CN109303067B - 一种防治马铃薯疮痂病的链霉菌组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种防治马铃薯疮痂病的链霉菌组合物及其应用，属于农业微生物和植物病害生物防治领域。本发明所提供的组合物由环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)CGMCC No.15826和链霉菌(Streptomyces pratensis)CGMCC No.15829组合而成。用该组合物对马铃薯种薯浸种处理，对马铃薯疮痂病的防效高达98.47％，沟施处理，防效高达97.15％，属于增效作用，能有效防治马铃薯疮痂病，具有良好的开发和应用前景。

Description

一种防治马铃薯疮痂病的链霉菌组合物及其应用

技术领域

本发明涉及一种链霉菌组合物及其在防治马铃薯疮痂病上的应用，属于农业微生物和植物病害生物防治领域。

背景技术

马铃薯疮痂病是由植物病原链霉菌(Streptomyces spp.)引起的一种重要土传病害。在世界马铃薯种植区均有发生。也是我国马铃薯生产中的重要病害，发生严重，个别地区发病率达到90％以上，尤其是种薯生产时基质的重复利用导致此病危害更加严重。主要危害马铃薯块茎表皮，造成侵染点周围的表皮组织坏死，在薯块上形成平斑、凸起或凹陷的病斑，影响其商品价值。也有报道该病原菌延迟马铃薯出苗，形成小薯，降低产量，造成巨大的经济损失。目前，生产中多数种植区不进行防治，发生严重的地区采用化学防治和农业防治的方法，化学防治也没有非常好的药剂，且使用不当易造成环境污染和抗药性；农业防治不能从根本上控制该病害；抗病品种选育和应用是经济有效的措施，但是目前尚无抗病品种可以使用；生物防治以其不污染环境，针对性强，对人蓄无毒等优点被广大学者关注，是防治土传病害的根部措施，也是解决由于农药化肥过量使用导致土壤污染问题的根本途径。

目前，我国报道了多种对马铃薯疮痂病有防治效果的生防菌株，其中以芽孢杆菌(Bacillus spp.)占多数，但是经常存在不同地块效果不稳定的情况。生防放线菌可诱发植物产生抗病性，或者产生抑菌物质破坏病原菌的繁殖、生长，最后导致靶标病菌死亡，也能通过抗生作用、竞争作用、捕食和重寄生作用，降低病原菌的致病性和侵染效率。放线菌的种类众多，对很多种植物病害有生物防治效果。但在马铃薯疮痂病的防治中报道的很少，刘大群从美国华盛顿州的马铃薯疮痂病自然衰退土壤中分离到一株玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)能用于防治马铃薯疮痂病。但是由于生防菌的环境适应性及可能发生的变异，单独使用可能存在不同环境条件效果不稳定的情况，选择没有拮抗作用的两种或多种生防菌混用，实现多种生防菌功能互补，增加防效的稳定性，或与化学杀菌剂、植物源杀菌剂混用，达到优势互补，减少化学杀菌剂的用量，增强防效是解决该病害行之有效的途径。

本发明从马铃薯疮痂病重病田取样，从疮痂病斑表面的坏死组织和土壤中分离拮抗放线菌，从形态学、生理生化和分子生物学的角度进行鉴定，并将相互没有拮抗作用的菌株进行混用，田间试验比较单用及混用菌株防效，旨在为马铃薯疮痂病的生物防治寻找高效稳定的生防资源。

发明内容

本发明目的在于提供一种链霉菌组合物。

本发明的另一目的在于提供利用上述链霉菌组合物制成的菌剂。

本发明第三目的在于提供上述菌剂的制备方法。

本发明第四目的在于提供上述链霉菌组合物在防治马铃薯疮痂病上的用途。

本发明第五目的在于提供上述菌剂在防治马铃薯疮痂病上的用途。

本发明公开了一株环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)，是从马铃薯疮痂病病斑表面分离、筛选获得，对马铃薯疮痂病菌具有明显的抑制作用，经形态学特征、生理生化特性及ITS序列分析鉴定为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)，于2018年05月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.15826，该菌株在本发明中简称菌株PBSH9。

