CN115747093B

CN115747093B - 一株耐盐芽胞杆菌及其应用

Info

Publication number: CN115747093B
Application number: CN202210830496.XA
Authority: CN
Inventors: 林红梅; 孙卓; 韩忠明; 韩梅; 杨利民
Original assignee: Jilin Agricultural University
Current assignee: Jilin Agricultural University
Priority date: 2022-07-15
Filing date: 2022-07-15
Publication date: 2024-02-27
Anticipated expiration: 2042-07-15
Also published as: CN115747093A

Abstract

本发明公开了一株耐盐芽孢杆菌及其应用，属于微生物技术领域，解决现有技术中尚未有可以防控防风真菌性病害的菌株的技术问题。本发明公开的耐盐芽胞杆菌于2022年6月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.62593。本发明还公开了该耐盐芽胞杆菌或其发酵液在制备防治植物病原真菌的药物中的应用、在制备防治防风立枯病、或/和防风枯萎病、或/和防风根腐病的药物中的应用。本发明的耐盐芽胞杆菌不仅对防风病害病原真菌具有抑制作用，对鹅掌楸链格孢菌等6种药用植物病原真菌也具有广谱抑菌作用。本发明的耐盐芽胞杆菌可在土壤中稳定定殖；无毒无致病性，不污染环境，能有效地、持久地控制防风真菌性病害的流行。

Description

一株耐盐芽胞杆菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株耐盐芽孢杆菌及其应用。

背景技术

防风Saposhnibopia divaricata(Turcz.)Schischk.为伞形科防风属多年生草本植物，以干燥根入药，有解表发汗、祛风除湿、止痛之功效。防风是我国大宗药材之一，市场需求量大。目前，由尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌、立枯丝核菌等病原真菌引起的防风真菌性病害严重影响防风的产量和品质。而对于防风真菌性病害的防治主要采用农业防治途径和化学防治途径，但轮作等农业防治费时费力，化学防治使用不当会引起病原菌产生耐药性，农药残留残毒和环境污染等问题，无法切实满足生产需求。利用有益拮抗菌对抗病原菌的生物防治措施，具有安全高效、绿色环保、操作简单等优势，随着当前绿色农业的发展，生物防治在农业生产中被认为是一种能代替或作为减少化学农药使用的措施。

生物防治是以生态学原理为基础，利用生物物种间的相互作用，以一种或一类生物抑制另一种或另一类生物。生物防治最大的优点是对农业生态环境友好，无农药残留。利用生防有益微生物防治病原微生物是生物防治技术的重要组成部分，它避免了化学农药使用带来的一系列植保、环境和能源方面的问题，更重要的是促进了农业的可持续发展。

现有技术中，关于防风真菌性病害生物防控的研究鲜有报道，且都只是针对于防风内生菌的研究，尚未见利用筛选自防风根际土壤的耐盐芽孢杆菌防控防风真菌性病害的相关报道。

发明内容

本发明的目的之一在于，提供一株耐盐芽孢杆菌，解决现有技术中尚未有可以防控防风真菌性病害的菌株的技术问题。

本发明的目的之二在于，提供该株耐盐芽孢杆菌的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供的一株耐盐芽胞杆菌，其保藏号为：GDMCC No.62593。

申请人从防风健康根际土壤中分离得到一株拮抗细菌SC-87，分类命名为：耐盐芽胞杆菌(Bacillus halotolerans)；保藏于广东省微生物菌种保藏中心，广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。保藏编号为：GDMCC No.62593；保藏时间：2022年6月30日。

本发明提供的所述耐盐芽胞杆菌或其发酵液在制备防治植物病原真菌的药物中的应用。

本发明的部分实施方案中，所述植物病原真菌包括立枯丝核菌Rhizoctoniasolani Kühn、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea Pers.ex Fr.、木贼镰刀菌Fusariumequiseti(Corda)Sacc.、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schlecht.、镰刀菌Fusarium.Spp、恶疫霉菌Phytophthora cactorum(lebert et Cohn)J.Schroet.、鹅掌楸链格孢菌Alternaria liriodendra T.Y.Zhang et J.Z.Zhang、腐皮镰孢菌Fusarium solani(mart.)App.et Wollenw、槭菌刺孢菌Mycocentrospora acerina(Hartig)Deighton.、细极链格孢菌Alternaria tenuissima(Fr)Wiltshire、核盘菌Sclerotinia asari Wu etC.R.Wang.、五味子尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schlecht.中的至少一种。

