CN115736117A - 一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，制得的该育肥猪饲料是以质量份数6份葡萄渣替代原价基础饲粮中的6份麦麸，由以下质量份数的饲粮原料组成：玉米：65份，葡萄渣：6份，豆粕：19份，酒糟蛋白：5份，磷酸氢钙：1.5份，碳酸钙：0.9份，氯化钠：0.5份，L‑赖氨酸盐酸盐：0.37份，L‑苏氨酸：0.04份，DL‑蛋氨酸：0.01份，氯化胆碱：0.18份，预混合料：1.5份。采用该育肥猪饲料可以降低饲养成本，提高饲料利用率，改善肉品质，减轻氧化应激和炎症反应，改善肠道健康，提高机体的免疫性能。其对于资源的开发利用、节能减效，地方猪种的发展具有重大意义。
Description
技术领域
本发明属于猪饲料技术领域，具体涉及一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料。
背景技术
我国不仅是生猪养殖大国，还是世界第一猪肉消费大国。猪肉是人类日常饮食中优质动物蛋白、矿物质、维生素等的重要来源。我国的生猪屠宰量和猪肉产量显著降低，在地方猪种中表现最为明显。关中黑猪具有适应性强、耐粗饲等优点，但其生长速度慢，加之外来猪种影响，一度出现品种退化的问题。因此在猪生产中如何提高地方猪种的生产效率非常重要。而在猪生产中饲料需求量大，麦麸、豆粕、玉米等饲料原料的价格持续上涨，导致地方猪种养殖收益不断减少。因此寻求新型地方猪种饲料原料替代传统粮食型饲料迫在眉睫。
许多研究发现，充分利用农业副产品不仅可以降低饲养成本，还可以减少环境污染。而葡萄渣作为酿酒过程中的主要副产品，是一种潜在的饲料资源。葡萄渣的产量高、价格低廉、营养丰富，尤其是酚类化合物的含量非常高，具有保护心脏和增强抗氧化能力的功能。但葡萄渣的pH值很低，自然降解比较困难，其特殊气味会吸引蚊虫，并在一定程度上增加生物安全隐患。且葡萄渣中大约70％的酚类化合物没有被充分利用，导致葡萄渣的利用效率很低。
有文献指出，葡萄酿酒后的剩余物葡萄渣，代替玉米面喂猪，效果很好。根据科学测定，在每公斤葡萄渣的干物质中，含消化能5.7兆焦，可消化蛋白86克，粗蛋白13.2％，粗脂肪13.2％，粗纤维29.4％，钙0.67％，磷0.32％，还含有多种维生素和微量元素。与玉米相比，每公斤可消化蛋白多32克，粗蛋白多3.7％，钙多0.65％，磷多0.09％，赖氨酸多1.57％。因此，在当前玉米供不应求、价格走高的情况下，用廉价的葡萄渣代替玉米面喂猪，确实是一种好的方法。
用葡萄渣喂猪，最好是将葡萄渣晒制成葡萄渣干，并经加工粉碎，再代替玉米面制成混合饲料后投喂。在混合饲料中所占的比例，一般占10％-20％，若所占的比例较大，需要加喂适量的青绿多汁饲料。
据一家养猪场试验，在混合饲料中，用15％左右的葡萄渣干粉代替玉米粉喂猪，每头出栏肥猪平均可节约玉米约50公斤，降低成本20多元。
还有文献指出，在育肥猪饲料中用10％-20％葡萄渣替代玉米粉，每头出栏猪平均可节省玉米约50公斤，降低成本约20元。
但上述文献都没有给出相应的实验数据，因此，用葡萄渣替代猪饲料的应用还需要进一步的研究。根据申请人进行的资料检索，还没有发现利用葡萄渣替代麦麸作为猪种育肥猪饲料的相关文献报道。
发明内容
为了合理有效利用葡萄渣资源，解决现有地方猪种饲养成本高，效益低的技术问题，本发明的目的在于，提供一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料。
为了实现上述任务，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，其特征在于，以质量份数6份葡萄渣替代原价基础饲粮中的6份麦麸，它是由以下质量份数的饲粮原料组成：
玉米：65份，葡萄渣：6份，豆粕：19份，酒糟蛋白：5份，磷酸氢钙： 1.5份，碳酸钙：0.9份，氯化钠：0.5份，L-赖氨酸盐酸盐：0.37份，L-苏氨酸：0.04份，DL-蛋氨酸：0.01份，氯化胆碱：0.18份，预混合料：1.5份。
