CN115728374A - 一种食品中禁限用农药的电化学快速分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种食品中禁限用农药的电化学快速分析方法，具体为高催化活性卟啉基MOFs模拟酶的制备方法及其应用；具体步骤为：首先制备卟啉基MOFs模拟酶，结合电镜技术、光学技术、电化学技术等对材料的形貌、组成及催化性能进行表征；将该MOFs模拟酶用于构建电化学适体传感器；然后利用电化学适体传感器进行食品中禁限用农药残留的检测，检测步骤为：将电化学适体传感器浸入农药标准溶液中，获取不同浓度条件下卟啉基MOFs模拟酶催化底物产生的响应电流，建立检测农药的标准曲线，实现果蔬汁实际样品中农药残留的定量检测；本发明工艺简单，检测方法灵敏、快速、抗干扰能力强，同时也拓展了金属‑有机框架材料的应用范围，具有广阔的应用前景。

Description

一种食品中禁限用农药的电化学快速分析方法

技术领域

本发明属于电化学分析技术领域，具体涉及一种食品中禁限用农药的电化学快速分析方法。

背景技术

果蔬汁能有效为人体补充多种维生素和矿物质，并增强细胞活力及胃肠功能，因而备受广大消费者的青睐。然而，水果、蔬菜在生长过程中极易受到禁限用农药污染，从而影响到果蔬汁的食用安全。因此，研究开发果蔬汁中禁限用农药灵敏、快速、准确的检测方法显得尤为重要。

传统的农药残留检测方法主要有原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法、液相色谱法等。这些方法大多存在操作繁琐、分析时间长等不足，在一定程度上已经不能农药现场快速检测的要求。目前，电化学适体传感器将传感器的选择性和电化学的便捷性相结合，为实现复杂基质中农药的准确、快速检测提供了可能。为了增强痕量甚至超痕量农药的电化学检测信号，通常利用酶循环实现信号放大。然而，生物酶具有本身不稳定、易失活且提纯难度大等不足。因此，研制稳定性好，并能高效产生更多信号分子的人工模拟酶(仿生酶)用于农药的电化学检测成为研究热点。

金属-有机框架材料(metal-organic frameworks,MOFs)是由金属离子或金属簇单元与有机配体自组装形成的一类多孔晶态材料，因其稳定的形态结构及高效催化活性等特点，被认为是一类极具潜质的模拟酶。

发明内容

为了解决现有禁限农药检测的不足，本发明提供了一种利用卟啉基MOFs模拟酶现场快速检测果蔬汁中禁限用农药的电化学传感分析方法。本发明首先制备了稳定性好、催化活性高的卟啉基MOFs模拟酶，旨在构建一种农药残留电化学适体传感技术，并将其应用于果蔬汁中禁限用农药(以氧乐果、毒死蜱、氯氰菊酯为例)的灵敏、准确、快速检测。本发明能够克服生物酶提取难度大、成本高、易失活的缺点，及传统农药残留检测方法操作繁琐、耗时长、难以实时在线检测的不足。

为了达到上述技术目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种环氧官能化卟啉基MOFs检测信号探针制备方法，具体为：

S1：卟啉基MOFs模拟酶的制备：将四氯化锆和尾端带有吡啶基的铁卟啉(Fe(III)PyBPTPPC)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，再将乙酸加入到上述溶液中超声均匀，并快速转移到反应釜中进行加热，通过水热结晶的微波辅助水热合成法制得卟啉基MOFs；

S2：环氧官能化卟啉基MOFs的制备：将卟啉基MOFs、曲拉通X-100、正己醇加入到环己烷溶液中，室温搅拌后，缓慢加入氨水和正硅酸甲酯进行反应，得到反应液；加入丙酮混匀、离心后，分别用N,N-二甲基甲酰胺和乙醇清洗，得到二氧化硅包覆的卟啉基MOFs；然后，将该材料加入到硅烷偶联剂KH-560溶液中，在轻微摇动下反应；将产物分别用甲苯、乙醇离心清洗后，即可得到环氧官能化卟啉基MOFs模拟酶；

S3：信号探针的制备：将环氧官能化卟啉基MOFs模拟酶与DNA1序列在室温条件下培养，反应后用Tris-HCl缓冲溶液离心、清洗，即可得到MOF-DNA1信号探针。

