CN110200016B - 防治马铃薯疮痂病并能促进马铃薯生长的链霉菌菌株pbsh9及其应用 - Google Patents

防治马铃薯疮痂病并能促进马铃薯生长的链霉菌菌株pbsh9及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一株防治马铃薯疮痂病并能促进马铃署生长的链霉菌菌株PBSH9及其应用，属于植物病害生物防治领域。本发明所提供的防治马铃薯疮痂病并能促进马铃薯生长的菌株是环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9。其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.15826。试验证明，用环圈链霉菌菌株PBSH9浸种处理马铃薯种薯对马铃薯疮痂病的防效可达73.97％，能使马铃薯增产15.93％，用菌株PBSH9沟施处理防效可达64.77％，能增产7.58％，并有促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长的作用。环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9还对马铃薯黄萎病菌的生长有抑制作用，抑制率达79.07％。本发明所提供的环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9用于防治马铃薯疮痂病，促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长，增产效果显著，具有良好的开发和应用前景。

Description

防治马铃薯疮痂病并能促进马铃薯生长的链霉菌菌株PBSH9 及其应用
技术领域
本发明属于植物病害生物防治技术领域，具体涉及一株防治马铃薯疮痂病，促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长，提高马铃薯产量的链霉菌菌株。
背景技术
马铃薯疮痂病是由植物病原链霉菌(Streptomyces spp.)引起的一种重要土传病害。在世界马铃薯种植区均有发生。也是我国马铃薯生产中的重要病害，发生严重，个别地区发病率达到90％以上，尤其是种薯生产时基质的重复利用导致此病危害更加严重。主要危害马铃薯块茎表皮，造成表皮侵染点周围的组织坏死，在薯块上形成平斑、凸起或凹陷的病斑，影响其商品价值。也有报道该病原菌延迟马铃薯出苗，形成小薯，降低产量，造成巨大的经济损失。目前，生产中多数种植区不进行防治，发生严重的地区采用化学防治和农业防治的方法，化学防治也没有非常好的药剂，且使用不当易造成环境污染和抗药性；农业防治不能从根本上控制该病害；抗病品种选育和应用是经济有效的措施，但是目前尚无抗病品种可以使用；生物防治以其不污染环境，针对性强，对人蓄无毒等优点被广大学者关注，是防治土传病害的根部措施，也是解决由于农药化肥过量使用导致土壤污染问题的根本途径。
目前，我国报道了多种对马铃薯疮痂病有防治效果的生防菌株，其中以芽孢杆菌(Bacillus spp.)占多数，但是经常存在不同地块效果不稳定的情况。生防放线菌可诱发植物产生抗病性，或者产生抑菌物质破坏病原菌的繁殖、生长，最后导致靶标病菌死亡，也能通过抗生作用、竞争作用、捕食和重寄生作用，降低病原菌的致病性和侵染效率。放线菌的种类众多，对很多种植物病害有生物防治效果。但在马铃薯疮痂病的防治中报道的很少，刘大群从美国华盛顿州的马铃薯疮痂病自然衰退土壤中分离到一株玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)能用于防治马铃薯疮痂病。筛选更多的放线菌资源单用或混用实现多种生防菌功能互补，增加防效的稳定性，或与化学杀菌剂、植物源杀菌剂混用，达到优势互补，减少化学杀菌剂的用量，增强防效是解决该病害行之有效的途径。
本发明从马铃薯疮痂病重病田取样，从疮痂病斑外面的坏死组织中分离拮抗放线菌，通过平板对峙法、温室盆栽试验、田间试验筛选生防放线菌，并从形态学、生理生化和分子生物学的角度对所得生防菌进行鉴定，旨在为马铃薯疮痂病的生物防治提供新的资源。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一株可用于防治马铃薯疮痂病，促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长，提高马铃薯产量的链霉菌。
本发明所提供的链霉菌为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.15826。
