CN110205262A - 类球红细菌a2菌株、生防菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

类球红细菌a2菌株、生防菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种类球红细菌A2菌株、生防菌剂、生防发酵液及其制备方法和应用，所述类球红细菌A2菌株为类球红细菌A2(Rhodobacter sphaeroides A2)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2018602，该菌株经过活化、种子培养、生产培养制备得到生防菌剂和生防发酵液，所述生防菌剂及生防发酵液既可以防治马铃薯晚疫病害还能促进马铃薯生长，具有环境友好、对人畜无害、对作物无要害、施用简单方便等特点，且不易使病虫害产生耐药性，在可持续农业发展中应用前景广阔。

Description

类球红细菌A2菌株、生防菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物农药技术领域，特别地，涉及一种类球红细菌A2菌株。此外，本发明还涉及一种类球红细菌A2生防菌剂和类球红细菌A2的生防发酵液，以及上述的类球红细菌A2 生防菌剂的制备方法及在马铃薯促生和防病害中的应用。
背景技术
马铃薯晚疫病又称疫病，是由致病疫霉引起，导致马铃薯茎叶死亡和块茎腐烂的一种毁灭性卵菌病害。凡种植马铃薯的地区都有发生，其损失程度由气候条件而定。在多雨、气候冷湿适于疫病发生和流行的地区和年份，受害马铃薯提前枯死，减产可达20％-40％。
马铃薯晚疫病为全株型病害，可侵染叶、茎和薯块，主要侵害植株的顶端，以叶片为主。发病初期，叶片染病先在叶尖或叶缘生水浸状绿褐色小斑点，病斑周围具浅绿色晕圈，湿度大时病斑迅速扩大，扩大后成为圆形、半圆形大病斑，呈褐色，并产生一圈白霉，即孢囊梗和孢子囊，尤以叶背最为明显，叶片背面可见白色霉状物；干燥时病斑变褐干枯，质脆易裂，不见白霉，且扩展速度减慢。叶柄与茎秆、叶片与叶柄连接部，或茎秆上出现褐色侵染；表皮韧部变褐、变脆。当湿度较大时病斑扩展迅速；在低湿高温条件下病斑呈褐色干枯状，白色霉层不明显。发病严重时叶片干枯、萎蔫，发病部位呈现黑色枯焦腐烂状，最后整个植株湿腐，有酒精气味。薯块被侵染初期呈褐色或紫褐色不规则状，有凹陷，薯肉水浸状，变褐腐烂，并伴随有腐败气味。
病菌主要以菌丝体在薯块中越冬。播种带菌薯块，导致不发芽或发芽后出土即死去，有的出土后成为中心病株，病部产生孢子囊借气流传播进行再侵染，形成发病中心，致该病由点到面，迅速蔓延扩大。病叶上的孢子囊还可随雨水或灌溉水渗入土中侵染薯块，形成病薯，成为翌年主要侵染源。
马铃薯晚疫病是世界性病害，也是植物病理学中最经典的病害之一。我国大部分地区适于马铃薯生长，是世界上马铃薯种植面积最大的国家，但单产低于世界平均水平，晚疫病是其主要的制约因素之一。贵州地处低纬度高海拔山区，具有适于马铃薯生长发育的自然条件，其种植面积大，但由于雨日多、雨量充沛、雾多、温暖湿润，易于马铃薯晚疫病的发生和流行。一般流行年份造成马铃薯产量损失20％左右，严重时可达50％以上甚至绝收。近年来，随着农业产业结构调整，开阳县双流镇马铃薯产业得到进一步发展，在面积和产量上都有较大幅度增加。为有效防止马铃薯生产过程中晚疫病的发生，几乎都采用化学农药处理。但是长期使用化学农药，使病菌介体产生抗药性，同时农药残留超标问题也日益突出。所以生物防治逐渐成为人们所关注的焦点和热点。
发明内容
本发明提供了一种类球红细菌A2菌株、生防菌剂、生防发酵液及其制备方法和应用，以解决马铃薯晚疫病不能有效得到防治以及化学防治带来环境污染的技术问题。
根据本发明的一个方面，提供一种类球红细菌A2菌株，所述类球红细菌A2菌株为类球红细菌A2(Rhodobacter sphaeroides A2)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2018602。
根据本发明的另一方面，还提供了一种由上述的类球红细菌A2菌株制备得到的类球红细菌A2生防菌剂。
根据本发明的另一方面，还提供了一种类球红细菌A2的生防发酵液，由上述的类球红细菌A2生防菌剂离心收集上清制得。
进一步地，所述离心的转速为6000～8000rpm，离心温度为4℃，离心时间为5～15min。