根据本发明，所述的原价基础饲粮，由以下质量份数的饲粮原料组成：
玉米：65份，麦麸：6份，豆粕：19份，酒糟蛋白：5份，磷酸氢钙： 1.5份，碳酸钙：0.9份，氯化钠：0.5份，L-赖氨酸盐酸盐：0.37份，L-苏氨酸：0.04份，DL-蛋氨酸：0.01份，氯化胆碱：0.18份，预混合料：1.5份。
所述葡萄渣的制备过程如下：将新鲜葡萄在酿酒过程中经过压榨后的皮、籽和梗的复合物经过烘干、粉碎，获得葡萄渣。
本发明以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，是将葡萄渣替代原价饲料基础饲粮中的麦麸，改变了原价基础饲粮中的氨基酸和脂肪酸的组成，可以改善地方猪种的肉品质，提高猪肉的抗氧化能力，减轻地方猪种的氧化应激和炎症反应，有效保护肠道粘膜屏障的完整性，提高机体免疫能力，改善肠道健康。且葡萄渣获得简单，来源丰富。
附图说明
图1是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪肉质抗氧化指标水平的影响直方图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图2是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪肉质氨基酸含量的影响图；
图3是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪肉质脂肪酸含量的影响图；
图4是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪血清免疫球蛋白水平的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图5是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪血清免疫相关因子水平的影响直方图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图6是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪脾脏TLR基因家族水平的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图7是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪回肠TLR基因家族水平的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图8是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪血清抗氧化指标水平的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图9是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪肠道形态的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图10是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪血清肠道屏障相关因子水平的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图11是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪回肠肠道屏障相关基因mRNA表达水平的影响图，图中，*代表差异显著 (p<0.05)；