本发明公开了一株链霉菌(Streptomyces pratensis)，是从马铃薯疮痂病发生严重地块的土壤中分离、筛选获得，对马铃薯疮痂病菌具有明显的抑制作用，经形态学特征、生理生化特性及ITS序列分析鉴定为链霉菌(Streptomyces pratensis)，于2018年05月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏中心登记入册编号为CGMCCNo.15829，该菌株在本发明中简称菌株PBS9。

本发明的一种实施方式是，一种链霉菌组合物，是环圈链霉菌(Streptomycesanulatus)PBSH9(CGMCC No.15826)和链霉菌(Streptomyces pratensis)PBS9(CGMCCNo.15829)组成。

优选地，所述组合物中环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)和链霉菌(Streptomyces pratensis)的活菌数比例为(1～5)∶(1～5)。

进一步优选地，环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)PBSH9和链霉菌(Streptomyces pratensis)的活菌数比例为1∶1。

本发明的一种实施方式是，一种含有权利要求所述任意一种的链霉菌组合物的菌剂，该菌剂为液体制剂，所述菌剂的活菌数为10⁸-10¹⁰cfu/mL。

对于上述菌剂，是将环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9和链霉菌(Streptomyces pratensis)菌株PBS9在燕麦琼脂培养基上28℃培养10d，分别用组织搅碎机将长好菌的培养基打碎，再分别加水稀释至浓度至10⁸-10¹⁰cfu/mL，按比例复合而成。

本发明进一步公开了上述链霉菌组合物及所述菌剂在防治马铃薯疮痂病中的应用。

所述菌剂在防治马铃薯疮痂病中的应用方法，是将上述所得菌剂用水稀释至活菌数为10⁷cfu/mL。用该稀释菌剂浸种或沟施，浸种是将马铃薯种薯完全浸没于该稀释菌剂中5min；沟施是将该稀释菌剂50mL单株浇灌于每个播种植穴内。

本发明具有的优点：

本发明所述的链霉菌组合物，用该组合物的所制的菌剂对马铃薯种薯浸种处理，对马铃薯疮痂病的防效高达98.47％，沟施处理，防效高达97.15％，属于增效作用，能有效防治马铃薯疮痂病，具有良好的开发和应用前景，还具有特异性强，不易产生抗药性，对人蓄安全，对环境没有污染的优点。

保藏说明：

本发明环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9，于2018年05月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，登记入册编号为：CGMCC No.15826，经检验存活。

本发明链霉菌(Streptomyces pratensis)菌株PBS9，于2018年05月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，登记入册编号为：CGMCC No.15829，经检验存活。

附图说明

图1菌株PBSH9和菌株PBS9不发生拮抗反应的平板试验；

图2菌株PBSH9和PBS9组合物的菌剂对马铃薯疮痂病防治效果。

具体实施方式

以下实施例便于更好地阐明本发明，但并不限定本发明的范围。下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用材料，如无特殊说明，均能从常规生化试剂公司买到。

下列实施例中的马铃薯疮痂病病原菌是本课题组(内蒙古农业大学农学院植物病理研究室)从内蒙古呼和浩特市武川县哈乐镇哈乐村马铃薯疮痂病发生严重的地块采集病薯，用稀释分离法进行分离，通过小薯片法、萝卜幼苗法及盆栽试验进行致病性测定，显示强致病力的菌株，通过形态学、生理生化及分子生物学方法鉴定，鉴定为加利利链霉菌(Streptomyces.galilaeus)。

下列实施例中的培养基：

燕麦琼脂培养基(OMA)：燕麦片30g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。

高氏1号培养基：可溶性淀粉20g、KNO₃ 1g、NaCl 0.5g、K₂HPO₄·3H₂O 0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、FeSO₄·7H₂O 0.01g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。

PDA培养基：土豆200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL、琼脂16g。

碳源利用基础培养基：K₂HPO₄·3H₂O 5.65g、(NH4)₂SO₄ 2.64g、KH₂PO₄ 2.38g、MgSO₄·7H₂O 1g、CuSO₄·5H₂O 6.4mg、FeSO₄·7H₂O 1.1mg、MnCl₂·7H₂O 7.9mg、ZnSO₄·7H₂O1.5mg、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。

氮源利用基础培养基：葡萄糖10g、MgSO₄·7H₂O 5g、NaCl 5g、K₂HPO₄·3H₂O 1g、FeSO₄·7H₂O 10mg、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。

