CN115718197A - 一种检测游离lgE含量的试剂盒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及体外检测的技术领域，具体公开了一种检测游离lgE含量的试剂盒及其应用。该试剂盒包括捕获试剂、结合试剂、磁分离试剂；所述捕获试剂中包括FcεＲI蛋白和防腐剂；所述防腐剂包括苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖。以及该试剂盒在检测游离lgE含量方面的应用。本申请提供的试剂盒能够有效提高试剂盒的稳定性以及对游离lgE含量检测结果的准确性。
Description
技术领域
本申请涉及体外检测的技术领域，更具体地说，涉及一种检测游离lgE含量的试剂盒及其应用。
背景技术
奥马珠单抗是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，其可以选择性地与游离的、循环的人免疫球蛋白(lgE)结合，从而抑制lgE与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的lgE受体结合，使得过敏性介质的释放减少。因此，奥马珠单抗可以作为抗lgE靶向生物制剂。奥马珠单抗广泛应用于治疗过敏性哮喘、过敏性鼻炎和慢性自发性荨麻疹。
临床研究数据表明，血清中游离lgE水平与哮喘的临床表现具有高度的相关性。奥马珠单抗给药后，血清中游离lgE水平降低，哮喘的临床表现(总哮喘症状评分、早晨呼气峰流量以及急救药物使用量等)有所缓解，且当游离lgE浓度上升回归至基线浓度，哮喘的临床表现也再次出现。因此，可以认为奥马珠单抗给药后，血清中游离lgE浓度的降低可以作为奥马珠单抗的药效学替代标志物。
目前，临床研究和实验室均未有游离lgE的检测。因此，提供一种检测血清中游离IgE含量的方法尤为重要。
发明内容
为了提高试剂盒的稳定性以及对游离lgE含量检测结果的准确性，本申请提供一种检测游离lgE含量的试剂盒及其应用。
第一方面，本申请提供一种检测游离lgE含量的试剂盒，采用如下的技术方案：
一种检测游离lgE含量的试剂盒，所述试剂盒包括捕获试剂、结合试剂、磁分离试剂；所述捕获试剂中包括FcεRI蛋白和防腐剂；所述防腐剂包括苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖。
本申请提供的检测游离lgE含量的试剂盒中，捕获试剂包括FcεRI蛋白和防腐剂。FcεRI蛋白是lgE的高亲和力受体，能够与lgE相互识别和特异性结合。通过FcεRI蛋白与lgE的特异性结合，从而实现对游离lgE含量的检测。本申请通过在捕获试剂中加入苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为防腐剂，一方面，相对于试剂盒的捕获试剂中使用相关技术中的防腐剂，本申请提供的试剂盒的检测结果具有更好的稳定性。另一方面，利用本申请提供的试剂盒对待测样本进行检测，还可以降低获得的检测结果的相对偏差，从而提高检测结果的准确性。
苯甲酸钠是一种广谱抗微生物试剂，其通过细胞膜进入微生物细胞内，干扰微生物细胞膜的通透性，阻碍细胞膜对氨基酸的吸收，抑制微生物细胞内呼吸酶系的活性，从而起到防腐作用。单独使用苯甲酸钠作为防腐剂，能够起到防腐作用，故在一定程度上，能够提高试剂盒的稳定性。咔唑作为一种有机化合物，主要用于染料、化学试剂、炸药、杀虫剂、润滑剂等的制造。而单独在试剂盒的捕获试剂中加入咔唑，并不能起到防腐剂的作用，故不能提高试剂盒的稳定性。银杏叶多糖是从银杏中提取的一种重要的活性成分，由葡萄糖、半乳糖、果糖和鼠李糖组成，具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种活性作用。同样的，单独在试剂盒的捕获试剂中加入银杏叶多糖，并不能起到防腐剂的作用，也不能提高试剂盒的稳定性。然而，当在试剂盒的捕获试剂中加入三者时，不仅能够有效提高试剂盒的稳定性，具有较好的防腐作用。同时，还能够最大程度地降低利用该试剂盒对待测样本中游离lgE含量检测获得的检测结果的相对偏差，从而提高检测结果的准确性。