本发明的另一目的在于提供一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，具体为：

S1：将工作电极清洗后，利用多电位阶跃法在其表面修饰一层均匀的纳米金膜，用于固定末端连有巯基的DNA2，从而制备电化学DNA传感器；

S2：配制一系列浓度的禁限用农药标准溶液，浓度分别为Q₁、Q₂、Q₃、……、Q_n-1、Q_n，共n个浓度梯度，n为正整数；

S3：将S1制备的电化学DNA传感器浸入S2制备的禁限用农药标准溶液中；由于禁限用农药对DNA2的酶切作用，使得DNA2发生断裂；通过DNA2残基序列与DNA1的特异识别作用，将MOF-DNA1信号探针固定于传感界面；

S4：记录S3信号探针中卟啉基MOFs模拟酶催化底物产生的响应电流；根据禁限用农药浓度和相对应的催化电流之间的关系建立检测禁限用农药的标准曲线，标准曲线的方程为y＝ax+b，x代表禁限用农药浓度的对数，y代表催化电流增加值，a和b分别为方程的系数和常数项；

S5：果蔬汁中禁限用农药的定量检测：参考S4建立的标准曲线，得到待测样品中禁限用农药的浓度Q＝(y-b)/a，由此实现果蔬汁中禁限用农药的定量检测；

优选的，所述S1中反应的条件为温度110～130℃，时间18～36h；

优选的，所述S1中氯化锆用量为4～9mg、铁卟啉用量为3～6mg；

优选的，所述S1中溶剂N,N-二甲基甲酰胺和乙酸的体积比为2～10：0.2～1；

优选的，所述S2中正己醇和环己烷的体积比为0.5～2：1～3；

优选的，所述S2中氨水、正硅酸甲酯和丙酮的体积比为0.5～2：1～3：3～5；

优选的，所述S3中反应的条件为室温，时间12～36h；

优选的，所述S3中Tris-HCl缓冲溶液pH为7.0，浓度为10mM；

优选的，所述S1中多电位阶跃法的扫描电位为+1.055～-0.045V；信号探针的用量为5μL；

优选的，所述S2中一系列浓度的禁限用农药标准溶液浓度为0～1×10^-5M。

本发明的有益效果是：

1)与辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶等生物酶相比，本发明制备的卟啉基MOFs模拟酶性质稳定、耐酸碱能力强、催化活性高，克服了蛋白酶易失活、提纯难度大等不足。

2)与原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法、液相色谱法等禁限用农药传统检测方法相比，本发明利用简便、快捷的电化学传感分析方法有效提高了果蔬汁复杂基质中禁限用农药检测的灵敏度、选择性和时效性。

附图说明

图1中(A)是MOFs的扫描电镜图，(B)是MOFs的红外光谱图。

图2中(A)是MOFs模拟酶在有无葡萄糖存在时的循环伏安图：(a)无葡萄糖存在，(b)有葡萄糖存在，(B)MOFs在硫酸加入前后的颜色变化：(a)MOFs自身颜色，(b)MOFs和葡萄糖混合溶液，(c)是(b)中加入硫酸后的颜色。

图3中(A)是传感器检测不同浓度禁限用农药标准溶液获得的示差脉冲响应电流，(B)根据禁限用农药浓度和响应电流信号建立的标准曲线。

图4是电化学传感器检测禁限用农药的选择性研究。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

S1：卟啉基MOFs模拟酶的制备：

制备MOFs模拟酶的具体步骤为：将6mg四氯化锆和5mg尾端带有吡啶基的铁卟啉分散到5mLN,N-二甲基甲酰胺中，再向其中加入0.40mL乙酸后超声混匀。随后，将该混合溶液转移到聚四氟乙烯反应釜中，在120℃条件下反应24h。将上述反应液冷却至室温，在转速10,000r/min条件下离心15min得到棕色沉淀，于60℃下真空干燥12h，即得到卟啉基MOFs模拟酶。

S2：环氧官能化卟啉基MOFs的制备：

将1g曲拉通X-100、2mg MOFs、1mL正己醇分散于2mL环己烷中，搅拌15min后，加入1.5mL氨水和2mL正硅酸甲酯。在4℃下反应6h后，加入4mL丙酮混匀并离心。分别用N,N-二甲基甲酰胺和乙醇清洗后，向其中加入2mL硅烷偶联剂KH-560溶液(5.0％，v/v)并在4℃下继续反应6h。将产物分别用甲苯和乙醇离心清洗3次后，即可得到环氧官能化卟啉基MOFs。