酪氨酸琼脂培养基：L-酪氨酸1g、NaCl 8.5g、酵母提取物1g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。

柴斯纳琼脂培养基：柠檬酸铁0.5g、蛋白胨10g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。

明胶培养基：蛋白胨5g、明胶200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL。

淀粉水解培养基：可溶性淀粉10g、MgCO₃ 0.3g、KNO₃ 1g、K₂HPO₄·3H₂O 0.3g、NaCl0.5g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。

纤维素水解培养基：KNO₃ 1g、K₂HPO₄·3H₂O 0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、NaCl 0.5g、蒸馏水1000mL，pH 7.2。

实施例1 拮抗菌的分离筛选

菌株PBSH9是从内蒙古武川县哈乐镇哈乐村马铃薯疮痂病发生严重的地块采集病薯，刮取病薯病斑处坏死的组织，充分研碎；菌株PBS9是从内蒙古四子王旗东八号乡土格木村马铃薯疮痂病发生严重的地块采集土样。采用稀释分离法分离，菌株PBSH9的分离是取研碎的病斑处坏死组织少许，菌株PBS9的分离是取1g土样，都分别加入到10mL无菌水中，在振荡器中震荡10min，制成悬浮液，取出1mL该悬浮液加入到盛有9mL无菌水的试管中，再依次逐级稀释，取稀释至10^-5、10^-6、10^-7的悬浮液均匀涂于OMA培养基上，每个浓度重复3皿，28℃恒温培养，待平板中出现较多单菌落时挑取不同性状的单菌落进行纯化培养。

采“井”字形接种法进行拮抗菌的筛选。取OMA培养基平板上扩大培养10d的马铃薯疮痂病菌，制成用无菌水稀释至10⁹cfu/mL浓度的菌悬液，用接种环蘸取菌悬液在OMA培养基上靠近平板边缘划线，再将扩大培养10d的待测菌株稀释至10⁹cfu/mL，用接种环蘸取沿垂直方向划线，于28℃恒温培养，期间观察交叉处马铃薯疮痂病菌的生长情况，把交叉处无马铃薯疮痂病菌生长的菌株视为有抑制效果的菌株，得到对马铃薯疮痂病病原菌有拮抗作用的菌株PBSH9和PBS9，于-80℃保存备用。

实施例2 菌株PBSH9和PBS9拮抗活性测定

将马铃薯疮痂病病原菌在OMA培养基上28℃恒温培养10d，用无菌水稀释至10⁷cfu/mL，取100μL菌悬液均匀涂于OMA培养基平板上。再将在OMA培养基上培养10d的菌株PBSH9和PBS9打成5mm菌饼分别到放在病原菌平板上，每皿3个，接无菌培养基为对照，放到28℃恒温培养箱中培养5d，用十字交叉法测量抑菌圈直径。

结果所示，菌株PBSH9对马铃薯疮痂病病原菌生长有明显抑制作用，菌饼周围产生透明的抑菌圈，经显微镜观察，基内菌丝和气生菌丝都不能生长，抑菌带达到5.5mm。菌株PBS9对疮痂病原菌生长有明显抑制作用，在菌饼周围产生透明的抑菌圈，抑菌带宽达5mm，经显微镜观察，基内菌丝和气生菌丝都不能生长，另外，在透明抑菌带外侧还有不透明抑菌圈，抑菌带宽达9mm，经显微镜观察不透明抑菌圈中有基内菌丝但是没有气生菌丝。

实施例3 菌株PBSH9和PBS9的鉴定

1.菌株PBSH9和PBS9的形态学特征

利用插片法，将菌株PBSH9和PBS9分别涂于高氏1号培养基平板中，再将灭菌盖玻片45°分别斜插入2菌株的平板中，28℃恒温培养，期间观察培养性状和用光学显微镜观察形态特征。将样品放在硅胶干燥器中自然干燥，粘到样品台上，使用离子溅射仪喷涂导电层(铂)，用扫描电镜拍摄孢子丝、孢子形态并记录孢子形态和大小。参照《链霉菌鉴定手册》(中国科学院微生物研究所放线菌分类组，科学出版社，1975)进行比对鉴定。

