5.00(br t,J＝9.8Hz,1H),4.60-4.48(m,4H),4.14(d,J＝2.8Hz,1H),3.95-3.87(m,2H),3.74-3.64(m,4H),2.99-2.89(m,1H),2.89-2.77(m,3H),2.59-2.49(m,1H),2.47(s,3H),2.25-2.18(m,1H),2.09-2.01(m,1H),1.97-1.88(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.074μM；hCRBN IC50>50μM.
实施例7.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003963213670000321
步骤1.3-((4-(乙氧基羰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯
于室温历经1分钟向4-羟基苯甲酸乙基酯(0.35g,2.106mmol)、顺式-3-羟基环丁基)氨甲酸叔丁基酯(0.493g,2.63mmol)和三苯膦(0.829g,3.16mmol)在甲苯(12mL)中的混合物中加入二异丙基偶氮二甲酸酯(DIAD)(0.622mL,3.16mmol)。所得溶液于105℃加热16小时。冷却至室温后，反应物溶液用乙酸乙酯(50mL)稀释，加入硅胶(5g)。在真空下除去挥发物。残余物接受ISCO色谱法(80g硅胶,0-35％乙酸乙酯/己烷)，得到4-(反式-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁氧基)苯甲酸乙基酯(704mg,2.099mmol,100％产率)，为粘稠的油。LCMS(M+H)+＝336.0。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.19–7.78(m,2H),7.06–6.62(m,2H),4.35(q,J＝7.1Hz,2H),4.14(d,J＝6.6Hz,2H),4.10(t,J＝8.5Hz,2H),3.80(dd,J＝8.8,5.2Hz,2H),2.98(ttt,J＝8.3,6.6,5.2Hz,1H),1.45(s,9H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤2.4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)苯甲酸
于室温历经1分钟向3-((4-(乙氧基羰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(300mg,0.894mmol)在四氢呋喃(10mL)和甲醇(2.5mL)中的溶液中加入在水(2.5mL)中的氢氧化锂(129mg,5.37mmol)。混合物于室温搅拌60小时，然后在真空下浓缩至约5mL的体积。残余物用水(15mL)稀释，用1N HCl酸化至pH＝5-6。通过抽滤收集沉淀产物,4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)苯甲酸(218mg,0.709mmol,79％产率)，为白色固体，于50℃在真空下干燥。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.10–7.88(m,2H),7.08–6.94(m,2H),4.21(d,J＝6.1Hz,2H),4.10(t,J＝8.5Hz,2H),3.83(dd,J＝8.7,5.3Hz,2H),3.06(tdd,J＝8.4,7.0,4.2Hz,1H),1.47(s,9H).
步骤3.3-((4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯
将4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)苯甲酸(122mg,0.397mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(中间体2)(86mg,0.332mmol)、HATU(151mg,0.398mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.232mL,1.327mmol)的混合物于室温搅拌7天。混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(20mL)、饱和NaHCO3溶液(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法(40g硅胶,固体装载,0-10％MeOH/CH2Cl2)分离出预期产物,3-((4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(102mg,0.186mmol,56.1％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝548.8。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),10.40(s,1H),8.15(d,J＝1.7Hz,1H),8.05–7.94(m,2H),7.84(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H),7.71(d,J＝8.3Hz,1H),7.11(d,J＝8.9Hz,2H),5.11(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),4.47(d,J＝17.3Hz,1H),4.33(d,J＝17.3Hz,1H),4.23(d,J＝6.4Hz,2H),4.07-3.92(s,2H),3.78-3.63(m,2H),3.07–2.84(m,2H),2.66–2.57(m,1H),2.44-2.36(m,1H),2.13–1.92(m,1H),1.40(s,9H).
步骤4.4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
于室温历经1分钟向3-((4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(102mg,0.186mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷中的4M溶液(5mL,20.00mmol)。混合物于室温搅拌1小时，然后在真空下浓缩至干，得到4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,HCl(129mg,0.186mmol,100％产率)，为白色固体(还观察到开环产物)。LCMS(M+H)+＝448.9.
步骤5.4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(25mg,0.033mmol)、4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,HCl(20mg,0.029mmol)、BOP(20.43mg,0.046mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.025mL,0.144mmol)在DMF(1mL)中的混合物于室温搅拌2小时。粗物质经制备型LC采用如下条件纯化：柱:Phenomenex Luna AxiaC18,21.2x100mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经10分钟30-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:20mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(15mg,0.013mmol,43.4％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1197.2.
