CN115746082A - 一种调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法及其在制备高内相乳液中的应用 - Google Patents
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Abstract
一种调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法及其在制备高内相乳液中的应用。本发明属于蛋白结构调控领域。本发明的目的是为了解决目前高内相乳液冻融不稳定、糖基化蛋白剩余游离糖升糖指数高、糖用量大的技术问题。本发明将透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液与低卡糖混合，然后冻干14h以上，完成蛋白质结构的调控，得到蛋白‑低卡糖复合物。并将其用于制备高内相乳液。本发明以透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液为基础，在低卡糖协助下，通过冻干调控了糖基化鳕鱼蛋白的二级结构，并以全新结构的蛋白‑低卡糖复合物为壁材，制备了高内相乳液，所得高内相乳液具有较低的游离糖，且全新的蛋白结构赋予了高内相乳液更高的冻融稳定性。
Description
技术领域
本发明属于蛋白结构调控及其应用领域，具体涉及到一种调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法及其在制备高内相乳液中的应用。
背景技术
高内相乳液是指分散相体积在74.05％以上的一类乳液，在食品中代替固态或半固态油脂方面具有很广阔的应用前景。当前以蛋白颗粒为乳化剂稳定的高内相乳液在食品级高内相乳液中占据重要地位。然而高内相乳具有冻融稳定性差的缺点，极大影响了其在食品、医药、生物工程等各个行业中的应用。
鳕鱼蛋白稳定的高内相乳具有良好的流变特性可作为新型的3D打印材料。但是鳕鱼蛋白高内相乳液因抗冻特性较差限制了其在冷冻食品比如冰淇淋等的使用。如何提高鳕鱼蛋白高内相乳的抗冻特性成为推广鳕鱼蛋白高内相乳应用的重要技术难题。糖基化修饰蛋白通常可作为提高乳液冻融稳定性的有效方法，通常葡萄糖可以快速、低价、高效地修饰鳕鱼蛋白。但糖基化反应过程会有大量的未反应游离糖如葡萄糖残留，在食品中应用会导致血糖升高的风险。通常透析处理可以有效去除未反应的游离糖而消除对血糖的影响，但这种技术处理后的糖基化鳕鱼蛋白再经冻干后，其制备的高内相乳液丧失了抗冻特性，如何解决糖基化鳕鱼蛋白同时具有抗冻特性且保持低的血糖指数成为鳕鱼蛋白类高内相乳应用新的技术难题。
有研究发现蛋白在冷冻干燥(即冻干)过程可以发生二级结构改变，但通常这种改变会导致蛋白不溶以及活性丧失等不良影响，传统过程中采用各种技术手段尽量避免冻干对蛋白结构的影响从而保持蛋白原有的结构和特性。目前还没有现有技术报道通过冻干调控蛋白二级结构而使其具有新的功能特性，尤其是赋予其制备具有冻融稳定的高内相乳液的能力。
发明内容
为解决上述高内相乳液冻融不稳定、糖基化蛋白剩余游离糖升糖指数高、糖用量大的技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法及其在制备高内相乳液中的应用。
本发明的目的之一是提供一种调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法，包括，
S1、将透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液与低卡糖混合，于7～10.5的pH值下搅拌1～2h；
S2、于温度为0～40℃和真空度为0～15Pa下冻干14h以上，完成糖基化鳕鱼蛋白结构的调控，得到糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物。
作为本发明调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法的一种优选方案，其中：S1中低卡糖为低聚糖、甜菊糖或糖醇产品中的一种。
作为本发明调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法的一种更进一步优选方案，其中：糖醇产品包括木糖醇、阿拉伯糖、赤藓糖醇、麦芽糖醇。