S3：信号探针的制备：

将5μL 10mM三-(2-甲酰乙基)磷盐酸盐加入到50μL DNA1中，使DNA1的双硫键打开。将活化后的DNA1与MOF分散液混合，在室温条件下培养24h后，用Tris-HCl缓冲溶液在12,000r/min下离心10min即可得到MOF-DNA1信号探针。

本发明还提供一种电化学适体传感检测氧乐果的方法，步骤为：

S1：配制浓度为0.10mg/mL的信号探针溶液；

S2：配制一系列浓度的氧乐果标准溶液，浓度分别为0、10^-13、10^-12、10^-11、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6M；

S3：利用粒径为0.3μm和0.05μm的氧化铝粉末分别对玻碳电极表面进行抛光打磨，并用丙酮、稀硝酸、氢氧化钠溶液、去离子水依次对电极超声清洗。通过多电位阶跃法在电极表面修饰纳米金膜，扫描电位为+1.055～-0.045V；在传感界面滴涂5μL DNA2，并于室温下反应6h，从而制备DNA传感器。将该传感器浸入不同浓度氧乐果溶液中，室温下孵育30min。将电极取出并清洗后，在其表面滴涂5μL MOF-DNA1信号探针并反应1h，使MOFs模拟酶固定在电极上。将得到的修饰电极浸入羟胺溶液中，进行示差脉冲伏安扫描(图3A)，扫描电位为+0.5～-0.1V。溶液中氧乐果的浓度越大，固定在传感界面的MOFs就越多，故可将MOFs模拟酶催化羟胺产生的响应电流信号用于的定量检测；

S4：记录传感器检测氧乐果标准溶液产生的响应电流，根据氧乐果浓度和相对应的电流信号(I)之间的关系建立检测氧乐果的标准曲线(图3B),标准曲线的线性方程为y＝2.30x+34.83(R²＝0.9973)。由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地检测氧乐果的含量；

S5：样品中氧乐果的定量检测：

将DNA2修饰的玻碳电极浸入待测苹果汁中，参照S3，得到MOFs模拟酶催化羟胺产生的响应电流为14.2μA，计算得到待测苹果汁中氧乐果浓度Q为(Q＝10^{(14.2-34.83)/2.3})1.07×10^-9M，由此实现了待测样品中氧乐果的定量检测。

通过与标准ICP-MS相比，本发明的检测结果相对标准偏差(RSD)为5.2％，且与标准方法结果相近，相对误差(RE)为4.9％；说明本检测方法结果较为稳定，重现性好；同时本传感分析方法检测氧乐果具有较好的选择性，能够有效克服果蔬汁中其它农药残留的干扰；在三倍信噪比条件下，检出限为0.086pM，能够满足果蔬汁中氧乐果检测的需求。总之，本发明建立的传感方法准确度高、抗干扰能力强、灵敏度高，为果蔬汁中氧乐果的检测提供了新的方法。

本发明方法灵敏度高、抗干扰能力强、准确度好的主要原因有：(1)制备的卟啉基MOFs模拟酶稳定性好、催化活性强，能够催化底物实现电化学信号放大，从而提高检测灵敏度；(2)传感界面修饰纳米金膜，能够促进催化活性中心与传感界面之间的电子传递，对提高氧乐果检测灵敏度起到重要作用；(3)氧乐果能够特异识别并切断DNA2，结合在传感界面的DNA2残基通过与DNA1序列特异性杂交，实现了MOFs模拟酶的有效固定并产生电催化信号，克服了复杂基质中其它干扰物质的影响，提高了氧乐果检测的抗干扰能力和准确性。因此，本发明制备的卟啉基MOFs模拟酶及用其构建的电化学DNA传感器能够实现氧乐果的灵敏、准确检测。

图1中(A)和(B)分别是MOFs的扫描电镜图和红外光谱图；由扫描电镜图(A)可以看出，该材料形貌规则、呈纺锤形，长轴长约480nm，短轴长约150nm。(B)中曲线a和b分别是卟啉基MOFs和环氧官能化MOFs的红外光谱图；这两条曲线在1350～1450cm^-1和1600～1750cm^-1两波段内都有明显的吸收峰，这是由于铁卟啉中卟啉环振动吸收形成的特征峰；不同的是，曲线b在910cm^-1和1100cm^-1处有一明显的吸收峰，这是由于硅氧烷中Si＝O键的振动吸收引起的，表明卟啉基MOFs已成功实现了环氧官能化。