图12是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪肠道微生物菌群α-多样性的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
图13是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪肠道微生物菌群不同分类水平丰度的影响图，图中，A表示门水平，B表示属水平；
图14是本发明的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料对关中黑猪肠道微生物菌群属水平丰度的影响图，图中，*代表差异显著(p<0.05)；
以下结合附图和实施例对本发明作进一步地详细说明。
具体实施方式
物种资源是珍贵的市场资源，物种资源的肆意流失，会对物种资源的认识、开发、利用等方面留下不可弥补的缺憾。关中黑猪是陕西省关中地方优良的培育品种，经过二十余年的精心培育选种而育成，在上世纪八十年完成了品种的鉴定，并在1984年获得了农业部首批地理标志培育猪品种，也是我国早期猪品种培育研究工作中成功的肉脂兼用型品种之一。开展关中黑猪的选育与利用，与引进外来瘦肉型猪良种齐头并进的策略，是养猪业必然的市场选择。
申请人研发了一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，通过在饲粮中将葡萄渣替代麦麸，不仅可以充分利用葡萄渣资源，还可以降低饲养成本，并进行了深入的研究和试验。
所述的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，是以质量份数6份葡萄渣替代原价基础饲粮中的6份麦麸，由以下质量份数的饲粮原料组成：
玉米：65份，葡萄渣：6份，豆粕：19份，酒糟蛋白：5份，磷酸氢钙： 1.5份，碳酸钙：0.9份，氯化钠：0.5份，L-赖氨酸盐酸盐：0.37份，L-苏氨酸：0.04份，DL-蛋氨酸：0.01份，氯化胆碱：0.18份，预混合料：1.5份。
综合来看，以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，可以作为一种新型地方猪种育肥猪饲料用于实践。
以下是发明人给出的具体实施例。
实施例1：
申请人在关中黑猪的选育与利用中，开发了一种不含任何添加剂的原价基础饲粮，已经广泛用于生猪生产，其原料配比及营养成分如下表1所示：
表1：原价饲料基础饲粮原料及营养成分
实施例2：
本实施例给出一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥饲料，是在实施例 1所述的原价饲料基础饲粮的基础上，以质量份数6份葡萄渣替代原价基础饲粮中的6份麦麸所得到，其原料及营养成分如表2所示。
表2：以关中黑猪为代表的地方猪种育肥饲料原料及营养成分
| 饲粮原料 | 质量份数 | 营养成分 | 含量 |
| 玉米 | 65.00 | 干物质(％) | 90.48 |
| 葡萄渣 | 6.00 | 能量(MJ/kg) | 14.98 |
| 豆粕 | 19.00 | 粗蛋白(％) | 15.31 |
| 酒糟蛋白 | 5.00 | 粗纤维(％) | 5.11 |
| 磷酸氢钙 | 1.50 | 钙 | 0.73 |
| 碳酸钙 | 0.90 | 总磷 | 0.66 |
| 氯化钠 | 0.50 | 赖氨酸 | 0.87 |
| L-赖氨酸盐酸盐 | 0.37 | 苏氨酸 | 0.51 |
| L-苏氨酸 | 0.04 | 蛋氨酸+半胱氨酸 | 0.60 |
| DL-蛋氨酸 | 0.01 | ||
| 氯化胆碱 | 0.18 | ||
| 预混合料 | 1.50 |
实施例3：
1、试验动物和试验饲粮
试验对象为选取222头体重相近(初始体重为55.14±0.59kg)的同组母猪(关中黑猪)，随机分为2组，分别作为对照组和试验组，试验期为77d。