作为本发明调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法的一种优选方案，其中：S1中糖基化鳕鱼蛋白溶液中的糖基化鳕鱼蛋白与低卡糖的质量比为1：(0.8～2)。
作为本发明调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法的一种优选方案，其中：S1中所述透析的方法为：将冷却至30℃以下糖基化鳕鱼蛋白溶液装入截留量为3500Da的透析袋，于4℃去离子水中透析36～60h至游离葡萄糖含量在0.3mg/mL以下。
作为本发明调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法的一种优选方案，其中：S2中于20℃和5Pa条件下冻干14h以上。
本发明的目的之二是提供一种按上述方法得到的糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物。
本发明的目的之三是提供一种按上述方法得到的糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物在制备高内相乳液中的应用，具体应用过程步骤如下：
S1、将糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物与去离子水混合，调节pH值至7～10.5，得到复合溶液；
S2、将食用植物油加入到复合溶液中，匀浆后，得到高抗冻融高内相乳液。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中，S1得到的复合溶液中糖基化鳕鱼蛋白浓度为30-70mg/mL。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中，S2中食用植物油包括但不限于大豆油。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中，S2中匀浆的转速为5k～16k rpm，时间为30～180s。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中，S2得到的高抗冻融高内相乳液中食用植物油的浓度为76～88vol％。
本发明的目的之四是提供一种按上述方法得到的高抗冻融高内相乳液。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明利用冻干调节蛋白质结构变化的能力，通过合理地添加蛋白结构调节剂辅助控制糖基化鳕鱼蛋白在冻干过程结构的变化，使糖基化鳕鱼蛋白二级结构落在合理的参数范围，从而实现透析后糖基化鳕鱼蛋白经冻干后呈现抗冻特性，具体优点如下：
1)本发明以透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液为基础，在低卡糖协助下，通过冻干调控了糖基化鳕鱼蛋白的二级结构(β-折叠含量上升1.18倍，β转角含量降低5倍)，并以全新构建的糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物为壁材，制备了稳定的高内相乳液，所得高内相乳液具有较低的游离糖，且全新的蛋白结构赋予了高内相乳液更高的冻融稳定性。
2)本发明应用结构改变的糖基化鳕鱼蛋白制备的高内相乳液，在三个冻融循环后仍能保持稳定的乳液结构。为高内相乳液的制备提供了一个新的方向，弥补现有高内相乳液冻融稳定性差的缺点，扩大了高内相乳液在冷冻食品领域的应用范围。
3)本发明采用的技术方案显著降低了抗冻高内相乳中低卡糖的使用当量，与透析后直接冻干糖基化鳕鱼蛋白再加低卡糖方案相比，低卡糖使用当量从20％降低到4％即可制备冻融稳定的高内相乳液，大大减少了糖的摄入量，为制备低糖、健康的食品提供了新材料。
4)食用本发明糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物制备的乳液，1h后血糖上升量较糖基化鳕鱼蛋白-葡萄糖复合物对照组相比降低43.33％，更满足于消费者对绿色、健康产品的需求。
5)本发明的制备方法可以拓展鳕鱼蛋白在乳液方面的应用，提高鳕鱼的经济附加值。
附图说明
图1是本发明实施例1制备的高内相乳液未经冻融的外观图；