形态学特征显示，菌株PBSH9在高氏1号琼脂培养基上培养5d其基内菌丝和气生菌丝均为白色，无可溶性色素产生，菌落中间形成一个圆环，孢子丝呈直-柔曲型，个别呈初螺旋型，孢子丝有分支，每个孢子丝由10-30个光滑的孢子组成，孢子丝断裂形成孢子，孢子椭圆形且光滑，大小为0.8-1.2×0.5-0.8μm。菌株PBSH9在马铃薯葡萄糖琼脂培养基和燕麦琼脂培养基基内菌丝和气生菌丝颜色都分别为淡黄色和乳白色；在高氏1号琼脂培养基中基内菌丝为乳白色，气生菌丝为白色；在克氏1号琼脂培养基、察氏琼脂培养基、淀粉琼脂培养基中基内菌丝和气生菌丝均呈白色；在这6种培养基中，均不产生可溶性色素；在克氏1号培养基中菌株PBSH9生长较弱(表3-1)。

菌株PBS9在燕麦琼脂培养基上培养具有典型的链霉菌属特征，培养7d后其基内菌丝和气生菌丝均为白色，孢子堆呈白色，无可溶性色素产生，孢子丝呈直-柔曲型，有分支，孢子丝断裂形成孢子，孢子圆柱形或近似圆形，表面光滑，成熟后有凹陷，大小为0.8～1.0μm×0.5～0.7μm。菌株PBS9在马铃薯葡萄糖琼脂培养基基内菌丝为淡黄色，气生菌丝为白色；燕麦琼脂培养基基内菌丝和气生菌丝颜色都为乳白色；在高氏1号琼脂培养基中基内菌丝为乳白色，气生菌丝为白色；在克氏1号琼脂培养基、察氏琼脂培养基、淀粉琼脂培养基中基内菌丝和气生菌丝均呈白色。在这6种培养基中，菌株PBS9均不产生可溶性色素。在克氏1号培养基中菌株PBS9生长较弱(表3-2)。

表3-1 PBSH9在不同培养基上的培养特征

表3-2 PBS9在不同培养基上的培养特征

2.菌株PBSH9的生理生化特性

根据《伯杰细菌鉴定手册》第八版，对菌株PBSH9和PBS9的碳源利用、氮源利用、黑色素产生、H₂S产生、纤维素分解、淀粉水解、明胶液化7项生理生化指标进行测定。碳源利用选用L-阿拉伯糖、D-木糖、棉子糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-山梨醇、L-鼠李糖、蔗糖、i-肌醇；氮源利用选硝酸钾、硝酸铵、硝酸钠、L-甲硫氨酸、L-羟脯氨酸、组氨酸；黑色素产生用酪氨酸琼脂培养基，观察培养基的变色情况判断是否产生黑色素。H₂S产生用柴斯纳琼脂培养基培养判断是否产生H₂S。纤维素分解测定用含有滤纸条的无碳源液体培养基培养，观察滤纸条被分解的情况判断是否产生纤维素酶。淀粉水解测定用淀粉水解培养基加碘液检测判断是否产生淀粉酶。明胶液化测定用明胶培养基培养判断明胶液化情况分析蛋白酶活性的强弱。

结果表明(表3-3)，菌株PBSH9可以利用D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖为唯一碳源，不能利用D-木糖、D-山梨醇、D-果糖、棉子糖、L-鼠李糖、i-肌醇、L-阿拉伯糖作为唯一碳源；能以硝酸钾、硝酸铵、硝酸钠、L-甲硫氨酸、L-羟脯氨酸和组氨酸为唯一氮源；可以使淀粉水解，利用纤维素生长和明胶液化，不产生黑色素和H₂S。

结果表明(表3-4)，菌株PBS9可以利用D-甘露糖、D-葡萄糖作为唯一碳源，不能利用D-半乳糖、D-木糖、蔗糖、D-山梨醇、D-果糖、麦芽糖、棉子糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、i-肌醇作为唯一碳源；能以L-甲硫氨酸、L-羟脯氨酸、组氨酸为唯一氮源；能使明胶液化，不能使淀粉水解，不能利用纤维素生长，不产生黑色素和H₂S。