本发明的部分实施方案中，所述植物病原真菌为防风病原真菌。

本发明的部分实施方案中，所述防风病原真菌包括立枯丝核菌Rhizoctoniasolani Kühn、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea Pers.ex Fr.、木贼镰刀菌Fusariumequiseti(Corda)Sacc.、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schlecht.、镰刀菌Fusarium.Spp、恶疫霉菌Phytophthora cactorum(lebert et Cohn)J.Schroet.中的至少一种。

本发明的耐盐芽胞杆菌或其发酵液在制备防治防风立枯病、或/和防风枯萎病、或/和防风根腐病的药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明从防风健康根际土壤中分离得到的耐盐芽胞杆菌SC-87，对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers.ex Fr.)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti(Corda)Sacc.)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht.)、镰刀菌(Fusarium.spp)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum(lebert et Cohn)J.Schroet.)等6种防风病害病原真菌均具有较好的生长抑制作用。

此外，耐盐芽胞杆菌SC-87对鹅掌楸链格孢菌(Alternaria liriodendraT.Y.Zhang et J.Z.Zhang)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani(mart.)App.et Wollenw)、槭菌刺孢菌(Mycocentrospora acerina(Hartig)Deighton.)、细极链格孢菌(Alternariatenuissima(Fr)Wiltshire)、核盘菌(Sclerotinia asari Wu et C.R.Wang.)、五味子尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht.)等6种药用植物病原真菌具有广谱抑菌作用。

耐盐芽胞杆菌SC-87可在土壤中稳定定殖；SC-87菌株发酵液对防风立枯病、枯萎病和根腐病具有良好的室外防控效果；菌株SC-87无毒无致病性，对人畜安全，不污染环境。

耐盐芽胞杆菌SC-87菌株发酵液可直接施加到土壤中对植物进行灌根处理即可发挥其杀菌作用，能显著改善防风根际环境中微生物群落的合理结构，形成一个生物多样化的防风根际土壤微生态环境，从而有效地、持久地控制防风真菌性病害的流行。

附图说明

图1为拮抗细菌SC-87的发酵液对防风病原真菌的抑制作用图，其中各病原真菌分别为A：立枯丝核菌；B：灰葡萄孢菌；C：木贼镰刀菌；D：镰刀菌；E：尖孢镰刀菌；F：恶疫霉菌。

图2为拮抗细菌SC-87的抑菌谱研究结果图，其中各病原真菌分别为A：立枯丝核菌；B：灰葡萄孢菌；C：木贼镰刀菌；D：镰刀菌；E：尖孢镰刀菌；F：恶疫霉菌；G：鹅掌楸链格孢菌；H：腐皮镰刀菌；I：(五味子)尖孢镰刀菌；J：细极链格孢菌；K：槭菌刺孢菌；L：核盘菌。

图3为拮抗细菌SC-87菌落形态和染色观察图，其中A为菌落形态图；B为革兰氏染色图；C为芽孢染色图。

图4为拮抗细菌SC-87生理生态检测结果图；其中A为D-甘露醇利用试验结果图；B为D-木糖利用试验结果图；C为明胶液化试验结果图；D为淀粉水解试验结果图；E为V-P试验结果图。

图5为基于16S rDNA、gyrB基因序列构建的拮抗细菌SC-87系统发育树图；其中图5A为基于16S rDNA基因序列构建的系统发育树图；图5B为基于gyrB基因序列构建的系统发育树图。

图6为菌株SC-87的标记菌株与原始菌株抑菌活性对比图；其中第一排为原始菌株对防风病原真菌的抑制作用图；第二排为标记菌株对防风病原真菌的抑制作用图；各病原真菌分别为A：立枯丝核菌；B：灰葡萄孢菌；C：木贼镰刀菌；D：镰刀菌；E：尖孢镰刀菌；F：恶疫霉菌。