含有所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9的菌剂也属于本发明的保护范围。
所述菌剂为下述(1)-(4)中任一的菌剂：
(1)用于防治马铃薯疮痂病，促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长，提高马铃薯产量的菌剂；
(2)用于防治马铃薯疮痂病的菌剂；
(3)用于促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长的菌剂；
(4)用于提高马铃薯产量的菌剂。
所述的环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9在制备下述(1)-(4)中任一菌剂中的应用也属于本发明的保护范围：
(1)用于防治马铃薯疮痂病，促进马铃薯种薯萌发和生长，提高马铃薯产量的菌剂；
(2)用于防治马铃薯疮痂病的菌剂；
(3)用于促进马铃薯种薯萌发和生长的菌剂；
(4)用于提高马铃薯产量的菌剂。
所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9用于制备所述菌剂的方法也属于本发明的保护范围。
所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9或所述菌剂在马铃薯生产和防治马铃薯疮痂病中的应用也是本发明的保护范围。
所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9产生的代谢物在马铃薯疮痂病防治中的应用也是本发明的保护范围。
所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9在防治马铃薯黄萎病(Verticillium.dahliae)中的应用也是本发明的保护范围。
本发明通过以下技术方案实现：
从马铃薯疮痂病病斑表面分离、筛选获得一株用于防治马铃薯疮痂病的链霉菌菌株PBSH9，进行了生物活性测定，明确了菌株PBSH9及其代谢产物对马铃薯疮痂病菌的抑制作用。菌株PBSH9对马铃薯黄萎病菌也具有明显的抑制作用。经形态学特征、生理生化特性及ITS序列分析鉴定为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)。盆栽试验及多年多点田间试验证明了菌株PBSH9能防治马铃薯疮痂病，并能促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长，且能提高马铃薯产量。该菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，登记入册编号为：CGMCC No.15826。
所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9用于制备所述菌剂的方法：是将菌株PBSH9在燕麦琼脂培养基上28℃培养10d，用组织搅碎机将长好菌的培养基打碎，再加水稀释制成菌剂，菌剂中活菌浓度108-1010cfu/mL。
所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9菌剂在马铃薯生产中及马铃薯疮痂病防治中的应用方法，将上述所得菌剂用水稀释至活菌数为107cfu/mL的菌剂。用该稀释菌剂浸种或沟施，浸种是将马铃薯种薯完全浸没于该稀释的菌剂中5min；沟施是将该稀释菌剂50mL单株浇灌在每个薯块种植穴内。马铃薯生产中应用即是将菌株PBSH9或其菌剂施用于马铃薯种薯或商品薯生产的土壤中。
本发明具有的优点：
本发明环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9及其代谢产物对马铃薯疮痂病菌具有很好的抑制作用，菌株PBSH9对马铃薯黄萎病菌也有抑制作用。用环圈链霉菌菌株PBSH9浸种处理马铃薯种薯对马铃薯疮痂病的防效可达73.97％，能使马铃薯增产15.93％，菌株PBSH9沟施处理防效可达64.77％，能增产7.58％，并有促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长的作用。环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9菌剂用于马铃薯生产和防治马铃薯疮痂病，具有增产，防效高，特异性强，不易产生抗药性，对人蓄安全，对环境没有污染的优点。
保藏说明：
本发明环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9，于2018年05月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.15826，在本发明中简称菌株PBSH9，经检验存活。