图2卟啉基MOFs模拟酶的催化性能分析；(A)中曲线a和曲线b分别是MOFs模拟酶在有无羟胺存在时的循环伏安图，曲线a没有明显的氧化/还原峰，而曲线b在0.28V处有一明显的还原峰，表明MOFs模拟酶对羟胺具有明显的催化特性；(B)中管a和管b分别是MOFs在加入羟胺前后的颜色变化，可以看出MOFs呈现棕黄色，加入羟胺后，由于模拟酶对羟胺的催化作用，溶液变为酒红色；当加入硫酸后(管c)，模拟酶的催化性能被钝化，溶液的颜色变为浅橙色。

图3中(A)是基于卟啉基MOFs模拟酶的电化学DNA传感器检测不同浓度氧乐果得到的示差脉冲响应电流信号，随着氧乐果浓度的升高，电流信号随之增大；(B)是根据氧乐果浓度和电流信号建立的标准曲线(y＝2.30x+34.83(R²＝0.9973))，由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地分析氧乐果的含量。

图4是电化学传感器检测氧乐果的选择性研究，由图可知，所制得的的电化学适体传感器检测不同干扰农药产生的响应电流明显小于其检测氧乐果产生的响应电流，表明本方法检测氧乐果具有较强的抗干扰能力，能够实现复杂基质中氧乐果的检测。

实施例2

S1：卟啉基MOFs模拟酶的制备：

制备MOFs模拟酶的具体步骤为：将4mg四氯化锆和3mg铁卟啉分散到2mL二甲基甲酰胺中，再向其中加入0.20mL乙酸后超声混匀。随后，将该混合溶液转移到聚四氟乙烯反应釜中，在120℃条件下反应24h。将上述反应液冷却至室温，在转速10000r/min条件下离心15min得到棕色沉淀，于60℃下真空干燥12h，即得到卟啉基MOFs模拟酶。

S2：环氧官能化卟啉基MOFs的制备：

将1g曲拉通X-100、2mg MOFs、0.5mL正己醇分散于1mL环己烷中，搅拌15min后，加入0.50mL氨水和1mL正硅酸甲酯。在4℃下反应6h后，加入3mL丙酮混匀并离心。分别用N,N-二甲基甲酰胺和乙醇清洗后，向其中加入2mL硅烷偶联剂KH-560溶液(5.0％，v/v)并在4℃下继续反应6h。将产物分别用甲苯和乙醇离心清洗3次后，即可得到环氧官能化卟啉基MOFs。

S3：信号探针的制备：

将5μL 10mM三-(2-甲酰乙基)磷盐酸盐加入到50μL DNA1中，使DNA1的双硫键打开。将活化后的DNA1与MOF分散液混合，在室温条件下培养12h后，用Tris-HCl缓冲溶液在12000r/min下离心10min即可得到MOF-DNA1信号探针。

本发明还提供一种电化学DNA传感检测毒死蜱的方法，步骤为：

S1：配制浓度为0.10mg/mL的信号探针溶液；

S2：配制一系列浓度的毒死蜱标准溶液，浓度分别为0、10^-13、10^-12、10^-11、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7M；

S3：利用粒径为0.3μm和0.05μm的氧化铝粉末分别对玻碳电极表面进行抛光打磨，并用丙酮、稀硝酸、氢氧化钠溶液、去离子水依次对电极超声清洗。通过多电位阶跃法在电极表面修饰纳米金膜，扫描电位为+1.055～-0.045V；在传感界面滴涂5μL DNA2，并于室温下反应6h，从而制备DNA传感器。将该传感器浸入不同浓度毒死蜱溶液中，室温下孵育30min。将电极取出并清洗后，在其表面滴涂5μL MOF-DNA1信号探针并反应1h，使MOFs模拟酶固定在电极上。将得到的修饰电极浸入羟胺溶液中，进行示差脉冲伏安扫描(图3A)，扫描电位为+0.5～-0.1V。溶液中毒死蜱的浓度越大，固定在传感界面的MOFs就越多，故可将MOFs模拟酶催化羟胺产生的响应电流信号用于毒死蜱的定量检测；