图7为标记菌株SC-87在含300μg/mLRif的NA固体培养基中生长状况图。

图8为拮抗细菌SC-87对防风立枯病的防治效果，各组所用菌剂分别为A：立枯丝核菌；B：立枯丝核菌+哈茨木霉菌剂；C：立枯丝核菌+枯草芽胞杆菌菌剂；D：立枯丝核菌+甲基托布津；E：立枯丝核菌+SC-87发酵液。

图9为拮抗细菌SC-87对防风枯萎病的防治效果。各组所用菌剂分别为A：尖孢镰刀菌；B：尖孢镰刀菌+哈茨木霉菌剂；C：尖孢镰刀菌+枯草芽胞杆菌菌剂；D：尖孢镰刀菌+多菌灵；E：尖孢镰刀菌+SC-87发酵液。

图10为拮抗细菌SC-87对防风根腐病的防治效果。各组所用菌剂分别为A：木贼镰刀菌；B：木贼镰刀菌+哈茨木霉菌剂；C：木贼镰刀菌+枯草芽胞杆菌菌剂；D：木贼镰刀菌+代森锰锌；E：木贼镰刀菌+SC-87发酵液。

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步阐述本发明。

本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。若为特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中所使用的材料、试剂等如无特殊情况，均从商业途径得到。

本发明实施例中所述的病原真菌为：立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers.ex Fr.)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti(Corda)Sacc.)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht.)、镰刀菌(Fusarium.spp)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum(lebert et Cohn)J.Schroet.)、鹅掌楸链格孢菌(Alternarialiriodendra T.Y.Zhang et J.Z.Zhang)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani(mart.)App.etWollenw)、槭菌刺孢菌(Mycocentrospora acerina(Hartig)Deighton.)、细极链格孢菌(Alternaria tenuissima(Fr)Wiltshire)、核盘菌(Sclerotinia asari Wu etC.R.Wang.)、五味子尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht.)。

本发明实施例中所用土壤样品为：采用五点取样法，于吉林农业大学药园(E125°24′59″、N 43°48′24″、海拔251m)，吉林省白城市黑水镇(E 122°52′10.43″、N 45°11′39.01″、海拔152m)，吉林省洮南市永茂林场(E 122°12′38.32″、N45°31′58.59″、海拔224m)的健康防风种植地进行土壤样品采集。根际土壤收集采用抖落法，即拔出根系，去除根围土，将离主根和须根根轴表面0-5mm之内附着的土壤抖到自封袋中，4℃保存、备用。

本发明实施例中所用培养基及试剂为：牛肉膏蛋白胨(NA)培养基：牛肉膏3g，氯化钠5g，蛋白胨10g，琼脂17g，蒸馏水1000mL；马铃薯葡萄糖(PDA)培养基：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂17g，蒸馏水1000mL；西蒙氏柠檬酸盐培养基，硝酸盐肉汤培养基，明胶水解培养基、淀粉水解培养基、V-P培养基等鉴定培养基和细菌生理生化鉴定管(青岛海博生物科技有限公司)；99％利福平(Rifampicin)(北京索莱宝科技有限公司)；70％代森锰锌800倍液(四川润尔科技有限公司)；哈茨木霉菌剂(潍坊奥奇生物科技有限公司)；枯草芽胞杆菌菌剂(山东鲁抗生物农药有限责任公司)；细菌基因组试剂盒(TaKaRa公司)；DNAMarker和细菌引物(生工生物工程(上海)股份有限公司)。