步骤6.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(25mg,0.021mmol)在70％乙酸(3mL)中的混合物于75℃加热17小时。溶液用甲醇(4mL)稀释，分为两份，上样至制备型HPLC。合并正确的级分，在真空下浓缩，得到产物。该产物用饱和NaHCO3水溶液稀释，用二氯甲烷(2x50mL)萃取。合并的萃取物经无水Na2SO4干燥。在真空下除去溶剂，得到预期产物,4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(21.3mg,0.019mmol,90％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1109.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),10.39(d,J＝3.4Hz,1H),9.14(d,J＝4.4Hz,1H),8.15(s,1H),8.11–7.61(m,8H),6.99(t,J＝8.9Hz,3H),5.48(d,J＝6.0Hz,1H),5.20(d,J＝10.7Hz,1H),5.11(dd,J＝13.1,5.1Hz,1H),4.88–4.62(m,2H),4.54–4.43(m,2H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.13–3.98(m,2H),3.99–3.57(m,6H),3.51–3.35(m,2H),3.05–2.75(m,2H),2.65-2.57(m,1H),2.46-2.28(m,4H),2.11–1.87(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.056μM；hCRBN IC50＝0.601μM.
实施例8.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003963213670000361
步骤1.3-(4-(乙氧基羰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯
于室温历经1分钟向4-羟基苯甲酸乙基酯(0.35g,2.106mmol)、3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(0.456g,2.63mmol)和三苯膦(0.829g,3.16mmol)在甲苯(12mL)中的混合物中加入偶氮二甲酸二异丙基酯(DIAD)(0.622mL,3.16mmol)。所得溶液于105℃加热16小时。冷却至室温后，反应物溶液用乙酸乙酯(50mL)稀释，加入硅胶(5g)。在真空下除去挥发物。残余物接受ISCO色谱法(80g硅胶,0-35％乙酸乙酯/己烷)，得到3-(4-(乙氧基羰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(637mg,1.982mmol,94％产率)，为粘稠的油。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.15–7.74(m,2H),6.95–6.58(m,2H),4.93(tt,J＝6.4,4.1Hz,1H),4.40–4.28(m,4H),4.01(ddd,J＝9.7,4.1,1.1Hz,2H),1.45(s,9H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤2.4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯甲酸
于室温历经1分钟向3-(4-(乙氧基羰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(637mg,1.982mmol)在四氢呋喃(20mL)和甲醇(5mL)中的溶液中加入在水(5mL)中的氢氧化锂(285mg,11.9mmol)。混合物于50℃搅拌16小时，然后在真空下浓缩至约5mL的体积。残余物用水(15mL)稀释，用1N HCl酸化至pH＝5-6。通过抽滤收集沉淀产物,4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯甲酸(516mg,1.759mmol,89％产率)，为白色固体，于50℃在真空下干燥。产物未经进一步纯化用于下一步骤。
步骤3.3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯
将4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯甲酸(122mg,0.416mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(86mg,0.332mmol)、HATU(151mg,0.398mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.232mL,1.327mmol)在DMF(3mL)中的混合物于室温搅拌7天。混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(2X20mL)、饱和NaHCO3溶液(20mL)洗涤，经无水MgSO4干燥。通过ISCO色谱法(40g硅胶,固体装载,0-10％MeOH/CH2Cl2)分离出预期产物,3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(110mg,0.206mmol,62.0％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝534.8。
步骤4.4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(110mg,0.206mmol)在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中的混合物于室温搅拌2小时。蒸发溶剂，得到4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,TFA(113mg,0.206mmol,100％产率)，为粘稠的油。产物未经进一步纯化用于下一步骤。
步骤5.4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,TFA(34mg,0.062mmol)、2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(48mg,0.063mmol)、BOP(43.9mg,0.099mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.054mL,0.310mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物于室温搅拌2小时。粗物质经制备型HPLC采用如下条件纯化：柱:Phenomenex Luna AxiaC18,30x100mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经10分钟25-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:20mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(58mg,0.049mmol,79％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1183.2.
