CN102952766A - 一种假紫色色杆菌生防菌株及其应用 - Google Patents

一种假紫色色杆菌生防菌株及其应用 Download PDF

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王海华
谢宗华
彭喜旭
高健
唐新科
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本发明公开了一种高效防治水稻稻瘟病的假紫色色杆菌（ChromobacteriumpseudoviolaceumkwkjT4）生防菌株及其应用。本发明的假紫色色杆菌保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC M2011332，保藏日期为2011年9月28日。本发明的假紫色色杆菌kwkjT4经平板对峙获得，其体外抑菌活性测定和温室盆栽实验表明，本发明的假紫色色杆菌kwkjT4对水稻稻瘟病菌的生长有较强的抑制作用，能有效防治稻瘟病，其抑菌谱较广，对立枯丝核菌、小麦纹枯菌和小麦全蚀病菌等多种病原真菌均有拮抗作用。本发明的菌种培养条件简单，易保存，对环境友好，具有良好的开发应用潜力。

Description

一种假紫色色杆菌生防菌株及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种防治水稻稻瘟病的生防菌株，更具体地说涉及一种高效防治水稻稻瘟病的假紫色色杆菌(Chromobacterium pseudoviolaceum kwkjT4)及其应用。 
背景技术
水稻是主要的粮食作物，而病害是其产量和品质的重要限制因素。由稻瘟病菌(Magnaporthe grisea Barr.)引起的稻瘟病是水稻毁灭性的病害，每年因稻瘟病损失的水稻足以养活6000万人。目前，水稻病害的防治主要依靠化学农药。化学农药高残留、对人畜有害、污染环境，具有环境风险，且长期使用导致抗药性的产生。为了提高综防效益，很有必要探索新的防治策略和方法。利用拮抗微生物的生防法防治植物病害，因选择性好、易降解和对环境友好等特点，在可持续农业生产中越来越受到重视。其中，根际有益细菌为水稻稻瘟病的生物防治提供了新的途径，显示出良好的应用前景，但目前菌种来源单一，相关技术仍然薄弱。 
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种假紫色色杆菌(Chromobacterium pseudoviolaceum kwkjT4)生防菌株，该假紫色色杆菌保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC M2011332。 
本发明的假紫色色杆菌生防菌株是从湖南湘潭本地的蔬菜根际土壤中分离筛选获得，具体是经平板对峙筛选获得。 
本发明的目的之二在于提供上述假紫色色杆菌生防菌株的应用。 
其应用之一是，对于水稻稻瘟病菌的拮抗作用。 
其应用之二是，在防治水稻稻瘟病方面的应用。 
其应用之三是，对于立枯丝核菌、小麦纹枯病菌、小麦全蚀病菌以及小麦赤霉病菌的拮抗作用。 
本发明的假紫色色杆菌kwkjT4能高效防治水稻稻瘟病，该生防细菌菌株对水稻稻瘟病菌具有拮抗作用，能够有效抑制水稻稻瘟病菌的生长，对水稻稻瘟病的防治具有重要的应用价值。 
本发明的有益效果具体体现在如下几个方面： 
(1)本发明的假紫色色杆菌kwkjT4为植物根际有益细菌，能在水稻根际根内、植株体内定殖，能抑制水稻稻瘟病菌的菌丝生长，抑制作用强，对水稻稻瘟病的防治效果显著。 
(2)抑菌谱较广，对立枯丝核菌、小麦纹枯病菌和小麦全蚀病菌等多种病原真菌都有拮抗作用。 
(3)对环境友好。 
(4)菌种培养条件简单，易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用潜力。 
附图说明
本发明的假紫色色杆菌（Chromobacterium pseudoviolaceum kwkjT4）保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位简称为CCTCC，保藏单位地址是：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC M2011332，保藏日期为2011年9月28日。 
图1是本发明实施例1的假紫色色杆菌kwkjT4对稻瘟病菌菌丝的抑制作用结果的照片。 
具体实施方式
下面结合具体实验实例及附图对本发明作进一步详细的描述。 
实施例1：假紫色色杆菌kwkjT4的分离筛选。 