实施例1

本实施例公开了本发明的耐盐芽胞杆菌SC-87的分离筛选及鉴定，具体过程包括以下步骤：

步骤一：土壤细菌的分离

采用稀释平板法，称取已过20目筛的土样10g，置于250mL三角瓶中，加入90mL无菌水和少许玻璃珠，30℃、180r/min充分振荡20min，混匀后静置5min，制得土壤悬液。按10^-3、10^-4、10^-5梯度制成稀释液，分别吸取200μL各稀释液在NA平板均匀涂布，每处理3次重复，平板倒置于恒温培养箱内32℃暗培养24-48h。根据菌落形态、颜色、边缘，可溶性色素等特征挑取不同的细菌菌落，进行NA平板划线纯化，编号，4℃保存，备用。

步骤二：拮抗细菌筛选

细菌发酵液的制备：将供试细菌接种于NA液体培养基中，32℃、180r/min振荡培养36h，制得细菌发酵液，加入灭菌水调整含菌量为10⁸CFU/mL，置于室温下备用。

采用滤纸片法进行初筛，将供试病原真菌制成直径8mm的菌饼，接种至PDA平板正中央，同时将4片灭菌滤纸圆片(直径8mm)对称置于距平板中心约25mm处，每片点接20μL细菌培养液，对照组点接20μLNA液体培养基，每处理3次重复，置于30℃培养箱暗培养，待对照组菌落长满平板，筛选出有明显拮抗作用的细菌菌株进行复筛。

抑菌率＝[(A－B)/(A－8)]×100％

其中，A：对照组病原真菌的生长直径，B：处理组病原真菌的生长直径，数字为病原菌菌饼直径。

筛选出一株编号为SC-87的拮抗细菌，其发酵液对供试6种防风病原真菌具有抑制作用(如表1和附图1所示)，抑菌率为77.76％-86.24％，具有广谱抑菌活性。

表1菌株SC-87对防风病原真菌的抑制率

注：表1中数据为平均数±标准差。

步骤三：拮抗细菌SC-87的抑菌谱研究

采用滤纸片法，以供试12种常见药用植物真菌性病害致病菌为标靶菌，对拮抗细菌SC-87进行抗菌谱的测定，每处理3次重复，置于30℃培养箱暗培养，待对照组菌落长满平板，计算抑制率。

抑菌谱结果表明(如表2和附图2所示)，拮抗细菌SC-87对12种病原真菌均具有抑菌效果，抑菌率为72.68％-89.18％，且经过多次试验验证其抑菌效果稳定，表明拮抗细菌SC-87不但对防风6种病原真菌具有广谱抑菌作用，同时，对其它6种药用植物病原真菌也具有广谱抑菌活性，展现出拮抗细菌SC-87良好的生防潜力。

表2菌株SC-87的抑菌谱测定结果

注:表2中数据为平均数±标准差。

步骤四：拮抗细菌SC-87的鉴定

1.形态学鉴定

将拮抗细菌SC-87划线接种于NA培养基上，30℃暗培养，观察菌落形态，主要包括菌落颜色、透明度、边缘特征等，并进行革兰氏染色及芽胞染色。

结果表明(如附图3所示)，菌株SC-87在NA固体培养基培养48h后，菌落乳白色，有黏性，质软，中心隆起，表面湿润，不透明，边缘整齐，镜检菌体为杆状，革兰氏阳性，有芽胞。

2.生理生态特性

参照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰细菌鉴定手册》，采用细菌生理生化鉴定管对拮抗细菌糖醇利用、甲基红试验、V-P试验、明胶液化、淀粉水解和吲哚试验等生理生化指标进行测定。

结果表明(如表3和附图4所示)，菌株SC-87能够水解淀粉和明胶，硝酸盐还原反应生成红色化合物，接触酶、酪蛋白、V-P反应和氧化酶均为阳性，能够利用柠檬酸盐和多种糖原，甲基红反应、丙酸盐、吲哚、苯丙氨酸脱氨酶均为阴性，代谢过程不产生H₂S气体，能在10％含NaCl的NA培养基生长。