附图说明
图1菌株PBSH9对马铃薯疮痂病菌的抑制作用；
图2菌株PBSH9菌落形态；
图3菌株PBSH9扫描电镜4000倍下孢子及孢子丝的形态；
图4菌株PBSH9对马铃薯种薯萌发和幼苗生长的影响(左为对照，右为菌株PBSH9处理)；
图5菌株PBSH9对马铃薯黄萎病菌(Verticillium dahliae)菌丝生长的抑制作用。
具体实施方式
以下实施例便于更好地阐明本发明，但并不限定本发明的范围。下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用材料，如无特殊说明，均能从常规生化试剂公司买到。
下列实施例中的马铃薯疮痂病病原菌是本课题组(内蒙古农业大学农学院植物病理研究室)从内蒙古呼和浩特市武川县哈乐镇哈乐村马铃薯疮痂病发生严重的地块采集病薯，用稀释分离法进行分离，通过小薯片法、萝卜幼苗法及盆栽试验进行致病性测定，显示强致病力的菌株，用形态学、生理生化及分子生物学方法进行鉴定，鉴定为加利利链霉菌(Streptomyces.galilaeus)。
下列实施例中的马铃薯黄萎病病原菌(Verticillium dahliae)是由内蒙古农业大学农学院植物病理研究室周洪友教授课题组采集，分离，鉴定并经致病性测定对马铃薯有强致病力的菌株。
下列实施例中的培养基：
燕麦琼脂培养基(OMA)：燕麦片30g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。
高氏1号培养基：可溶性淀粉20g、KNO31g、NaCl 0.5g、K2HPO4·3H2O 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。
PDA培养基：土豆200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL、琼脂16g。
碳源利用基础培养基：K2HPO4·3H2O 5.65g、(NH4)2SO42.64g、KH2PO42.38g、MgSO4·7H2O 1g、CuSO4·5H2O 6.4mg、FeSO4·7H2O 1.1mg、MnCl2·7H2O 7.9mg、ZnSO4·7H2O 1.5mg、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。
氮源利用基础培养基：葡萄糖10g、MgSO4·7H2O 5g、NaCl 5g、K2HPO4·3H2O 1g、FeSO4·7H2O 10mg、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。
酪氨酸琼脂培养基：L-酪氨酸1g、NaCl 8.5g、酵母提取物1g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。
柴斯纳琼脂培养基：柠檬酸铁0.5g、蛋白胨10g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
明胶培养基：蛋白胨5g、明胶200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL。
淀粉水解培养基：可溶性淀粉10g、MgCO30.3g、KNO31g、K2HPO4·3H2O 0.3g、NaCl0.5g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。
纤维素水解培养基：KNO31g、K2HPO4·3H2O 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。
实施例1 拮抗菌的分离筛选
从内蒙古武川县哈乐镇哈乐村马铃薯疮痂病发生严重的地块采集病薯，刮取病薯病斑处坏死的组织适量，充分研碎，加到10mL无菌水中，在振荡器中震荡10min，制成悬浮液，取出1mL该悬浮液加入到盛有9mL无菌水的试管中，再依次逐级稀释，取稀释至10-5、10-6、10-7的悬浮液均匀涂于OMA培养基上，每个浓度重复3皿，28℃恒温培养，待平板中出现较多单菌落时挑取不同性状的单个菌落进行纯化培养。
采“井”字形接种法进行拮抗菌的筛选。取OMA培养基平板上扩大培养10d的马铃薯疮痂病菌，制成用无菌水稀释至109cfu/mL浓度的菌悬液，用接种环蘸取菌悬液在OMA培养基上靠近平板边缘划线，再将扩大培养10d的待测菌株稀释至109cfu/mL，用接种环蘸取沿垂直方向划线，于28℃恒温培养，期间观察交叉处马铃薯疮痂病菌的生长情况，把交叉处无马铃薯疮痂病菌生长的菌株视为有抑制效果的菌株，得到对马铃薯疮痂病病原菌有拮抗作用的菌株PBSH9，于-80℃保存备用。