S4：记录传感器检测毒死蜱标准溶液产生的响应电流，根据毒死蜱浓度和相对应的电流信号(I)之间的关系建立检测毒死蜱的标准曲线(图3B),标准曲线的线性方程为y＝1.90x+32.62(R²＝0.9906)。由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地检测毒死蜱的含量；

S5：样品中毒死蜱的定量检测：

将DNA2修饰的玻碳电极浸入待测橙子汁中，参照S3，得到MOFs模拟酶催化羟胺产生的响应电流为13.8μA，计算得到待测橙子汁浓度Q为(Q＝10^{(13.8-32.62)/1.90})1.2×10^-10M，由此实现了待测样品中毒死蜱的定量检测。通过与标准ICP-MS相比，本发明的检测结果的RSD为5.8％，且与标准方法结果相近，相对误差RE为4.6％。

实施例3

S1：卟啉基MOFs模拟酶的制备：

制备MOFs模拟酶的具体步骤为：将9mg四氯化锆和6mg铁卟啉分散到10mL N,N-二甲基甲酰胺中，再向其中加入1mL乙酸后超声混匀。随后，将该混合溶液转移到聚四氟乙烯反应釜中，在120℃条件下反应24h。将上述反应液冷却至室温，在转速10000r/min条件下离心15min得到棕色沉淀，于60℃下真空干燥12h，即得到卟啉基MOFs模拟酶。

S2：环氧官能化卟啉基MOFs的制备：

将1g曲拉通X-100、2mg MOFs、2mL正己醇分散于3mL环己烷中，搅拌15min后，加入2mL氨水和3mL正硅酸甲酯。在4℃下反应6h后，加入5mL丙酮混匀并离心。分别用N,N-二甲基甲酰胺和乙醇清洗后，向其中加入2mL硅烷偶联剂KH-560溶液(5.0％，v/v)并在4℃下继续反应6h。将产物分别用甲苯和乙醇离心清洗3次后，即可得到环氧官能化卟啉基MOFs。

S3：信号探针的制备：

将5μL 10mM三-(2-甲酰乙基)磷盐酸盐加入到50μL DNA1中，使DNA1的双硫键打开。将活化后的DNA1与MOF分散液混合，在室温条件下培养36h后，用Tris-HCl缓冲溶液在12000r/min下离心10min即可得到MOF-DNA1信号探针。

本发明还提供一种电化学DNA传感检测氯氰菊酯的方法，步骤为：

S1：配制浓度为0.10mg/mL的信号探针溶液；

S2：配制一系列浓度的氯氰菊酯标准溶液，浓度分别为0、10^-12、10^-11、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5M；

S3：利用粒径为0.3μm和0.05μm的氧化铝粉末分别对玻碳电极表面进行抛光打磨，并用丙酮、稀硝酸、氢氧化钠溶液、去离子水依次对电极超声清洗。通过多电位阶跃法在电极表面修饰纳米金膜，扫描电位为+1.055～-0.045V；在传感界面滴涂5μL DNA2，并于室温下反应6h，从而制备DNA传感器。将该传感器浸入不同浓度氯氰菊酯溶液中，室温下孵育30min。将电极取出并清洗后，在其表面滴涂5μL MOF-DNA1信号探针并反应1h，使MOFs模拟酶固定在电极上。将得到的修饰电极浸入羟胺溶液中，进行示差脉冲伏安扫描(图3A)，扫描电位为+0.5～-0.1V。溶液中氯氰菊酯的浓度越大，固定在传感界面的MOFs就越多，故可将MOFs模拟酶催化羟胺产生的响应电流信号用于氯氰菊酯的定量检测；

S4：记录传感器检测氯氰菊酯标准溶液产生的响应电流，根据氯氰菊酯浓度和相对应的电流信号(I)之间的关系建立检测氯氰菊酯的标准曲线(图3B),标准曲线的线性方程为y＝3.24x+36.75(R²＝0.9974)。由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地检测氯氰菊酯的含量；

S5：样品中氯氰菊酯的定量检测：

将DNA2修饰的玻碳电极浸入待测蔬菜汁中，参照S3，得到MOFs模拟酶催化羟胺产生的响应电流为8.96μA，计算得到待测蔬菜汁浓度Q为(Q＝10^{(8.96-36.75)/3.24})2.65×10^-9M，由此实现了待测样品中氯氰菊酯的定量检测。通过与标准ICP-MS相比，本发明的检测结果的RSD为6.3％，且与标准方法结果相近，相对误差RE为5.1％。