对照组饲喂实施例1的不含任何添加剂的原价基础饲粮。试验组饲喂实施例2的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料(即：将含有6％葡萄渣替代原价基础饲粮中的6％麦麸，以下简称育肥猪饲料)。
2、饲养管理
在具体开始试验之前，认真清理猪舍，保证完全消毒并有一定的通风时间。试验时间77天，让试验动物自由采食和饮水，尽量保持猪舍内适宜的温度和湿度，按时打扫卫生，保持猪舍的清洁。
实施例4：关中黑猪生长性能的测定
在77天正式试验中，对试验过程中两组猪的生长性能进行测定，统计两组猪的采食情况和增重情况，每周记录采食量，试验开始和结束时记录体重，计算料肉比。其结果如下表3所示。
表3：以关中黑猪为代表的地方猪种育肥饲料对关中黑猪生长性能的影响
| 项目 | 对照组 | 试验组 |
| 平均初始体重(kg) | 54.72±3.73 | 55.56±4.30 |
| 平均结束体重(kg) | 115.28±6.48 | 115.11±10.19 |
| 平均日增重(kg) | 0.71±0.06 | 0.72±0.10 |
| 平均日采食量(kg) | 2.48±0.17 | 2.38±0.27 |
| 料肉比(F：G) | 3.52±0.39 | 3.34±0.41 |
注：同一行中没有上标字母或上标相同字母的表示差异不显著(P>0.05),数据以平均值±标准差表示(n＝111)。
从表3可以看出，试验组和对照组的生长性能(平均初始体重、平均结束体重、平均日增重、平均日采食量、料肉比)无显著差异(P>0.05)。表明育肥猪饲料对关中黑猪的生长性能没有不利影响，是一种良好的地方猪种育肥猪饲料原料。
实施例5：关中黑猪胴体性状的测定
试验猪屠宰前禁食24h，然后逐一称重。每组随机选取6头猪屠宰放血。宰后立即测量热胴体重，眼肌面积，计算屠宰率。其结果如表4所示。
表4：以关中黑猪为代表的地方猪种育肥饲料对关中黑猪胴体性状的影响
| 项目 | 对照组 | 试验组 |
| 热胴体重(kg) | 87.74±5.09 | 88.60±7.56 |
| 屠宰率(％) | 76.13±2.00 | 77.05±3.31 |
| 眼肌面积(cm<sup>2</sup>) | 30.98±6.21 | 29.06±4.31 |
注：同一行中没有上标字母或上标相同字母的表示差异不显著(P＞0.05)，数据以平均值±标准差表示(n＝6)。
部分指标测量标准和计算公式如下：
屠宰率(％)：胴体重/宰前活重×100
眼肌面积(cm2)：眼肌高度(cm)×眼肌宽度(cm)×0.7
从表4可以看出，试验组和对照组的胴体性状(热胴体率、屠宰率、眼肌面积)无显著差异(P＞0.05)。表明育肥猪饲料对关中黑猪的胴体性状没有不利影响，可作为地方猪种育肥猪饲料。
实施例6：关中黑猪背最长肌肉品质的测定
将试验猪进行屠宰后，在45min和24h用便携式pH计和色度计在测定背最长肌的pH和肉色(L*，a*和b*)。对pH值和肉色进行两次重复测量，求出平均值用于进一步的数据分析。蒸煮损失，称取约15g样品，浸泡在 80℃的水浴中，直到内部温度达到75℃后，再冷却到25℃，擦拭，并重新称重。蒸煮损失是根据重量损失计算的，并以重量变化百分比表示。背最长肌的剪切力(直径：1cm；厚度：1cm)使用嫩度计测量。其结果如下表5所示。
表5：以关中黑猪为代表的地方猪种育肥饲料对关中黑猪背最长肌肉品质的影响
| 项目 | 对照组 | 试验组 |
| pH<sub>45min</sub> | 6.63±0.13 | 6.78±0.10 |
| L*<sub>45min</sub> | 44.52±1.19 | 45.06±1.34 |
| a*<sub>45min</sub> | 8.15±0.69 | 8.21±0.48 |
| b*<sub>45min</sub> | 15.42±0.33 | 15.78±1.02 |
| pH<sub>24h</sub> | 5.58±0.09 | 5.68±0.03 |