实施例2 菌株PBSH9拮抗活性测定
1.菌株PBSH9拮抗活性测定
将马铃薯疮痂病病原菌在OMA培养基上28℃恒温培养10d，用无菌水稀释至107cfu/mL，取100μL菌悬液均匀涂于OMA培养基平板上。再将在OMA培养基上培养10d的菌株PBSH9 打成5mm菌饼到放在病原菌平板上，每皿3个，接无菌培养基为对照，放到28℃恒温培养箱中培养5d，用十字交叉法测量抑菌圈直径。
结果如图1所示，菌株PBSH9对疮痂病原菌生长有明显抑制作用，菌饼周围产生透明的抑菌圈，经显微镜观察，基内菌丝和气生菌丝都不能生长，抑菌带宽度达到5.5mm。
2.菌株PBSH9代谢物对马铃薯疮痂病菌的抑制作用
将菌株PBSH9用高氏1号培养基28℃培养5d，用0.22μm滤膜滤出菌体，得到滤液，即菌株PBSH9的代谢物。取浓度为107cfu/mL的病原菌菌悬液100μL涂平板，将牛津杯插入到涂有病原菌平板中，每个平板插入1个，再将0.5mL菌株PBSH9代谢物加到牛津杯中，记录抑菌圈直径。
结果表明，菌株PBSH9产生的代谢物对马铃薯疮痂病病原菌生长具有抑制用，在牛津杯周围出现明显的透明抑菌圈，处理3d透明抑菌带宽达到5.5mm。
实施例3 菌株PBSH9的鉴定
1.菌株PBSH9的形态学特征
利用插片法，将灭菌盖玻片45°斜插入涂有菌株PBSH9的高氏1号培养基平板中，28℃恒温培养，期间观察培养性状和用光学显微镜观察形态特征。将样品放在硅胶干燥器中自然干燥，粘到样品台上，使用离子溅射仪喷涂导电层(铂)，用扫描电镜拍摄孢子丝、孢子形态并记录孢子形态和大小。参照《链霉菌鉴定手册》(中国科学院微生物研究所放线菌分类组，科学出版社，1975)进行比对鉴定。
形态学特征显示，菌株PBSH9在高氏1号琼脂培养基上培养5d其基内菌丝和气生菌丝均为白色，无可溶性色素产生，菌落中间形成一个圆环(图2)，孢子丝呈直-柔曲型，个别呈初螺旋型，孢子丝有分支，每个孢子丝由10-30个光滑的孢子组成，孢子丝断裂形成分生孢子，孢子椭圆形且光滑，孢子大小0.8-1.2×0.5-0.8μm。
菌株PBSH9在马铃薯葡萄糖琼脂培养基和燕麦琼脂培养基基内菌丝和气生菌丝颜色都分别为淡黄色和乳白色，在高氏1号琼脂培养基中基内菌丝为乳白色，气生菌丝为白色，在克氏1号琼脂培养基、察氏琼脂培养基、淀粉琼脂培养基中基内菌丝和气生菌丝均呈白色，在这6种培养基中，均不产生可溶性色素。在克氏1号培养基中菌株PBSH9生长较弱(表3-1)。
表3-1 PBSH9在不同培养基上的培养特征
Figure 69943DEST_PATH_IMAGE002
2.菌株PBSH9的生理生化特性
根据《伯杰细菌鉴定手册》第八版，对菌株PBSH9的碳源利用、氮源利用、黑色素产生、H2S产生、纤维素分解、淀粉水解、明胶液化7项生理生化指标进行测定。碳源利用选用L-阿拉伯糖、D-木糖、棉子糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-山梨醇、L-鼠李糖、蔗糖、i-肌醇；氮源利用选硝酸钾、硝酸铵、硝酸钠、L-甲硫氨酸、L-羟脯氨酸、组氨酸；黑色素产生用酪氨酸琼脂培养基，观察培养基的变色情况判断是否产生黑色素。H2S产生用柴斯纳琼脂培养基培养判断是否产生H2S。纤维素分解测定用含有滤纸条的无碳源液体培养基培养，观察滤纸条被分解的情况判断是否产生纤维素酶。淀粉水解测定用淀粉水解培养基加碘液检测判断是否产生淀粉酶。明胶液化测定用明胶培养基培养判断明胶液化情况分析蛋白酶活性的强弱。
结果表明(表3-2)，菌株PBSH9可以利用D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖为唯一碳源，不能利用D-木糖、D-山梨醇、D-果糖、棉子糖、L-鼠李糖、i-肌醇、L-阿拉伯糖作为唯一碳源；能以硝酸钾、硝酸铵、硝酸钠、L-甲硫氨酸、L-羟脯氨酸和组氨酸为唯一氮源；可以使淀粉水解，利用纤维素生长和明胶液化，不产生黑色素和H2S。
表3-2 菌株PBSH9生理生化测定结果
Figure 987083DEST_PATH_IMAGE004
注：“+”为阳性反应，“-”为阴性反应。
3.分子生物学鉴定
提取菌株PBSH9的DNA，用引物Primer A：5’-AGAGTTTGATCCTGCTCAG-3’，Primer B：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’PCR扩增16S rDNA，回收PCR扩增产物，经链接、转化、鉴定后，阳性克隆测序，结果表明，菌株PBSH9 16S rDNA序列与环圈链霉菌(Streptomycesanulatus)(KC814714.1)序列的相似度达到99.3％，利用MEGA7.0软件进行系统发育树的构建，菌株PBSH9与环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)聚在一起。