根据本发明的另一方面，还提供了一种上述的类球红细菌A2生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、活化：将所述类球红细菌A2菌株的保存菌种按双层平板培养法进行培养，培养至红色单菌落出现；
S2、种子培养：将步骤S1培养出的红色单菌落接入至血清瓶中，以类球红细菌A2液体培养基进行种子培养至对数生长期得到菌液；
S3、生产培养：将步骤S2种子培养后得到的菌液按类球红细菌A2菌株总体积5％的接种量接种，以类球红细菌A2生产培养基进行生产培养至对数生长期，即制得类球红细菌A2生防菌剂。
进一步地，步骤S1中，采用的培养基为类球红细菌A2固体培养基，配方为：(NH4)2SO4： 2g/L、CH2COONa：2g/L、酵母提取物：1.5g/L、蛋白胨：2.5g/L、葡萄糖：2g/L、K2HPO4：0.4g/L、MgSO4：0.5g/L、微量金属元素贮液1.0ml/L、琼脂粉：20g/L，pH＝7.0，其中微量金属元素贮液的配制方法为：准确称量EDTA：2.5g、ZnSO4：6.13g、MgSO4：0.78g、CuSO4： 0.25g、CoCl2：0.08g、FeSO4·7H2O：7.0g溶于1L蒸馏水中；
步骤S2和步骤S3中，采用的培养基相同，配方为：(NH4)2SO4：1.8～2g/L、CH2COONa：1.5～2g/L、YE：1.5～2g/L、K2HPO4：0.4～0.8g/L、MgSO4：0.4～0.6g/L、微量金属元素贮液：1.0ml/L， pH＝7.0，其中微量金属元素贮液的配制方法为：准确称量EDTA：2.5g、ZnSO4：6.13g、MgSO4： 0.78g、CuSO4：0.25g、CoCl2：0.08g、FeSO4·7H2O：7.0g溶于1L蒸馏水中。
进一步地，步骤S2中，种子培养的温度为30～35℃，光照条件为2500～4000Lx，pH为 7.0。
进一步地，步骤S3中，生产培养的温度为30～35℃，光照条件为2500～4000Lx，pH为 7.0。
根据本发明的再一方面，还提供了一种上述的类球红细菌A2生防菌剂或上述的类球红细菌A2的生防发酵液在马铃薯促生中的应用。
根据本发明的再一方面，还提供了一种上述的类球红细菌A2生防菌剂或上述的类球红细菌A2的生防发酵液在拮抗马铃薯晚疫病菌或防控马铃薯晚疫病中的应用。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明的类球红细菌A2菌株可通过简单、快捷、低成本的操作方法制备得到马铃薯晚疫病防控的生防菌剂及生防发酵液；
(2)本发明的类球红细菌A2菌株制得的生防菌剂及生防发酵液具有环境友好、对人畜无毒、对作物无药害、施用简单方便等特点，且不易使病虫害产生耐药性；推广应用生物制剂可减少化学农药的使用量，保护生态环境平衡发展，增强农业生产的可持续性，提高农产品品质及降低农产品中有害物质残留，增强农产品的市场竞争力，保障食品安全和生态安全，加快我国绿色农业生产资料的产业化，促进绿色农业产业化的快速发展，对发展农村经济、增加农民收入具有重要推进作用；
(3)本发明的类球红细菌A2菌株制得的生防菌剂及生防发酵液既可以防治马铃薯晚疫病害又能促进马铃薯生长。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本发明作进一步详细的说明。
附图说明
构成本申请的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1A为实施例4中分别采用类球红细菌A2的生防发酵液进行处理后与空白对照组的晚疫病发病率的对照结果示意图；
图1B为实施例4中分别采用类球红细菌A2的生防发酵液进行处理后与空白对照组的晚疫病病情指数的对照结果示意图；
图2为实施例5中分别采用类球红细菌A2生防菌剂、类球红细菌A2培养基和清水处理的对照结果示意图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以由下述所限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1
本实施例的类球红细菌A2菌株为红螺菌属，其拉丁名称为Rhodobactersphaeroides A2，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2018602，保藏时间为2018 年9月7号，保藏单位地址为：中国湖北省武汉市武昌武珞珈山路16号武汉大学。