步骤6.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(58mg,0.049mmol)在70％乙酸(3mL)中的混合物于70℃加热17小时。溶液用甲醇(3mL)稀释，分为两份，上样至制备型HPLC。合并正确的级分，在真空下浓缩，得到产物。产物溶于100ml DCM中，用饱和NaHCO3溶液(5ml)洗涤。分离有机层，经MgSO4干燥和浓缩，得到预期产物,4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(26mg,0.023mmol,46.0％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1095.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),10.42(d,J＝2.3Hz,1H),9.14(d,J＝15.3Hz,1H),8.15(s,1H),8.06(dd,J＝8.8,6.5Hz,1H),8.02–7.93(m,3H),7.93–7.79(m,3H),7.71(d,J＝8.3Hz,1H),6.92–6.77(m,2H),5.47(t,J＝6.3Hz,1H),5.21(d,J＝10.7Hz,1H),5.11(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),5.02-4.91(m,1H),4.86–4.73(m,1H),4.73–4.64(m,1H),4.55–4.42(m,2H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.24–3.99(m,2H),3.97–3.55(m,6H),3.50–3.39(m,2H),2.92-2.83(m,1H),2.76–2.57(m,1H),2.44-2.30(m,4H),2.17–1.89(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.048μM；hCRBNIC50μM＝1.42μM.
实施例9.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003963213670000391
步骤1.3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯
将4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)苯甲酸(98mg,0.319mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-甲基哌啶-2,6-二酮(105mg,0.384mmol,中间体3)、HATU(145mg,0.383mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.223mL,1.275mmol)在DMF(3mL)中的混合物于室温搅拌5天。粗物质经制备型HPLC采用如下条件纯化：柱:Sunfire C18,30x100mm,OBD 5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经10分钟5-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:40mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,3-((4-((2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(44mg,0.078mmol,24.53％产率)。LCMS(M+H)+＝562.8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),8.05–7.93(m,2H),7.85(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),7.71(d,J＝8.3Hz,1H),7.11(d,J＝8.9Hz,2H),5.18(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.47(d,J＝17.4Hz,1H),4.32(d,J＝17.2Hz,1H),4.23(d,J＝6.5Hz,2H),4.05–3.92(m,2H),3.79–3.61(m,2H),3.47(bs,1H),3.10–2.92(m,4H),2.88–2.70(m,1H),2.47–2.29(m,1H),2.06–1.96(m,1H),1.40(s,9H).
步骤2.4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将3-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(44mg,0.078mmol)在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中的混合物于室温搅拌2小时。蒸发溶剂，得到4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,TFA(45mg,0.078mmol)，为粘稠的油。LCMS(M+H)+＝462.9。产物未经进一步纯化用于下一步骤。
步骤3.4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,TFA(36mg,0.062mmol)、2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(48mg,0.063mmol)、BOP(44.3mg,0.100mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.055mL,0.313mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物于室温搅拌2小时。粗物质经制备型HPLC采用如下条件纯化：柱:Phenomenex Luna Axia C18,30x100mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经10分钟35-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:40mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(65mg,0.054mmol,86％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1211.1.
步骤4.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(65mg,0.054mmol)在70％乙酸(4mL)中的混合物于70℃加热17小时。蒸发溶剂。粗产物经制备型HPLC采用如下条件纯化：柱:XBridge C18,200mm x 19mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含10-mM乙酸铵；流动相B:95:5乙腈:水,含10-mM乙酸铵；梯度:0-分钟保持在27％B,历经22分钟27-67％B,然后0-分钟保持在100％B；流速:20mL/min；柱温:25℃。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(33.6mg,0.030mmol,55.1％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1123.0。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.40(d,J＝5.0Hz,1H),9.13(d,J＝5.9Hz,1H),8.16(s,1H),8.05(dd,J＝15.2,8.6Hz,1H),8.02–7.90(m,4H),7.89–7.79(m,3H),7.73(d,J＝8.3Hz,1H),6.99(dd,J＝12.8,8.7Hz,2H),5.49(d,J＝5.8Hz,1H),5.26–5.11(m,2H),4.89–4.67(m,2H),4.57–4.42(m,2H),4.34(d,J＝17.2Hz,1H),4.14–3.96(m,2H),3.97–3.57(m,7H),3.51–3.37(m,2H),3.02(s,3H),3.05–2.93(m,1H),2.95–2.71(m,2H),2.46–2.33(m,1H),2.36(s,3H),2.14–1.96(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.085μM；hCRBN IC50＝8.95μM.