| L*<sub>24h</sub> | 53.51±0.94 | 54.50±0.91 |
| a*<sub>24h</sub> | 11.37±2.27 | 12.72±1.11 |
| b*<sub>24h</sub> | 19.60±0.98 | 19.61±1.40 |
| 失水率<sub>24h</sub>(％) | 32.90±2.81<sup>a</sup> | 24.82±1.33<sup>b</sup> |
| 滴水损失<sub>24h</sub>(％) | 2.54±0.19<sup>a</sup> | 1.49±0.10<sup>b</sup> |
| 失水率<sub>48h</sub>(％) | 38.03±1.73<sup>a</sup> | 33.31±2.02<sup>b</sup> |
| 滴水损失<sub>48h</sub>(％) | 7.16±0.49<sup>a</sup> | 4.32±0.23<sup>b</sup> |
| 剪切力(N) | 31.81±7.66 | 39.63±6.37 |
| 蒸煮损失(％) | 35.25±0.83<sup>a</sup> | 32.05±0.79<sup>b</sup> |
注：同一行中没有上标字母或上标相同字母的表示差异不显著(P＞0.05),上标字母不同的表示差异显著(P＜0.05)。数据以平均值±标准差表示(n＝6)。
从表5可以看出，试验组的失水率(24h、48h)、滴水损失(24h、48h)、蒸煮损失均显著低于对照组(P＜0.05)。而试验组和对照组的pH(45min、 24h)、L*(45min、24h)、a*(45min、24h)、b*(45min、24h)均无显著差异(P>0.05)。表明育肥猪饲料有利于生产高品质的地方猪肉。
实施例7：关中黑猪肉质抗氧化指标水平的测定
试验猪屠宰后采用酶联免疫方法检测肉质中T-AOC，T-SOD，CAT和 MDA等抗氧化指标的浓度。其结果如图1所示，图中，*代表差异显著(p＜ 0.05)。
从图1可以看出，试验组的T-AOC和SOD活性显著高于对照组(p＜ 0.05)，试验组的MDA含量和ROS活性显著低于对照组(p＜0.05)。表明育肥猪饲料可以增强猪肉的抗氧化能力，在一定程度上改善了关中黑猪的肉品质。
实施例8：关中黑猪肉质氨基酸含量的测定
随机选取试验组和对照组背最长肌样品(n＝5)，称取3-5g样品，脱脂，干燥，粉碎。再称取0.1g样品粉末配置为试样测定液，用A300全自动氨基酸分析仪以外标法来测定试样测定液中氨基酸的含量。并对氨基酸的含量进行热图分析，其结果如图2所示。
从图2可以看出，试验组丙胺酸的含量显著高于对照组(p＜0.05)，而谷氨酰胺、苯丙氨酸、天冬氨酸、丝氨酸和赖氨酸的含量也有升高趋势，但差异不显著(P＞0.05)。表明育肥猪饲料可以改变氨基酸的组成，改善地方猪肉的肉色和风味，提高地方猪肉的营养价值。
实施例9：关中黑猪肉质脂肪酸含量的测定
随机选取试验组和对照组背最长肌样品(n＝5)，称取0.3-0.5g样品于离心管中，通过过滤，离心，去上清。随后溶解油脂，进行甲酯化，加入去离子水，待分层后提取上层溶液在气相色谱仪中进行测定。其结果如图3所示。
从图3可以看出，试验组肉蔻油酸(C14:1)、硬脂酸(C18:0)、亚油酸(C18:2N6)和二十碳四烯酸(C20:4N6)的含量显著高于对照组(p<0.05)。表明育肥猪饲料可以改变脂肪酸的组成，对关中黑猪肉质起到一定的改善作用。
实施例10：关中黑猪血清免疫球蛋白水平的测定
在试验猪屠宰前，空腹每只猪静脉采血3ml，分离血清，离心，取上清，置-80℃冰箱中保存备用。采用酶联免疫吸附方法检测血清中IgA、IgG、IgM 的浓度。其结果如图4所示，图中，*代表差异显著(p＜0.05)。
从图4可以看出，试验组血清中IgA、IgG、IgM的浓度显著高于对照组(p＜0.05)，表明育肥猪饲料可以显著提高关中黑猪血清免疫球蛋白水平，对关中黑猪的免疫性能具有促进作用。