结合形态学特征、生理生化特性和分子生物学鉴定结果，菌株PBSH9属于环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)。
实施例4 盆栽防效试验
1.病原菌接种体制备
将马铃薯疮痂病病原菌在燕麦琼脂培养基上28℃培养10d，用组织搅碎机将长好菌的培养基打碎，加水稀释至浓度108-1010cfu/mL，为病原菌接种体。
2.菌株PBSH9菌剂的制备
将菌株PBSH9在燕麦琼脂培养基上28℃培养10d，用组织搅碎机将长好菌的培养基打碎，加水稀释至浓度108-1010cfu/mL，为菌株PBSH9的菌剂，用于盆栽防效及田间防效试验。
3.试验方法
试验于2017年在内蒙古呼和浩特市内蒙古农业大学农场进行，选用大西洋品种作为种薯，采取浸种和拌土两种处理方式，72％农用硫酸链霉素2000倍液处理、只接病原菌处理为对照，每个处理7盆(20cm×15cm)，每盆3株。先将病原菌接种体和菌株PBSH9的菌剂稀释至107cfu/mL。浸种处理，先将稀释的病原菌接种体50mL接种于灭菌蛭石和土1∶1比例的花盆中，搅拌均匀，取大小一致的种薯分别浸没于菌株PBSH9稀释的菌剂中和72％农用硫酸链霉素2000倍液中5min，然后种到花盆中。拌土处理，将病原菌接种体用同样的方法拌到同样大小相同基质的花盆中，然后再将菌株PBSH9稀释的菌剂50mL浇灌于每个花盆中，搅拌均匀，再将种薯种到花盆中，对照浇灌72％农用硫酸链霉素2000倍液50mL、稀释病原菌接种体50mL。所有花盆放置于室外，自然条件，适时定量浇水。120d收获，按以下病情分级标准调查记录发病情况，计算病情指数和防治效果。
马铃薯疮痂病病情分级标准：0：薯块上没有病斑；1：疮痂病斑面积占整个薯块面积的1％～5％；2：疮痂病斑面积占整个薯块面积的6％～25％；3：疮痂病斑面积占整个薯块面积的26％～50％；4：疮痂病斑面积占整个薯块面积的51％～75％；5：疮痂病斑面积占整个薯块面积的75％以上。
计算公式：
Figure 297979DEST_PATH_IMAGE006
结果表明，用菌株PBSH9浸种处理的防治效果高达77.74％，拌土接种处理防效达到81.88％，明显高于72％农用硫酸链霉素2000倍液处理的防效56.06％和50.57％。
实施例5 菌株PBSH9田间防效试验(2016年内蒙古察哈尔右翼中旗大滩乡财务营子村)
试验于2016年在内蒙古察哈尔右翼中旗大滩乡财务营子村进行，选用大西洋品种作为种薯，设菌株PBSH9浸种处理，菌株PBSH9沟施处理，以不接菌、只接病原菌为对照，每处理种植25株，重复4次。先将病原菌接种体和菌株PBSH9的菌剂稀释至107cfu/mL。浸种处理，取稀释的病原菌接种体50mL单株浇灌于播种穴内，取大小一致的种薯浸没于菌株PBSH9稀释的菌剂中5min，然后取出种到每个播种穴内；沟施处理，取稀释的病原菌接种体50mL单株浇灌于播种穴内，再将菌株PBSH9稀释的菌剂50mL单株浇灌于每个播种穴内，再种植种薯，以病原菌接种体50mL和清水50mL为对照。常规管理。5月22日种植，10月1日收获。所有植株的块茎全部收获，按实施例4中病情分级标准进行调查，计算防治效果，同时测定产量。
结果表明，用菌株PBSH9浸种处理防效为59.50％，增产15.93％，用菌株PBSH9沟施处理防效是47.64％，增产7.48％。
实施例6 菌株PBSH9田间防效试验(2017年内蒙古四子王旗忽鸡图乡红房子村)
于2017年在内蒙古四子王旗忽鸡图乡红房子村进行菌株PBSH9的田间防效试验，选用大西洋品种作为种薯，增加72％农用硫酸链霉素2000倍液对照，其它试验处理、方法、调查方法同实施例5。5月13日种植，9月30日收获。
结果表明，用菌株PBSH9浸种处理防效为73.97％，增产9.77％，高于72％农用硫酸链霉素2000倍液处理的防效50.72％，用菌株PBSH9菌株沟施处理防效为64.77％，增产7.58％，防效大于54.79％的药剂处理。
实施例7 菌株PBSH9促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长试验
1.菌株PBSH9菌悬液的制备
刮取在OMA培养基上28℃培养10d的菌株PBSH9的菌丝和孢子，用无菌水稀释成浓度为107cfu/mL的菌悬液，取1mL加入到盛有100mL高氏1号液体培养基的250mL三角瓶中，28℃、200r/min恒温摇床震荡培养5d，再加水稀释成浓度为107cfu/mL的菌悬液。