类球红细菌，是能在厌氧条件下进行不产氧的光合作用的一类细菌的总称，是20亿年前地球上最早存在的并具有原始光能合成体系的原核生物，属于水圈微生物的一种。农业生产上，它是一种有益微生物菌剂，具有改善作物生态环境，增强光作用，促进作物生长，抑制病原微生物，增强作物抗病性等功效，对病毒病、真菌和细菌性病害都有明显的预防作用。类球红细菌的作用非常广泛，包括在农业、畜牧业、水产养殖业和改善环境等方面担当着重要角色。类球红细菌培养液中还含有抗病毒和抗细菌的物质，无论在光照还是黑暗的条件下，类球红细菌均有抑制病原菌及钝化病毒致病力的能力，可在一定程度上起到抗植物病害的作用。类球红细菌菌体富含多种生理活性物质及促生长因子，甚至菌体分泌的胞外组份对固氮根瘤细菌也有刺激作用，能显著提高其固氮活性；且因其含有脯氨酸、尿嘧啶、胞嘧啶等物质，能增加多种经济作物的产量等。而且类球红细菌的一些活性物质能钝化病原体的致病力、促进放线菌等有益微生物增殖，以及抑制病原体的生长，从而有效地抑制某些植物病害的发生与蔓延。
本实施例的类球红细菌A2菌株分离自土壤，经多次富集分离纯化得到，其序列如下： aacgatctacgtggtcggctgcctcctcttgcgaggttggcgcaccgccttcgggtagaaccaattcccatggtgtgacgggcggtgtgtacaag gcccgggaacgtattcaccgcgtcatgctgttacgcgattactagcgattccgacttcatggggtcgagttgcagaccccaatccgaactgagac agctttttgggattaacccattgtcactgccattgtagcacgtgtgtagcccaacccgtaagggccatgaggacttgacgtcatccacaccttcctcc ggcttatcaccggcagtttccctagagtgcccaactgaatgctggcaactaaggacgtgggttgcgctcgttgccggacttaaccgaacatctcac gacacgagctgacgacagccatgcagcacctgtgtgcgatccagccgaactgaaggaaccatctctggaaccgcgatcgccatgtcaagggtt ggtaaggttctgcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagttttaaccttgcggccgtactcc ccaggcggaatgcttaatccgttaggtgtgtcaccgaacagcatgctgcccgacgactggcattcatcgtttacggcgtggactaccagggtatct aatcctgtttgctccccacgctttcgcacctcagcgtcagtatcgagccagtgagccgccttcgccactggtgttcctccgaatatctacgaatttca cctctacactcggaattccactcacctctctcgacctcaagatcgggagtttcaaaggcagttccagggttgagccctgggatttcacctctgacttt ccgatccgcctacgtgcgctttacgcccagtaattccgaataacgctagccccctccgtattaccgcggctgctggcacggagttagccggggct tcttctggtggtaccgtcattatcttcccacctgaaa。
类球红细菌菌株A2，主要生物学特征有：双层固体平板培养基上培养4～8天，形成红色的圆形菌落，菌落边缘整齐光滑、菌落直径0.2～0.6mm；液体培养基中培养7天呈深红色；在厌氧和微氧条件下生长良好，生理化特性为V-P反应与甲基红反应阴性，H2S反应、明胶液化、脲酶试验、吲哚试验均阳性，最适宜生长温度30～35℃，pH＝7。
由此可见，类球红细菌A2的生产工艺简单、培养时间短、成本低，很适合人工培养。
实施例2
本实施例中的类球红细菌A2生防菌剂，采用实施例1的类球红细菌A2菌株为原料经活化、种子培养、生产培养制备得到。具体制备方法包括以下步骤：