实施例11：关中黑猪血清免疫相关因子水平的测定
其操作同实施例10。采用酶联免疫方法检测血清中IL-1β、IL-6、IL-10、 IFN-γ的浓度。其结果如图5所示，图中*代表差异显著(p＜0.05)。
从图5可以看出，试验组血清免疫相关因子IL-1β的浓度显著低于对照组(p＜0.05)，IFN-γ的浓度显著高于对照组(p＜0.05)，IL-6、IL-1的浓度与对照组无显著差异(P＞0.05)，表明育肥猪饲料可以减少关中黑猪血清促炎因子的产生，增强机体的免疫性能，减少体内炎症反应的发生。
实施例12：关中黑猪脾脏TLR基因家族水平的测定
屠宰时，采集脾脏组织样品，用生理盐水冲洗干净，储存在-80℃冰箱中。随后提取组织总RNA，进行反转录，RT-qPCR，检测脾脏免疫相关基因mRNA的表达水平。其结果如图6所示，图中，*代表差异显著(p＜0.05)。
从图6可以看出，试验组脾脏TLR基因家族TLR1、TLR3、TLR4、TLR5、 TLR6、TLR7和TLR8的基因表达水平显著高于对照组(p＜0.05)，表明育肥猪饲料可以改善脾脏免疫相关基因mRNA的表达水平，提高机体的免疫能力。
实施例13：关中黑猪回肠TLR基因家族水平的测定
屠宰时，采集回肠组织样品，用PBS冲洗干净，储存在-80℃冰箱中。随后提取组织总RNA，进行反转录，RT-qPCR，检测回肠免疫相关基因mRNA 的表达水平。其结果如图7所示，图中，*代表差异显著(p＜0.05)。
从图7可以看出，试验组回肠TLR基因家族TLR1、TLR5、TLR8和 TLR9的基因表达水平显著高于对照组(p＜0.05)，表明育肥猪饲料可以改善回肠免疫相关基因mRNA的表达水平，增强关中黑猪肠道免疫性能，保护肠道屏障的完整性。
实施例14：关中黑猪血清抗氧化指标水平的测定
其操作同实施例10。采用酶联免疫方法检测血清中MDA、T-AOC、 T-SOD、CAT等抗氧化指标。其结果如图8所示，图中，*代表差异显著(p ＜0.05)。
从图8可以看出，试验组血清抗氧化指标T-AOC、T-SOD、CAT的浓度显著高于对照组(p＜0.05)，MDA的浓度与对照组无显著差异(P＞0.05)，表明育肥猪饲料可以提高血清的抗氧化能力，提高关中黑猪的抗氧化性能，降低关中黑猪在饲喂过程中的氧化应激风险。
实施例15：关中黑猪肠道形态的测定
屠宰时，用无菌手术刀取1-2cm回肠、盲肠和结肠切片样本，用生理盐水进行漂洗，漂洗干净后用4％多聚甲醛溶液固定。随后制备组织切片，进行HE染色。其结果如图9所示，图中，*代表差异显著(p＜0.05)。
从图9可以看出，试验组回肠的绒毛高度显著高于对照组(p＜0.05)，而试验组的回肠、盲肠、结肠的隐窝高度显著低于对照组(p＜0.05)。表明育肥猪饲料可以有效改善肠道绒毛的完整性，维持肠道组织形态平衡，增强肠道对营养物质的消化吸收，保障关中黑猪对饲料的营养利用率。
实施例16：关中黑猪血清肠道屏障相关因子水平的测定
其操作同实施例10。采用酶联免疫方法检测血清中二胺氧化酶(DAO)、内毒素(ET)等肠道屏障相关因子的含量。其结果如图10所示，图中，* 代表差异显著(p＜0.05)。
从图10可以看出：试验组DAO的含量显著低于对照组(p＜0.05)，而ET的含量与对照组无显著差异(P＞0.05)。表明育肥猪饲料可有效保护肠道屏障的完整性，促进关中黑猪对饲料的消化吸收，在一定程度上改善关中黑猪的肉品质。
实施例17：关中黑猪回肠肠道屏障相关基因mRNA表达水平的测定
其操作同实施例13。检测回肠肠道屏障相关基因mRNA的表达水平。其结果如图11所示，图中，*代表差异显著(p＜0.05)。
从图11可以看出：试验组ZO-1、Occludin-1、Claudin-1的表达水平显著高于对照组(p＜0.05)，MUC1的表达水平与对照组无显著差异(P＞0.05)。表明育肥猪饲料可以改善回肠中紧密连接蛋白和粘蛋白相关基因mRNA的表达水平，减轻关中黑猪肠道的氧化应激和炎症反应，改善回肠肠道屏障功能。