经过试验分析，利用上述试剂盒对待测样本进行检测时，相对于在试剂盒的捕获试剂中选择加入苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者中的任意一种或两种作为防腐剂，本申请选择在试剂盒的捕获试剂中加入苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为防腐剂，获得的检测结果具有较好的稳定性和准确性。因此，本申请选择在捕获试剂中加入苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为防腐剂，通过苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者之间的相互配合，从而提高试剂盒的稳定性，同时提高检测结果的准确性。
优选地，所述防腐剂包含以下重量份的组分：苯甲酸钠0.50-1.50份、咔唑0.10-0.50份和银杏叶多糖0.20-0.80份。
优选地，所述防腐剂包含以下重量份的组分：苯甲酸钠0.75-1.25份、咔唑0.25-0.45份和银杏叶多糖0.35-0.65份。
在一个具体的实施方案中，所述防腐剂中苯甲酸钠的重量份可以是0.50份、0.75份、1.00份、1.25份和1.50份。
在一些具体的实施方案中，所述防腐剂中苯甲酸钠的重量份可以是0.50-0.75份、0.50-1.00份、0.50-1.25份、0.75-1.00份、0.75-1.25份、0.75-1.50份、1.00-1.25份、1.00-1.50份、1.25-1.50份。
在一个具体的实施方案中，所述防腐剂中咔唑的重量份可以是0.10份、0.25份、0.35份、0.45份和0.50份。
在一些具体的实施方案中，所述防腐剂中咔唑的重量份可以是0.10-0.25份、0.10-0.35份、0.10-0.45份、0.25-0.35份、0.25-0.45份、0.25-0.50份、0.35-0.45份、0.35-0.50份、0.45-0.50份。
在一个具体的实施方案中，所述防腐剂中银杏叶多糖的重量份可以是0.20份、0.35份、0.50份、0.65份和0.80份。
在一些具体的实施方案中，所述防腐剂中银杏叶多糖的重量份可以是0.20-0.35份、0.20-0.50份、0.20-0.65份、0.35-0.50份、0.35-0.65份、0.35-0.80份、0.50-0.65份、0.50-0.80份、0.65-0.80份。
经过试验分析，本申请将防腐剂中苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖的添加比例控制在上述范围内，能够进一步有效提高试剂盒的稳定性，同时，也能够进一步提高利用该试剂盒对待测样本中游离lgE含量检测结果的准确性。
优选地，所述FcεRI蛋白和所述防腐剂的重量比为(0.50-1.50)：100。
优选地，所述FcεRI蛋白和所述防腐剂的重量比为(0.75-1.25)：100。
在一个具体的实施方案中，所述FcεRI蛋白和所述防腐剂的重量比可以是0.20：100、0.50：100、0.75：100、1.00：100、1.25：100、1.50：100、1.80：100。
在一些具体的实施方案中，所述FcεRI蛋白和所述防腐剂的重量比可以是(0.20-0.50)：100、(0.20-0.75)：100、(0.20-1.00)：100、(0.20-1.25)：100、(0.20-1.50)：100、(0.20-1.80)：100、(0.50-0.75)：100、(0.50-1.00)：100、(0.50-1.25)：100、(0.50-1.80)：100、(0.75-1.00)：100、(0.75-1.25)：100、(0.75-1.50)：100、(0.75-1.80)：100、(1.00-1.25)：100、(1.00-1.50)：100、(1.00-1.80)：100、(1.25-1.50)：100、(1.25-1.80)：100、(1.50-1.80)：100。
经过试验分析，本申请将捕获试剂中FcεRI蛋白和防腐剂的重量比控制在上述范围内，能够再进一步提高试剂盒的稳定性和利用该试剂盒对待测样本中游离lgE含量检测结果的准确性。
优选地，所述FcεRI蛋白包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加后的氨基酸序列。
经过试验分析发现，利用包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加后的氨基酸序列的FcεRI蛋白的捕获试剂进行待测样本中游离lgE含量的检测，能够更进一步提高试剂盒的稳定性，同时还能够进一步提高利用该试剂盒对待测样本中游离lgE含量检测结果的准确性。