S1、活化：将类球红细菌A2菌株的保存菌种按双层平板培养法进行培养，培养至红色单菌落出现；采用的培养基为类球红细菌A2固体培养基，配方为：(NH4)2SO4：2g/L、CH2COONa： 2g/L、酵母提取物：1.5g/L、蛋白胨：2.5g/L、葡萄糖：2g/L、K2HPO4：0.4g/L、MgSO4：0.5g/L、微量金属元素贮液1.0ml/L、琼脂粉：20g/L，pH＝7.0，其中所述微量金属元素贮液的配制方法为：准确称量EDTA：2.5g、ZnSO4：6.13g、MgSO4：0.78g、CuSO4：0.25g、CoCl2：0.08g、 FeSO4·7H2O：7.0g溶于1L蒸馏水中。
S2、种子培养：将步骤S1培养出的红色单菌落接入至血清瓶中，以类球红细菌A2液体培养基进行种子培养至对数生长期得到菌液；类球红细菌液体培养基的配方为(NH4)2SO4： 2g/L、CH2COONa：2g/L、YE：1.5g/L、K2HPO4：0.4g/L、MgSO4：0.5g/L、微量金属元素贮液：1.0ml/L，pH＝7.0，其中微量金属元素贮液的配制方法为：准确称量EDTA：2.5g、ZnSO4：6.13g、MgSO4：0.78g、CuSO4：0.25g、CoCl2：0.08g、FeSO4·7H2O：7.0g溶于1L蒸馏水中。
S3、生产培养：将步骤S2种子培养后得到的菌液按类球红细菌A2菌株总体积5％的接种量接种到生产瓶中，以类球红细菌生产培养基进行生产培养至对数生长期，生产培养基成分与上述类球红细菌A2液体培养基的成分一致，即制得类球红细菌A2生防菌剂。
本实施例中，制备得到的类球红细菌A2生防菌剂的菌浓度为5×105cfu/mL～5×107cfu/mL。该菌浓度下的生防菌剂活性强，施用于作物对作物病害防治能力强。
本实施例中的类球红细菌A2生防菌剂经过类球红细菌A2菌株活化、种子培养和生产培养即可制得，制备条件温和，操作简单、快捷、成本低。
本实施例中，步骤S2中，种子培养的温度为30～35℃，光照条件为2500～4000Lx，pH 为7.0。上述条件最适宜类球红细菌A2的生长，而且上述条件较温和，容易达到，成本低。
本实施例中，步骤S3中，生产培养的温度为30～35℃，光照条件为2500～4000Lx，pH 为7.0。上述条件最适宜类球红细菌A2的生长，且上述条件较温和，容易达到，成本低。
实施例3
本实施例的类球红细菌A2的生防发酵液，采用实施例2的类球红细菌A2生防菌剂离心收集上清制得。具体制备方法包括以下步骤：
取实施例2中获得的类球红细菌A2的生防菌剂，经发酵培养6天，发酵培养在温度30～35℃、光照条件3000～4000Lx条件下进行，发酵培养基成分与上述的类球红细菌A2液体培养基成分相同，然后在6000～8000rpm条件下离心5～15min，离心收集上清液，将上清液用细菌过滤器过滤，得到无类球红细菌A2菌体的上清液即为生防发酵液，4℃保存备用。
实施例4
本实施例考察类球红细菌A2对马铃薯晚疫病的影响，具体方法为：
配制黑麦液体培养基，121℃高压灭菌后接入致病疫霉菌，温度20℃条件下120rpm黑暗培养，至菌悬液浓度达1×107个/mL时，将10mL实施例3中的类球红细菌A2的生防发酵液浇灌入生长30天的马铃薯苗根部。然后将马铃薯苗的培养温度设为20℃，湿度保持在80％，并每天用喷壶喷洒叶片，创造晚疫病的发病条件，并观察记录晚疫病发病情况。马铃薯晚疫病的病情指数根据陈亚兰等(2017)的四级分级标准(0级：无病；1级：病叶占全株总叶片数的1/4以下；2级：病叶占全株总叶片数的1/4-1/2；3级：病叶占全株总叶片数的1/2-3/4；4 级：全株叶片几乎都有病斑，大部分叶片枯死，甚至茎部也枯死)。
图1A、图1B为采用实施例3的类球红细菌A2的生防发酵液进行处理后与空白对照组 (CK)的晚疫病发病率以及病情指数的对照结果示意图。
发病率(％)＝(发病叶数/调查叶片总数)×100％；
病情指数＝(Σ各级病叶片数×相应级数)/(调查叶片总数×最高级数)×100
通过图1A和图1B可以得出，类球红细菌A2的生防发酵液处理后的马铃薯幼苗发病较轻，下部叶片基本保存。采用类球红细菌A2的生防发酵液处理显著降低了晚疫病的发病率，在接种致病疫霉后的第5天、10天和15天的发病率分别为22.34％、36.81％和54.65％，而对照组在接种致病疫霉后的第5天、10天和15天的发病率分别为56.12％、63.74％和90.13％；并且，采用类球红细菌A2的生防发酵液处理显著降低了马铃薯晚疫病的严重程度，对照组在接种致病疫霉后的第5天、10天和15天的马铃薯晚疫病的病情指数分别为32.49％、55.37％和78.94％，而经过类球红细菌A2的生防发酵液处理的马铃薯其晚疫病病情指数明显低于对照组，分别为10.62％、28.13％和47.55％；这些数据表明，用类球红细菌A2的生防发酵液处理可以明显降低马铃薯晚疫病的发病率及发病程度。