图2是本发明实施例1制备的高内相乳液冻融1个循环的外观图；
图3是本发明实施例1制备的高内相乳液冻融3个循环的外观图；
图4是本发明实施例2制备的高内相乳液未经冻融的外观图；
图5是本发明实施例2制备的高内相乳液冻融1个循环的外观图；
图6是本发明实施例2制备的高内相乳液冻融3个循环的外观图；
图7是本发明对比例1制备的高内相乳液冻融1个循环的外观图；
图8是本发明对比例2制备的高内相乳液冻融1个循环的外观图；
图9是本发明对比例4制备的高内相乳液未经冻融的外观图；
图10是本发明对比例4制备的高内相乳液冻融1个循环的外观图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
下述实施例中所用鳕鱼蛋白为公开号为CN113040369的发明专利中实施例1-S1得到的大西洋鳕鱼蛋白粗提物；其他原料均通过商业购买获得。
离子色谱测定：采用C18固相萃取筒(Agela Technologies,USA)纯化1mL糖基化鳕鱼蛋白，然后通过0.22μm膜过滤。使用离子色谱Thermo Fisher Scientific Dionex ICS-5000+系统对样品中剩余葡萄糖进行定量，包括泵(Dionex ICS-5000+DP)、柱烘箱、检测器(Dionex ICS-5000+DC)和PA1柱(250×2mm；Thermo Fisher Scientific,USA)。流动相A为超纯水，流动相B为250mmol/L的氢氧化钠溶液。流动相设置为：5％B作用0-20min；5％B升到100％B作用20-26min；100％B作用26-35min；100％B线性梯度降到5％B作用35-36min；5％B作用36-45min；流速为0.25mLmin/L，注射量为25μL。
实施例1
S1
(1)糖基化鳕鱼蛋白溶液的制备：①使用水将鳕鱼蛋白复溶成蛋白质浓度为50mg/mL的蛋白溶液；②向蛋白溶液中加入葡萄糖，得到混合溶液；其中，蛋白溶液中鳕鱼蛋白与葡萄糖的浓度比为1：4；③将混合溶液于120℃油浴反应20min，后冷却至室温，得到糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(2)透析：将冷却至30℃以下糖基化鳕鱼蛋白溶液装入截留量为3500D的透析袋，于4℃去离子水中透析48h，离子色谱测定游离葡萄糖含量在0.3mg/mL以下，得到透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(3)糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物的制备：将透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液与低聚半乳糖按糖基化鳕鱼蛋白与低聚半乳糖的质量比为1:1混合，于pH值为10的条件下搅拌1h，然后转入培养皿中，置于冷冻干燥机内，于20℃和5Pa条件下冻干24h，得到糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物，蛋白结构检测结果见表1。
S2
将糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物与去离子水混合，以NaOH溶液调节pH值至10，得到糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物浓度为100mg/mL的复合溶液(其中糖基化鳕鱼蛋白浓度为50mg/mL)，作为水相。
S3
将大豆油加入到复合溶液中，用匀浆机以8000rpm匀浆90s，得到高抗冻融高内相乳液，所述高抗冻融高内相乳液中大豆油的含量为80vol％。
取本实施例制得的高抗冻融高内相乳液，以6g/kg对小鼠进行灌胃，测得餐后1h小鼠血糖上升51.56％，具体结果见表2。
取本实施例制得的低糖高抗冻融高内相乳液9g置于10mL可立离心管中，以-30℃冷冻22h，以37℃水浴融化2h，以所述冷冻融化过程为1个冻融循环，共计3个循环，冻融前后高内相乳液的外观图如图1-3所示，可以看出，在反复冻融3个循环后，所示乳液体系无明显变化，表面无油层析出，无破乳现象，表明该乳液具有良好的冻融稳定性。
实施例2
S1