实施例18：关中黑猪肠道微生物菌群α-多样性的测定
在关中黑猪满足出栏要求(平均体重115kg左右)前，每隔25天采集一次猪只粪便样品，共采集四次，每组12个样本，共计96个粪便样本。采用CTAB/SDS法提取粪便样本总基因组DNA和16S rRNA，用1％琼脂糖凝胶检测DNA浓度和纯度。根据浓度，用无菌水稀释至lug/μL。对16s rRNA 进行扩增和测序。通过丰富度指数(ACE、Chao1)和多样性指数(Shannon、 Simpson)对粪便中微生物Alpha多样进行分析，其结果如图12所示，图中， *代表差异显著(p＜0.05)。
从图12可以看出：试验组第50天的香农指数、Chao1指数、辛普森指数和ACE指数显著高于对照组(p＜0.05)，而其他时间与对照组无显著差异 (P＞0.05)。表明育肥猪饲料可以增加肠道微生物的多样性，提高关中黑猪机体的免疫性能。
实施例19：关中黑猪肠道微生物菌群不同分类水平丰度的测定
其操作同实施例18。对肠道微生物菌群不同分类水平丰度进行分析，其结果如图13所示，图中，A表示门水平，B表示属水平。
从图13可以看出，在门水平上，试验组与对照组无差异。在属水平上，试验组与对照组存在差异。表明育肥猪饲料对肠道微生物菌群的影响主要表现在属水平上，可以降低猪腹泻、肠道炎症等疾病的发生，在维持关中黑猪肠上皮屏障和免疫系统等方面发挥重要作用。
实施例20：关中黑猪肠道微生物菌群属水平丰度的测定
其操作同实施例18。对肠道微生物菌群属水平丰度进行分析，其结果如图14所示，图中*代表差异显著(p＜0.05)。
从图14可以看出，试验组密螺旋体的相对丰度在day25和day50显著低于对照组(p＜0.05)，链球菌的相对丰度在day25、day50和day75显著低于对照组(p＜0.05)。表明育肥猪饲料可以显著降低肠道内有害菌群的比重，维护肠道内环境健康，从而有效改善关中黑猪的免疫性能。
综上所述，本实施例给出的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥饲料，用葡萄渣替代原价饲料基础饲粮中的麦麸，不仅可以降低饲养成本，改善地方猪种的肉品质，提高饲料转化率，还可以减轻地方猪种氧化应激和炎症反应，改善肠道健康，提高机体的免疫性能。
以上所描述的实施例是一些较优的例子，通过实施例对本发明进行了详细说明，本发明不限于上述实施例。本领域的技术人员可以在不脱离实际的前提下对本发明的技术方案进行添加、替换，均应属于本申请权利要求书所限定的范围。
Claims (3)
1.一种以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，其特征在于，以质量份数6份葡萄渣替代原价基础饲粮中的6份麦麸制成，它是由以下质量份数的饲粮原料组成：
玉米：65份，葡萄渣：6份，豆粕：19份，酒糟蛋白：5份，磷酸氢钙：1.5份，碳酸钙：0.9份，氯化钠：0.5份，L-赖氨酸盐酸盐：0.37份，L-苏氨酸：0.04份，DL-蛋氨酸：0.01份，氯化胆碱：0.18份，预混合料：1.5份。
2.如权利要求1所述的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，其特征在于，所述的原价基础饲粮由以下质量份数的饲粮原料组成：
玉米：65份，麦麸：6份，豆粕：19份，酒糟蛋白：5份，磷酸氢钙：1.5份，碳酸钙：0.9份，氯化钠：0.5份，L-赖氨酸盐酸盐：0.37份，L-苏氨酸：0.04份，DL-蛋氨酸：0.01份，氯化胆碱：0.18份，预混合料：1.5份。
3.如权利要求1所述的以关中黑猪为代表的地方猪种育肥猪饲料，其特征在于，所述葡萄渣的制备过程如下：将新鲜葡萄在酿酒过程中经过压榨后的皮、籽和梗的复合物经过烘干、粉碎，获得葡萄渣。
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