表3拮抗细菌SC-87的生理生化特征

注：“+”阳性，“-”阴性。

3.分子鉴定

采用细菌基因组试剂盒提取拮抗细菌基因组DNA。采用细菌16S通用引物16S1F和16S1R扩增16S rDNA基因序列。采用特异性引物gyrB-Up1-F和Up-2R扩增gyrB基因序列。扩增产物交生工生物工程(上海)有限公司测序，测序结果在NCBI进行同源性比较分析，用MEGA 5.0软件中的Neighbor-oining法构建系统发育树，自展值设为1000。结果表明，扩增菌株SC-87的16S rDNA基因序列，分别获得了1436bp的PCR产物，提交GenBank注册，经NCBIBLAST进行同源性比对并构建16S rDNA基因序列系统发育树显示，菌株SC-87与暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)聚为一支，且支持率较低，难以区分；进一步扩增菌株SC-87的gyrB基因序列，经测序分别获得1197bp的PCR产物，经NCBI BLAST进行同源性比对并构建gyrB基因序列系统发育树显示，菌株SC-87与耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)聚为一支。本发明的耐盐芽胞杆菌SC-8的基于16S rDNA基因序列构建的系统发育树如图5A所示；基于gyrB基因序列构建的系统发育树如图5B所示；16S rDNA基因序列如SEQ.ID NO.1所示，gyrB基因序列如SEQ.ID NO.2所示。

结合形态学、生理生化特性以及16S rDNA、gyrB基因序列，菌株SC-87鉴定为耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)。

综上所述：本发明通过稀释梯度平板法，从防风健康根际土壤中分离出多株菌株，以防风常见6种病原真菌及6种其它药用植物病原真菌为标靶菌，采用滤纸片法和牛津杯法筛选出一株编号为SC-87的拮抗菌株，该菌株不仅对防风病原菌具有良好抑菌效果，对其它6种药用植物病原真菌也具有拮抗作用，具有广谱抑菌能力，经形态学、生理生化特性及分子生物学鉴定，将拮抗细菌SC-87鉴定为耐盐芽胞杆菌(Bacillus halotolerans)。

实施例2

本实施例公开了本发明的耐盐芽胞杆菌SC-87抗利福平标记菌株的筛选及定殖能力研究。

1.抗利福平(Rif)标记菌株的筛选及检测

采用抗生素标记法，取拮抗细菌发酵液10mL接种在含10μg/mL Rif的50mLNA培养液中。32℃、180r/min振荡培养，逐步筛选出能在300μg/mL Rif的NA培养液中稳定生长且拮抗活性、菌落形态变化不大的标记菌株进行遗传稳定性和拮抗稳定性检测。

遗传稳定性检测：将标记菌株在NA液体培养基(不含Rif)中继代培养10代后，涂布于含300μg/mL Rif的NA培养基平板，观察是否能正常生长。

拮抗稳定性检测：采用滤纸片法，以原始菌株为对照，观察抑菌率是否存在差异。结果表明(如附图6所示)，菌株SC-87能在含300μg/mL Rif的NA固体培养基上稳定生长，并且在不含Rif的NA固体培养基上连续培养10代后，均能在含300μg/mL Rif的NA固体培养基上正常生长，其发酵液对防风病原菌仍具有抑制作用，抑菌效果与原始菌株基本相同，具有遗传稳定性和拮抗稳定性。

2.抗利福平突变菌株在土壤中的定殖

采用拌土接种法，将300g土壤放入育苗盆中，并向盆中注入30mL突变菌株发酵液(初始菌量10⁸CFU/g)均匀拌土，3次重复处理，室温下放置，每隔7d定期取样，采用土壤稀释法将土壤稀释液涂布在含300μg/mL Rif的NA培养基平板上，计算含菌量。

如表4所示，菌株SC-87在土壤中定殖动态呈现“先减后增再趋于平稳”的趋势。标记菌株施入土壤后定殖菌量明显下降，第14天时达到最低值，14d后土壤的定殖菌量逐渐增加，于第21天达到峰值，分别为14d的1.17倍；标记菌株定殖菌量达到峰值后开始逐渐减少，并于28d后土壤定殖菌量趋于稳定；35d时，标记菌株的定殖菌量仍可达到10⁷CFU/g以上，表现出良好的定殖能力。