优选地，所述捕获试剂中所述FcεRI蛋白的浓度为0.10-0.18ug/mL。
在一个具体的实施方案中，所述捕获试剂中所述FcεRI蛋白的浓度为0.10ug/mL、0.14ug/mL、0.18ug/mL。
在一些具体的实施方案中，所述捕获试剂中所述FcεRI蛋白的浓度为0.10-0.14ug/mL、0.10-0.18ug/mL、0.14-0.18ug/mL。
优选地，所述FcεRI蛋白需固定于固相载体上，固定方式为通过物理吸附、非共价键结合或化学结合将FcεRI蛋白直接固定于固相载体上。
第二方面，本申请提供一种上述检测游离lgE含量的试剂盒的使用方法，采用如下的技术方案：
一种上述检测游离lgE含量的试剂盒的使用方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
将所述捕获试剂和所述磁分离试剂混合，孵育，形成中间体1；
将待测样本稀释后与所述中间体1混合，孵育，形成中间体2；
将所述结合试剂与所述中间体2混合，孵育，形成固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物；
将所述固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物与反应底物混合，孵育，检测相对发光强度。
首先，将捕获试剂和磁分离试剂混合，利用捕获试剂中的生物素化FcεRI蛋白与磁分离试剂中的包被有链霉亲和素的荧光磁珠(固相载体)结合，从而形成中间体1(固相载体-抗原复合物)。然后，将稀释后的待测样本与中间体1混合，待测样本中游离的lgE被生物素化FcεRI蛋白所捕获，从而使得测样本中游离的lgE与中间体1结合，从而形成中间体2(固相载体-抗原-IgE复合物)。接着，将结合试剂与中间体2混合，结合试剂中的酶标二抗与结合在中间体2上的lgE结合，从而形成固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物。最后，将发光底物与固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物混合，酶标二抗上的酶催化发光底物发射光子，利用仪器检测发射出来的光子，测试结果以相对发光强度表示。测试获得的相对发光强度与待测样本中游离lgE的含量成正比。利用上述方法检测标准品的相对发光强度，以标准品中lgE浓度为横坐标，以测得的相对发光强度为纵坐标，制作标准曲线。将利用上述方法检测待测样本获得的相对发光强度代入标准曲线，即可获得待测样本中游离lgE的含量。
第三方面，本申请提供一种上述检测游离lgE含量的试剂盒的应用，采用如下的技术方案：
一种上述检测游离lgE含量的试剂盒的应用，所述试剂盒在检测血清中游离lgE含量中的应用。
本申请提供的检测游离lgE含量的试剂盒，用于体外定量检测人血清中游离IgE的含量。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请提供的试剂盒中，捕获试剂包括FcεRI蛋白和防腐剂。且以苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为防腐剂。相对于在试剂盒的捕获试剂中选择加入苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者中的任意一种或两种作为防腐剂，本申请选择在试剂盒的捕获试剂中加入苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为防腐剂，对于低值参考品的检测结果的相对偏差小于3％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％。因此，利用本申请提供的试剂盒对待测样本中游离lgE进行检测，获得的检测结果具有较好的稳定性和准确性。
2、本申请进一步优化了防腐剂中各组分的添加量，将苯甲酸钠的添加量控制在0.50-1.50份的范围内，咔唑的添加量控制在0.10-0.50份的范围内，银杏叶多糖的添加量控制在0.20-0.80份的范围内，从而进一步提高试剂盒的稳定性和对待测样本中游离lgE含量检测结果的准确性。