(1)糖基化鳕鱼蛋白溶液的制备：①使用水将鳕鱼蛋白复溶成蛋白质浓度为50mg/mL的蛋白溶液；②向蛋白溶液中加入葡萄糖，得到混合溶液；其中，蛋白溶液中鳕鱼蛋白与葡萄糖的浓度比为1：4；③将混合溶液于120℃油浴反应20min，后冷却至室温，得到糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(2)透析：将冷却至30℃以下糖基化鳕鱼蛋白溶液装入截留量为3500D的透析袋，于4℃去离子水中透析48h，离子色谱测定游离葡萄糖含量在0.3mg/mL以下，得到透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(3)糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物的制备：将透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液与海藻糖按糖基化鳕鱼蛋白与海藻糖的质量比为1:1混合，于pH值为10的条件下搅拌1h，然后转入培养皿中，置于冷冻干燥机内，于20℃和5Pa条件下冻干24h，得到糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物，蛋白结构检测结果见表1。
S2
将糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物与去离子水混合，以NaOH溶液调节pH值至10，得到糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物浓度为100mg/mL的复合溶液(其中糖基化鳕鱼蛋白浓度为50mg/mL)，作为水相。
S3
将大豆油加入到复合溶液中，用匀浆机以6000rpm匀浆120s，得到高抗冻融高内相乳液，所述高抗冻融高内相乳液中大豆油的含量为80vol％。
取本实施例制得的高抗冻融高内相乳液，以6g/kg对小鼠进行灌胃，测得餐后1h小鼠血糖上升54.69％，具体结果见表2。
取本实施例制得的高抗冻融高内相乳液9g置于10mL可立离心管中，以-30℃冷冻22h，以37℃水浴融化2h，以所述冷冻融化过程为1个冻融循环，共计3个循环，冻融前后高内相乳液的外观图如图4-6所示，可以看出，在反复冻融3个循环后，所示乳液体系无明显变化，表面无油层析出，无破乳现象，表明该乳液具有良好的冻融稳定性。
对比例1
S1
(1)糖基化鳕鱼蛋白溶液的制备：①使用水将鳕鱼蛋白复溶成蛋白质浓度为50mg/mL的蛋白溶液；②向蛋白溶液中加入葡萄糖，得到混合溶液；其中，蛋白溶液中鳕鱼蛋白与葡萄糖的浓度比为1：4；③将混合溶液于120℃油浴反应20min，后冷却至室温，得到糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(2)冻干：将糖基化鳕鱼蛋白溶液置于培养皿中，于冷冻干燥机内，在-80℃和5Pa条件下冻干24h，得到糖基化鳕鱼蛋白。
S2
将糖基化鳕鱼蛋白与去离子水混合，然后按低聚半乳糖与糖基化鳕鱼蛋白质量比为1:1加入低聚半乳糖，于pH值为10的条件下搅拌1h，得到糖基化鳕鱼蛋白浓度为50mg/mL的复合溶液，作为水相，其中蛋白结构检测结果见表1。
S3、
将大豆油加入到复合溶液中，用匀浆机以8000rpm匀浆120s，得到高内相乳液，所述高内相乳液中大豆油的含量为80vol％。
取本对比例制得的高内相乳液9g置于10mL可立离心管中，以-30℃冷冻22h，以37℃水浴融化2h，冻融后高内相乳液的外观图如图7所示，可以看出，乳液在冻融循环后，油水分层，出现破乳现象，表明该乳液不具有冻融稳定性。
对比例2
S1
(1)糖基化鳕鱼蛋白溶液的制备：①使用水将鳕鱼蛋白复溶成蛋白质浓度为50mg/mL的蛋白溶液；②向蛋白溶液中加入葡萄糖，得到混合溶液；其中，蛋白溶液中鳕鱼蛋白与葡萄糖的浓度比为1：4；③将混合溶液于120℃油浴反应20min，后冷却至室温，得到糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(2)冻干：将糖基化鳕鱼蛋白溶液置于培养皿中，于冷冻干燥机内，在-80℃和5Pa条件下冻干24h，得到糖基化鳕鱼蛋白。
S2
将糖基化鳕鱼蛋白与去离子水混合，然后按海藻糖与糖基化鳕鱼蛋白质量比为1:1加入海藻糖，于pH值为10的条件下搅拌1h，得到糖基化鳕鱼蛋白浓度为50mg/mL的复合溶液，作为水相，其中蛋白结构检测结果见表1。