表3-3 菌株PBSH9生理生化测定结果

注：“+”为阳性反应，“-”为阴性反应。

表3-4 PBS9生理生化测定结果

注：“+”为阳性反应，“-”为阴性反应。

3.分子生物学鉴定

提取菌株PBSH9和PBS9的DNA，用引物PrimerA：5’-AGAGTTTGATCCTGCTCAG-3’，Primer B：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’PCR扩增16S rDNA，回收PCR扩增产物，经链接、转化、鉴定后，阳性克隆测序，结果表明，菌株PBSH9 16S rDNA序列与环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)(KC814714.1)序列的相似度达到99.3％，利用MEGA7.0软件进行系统发育树的构建，菌株PBSH9与环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)聚在一起。结合形态学特征、生理生化特性和分子生物学鉴定结果，菌株PBSH9属于环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)。

菌株PBS9 16S rDNA序列与链霉菌(Streptomyces pratensis)序列的相似度达到99.6％(MH482914.1)，利用MEGA7.0软件进行系统发育树的构建，菌株PBS9与Streptomycespratensis聚在一起。结合形态学特征、生理生化特性和分子生物学鉴定结果菌株PBS9属于链霉菌(Streptomyces pratensis)。

实施例4 菌株PBSH9和PBS9拮抗性测定

将菌株PBSH9和PBS9在OMA培养基中28℃培养10d，用无菌水将2菌株分别稀释至10⁷cfu/mL，取100μL菌悬液分别涂到OMA培养基平板上。然后在菌株PBSH9的平板上倒放5mm菌株PBS9的菌饼，在菌株PBS9的平板上倒放5mm菌株PBSH9的菌饼，每个平板放置4个菌饼，置于28℃培养，观察菌株间是否产生拮抗作用。

结果显示，在菌株PBSH9的平板上放置菌株PBS9的菌饼和在菌株PBS9的平板上放置菌株PBSH9的菌饼，菌饼周围均无抑菌圈产生(图1)，2菌株间不发生拮抗反应。

实施例5 菌株PBSH9和PBS9组合物田间防效试验(2017年内蒙古四子王旗忽鸡图乡红房子村)

1.病原菌接种体制备

将马铃薯疮痂病病原菌在燕麦琼脂培养基上28℃培养10d，用组织搅碎机将长好菌的培养基打碎，加水稀释至浓度10⁸-10¹⁰cfu/mL，为病原菌接种体。

2.菌株PBSH9和菌株PBS9单用菌剂的制备

将菌株PBSH9和PBS9分别在燕麦琼脂培养基上28℃培养10d，用组织搅碎机将长好菌的培养基打碎，分别加水稀释至浓度至10⁸-10¹⁰cfu/mL，为菌株PBSH9和PBS9田间防效试验单独使用的菌剂。

3.菌株PBSH9和PBS9组合物菌剂的制备

将菌株PBSH9和PBS9单用菌剂按体积比进行配比，比例是(1～5)∶(1～5)，配制成活菌浓度为10⁸-10¹⁰cfu/mL的菌剂，为菌株PBSH9和PBS9的组合物的菌剂，选取菌株PBSH9和PBS9体积比为1∶1的菌剂进行田间防效试验。

4.试验方法

于2017年在内蒙古四子王旗忽鸡图乡红房子村进行菌株PBSH9和PBS9组合物的田间防效试验。选用大西洋品种作为种薯。设菌株PBSH9和PBS9组合物、菌株PBSH9、菌株PBS9、72％农用硫酸链霉素2000倍液、病原菌接种共5个处理，每处理种植25株，重复4次。设浸种和沟施2种处理方式。先将菌株PBSH9和PBS9组合物的菌剂、菌株PBSH9的菌剂、菌株PBS9的菌剂、病原菌接种体分别稀释至10⁷cfu/mL。浸种处理，取稀释的病原菌接种体50mL单株浇灌于播种穴内，取大小一致的种薯分别浸没于稀释的菌株PBSH9和PBS9组合物的菌剂、稀释的菌株PBSH9的菌剂、稀释的菌株PBS9的菌剂和72％农用硫酸链霉素2000倍液中5min，然后取出种到每个播种穴内；沟施处理，是取稀释的病原菌接种体50mL单株浇灌于播种穴内，再分别将稀释的菌株PBSH9和PBS9组合物的菌剂、稀释的菌株PBSH9的菌剂、稀释的菌株PBS9的菌剂和和72％农用硫酸链霉素2000倍液50mL单株浇灌于每个播种穴内，再种植种薯，以只浇灌稀释的病原菌接种体50mL为对照。常规管理。5月22日种植，10月1日收获。所有植株的块茎全部收获，按下列病情分级标准进行调查，计算防治效果，并利用Abbott方法计算菌株PBSH9和PBS9组合物的作用效果。