3、本申请将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.50-1.50)：100的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近1％，说明将两者的重量比控制在(0.50-1.50)：100的范围内，能够更一步提高试剂盒的稳定性和对待测样本中游离lgE含量检测结果的准确性。
4、本申请选择包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近0.6％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近0.2％，获得的检测结果的相对偏差更低，说明本申请提供的试剂盒选择包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，更能够提高试剂盒的稳定性和对待测样本中游离lgE含量检测结果的准确性。
附图说明
图1是利用本申请提供的试剂盒制备的标准曲线。
具体实施方式
本申请提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。该试剂盒能够检测的待测样本可以是血清或血浆，也可以是包含游离lgE的其他待测样本。
该试剂盒包括捕获试剂、结合试剂、磁分离试剂。其中，捕获试剂中包括FcεRI蛋白和防腐剂。防腐剂包括苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖。FcεRI蛋白是lgE的高亲和力受体，能够与lgE相互识别和特异性结合。上述捕获试剂中，FcεRI蛋白包含如SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列。
进一步地，防腐剂包含以下重量份的组分：苯甲酸钠0.50-1.50份、咔唑0.10-0.50份和银杏叶多糖0.20-0.80份。
再进一步地，防腐剂包含以下重量份的组分：苯甲酸钠0.75-1.25份、咔唑0.25-0.45份和银杏叶多糖0.35-0.65份。
进一步地，FcεRI蛋白和防腐剂的重量比为(0.50-1.50)：100。
再进一步地，FcεRI蛋白和防腐剂的重量比为(0.75-1.25)：100。
进一步地，所述FcεRI蛋白包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加后的氨基酸序列。
具体的，所述试剂盒包括以下试剂：
(1)捕获试剂：包括FcεRI蛋白，含牛血清白蛋白(BSA)和防腐剂的Tris缓冲液(0.1M，pH 7.4)。
优选地，捕获试剂中FcεRI蛋白的浓度为0.10-0.18ug/mL。
优选地，捕获试剂中BSA的浓度为10mg/mL。
优选地，FcεRI蛋白为酶标记、化学发光标记或生物素化标记的FcεRI蛋白。
在一个具体的实施方案中，FcεRI蛋白为生物素化FcεRI蛋白。
优选地，FcεRI蛋白包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列。
优选地，FcεRI蛋白包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加后的氨基酸序列。
优选地，FcεRI蛋白需固定于固相载体上。
在一个具体的实施方案中，FcεRI蛋白固定于固相载体的固定方式为通过物理吸附、非共价键结合或化学结合将FcεRI蛋白直接固定于固相载体上。
(2)结合试剂：包括辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗人IgE的IgG(酶标二抗)，含牛血清白蛋白(BSA)和0.1％(v/v)ProClin 950作为防腐剂的MES缓冲液(0.1M，pH 6.5)。
优选地，结合试剂中酶标二抗的浓度为0.2ug/mL。
优选地，结合试剂中BSA的浓度为1％。
其中，ProClin 950可替换为NaN3。
(3)标准品：含牛血清白蛋白(BSA)和0.1％(v/v)ProClin 950作为防腐剂的Tirs缓冲液(0.05M，pH 7.4)，分别添加了不同浓度游离IgE抗体。
优选地，标准品中BSA的浓度为1％。
其中，ProClin 950可替换为NaN3。