S3、
将大豆油加入到复合溶液中，用匀浆机以8000rpm匀浆120s，得到高内相乳液，所述高内相乳液中大豆油的含量为80vol％。
取本对比例制得的高内相乳液9g置于10mL可立离心管中，以-30℃冷冻22h，以37℃水浴融化2h，冻融后高内相乳液的外观图如图8所示，可以看出，乳液在冻融循环后，油水分层，出现破乳现象，表明该乳液不具有冻融稳定性。
对比例3
S1
(1)糖基化鳕鱼蛋白溶液的制备：①使用水将鳕鱼蛋白复溶成蛋白质浓度为50mg/mL的蛋白溶液；②向蛋白溶液中加入葡萄糖，得到混合溶液；其中，蛋白溶液中鳕鱼蛋白与葡萄糖的浓度比为1：4；③将混合溶液于120℃油浴反应20min，后冷却至室温，得到糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(2)冻干：将糖基化鳕鱼蛋白溶液置于培养皿中，于冷冻干燥机内，在-80℃和5Pa条件下冻干24h，得到糖基化鳕鱼蛋白。
S2
将糖基化鳕鱼蛋白与去离子水混合，然后按葡萄糖与糖基化鳕鱼蛋白质量比为1:1加入葡萄糖，于pH值为10的条件下搅拌1h，得到糖基化鳕鱼蛋白浓度为50mg/mL的复合溶液，作为水相。
S3、
将大豆油加入到复合溶液中，用匀浆机以8000rpm匀浆120s，得到高内相乳液，所述高内相乳液中大豆油的含量为80vol％。
取本实施例制得的高内相乳液，以6g/kg对小鼠进行灌胃，测得餐后1h小鼠血糖上升93.75％，其升糖速率比实施例高1.8倍，具体结果见表2，对比说明，本专利制备的产品更满足于消费者对绿色、健康产品的需求。
对比例4
S1
(1)糖基化鳕鱼蛋白溶液的制备：①使用水将鳕鱼蛋白复溶成蛋白质浓度为50mg/mL的蛋白溶液；②向蛋白溶液中加入葡萄糖，得到混合溶液；其中，蛋白溶液中鳕鱼蛋白与葡萄糖的浓度比为1：4；③将混合溶液于120℃油浴反应20min，后冷却至室温，得到糖基化鳕鱼蛋白溶液。
(2)冻干：将糖基化鳕鱼蛋白溶液置于培养皿中，于冷冻干燥机内，在-80℃和5Pa条件下冻干24h，得到糖基化鳕鱼蛋白。
S2
将糖基化鳕鱼蛋白与去离子水混合，然后按低聚半乳糖与糖基化鳕鱼蛋白质量比4:1加入低聚半乳糖，于pH值为10的条件下搅拌1h，得到糖基化鳕鱼蛋白浓度为50mg/mL的复合溶液，作为水相。
S3、
将大豆油加入到复合溶液中，用匀浆机以8000rpm匀浆120s，得到高内相乳液，所述高内相乳液中大豆油的含量为80vol％。
取本对比例制得的高内相乳液9g置于10mL可立离心管中，以-30℃冷冻22h，以37℃水浴融化2h，以所述冷冻融化过程为1个冻融循环，冻融前后高内相乳液的外观图如图9-10所示。在冻融1个循环后，所示乳液体系底部油水分层，出现破乳现象，表明在未使用本专利提出的冻干技术调控蛋白结构时，水相中加入20％的低聚半乳糖仍然不能使高内相乳具备冻融稳定效果。说明本专利制备的产品在提升了高内相乳液冻融稳定性的同时，大大减少了糖的摄入量，为制备低糖、健康的食品提供了新材料。
表1蛋白二级结构
| α-helix | β-sheet | β-turn | Randomcoil | |
| 冻干前G-CP | 0.26±0.03<sup>b</sup> | 0.34±0.01<sup>a</sup> | 0.09±0.01<sup>a</sup> | 0.29±0.01<sup>b</sup> |
| 冻干后G-CP | 0.39±0.02<sup>a</sup> | 0.17±0.04<sup>b</sup> | 0.12±0.02<sup>a</sup> | 0.32±0.00<sup>a</sup> |
| 实施例1：G-CP(与低聚半乳糖1:1混合后冻干) | 0.32±0.03<sup>b</sup> | 0.37±0.02<sup>a</sup> | 0.02±0.00<sup>c</sup> | 0.27±0.04<sup>b</sup> |
| 实施例2：G-CP(与海藻糖1:1混合后冻干) | 0.32±0.04<sup>b</sup> | 0.39±0.03<sup>a</sup> | 0.03±0.01<sup>c</sup> | 0.26±0.02<sup>b</sup> |