表4标记菌株在土壤里的定殖动态

注：表4中数据为平均数±标准差。

实施例3

本实施例公开了本发明的耐盐芽胞杆菌SC-87对防风立枯病、枯萎病和根腐病的盆栽防效研究，具体步骤如下：

拮抗细菌发酵液的制备：将拮抗细菌SC-87分别接种于NA液体培养基中，32℃、180r/min振荡培养4d，制得拮抗细菌发酵液，用灭菌水调整含菌量为10⁸CFU/mL，置于室温下备用。

立枯丝核菌菌丝悬浮液的制备：将3-4块直径8mm的立枯丝核菌菌饼，置于装有100mLPDA液体培养基的250mL锥形瓶中，25℃，180r/min振荡培养3d，过滤，吸干水分后称量菌丝的重量，加入灭菌水配置成浓度为10g/L的菌丝悬浮液。

孢子悬液的制备：将已活化好的木贼镰刀菌和尖孢镰刀菌用打孔器打成直径8mm的菌饼，挑取5-6块菌饼分别放入装有PDA液体培养基的锥形瓶中，25℃，180r/min振荡培养7d，用灭菌纱布过滤，在显微镜下用血球计数板调整孢子浓度为10⁸CFU/mL。

盆栽试验设置5个处理：

处理1：单接病原菌悬液15mL；处理2：哈茨木霉菌剂(孢子浓度为10⁸CFU/mL)与病原菌悬液各15mL混合接种；处理3：枯草芽胞菌剂(含菌量为10⁸CFU/mL)与病原菌悬液各15mL混合接种；处理4：70％代森锰锌800倍液、50％甲基托布津800倍液和50％多菌灵500倍液分别与病原菌悬液各15mL混合接种；处理5：拮抗细菌发酵液与病原菌悬液各15mL混合接种。

接种方式：选取长势一致且健康的一年生防风植株，防风立枯病采用针刺涂抹法，用小号注射针头轻刺防风叶片，针刺10-15个点，勿刺穿叶片，在针刺的叶片上涂抹上述处理组菌液；防风根腐病和枯萎病采用伤根灌注法，用刀片在距防风茎基1-2cm处划伤，从伤口处灌入上述处理组菌液。每个处理8个重复。常规管理，接种35d后进行病害调查，计算病情指数和防治效果。

防风立枯病病情分级，分为9级。0级：全株无病；1级：茎部病斑未超过1/3的茎围，或1/3以下叶片凋萎；3级：茎部病斑环绕茎围1/3-1/2，或1/3-1/2叶片轻度凋萎；5级：茎部病斑超过1/2的茎围，但未达到整个茎围，或1/2-2/3叶片凋萎；7级：茎部病斑环绕整个茎围，或2/3以上的叶片凋萎；9级：病株基本枯死。

防风根腐病病情分级，分为9级。0级：健株，无病斑；1级：全株10％以下的叶片发病；3级：全株11-25％的叶片发病；5级：全株26-50％的叶片发病；7级：全株51-75％叶片发病；9级：全株76％以上的叶片发病。

防风枯萎病病情分级，分为9级。0级：健株，无病斑；1级：全株1-10％的叶表面有黄色病斑；3级：病斑占全株叶片的11-25％；5级：病斑占全株叶片的26-50％；7级：病斑占全株叶片的51-75％；9级：病斑占全株叶片的76％以上。

病情指数＝∑(各级病株数×相应级数)/(病级最高级×调查总植株数)×100防治效果(％)＝(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数×100％拮抗细菌SC-87对防风立枯病的盆栽防效如表5和附图8所示，结果表明：接种35d后，单接立枯丝核菌的防风植株病情指数为46.91，其它处理组的病情指数均较单接立枯丝核菌显著降低。拮抗细菌SC-87对防风立枯病的防效均高于菌剂处理，其防效较接种哈茨木霉菌剂和枯草芽胞杆菌菌剂分别提高了15.00％和19.99％，与甲基托布津防效相同。