实施例5
本实施例考察类球红细菌A2生防菌剂在马铃薯促生中的应用，具体的应用方法为：
在温室中，分别将5×106cfu/mL类球红细菌A2生防菌剂、类球红细菌A2培养基和清水处理喷施于移栽3片真叶的马铃薯苗，每处理10株共喷100mL至叶面滴水，重复3次。鉴定期间幼苗保持在26～28℃、10h光照/天条件下的温室中培养，14天后调查。每个处理选取3 株代表性植株分别测定株高和湿重。
图2为分别采用类球红细菌A2生防菌剂、类球红细菌A2培养基和清水处理的对照结果示意图，请参阅图2，图2中编号1、编号2、编号3分别为5×106cfu/mL类球红细菌A2生防菌剂、类球红细菌A2培养基和清水对照。从图2中可以知道施用类球红细菌A2生防菌剂处理后的马铃薯株高相对于清水对照增加33.77％、马铃薯单棵鲜重相对于清水对照增加32.78％。而施用类球红细菌A2培养基处理后的马铃薯株高相对于清水对照也增加了15％，马铃薯单棵鲜重相对于清水对照增加11％，可见类球红细菌A2的培养基也可在一定程度上起到抗植物病害的作用。
本发明的类球红细菌A2的生产工艺简单、培养时间短、成本低，且该菌株可通过简单、快捷、低成本的操作方法制备得到马铃薯晚疫病防控的生防菌剂及生防发酵液；本发明的类球红细菌A2制得的生防菌剂及生防发酵液具有环境友好、对人畜无毒、对作物无药害、施用简单方便等特点，且不易使病虫害产生耐药性，在可持续农业发展中应用前景广阔；本发明的类球红细菌A2制得的生防菌剂及生防发酵液既可以防治马铃薯晚疫病害又能促进马铃薯生长。推广应用生物制剂可减少化学农药的使用量，保护生态环境平衡发展，增强农业生产的可持续性，提高农产品品质及降低农产品中有害物质残留，增强农产品的市场竞争力，保障食品安全和生态安全，加快我国绿色农业生产资料的产业化，促进绿色农业产业化的快速发展，对发展农村经济、增加农民收入具有重要推进作用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 湖南省植物保护研究所
<120> 类球红细菌A2菌株、生防菌剂及其制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1000
<212> DNA
<213> 类球红细菌Ａ２(Rhodobacter sphaeroides A2)
<400> 1
aacgatctac gtggtcggct gcctcctctt gcgaggttgg cgcaccgcct tcgggtagaa 60
ccaattccca tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcgtca 120
tgctgttacg cgattactag cgattccgac ttcatggggt cgagttgcag accccaatcc 180
gaactgagac agctttttgg gattaaccca ttgtcactgc cattgtagca cgtgtgtagc 240
ccaacccgta agggccatga ggacttgacg tcatccacac cttcctccgg cttatcaccg 300
gcagtttccc tagagtgccc aactgaatgc tggcaactaa ggacgtgggt tgcgctcgtt 360
gccggactta accgaacatc tcacgacacg agctgacgac agccatgcag cacctgtgtg 420
cgatccagcc gaactgaagg aaccatctct ggaaccgcga tcgccatgtc aagggttggt 480
aaggttctgc gcgttgcttc gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt 540
caattccttt gagttttaac cttgcggccg tactccccag gcggaatgct taatccgtta 600
ggtgtgtcac cgaacagcat gctgcccgac gactggcatt catcgtttac ggcgtggact 660