实施例10.5-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
Figure BDA0003963213670000421
步骤1.5-(苄基氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
将5-(苄基氧基)吡啶甲酸(85mg,0.371mmol)、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(95mg,0.366mmol)、HATU(169mg,0.445mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.259mL,1.483mmol)在DMF(2mL)中的混合物于室温搅拌过周末。加入水(3mL)。过滤收集不溶性产物,5-(苄基氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(127mg,0.270mmol,72.8％产率)，为驼色固体，在真空下干燥。LCMS(M+H)+＝470.8。
步骤2.N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-5-羟基吡啶酰胺
将5-(苄基氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(127mg,0.270mmol)和10％Pd/C(28.7mg,0.027mmol)在甲醇(18mL)和四氢呋喃(5mL)中的混合物在H2气囊提供的H2下于室温搅拌6小时。除去H2气囊后，反应混合物用N2净化，加热至回流。混合物趁热过滤除去催化剂。滤液在真空下浓缩至干。残余物于50℃在真空下干燥，得到预期产物,N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-5-羟基吡啶酰胺(70mg,0.018mmol,70％产率)，为浅黄色固体。LCMS(M+H)+＝380.8.
步骤3.2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙烷-1-醇
于室温向2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(中间体1)(100mg,0.130mmol)在THF(0.8mL)中的溶液中加入硼烷-四氢呋喃复合物(1M THF溶液,0.860mL,0.860mmol)。反应物于室温搅拌4小时。滴加MeOH以淬灭反应物直至停止产泡。反应物搅拌60分钟，然后在真空下浓缩。残余物用EtOAc稀释，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，浓缩。粗物质经硅胶快速柱和用0-90％EtOAc-己烷洗脱纯化，得到2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙烷-1-醇(97mg,0.129mmol,99％产率)，为泡沫状固体。
步骤4.5-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
于室温历经1分钟向N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-5-羟基吡啶酰胺(38.9mg,0.102mmol)、2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙烷-1-醇(77.00mg,0.102mmol)和三苯膦(40.2mg,0.153mmol)在THF(6mL)中的混合物中加入DIAD(0.030mL,0.153mmol)。所得溶液于室温搅拌2.5小时。反应混合物于70℃加热0.5小时。在真空下除去挥发物。残余物接受以下条件的制备型HPLC纯化：柱:Phenomenex Luna Axia C18,30x100mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经10分钟45-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:40mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,5-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(16.5mg,0.015mmol,14.5％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1115.0.
步骤5.5-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺
将5-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(18mg,0.016mmol)在70％乙酸(3mL)中的混合物于70℃加热17小时。溶液用甲醇稀释，接受具有以下条件的制备型HPLC纯化：柱:PhenomenexLuna Axia C18,21.2x100mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经16分钟15-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:20mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物。该产物用饱和NaHCO3水溶液(5mL)稀释，用二氯甲烷(2x30mL)萃取。合并的萃取物经无水Na2SO4干燥。在真空下除去溶剂，得到预期产物,5-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶酰胺(12.0mg,0.011mmol,71％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1127.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),10.63(s,1H),9.14(s,1H),8.24(d,J＝1.8Hz,1H),8.07(d,J＝8.7Hz,1H),8.02–7.89(m,4H),7.83–7.64(m,4H),7.25(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.52(d,J＝5.9Hz,1H),5.16(dd,J＝10.7,2.9Hz,1H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.83(t,J＝9.8Hz,1H),4.71(t,J＝5.8Hz,1H),4.56–4.39(m,2H),4.33(d,J＝17.3Hz,1H),3.95-3.88(m,2H),3.82–3.73(m,1H),3.71(t,J＝6.3Hz,1H),3.67–3.57(m,1H),3.54–3.39(m,3H),3.03–2.84(m,1H),2.65–2.57(m,1H),2.44–2.38(m,1H),2.36(s,3H),2.11–1.84(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.074μM；hCRBN IC50＝0.214μM.
实施例11.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003963213670000451
步骤1.3-((4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯
将4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)苯甲酸(65.0mg,0.211mmol)、3-(6-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(50mg,0.193mmol,中间体4)、HATU(88mg,0.231mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.135mL,0.77mmol)在DMF(2mL)中的混合物于室温搅拌16小时。粗物质经制备型HPLC采用如下条件纯化：柱:Phenomenex Luna AxiaC18,30x100mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经10分钟15-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:40mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,3-((4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(77mg,0.140mmol,72.8％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝548.8.