马铃薯疮痂病病情分级标准：0：薯块上没有病斑；1：疮痂病斑面积占整个薯块面积的1％～5％；2：疮痂病斑面积占整个薯块面积的6％～25％；3：疮痂病斑面积占整个薯块面积的26％～50％；4：疮痂病斑面积占整个薯块面积的51％～75％；5：疮痂病斑面积占整个薯块面积的75％以上。

计算公式：

C_exp＝A+B-AB/100

其中A和B为单剂的防效，Cexp为预期的防效，如果实际测得的混剂防效(Cobs)和预期防治效果(Cexp)的比值(增效比)＞1，则混剂表现出增效作用。

结果表明(表5-1、5-2、图2)，用菌株PBSH9和PBS9组合物的菌剂对马铃薯种薯浸种处理，病情指数明显降低，防效高达98.47％，明显高于菌株PBSH9和菌株PBS9单独使用及72％农用硫酸链霉素2000倍液处理的防效，增效比为1.11，大于1，说明2菌株混用后防效表现为增效作用。用菌株PBSH9和PBS9组合物的菌剂对马铃薯沟施处理，病情指数也明显降低，防效高达97.15％，增效比为1.13，大于1，说明该组合物沟施处理对马铃薯疮痂病的防效也表现增效作用。

表5-1 2017年田间防效试验结果(浸种处理)

表5-2 2017年田间防效试验结果(沟施处理)

实施例6 菌株PBSH9和PBS9组合物田间防效试验(2018年内蒙古包头市土默特旗萨拉齐镇内蒙古农业大学科技园区)

于2018年在内蒙古包头市土默特旗萨拉齐镇内蒙古农业大学科技园区进行菌株PBSH9和PBS9组合物的田间防效试验。试验处理、方法、调查方法同实施例5。5月13日种植，9月30日收获。所有植株块茎全部收获，按实施例5中病情分级标准进行调查，计算防治效果和菌株PBSH9和PBS9组合物的作用效果。

结果表明(表6-1，6-2)，用菌株PBSH9和PBS9组合物的菌剂对马铃薯种薯浸种处理，病情指数明显降低，防效达86.94％，明显高于菌株PBSH9和菌株PBS9单独使用及72％农用硫酸链霉素2000倍液处理，增效比为1.01，大于1，说明2菌株混用后对马铃薯种薯浸种处理表现为增效作用。用菌株PBSH9和PBS9组合物对马铃薯沟施处理，病情指数也明显降低，防效高达84.33％，增效比为1.01，大于1，说明该组合物沟施处理对马铃薯疮痂病的防效也表现增效作用。

表6-1 2018年田间防效试验结果(浸种处理)

表6-2 2018年田间防效试验结果(沟施处理)

菌株PBSH9 16S rDNA序列表

菌株PBSH9 16S rDNA序列(片段长度1428bp)：

菌株PBS9的16S rDNA序列表

菌株PBS9 16S rDNA序列(片段长度1437bp)：

Claims (6)

1.一种链霉菌组合物，由环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)菌株PBSH9和链霉菌(Streptomyces pratensis)菌株PBS9组成；其中所述菌株PBSH9的保藏编号为CGMCCNo.15826；所述菌株PBS9的保藏编号为CGMCC No.15829。

2.根据权利要求1所述的链霉菌组合物，其特征在于，环圈链霉菌菌株PBSH9和链霉菌菌株PBS9的活菌数比例为1～5∶1～5。

3.根据权利要求2所述的链霉菌组合物，其特征在于，所述环圈链霉菌菌株PBSH9和链霉菌菌株PBS9的活菌数比例为1∶1。

4.权利要求1-3任一项所述的链霉菌组合物在马铃薯疮痂病防治中的应用。

5.一种含有权利要求1-3任一项所述的链霉菌组合物的菌剂。

6.权利要求5所述的菌剂在防治马铃薯疮痂病中的应用。

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