综上所述，本发明采用的是尾端带有吡啶基的铁卟啉，选用水热结晶的微波辅助水热合成法，设计一种稳定性好、催化活性高的卟啉基MOFs模拟酶，能够克服传统生物酶的提取难度大、易失活、稳定性差等缺点；充分发挥了铁卟啉尾端吡啶基团对专一识别禁限用农药DNA的亲和力，显著提升了信号探针的稳定性和传感分析的准确度；克服了传统农药残留检测方法操作繁琐、耗时长、难以实时在线检测的不足；利用该MOFs构建的电化学适体传感器实现了果蔬汁中禁限用农药的灵敏、准确、快速检测，为监控果蔬汁中农药污染，进而保障其品质安全提供了新的方法。

Claims (9)

1.一种环氧官能化卟啉基MOFs检测信号探针制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：卟啉基MOFs模拟酶的制备：将四氯化锆和尾端带有吡啶基的铁卟啉(Fe(III)PyBPTPPC)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，再将乙酸加入到上述溶液中超声均匀，并快速转移到反应釜中进行加热，通过水热结晶的微波辅助水热合成法制得卟啉基MOFs；

S2：环氧官能化卟啉基MOFs的制备：将卟啉基MOFs、曲拉通X-100、正己醇加入到环己烷溶液中，室温搅拌后，缓慢加入氨水和正硅酸甲酯进行反应，得到反应液；加入丙酮混匀、离心后，分别用N,N-二甲基甲酰胺和乙醇清洗，得到二氧化硅包覆的卟啉基MOFs；然后，将该材料加入到硅烷偶联剂KH-560溶液中，在轻微摇动下反应；将产物分别用甲苯、乙醇离心清洗后，即可得到环氧官能化卟啉基MOFs模拟酶；

S3：信号探针的制备：将环氧官能化卟啉基MOFs模拟酶与DNA1序列在室温条件下培养，反应后用Tris-HCl缓冲溶液离心、清洗，即可得到MOF-DNA1信号探针。

2.一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将工作电极清洗后，利用多电位阶跃法在其表面修饰一层均匀的纳米金膜，用于固定末端连有巯基的DNA2，从而制备电化学DNA传感器；

S2：配制一系列浓度的禁限用农药标准溶液，浓度分别为Q₁、Q₂、Q₃、……、Q_n-1、Q_n，共n个浓度梯度，n为正整数；

S3：将S1制备的电化学DNA传感器浸入S2制备的禁限用农药标准溶液中；由于禁限用农药对DNA2的酶切作用，使得DNA2发生断裂；通过DNA2残基序列与DNA1的特异识别作用，将MOF-DNA1信号探针固定于传感界面；

S4：记录S3信号探针中卟啉基MOFs模拟酶催化底物产生的响应电流；根据禁限用农药浓度和相对应的催化电流之间的关系建立检测禁限用农药的标准曲线，标准曲线的方程为y＝ax+b，x代表禁限用农药浓度的对数，y代表催化电流增加值，a和b分别为方程的系数和常数项；

S5：果蔬汁中禁限用农药的定量检测：参考S4建立的标准曲线，得到待测样品中禁限用农药的浓度Q＝(y-b)/a，由此实现果蔬汁中禁限用农药的定量检测。

3.根据权利要求2所述一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，所述S1中反应的条件为温度110～130℃，时间18～36h。

4.根据权利要求2所述一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，所述S1中氯化锆用量为4～9mg、铁卟啉用量为3～6mg。

5.根据权利要求2所述一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，所述S1中溶剂N,N-二甲基甲酰胺和乙酸的体积比为2～10：0.2～1。

6.根据权利要求2所述一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，所述S2中正己醇和环己烷的体积比为0.5～2：1～3；氨水、正硅酸甲酯和丙酮的体积比为0.5～2：1～3：3～5。

7.根据权利要求2所述一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，所述S3中反应的条件为室温，时间12～36h；Tris-HCl缓冲溶液pH为7.0，浓度为10mM。

8.根据权利要求2所述一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，所述S1中多电位阶跃法的扫描电位为+1.055～-0.045V；信号探针的用量为5μL。

9.根据权利要求2所述一种基于卟啉基MOFs模拟酶检测禁限用农药的电化学传感分析方法，其特征在于，所述S2中一系列浓度的禁限用农药标准溶液浓度为0～1×10^-5M。

Images