2.室内促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长试验
将未发芽的马铃薯品种大西洋原原种埋入装有蛭石的花盆(20cm×15cm)中，设菌株PBSH9处理与清水对照，每个花盆浇入500mL菌株PBSH9的菌悬液，对照浇入等量清水，每个处理重复3盆，每盆放15粒种子，10d记录种子发芽率、芽长、芽鲜重、芽干重。
结果表明，菌株PBSH9处理的种薯芽长显著高于清水对照(表7-1、图4)，芽鲜重、干重也均明显高于对照，菌株PBSH9具有促进马铃薯种薯萌发和幼芽生长的作用。
表7-1 室内促生作用测定结果
Figure 693188DEST_PATH_IMAGE008
3.田间生长势调查
在实施例5和6的田间防效试验中，在马铃薯种植后50d观察记录并计算出苗率、生长势。生长势调查方法：在不同处理的同一重复中，目测比较所有处理，生长势由弱到强用1、2、3、3、4、5表示，1表示生长势最弱的，5表示生长势最佳的处理。
结果表明(表7-2)，2016和2017年2年的田间试验中，菌株PBSH9的出苗率和生长势在浸种和灌根两种不同处理方式下均高于接菌和不接菌对照处理，表明菌株PBSH9具有促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长的作用。
表7-2 两年田间试验出苗率及生长势结果
Figure 507560DEST_PATH_IMAGE010
实施例8 菌株PBSH9对马铃薯黄萎病菌的抑制作用
将马铃薯黄萎病病原菌大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)的5mm菌饼到放在PDA培养基平板中心位置，在平板4个角到放接入直径5mm的菌株PBSH9菌饼，观察菌落生长情况，至产生明显抑菌圈时，测定其直径大小并计算生长抑制率。
结果表明，菌株PBSH9对马铃薯黄萎病原菌菌丝的生长具有明显的抑制作用(图5)，培养15d抑制率达到79.07％。
Figure ISB0000180471470000011

Claims (8)

1.一株环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.15826。
2.一种菌剂，它的活性成分为权利要求1所述的环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂为下述(1)-(4)中任一的菌剂：
(1)用于防治马铃薯疮痂病，促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长，提高马铃薯产量的菌剂；
(2)用于防治马铃薯疮痂病的菌剂；
(3)用于促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长的菌剂；
(4)用于提高马铃薯产量的菌剂。
4.权利要求1所述的环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9在制备下述(1)-(4)中任一的菌剂中的应用：
(1)用于防治马铃薯疮痂病，促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长，提高马铃薯产量的菌剂；
(2)用于防治马铃薯疮痂病的菌剂；
(3)用于促进马铃薯种薯萌发和幼苗生长的菌剂；
(4)用于提高马铃薯产量的菌剂。
5.权利要求1所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9用于制备所述菌剂的方法，是将菌株PBSH9在燕麦琼脂培养基上28℃培养10d，用组织搅碎机将长好菌的培养基打碎，再加水稀释制成菌剂，菌剂中活菌浓度为108-1010cfu/mL。
6.权利要求1所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9或权利要求2或3所述的菌剂在马铃薯生产和马铃薯疮痂病防治中的应用。
7.权利要求1所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9产生的代谢物在马铃薯疮痂病防治中的应用。
8.权利要求1所述环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9在防治马铃薯黄萎病(Verticillium.dahliae)中的应用。
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