| 对比例1：G-CP(冻干后1:1加入低聚半乳糖) | 0.34±0.03<sup>b</sup> | 0.24±0.04<sup>b</sup> | 0.06±0.02<sup>b</sup> | 0.36±0.04<sup>a</sup> |
| 对比例2：G-CP(冻干后1:1加入海藻糖) | 0.32±0.01<sup>b</sup> | 0.21±0.03<sup>b</sup> | 0.10±0.01<sup>a</sup> | 0.37±0.05<sup>a</sup> |
*G-CP为糖基化鳕鱼蛋白
从表1中可以观察到，与低卡糖混合冻干的糖基化鳕鱼蛋白β-转角含量显著低于未添加糖直接冻干的糖基化鳕鱼蛋白，而β-折叠含量则明显高于直接冻干的糖基化鳕鱼蛋白。表明低卡糖在冻干过程中有效调控了糖基化鳕鱼蛋白的二级结构。蛋白二级结构的改变使糖基化鳕鱼蛋白的功能性发生了改变，二级结构改变的糖基化鳕鱼蛋白具备了制备具有冻融稳定的高内相乳液的能力。
表2小鼠灌胃高内相乳血糖变化的比较(mmol/L)
| 高内相乳壁材 | 空腹血糖 | 餐后0.5h血糖值 | 餐后1h血糖值 | 餐后1.5h血糖值 |
| 对比例3 | 6.4±0.3 | 8.7±0.4 | 12.4±0.8 | 8.1±0.4 |
| 实施例1 | 6.6±0.2 | 7.1±0.6 | 9.8±0.5 | 7.5±0.4 |
| 实施例2 | 6.4±0.4 | 7.7±0.5 | 9.9±0.7 | 7.2±0.6 |
从表2中可以观察到，灌胃本专利制得低糖高内相乳液的小鼠在餐后血糖上升量和波动幅度远低于葡萄糖对照组小鼠。表明本发明使用糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物制备的乳液能够降低进食后血糖上升速度，减小血糖波动，更满足于消费者对绿色、健康产品的需求。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种调控糖基化鳕鱼蛋白结构的方法，其特征在于，包括，
S1、将透析后的糖基化鳕鱼蛋白溶液与低卡糖混合，于7～10.5的pH值下搅拌1～2h；
S2、于温度为0～40℃和真空度为0～15Pa下冻干14h以上，完成糖基化鳕鱼蛋白结构的调控，得到糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中低卡糖为低聚糖、甜菊糖或糖醇产品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，糖醇产品包括木糖醇、阿拉伯糖、赤藓糖醇、麦芽糖醇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中糖基化鳕鱼蛋白溶液中的糖基化鳕鱼蛋白与低卡糖的质量比为1：(0.8～2)，所述透析的方法为：将冷却至30℃以下糖基化鳕鱼蛋白溶液装入截留量为3500Da的透析袋，于4℃去离子水中透析36～60h至游离葡萄糖含量在0.3mg/mL以下。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中于20℃和5Pa条件下冻干14h以上。
6.权利要求1-5任一项所述的方法得到的糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物。
7.权利要求1-5任一项所述的方法得到的糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物在制备高内相乳液中的应用，其特征在于，具体包括：
S1、将糖基化鳕鱼蛋白-低卡糖复合物与去离子水混合，调节pH值至7～10.5，得到复合溶液；
S2、将食用植物油加入到复合溶液中，匀浆后，得到高抗冻融高内相乳液。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，S1得到的复合溶液中糖基化鳕鱼蛋白浓度为30-70mg/mL。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，S2中食用植物油包括但不限于大豆油，匀浆的转速为5k～16krpm，时间为30～180s，高抗冻融高内相乳液中食用植物油的浓度为76～88vol％。
10.权利要求7得到的高抗冻融高内相乳液。
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