表5拮抗细菌SC-87对防风立枯病的防治效果

处理	病情指数	防效(％)
			立枯丝核菌	46.91±8.55a	/
立枯丝核菌+哈茨木霉菌剂	25.93±4.28b	44.74±8.45a
			立枯丝核菌+枯草芽胞杆菌菌剂	27.16±6.42b	42.11±12.67a
立枯丝核菌+甲基托布津	22.22±5.66b	52.63±11.18a
			立枯丝核菌+SC-87	22.22±3.70b	52.63±7.32a

注:数据为平均数±标准差。不同小写字母表示经Duncan氏新复极差法检验差异显著(P<0.05)。

拮抗细菌SC-87对防风枯萎病的盆栽防效如表6和附图9所示，结果表明，接种35d后，单接尖孢镰刀菌的防风植株病情指数为56.79，其它处理组的病情指数均较单接尖孢镰刀菌显著降低。拮抗细菌SC-87对防风枯萎病的防效均高于菌剂和农药处理，菌株SC-87与尖孢镰刀菌混合接种后，其防效较接种哈茨木霉菌剂、枯草芽胞杆菌菌剂和多菌灵分别提高了21.42％、25.00％和17.85％。

表6拮抗细菌SC-87对防风枯萎病的防控效果

注:表6中数据为平均数±标准差。不同小写字母表示经Duncan氏新复极差法检验差异显著(P<0.05)。

拮抗细菌SC-87对防风根腐病的盆栽防效如表7和附图10所示，结果表明，接种35d后，单接木贼镰刀菌的病情指数为56.79，其它处理组病情指数均较单接木贼镰刀菌显著降低。拮抗细菌SC-87对防风根腐病的防效均高于菌剂和农药处理，其防效较接种哈茨木霉菌剂、枯草芽胞杆菌菌剂和代森锰锌分别提高了16.66％、30.00％和13.34％。

表7拮抗细菌SC-87对防风根腐病的防控效果

处理	病情指数	防效(％)
			木贼镰刀菌	56.79±7.41a	/
木贼镰刀菌+哈茨木霉菌剂	29.63±4.28b	47.83±6.79a
			木贼镰刀菌+枯草芽胞杆菌菌剂	30.86±7.41b	45.65±11.76a
木贼镰刀菌+代森锰锌	24.69±7.71b	56.52±12.25a
			木贼镰刀菌+SC-87	19.75±3.7b	65.22±5.88a

注:表7中数据为平均数±标准差。不同小写字母表示经Duncan氏新复极差法检验差异显著(P<0.05)。

综上所述，拮抗细菌SC-87对防风立枯病、枯萎病和根腐病均有良好的防治效果，防效可达52.63％-65.22％。

本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。在本专利的启示下，结合本领域的基本常识，将所述菌株用于防风真菌性病害的防治中，都属于本发明的保护范围。

Claims

1.一株耐盐芽胞杆菌（Bacillus halotolerans），其特征在于，其保藏号为：GDMCC No.62593。

2. 根据权利要求1所述的耐盐芽胞杆菌或其发酵液在制备防治植物病原真菌的药物中的应用；所述植物病原真菌为立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea Pers. ex Fr.、木贼镰刀菌Fusarium equiseti (Corda) Sacc.、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schlecht.、恶疫霉菌Phytophthora cactorum (lebert etCohn) J. Schroet. 、鹅掌楸链格孢菌Alternaria liriodendra T. Y. Zhang et J. Z.Zhang 、腐皮镰孢菌Fusarium solani (mart.) App. et Wollenw 、槭菌刺孢菌Mycocentrospora acerina (Hartig) Deighton. 、细极链格孢菌Alternaria tenuissima(Fr) Wiltshire 、核盘菌Sclerotinia asari Wu et C .R. Wang.中的至少一种。

3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物病原真菌为防风病原真菌；所述防风病原真菌为立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn、灰葡萄孢菌Botrytis cinereaPers. ex Fr.、木贼镰刀菌Fusarium equiseti (Corda) Sacc.、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schlecht.、恶疫霉菌Phytophthora cactorum (lebert et Cohn) J.Schroet.中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的耐盐芽胞杆菌或其发酵液在制备防治防风立枯病、或/和防风枯萎病、或/和防风根腐病的药物中的应用。