步骤2.4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将3-((4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)氨甲酰基)苯氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(42mg,0.077mmol)在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中的溶液于室温搅拌2小时。蒸发溶剂，得到4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,TFA(43mg,0.077mmol,100％产率)，为粘稠的油。LCMS(M+H)+＝449.8.
步骤3.4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酸(48mg,0.063mmol)、4-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺,TFA(43.1mg,0.077mmol)、BOP(44.3mg,0.100mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.055mL,0.313mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物于室温搅拌2小时。粗物质经制备型HPLC采用如下条件纯化：柱:Phenomenex LunaAxia C18,30x100mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含0.1％TFA；流动相B:95:5乙腈:水,含0.1％TFA；梯度:历经10分钟30-100％B,然后2-分钟保持在100％B；流速:40mL/min。合并含预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(61mg,0.051mmol,81％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1199.2.
步骤4.4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
将4-((1-(2-(((4aR,6S,7R,8R,8aR)-6-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-8-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁烯-7-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(61mg,0.051mmol)在70％乙酸(3mL)中的混合物于70℃加热17小时。蒸发溶剂。粗产物溶于DMF中，经制备型HPLC采用如下条件纯化：柱:XBridge C18,200mm x 19mm,5-μm粒子；流动相A:5:95乙腈:水,含10-mM乙酸铵；流动相B:95:5乙腈:水,含10-mM乙酸铵；梯度:0-分钟保持在19％B,历经28分钟19-58％B,然后0-分钟保持在100％B；流速:20mL/min；柱温:25℃。合并含有预期产物的级分，经离心蒸发进行干燥，得到预期产物,4-((1-(2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-2-(1-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-4-(4-(4-氯-3,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺(22.6mg,0.020mmol,57％产率)，为白色固体。LCMS(M+H)+＝1109.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.00(s,1H),10.33(d,J＝6.3Hz,1H),9.09(d,J＝6.5Hz,1H),8.23(s,1H),8.05(dd,J＝15.5,8.6Hz,1H),8.01–7.89(m,5H),7.83(dd,J＝21.7,8.9Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),6.97(dd,J＝15.9,8.4Hz,2H),5.51(d,J＝5.9Hz,1H),5.19(d,J＝10.7Hz,1H),5.10(dd,J＝13.0,5.1Hz,1H),4.83–4.72(m,2H),4.54–4.38(m,2H),4.33(d,J＝17.1Hz,1H),4.14–3.95(m,2H),3.94–3.50(m,8H),2.97–2.80(m,2H),2.67–2.59(m,1H),2.44-2.39(m,1H),2.38(d,J＝2.7Hz,3H),2.13–1.96(m,1H)。hGal-3 IC50＝0.040μM；hCRBN IC50＝1.27μM.
采用对上述实施例所述的操作合成了下表1中的实施例12至35。
表1
Figure BDA0003963213670000481
Figure BDA0003963213670000491
Figure BDA0003963213670000501
Figure BDA0003963213670000511
Figure BDA0003963213670000521
Figure BDA0003963213670000531
Figure BDA0003963213670000541
Figure BDA0003963213670000551
Figure BDA0003963213670000561
Figure BDA0003963213670000571
Figure BDA0003963213670000581
表2.THP-1细胞中的ELISA Gal-3降解分析
Figure BDA0003963213670000591

Claims (11)

1.式(I)化合物：
Figure FDA0003963213660000011
或其可药用盐，其中：
Ar1独立地是
Figure FDA0003963213660000012
Ar2独立地是苯基或萘基；和其中各个环部分被1至5个选自如下的取代基取代：
氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基；
Ar3独立地是苯基、吡啶基、喹诺酮、异喹啉或苯并噻唑基，其中各个环部分被0至3个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基的取代基取代；
R1和R1a独立地是H或C1-4烷基；
R2独立地是-C(＝O)NR3R4或-OR4；
R3独立地是H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；
R4独立地是-(L1)1-4-L2-C(＝O)NHR5、-(L1)1-4-L2-NHC(＝O)R5、-(L1)1-4-NHC(＝O)-L2-OR5、
Figure FDA0003963213660000013
Figure FDA0003963213660000014
或者，-NR3R4独立地是
Figure FDA0003963213660000015
Figure FDA0003963213660000016
L1独立地是C1-3亚烷基或-C1-3亚烷基-O-；
L2独立地是价键或C1-3亚烷基；
L3独立地是-O-、-CH2-、-CH2O-、-OCH2-或-CH2OCH2-；
Ar4独立地是亚苯基或亚吡啶基；和其中各个环部分被0至2个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代；
R5独立地是
Figure FDA0003963213660000021
R6独立地是H或C1-4烷基；
R7独立地是吲哚基，被0-2个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代；和
Ar5独立地是亚苯基或亚吡啶基；和其中各个环部分被噻唑基取代，所述噻唑基被0-2个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代。
2.权利要求1的化合物，其中：
Ar1是
Figure FDA0003963213660000022
Ar2独立地是苯基，被1至5个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基的取代基取代；和
Ar3独立地是苯基，被0至3个选自氰基、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基和C3-6环烷基的取代基取代。
3.权利要求2的化合物，其中：
Ar2独立地是苯基，被1至4个选自F、Cl和Br的取代基取代；
Ar3独立地是苯基，被0至3个选自Cl、CH3、CF3和-OCF3的取代基取代；
R3独立地是H、C1-3烷基或C1-3卤代烷基；
R4独立地是-L1-L2-C(＝O)NHR5、-(L1)1-3-L2-NHC(＝O)R5、
-(L1)1-3-NHC(＝O)-L2-OR5、
Figure FDA0003963213660000023
和或者，-NR3R4独立地是
Figure FDA0003963213660000031
Figure FDA0003963213660000032
4.权利要求2或权利要求3的化合物，其中：
Ar2独立地是
Figure FDA0003963213660000033
Figure FDA0003963213660000034
5.权利要求1-4任一项的化合物，其中：
Ar3独立地是
Figure FDA0003963213660000035
6.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式(Ia)：
Figure FDA0003963213660000036
或其可药用盐，其中：
R3独立地是H或-CH2Cl；
R4独立地是-CH2CH2OCH2C(＝O)NHR5、-(CH2CH2O)1-3(CH2)1-2NHC(＝O)R5、-(CH2CH2O)1-3(CH2)2NHC(＝O)CH2OR5、
Figure FDA0003963213660000041
Figure FDA0003963213660000042
或者，-NR3R4独立地是
Figure FDA0003963213660000043
Figure FDA0003963213660000044
R5独立地是
Figure FDA0003963213660000045
Figure FDA0003963213660000046
且
R6独立地是H或CH3。
7.权利要求1的化合物，其中所述化合物选自实施例1-35，或其可药用盐。
8.组合物，包含治疗有效量的权利要求1至7任一项的化合物或其可药用盐以及一种或多种可药用载体。
9.权利要求1至7任一项的化合物或其可药用盐或者权利要求8的组合物，用作药剂。
10.用于治疗器官(包括肝、肾脏、肺、心脏和皮肤)纤维化、肝脏疾病和病症(包括急性肝炎、慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化、门静脉高压、再生衰竭、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝功能减退和肝血流疾病)、细胞增殖性疾病、癌症和病症(包括实体瘤、实体瘤转移、血管纤维瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、白血病、慢性淋巴细胞白细胞(CLL))和癌细胞侵袭性转移)、炎性疾病和病症(包括银屑病、肾病和肺炎)、胃肠道疾病和病症(包括肠易激惹综合征(IBS)、炎性肠病(IBD)和胰腺分泌异常)、肾脏疾病和病症、泌尿道相关性疾病和病症(包括良性前列腺增生症或与神经性膀胱疾病、脊髓肿瘤、椎间盘突出、脊椎管狭窄相关的症状和衍生自糖尿病的症状)、下泌尿道疾病和病症(包括下泌尿道阻塞)、下泌尿道炎性疾病和病症(包括排尿困难和尿频)、胰腺疾病和病症、异常血管发生相关性疾病和病症(包括动脉阻塞)、硬皮病、脑相关疾病和病症(包括脑梗死和脑出血)、神经性疼痛和周围神经病、眼部疾病和病症(包括年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病、增殖性玻璃体视网膜病(PVR)、瘢痕性类天疱疮和青光眼滤过术瘢痕)的用途，包括给患者施用治疗有效量的权利要求1至7任一项的化合物或其可药用盐或者权利要求8的组合物。
11.权利要求10的用途，其中所述疾病或病症是肾纤维化、肺纤维化、肝纤维化、动脉纤维化或系统性硬化病。
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