本发明的假紫色色杆菌，其属名为Chromobacterium，种名为pseudoviolaceum，株名为kwkjT4，菌株是从湖南湘潭本地的蔬菜根际土壤中分离筛选获得，具体通过平板对峙筛选获得，所述筛选方法属于本领域常规实验方法。具体方法及过程描述如下：取蔬菜根际土壤(0-15cm)0.5g，以无菌水浸泡，于32℃振荡24h，取悬浊液，采用系列稀释法分离细菌，挑选单菌落后，划线纯化，获得细菌纯培养。水稻稻瘟菌(06-249ZF-1，由浙江省农科院植物保护与微生物研究所郝中娜博士提供)在马铃薯蔗糖培养基(PDA)平板上28℃培养2-4天，用0.5cm的打孔器制成菌饼，取1块置另一PDA平板中心，在距菌饼3cm处接种分离纯化的细菌，28℃下培养，直至对照中菌丝扩展至平板边缘，记录实验结果(照相)。以不加kwkjT4菌株发酵液的平板作为对照，实验设3个重复。共获得161株土壤细菌，用平板对峙法对这161株纯化的细菌进行筛选，获得一株稻瘟菌拮抗细菌，结果参见图1。菌株经形态(培养)、生理生化特征和16S rDNA序列分析，并参照文献(Kampfer P，et al.Chromobacterium piscinae sp.nov.and Chromobacterium pseudoviolaceum sp.nov.，from environmental samples.Int J Syst Evol Microbiol，2009，59：2486-2490)，鉴定为假紫色色杆菌(Chromobacterium pseudoviolaceum)，即本发明的假紫色色杆菌kwkjT4菌株。 
该菌种的培养条件、检测存活性条件是：营养琼脂(NA)培养基，10g胰蛋白胨，5g氯化钠，5g牛肉膏，20g琼脂粉，1000ml水，pH7.0，28℃下培养。 
实施例2：假紫色色杆菌kwkjT4对水稻稻瘟菌的体外抑菌活性测定实验。 
将kwkjT4菌株于营养琼脂培养基中28℃下培养48小时，取1.5mL该菌液于8000r/min离心10min，取1mL上清液与30mL PDA培养基(实施例1中的马铃薯蔗糖培养基)混合均匀，倒平板，冷却后接种0.5cm的稻瘟菌菌饼于平板中心，28℃下培养，以不加kwkjT4菌株培养上清液为对照，待对照长至培养皿边缘时测量抑菌圈大小。 
相对抑菌率＝(对照菌落扩展直径-处理菌落扩展直径)/对照菌落扩展直径×100％。其中，菌落扩展直径(cm)＝菌落的平均直径-0.5(菌饼直径)。 
结果表明，kwkjT4菌株对稻瘟菌菌丝生长的抑制率分别为97.2，如表一。 
表一假紫色色杆菌kwkjT4菌株对稻瘟菌的体外抑菌活性 
实施例3：假紫色色杆菌kwkjT4防治水稻稻瘟病的温室盆栽实验。 
水稻品种为秀水11，对稻瘟菌(06-249ZF-1)感病。盆栽试验选用灭菌的有机营养土，每盆装土1kg(湿重)，播种15颗种子，以保证10株壮苗。先在28℃培养箱中培养2天，以保证出芽整齐，后于温室培养，温度保持26-30℃。 
以5×108cfu/mL的kwkjT4悬浮液(含0.1％Tween80，v/v)对5叶龄稻苗喷雾，每盆的喷雾量为2.5mL，以清水喷雾为对照。处理后，于培养箱中放置2小时，温度是25℃，湿度是95％。然后，以喷雾的方式接种稻瘟菌孢子悬浮液(105cfu/mL)，黑暗培养10小时，光照培养14小时，然后转移到室温中培养，8天后调查每株的病情，参照稻瘟病测报调查规范(中华人民共和国国家标准GB/T 15790-1995)计算防效。 
通过盆栽实验，kwkjT4菌株对稻瘟病的防治效果达到72-81％。 
实施例4：假紫色色杆菌kwkjT4对其他病原真菌的平板拮抗作用实验。 
立枯丝核菌、小麦纹枯病菌和尖孢镰刀菌由本申请人实验室保存，小麦全蚀病菌和小麦赤霉菌由扬州大学农学院潘学彪教授提供。按照实施例1的方法实施。上述病原菌株活化后，用0.5cm的打孔器制成菌饼，待对照长至培养皿边缘时测量抑菌圈大小。结果如表二。 
表二假紫色色杆菌kwkjT4对对其他病原真菌的拮抗作用 
Figure BDA0000113954860000051
从表二可以得出，kwkjT4菌株对小麦纹枯病菌、立枯丝核菌和小麦全蚀病菌有一定的拮抗作用，拮抗作用的大小为：小麦纹枯病菌＞立枯丝核菌＞小麦全蚀病菌，对小麦赤霉菌和尖孢镰刀菌无拮抗作用。 

Claims (4)

1.一种假紫色色杆菌（Chromobacterium pseudoviolaceum kwkjT4）生防菌株，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC M2011332。
2.一种如权利要求1所述的假紫色色杆菌生防菌株的应用，其特征在于：对于水稻稻瘟病菌的拮抗作用。
3.一种如权利要求1所述的假紫色色杆菌生防菌株的应用，其特征在于：在防治水稻稻瘟病方面的应用。
4.一种如权利要求1所述的假紫色色杆菌生防菌株的应用，其特征在于：对于立枯丝核菌、小麦纹枯病菌、小麦全蚀病菌以及小麦赤霉病菌的拮抗作用。
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