accagggtat ctaatcctgt ttgctcccca cgctttcgca cctcagcgtc agtatcgagc 720
cagtgagccg ccttcgccac tggtgttcct ccgaatatct acgaatttca cctctacact 780
cggaattcca ctcacctctc tcgacctcaa gatcgggagt ttcaaaggca gttccagggt 840
tgagccctgg gatttcacct ctgactttcc gatccgccta cgtgcgcttt acgcccagta 900
attccgaata acgctagccc cctccgtatt accgcggctg ctggcacgga gttagccggg 960
gcttcttctg gtggtaccgt cattatcttc ccacctgaaa 1000

Claims (10)

1.一种类球红细菌A2菌株，其特征在于，
所述类球红细菌A2菌株为类球红细菌A2(Rhodobacter sphaeroides A2)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2018602。
2.一种由权利要求1所述的类球红细菌A2菌株制备得到的类球红细菌A2生防菌剂。
3.一种类球红细菌A2的生防发酵液，其特征在于，
由权利要求2所述的类球红细菌A2生防菌剂离心收集上清制得。
4.根据权利要求3所述的类球红细菌A2的生防发酵液，其特征在于，
所述离心的转速为6000～8000rpm，离心温度为4℃，离心时间为5～15min。
5.一种如权利要求2所述的类球红细菌A2生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、活化：将所述类球红细菌A2菌株的保存菌种按双层平板培养法进行培养，培养至红色单菌落出现；
S2、种子培养：将步骤S1培养出的红色单菌落接入至血清瓶中，以类球红细菌A2液体培养基进行种子培养至对数生长期得到菌液；
S3、生产培养：将步骤S2种子培养后得到的菌液按类球红细菌A2菌株总体积5％的接种量接种，以类球红细菌A2生产培养基进行生产培养至对数生长期，即制得类球红细菌A2生防菌剂。
6.根据权利要求5所述的类球红细菌A2生防菌剂的制备方法，其特征在于，
步骤S1中，采用的培养基为类球红细菌A2固体培养基，配方为：(NH4)2SO4：2g/L、CH2COONa：2g/L、酵母提取物：1.5g/L、蛋白胨：2.5g/L、葡萄糖：2g/L、K2HPO4：0.4g/L、MgSO4：0.5g/L、微量金属元素贮液1.0ml/L、琼脂粉：20g/L，pH＝7.0，其中微量金属元素贮液的配制方法为：准确称量EDTA：2.5g、ZnSO4：6.13g、MgSO4：0.78g、CuSO4：0.25g、CoCl2：0.08g、FeSO4·7H2O：7.0g溶于1L蒸馏水中；
步骤S2和步骤S3中，采用的培养基相同，配方为：(NH4)2SO4：1.8-2g/L、CH2COONa：1.5-2g/L、YE：1.5-2.0g/L、K2HPO4：0.4-0.8g/L、MgSO4：0.4-0.6g/L、微量金属元素贮液：1.0ml/L，pH＝7.0，其中微量金属元素贮液的配制方法为：准确称量EDTA：2.5g、ZnSO4：6.13g、MgSO4：0.78g、CuSO4：0.25g、CoCl2：0.08g、FeSO4·7H2O：7.0g溶于1L蒸馏水中。
7.根据权利要求5所述的类球红细菌A2生防菌剂的制备方法，其特征在于，
步骤S2中，种子培养的温度为30～35℃，光照条件为2500～4000Lx，pH为7.0。
8.根据权利要求5所述的类球红细菌A2生防菌剂的制备方法，其特征在于，
步骤S3中，生产培养的温度为30～35℃，光照条件为2500～4000Lx，pH为7.0。
9.一种如权利要求2所述的类球红细菌A2生防菌剂或权利要求3所述的类球红细菌A2的生防发酵液在马铃薯促生中的应用。
10.一种如权利要求2所述的类球红细菌A2生防菌剂或权利要求3所述的类球红细菌A2的生防发酵液在拮抗马铃薯晚疫病或防控马铃薯晚疫病中的应用。
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