(4)磁分离试剂：包被有链霉亲和素的荧光磁珠，含牛血清白蛋白(BSA)和0.1％(v/v)ProClin 950作为防腐剂的Tris缓冲液(0.1M，pH7.4)。
优选地，磁分离试剂中包被有链霉亲和素的荧光磁珠的浓度为1mg/mL。
优选地，磁分离试剂中BSA的浓度为1％。
其中，ProClin 950可替换为NaN3。
(5)稀释液：人血清白蛋白(HSB)，0.01M磷酸盐缓冲盐溶液，含0.1％(v/v)ProClin950作为防腐剂。
优选地，所述稀释液中人血清白蛋白的浓度为1％。
其中，ProClin 950可替换为NaN3。
(6)底物A：过氧化物、含0.1％(v/v)ProClin 950作为防腐剂。
优选地，过氧化物可以是过氧化氢。
优选地，底物A中过氧化氢的浓度为为2mol/L。
其中，ProClin 950可替换为NaN3。
(7)底物B：鲁米诺、含0.1％(v/v)ProClin 950作为防腐剂。
优选地，所述底物B中鲁米诺的浓度为0.63mol/L。
其中，ProClin 950可替换为NaN3。
(8)清洗液：磷酸钠，0.9％NaCl，0.05％Tween-20，含0.1％(v/v)ProClin 950作为防腐剂。
优选地，清洗液中磷酸钠的浓度为10mM，pH 7.4。
其中，ProClin 950可替换为NaN3。
本申请还提供了上述试剂盒在检测血清中游离lgE含量中的应用。
上述检测游离lgE含量的试剂盒的使用方法，具体包括以下步骤：
(1)将捕获试剂和磁分离试剂混合，孵育，形成中间体1。
利用磁分离方法和清洗液洗掉未结合的物质。
(2)将待测样本稀释后与中间体1混合，孵育，形成中间体2。
利用磁分离方法和清洗液洗掉未结合的物质。
(3)将结合试剂与中间体2混合，孵育，形成固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物。
利用磁分离方法和清洗液洗掉未结合的物质。
(4)将反应底物与固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物混合，孵育，检测相对发光强度(RLU)，并根据标准曲线，获得待测样本中lgE的含量。
以下结合实施例1-21、对比例1-16以及性能检测试验对本申请作进一步详细说明。
实施例
实施例1-13
实施例1-13分别提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其不同之处在于：上述试剂盒的捕获试剂中，防腐剂中各组分的添加量，具体如表1所示。待测样本为血清。
上述检测游离lgE含量的试剂盒包括捕获试剂、结合试剂、磁分离试剂、发光底物、稀释液和清洗液。发光底物包括底物A和底物B。其中，捕获试剂包括FcεRI蛋白和防腐剂。FcεRI蛋白为市售FcεRI蛋白。该市售FcεRI蛋白包含如SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列。
防腐剂中包括苯丙酸钠、咔唑和银杏叶多糖。其中，苯丙酸钠和咔唑可通过市售获得。银杏叶多糖的制备方法如下：
(1)将100g银杏叶在50℃的恒温干燥箱中干燥至恒重，粉碎至40目，在1500mL碳酸氢钠溶液中，于50℃、200W超声提取15min，过滤得到滤液和滤渣，将滤渣中加入1000mL碳酸氢钠溶液，于50℃、200W超声提取15min，合并滤液，减压浓缩合并滤液的体积至1/3，得到银杏叶碱水液；其中，碳酸氢钠溶液的制备方法为在10kg中加入250g碳酸氢钠，搅拌混合均匀，即得。
(2)将上述银杏叶碱水液与8倍量的60％乙醇溶液混合，用盐酸调溶液pH至中性后，在75℃下提取1.5h，过滤得到滤液和滤渣，用1/30滤液体积的石油醚萃取滤液，55℃减压浓缩，在70℃的恒温干燥箱中干燥至恒重，即得银杏叶提取物。
上述试剂盒中的试剂具体如下：
(1)捕获试剂：0.14ug/mL生物素化FcεRI蛋白，含10mg/mL BSA和14ug/mL防腐剂的Tris缓冲液(0.1M，pH 7.4)。
(2)结合试剂：0.2ug/mL酶标二抗，含1％BSA和0.1％(v/v)ProClin 950的MES缓冲液(0.1M，pH 6.5)。
(3)磁分离试剂：1mg/mL包被有链霉亲和素的荧光磁珠，含1％BSA和0.1％(v/v)ProClin 950的Tris缓冲液(0.1M，pH7.4)。
(4)稀释液：1％HSB，含0.1％(v/v)ProClin 950的磷酸盐缓冲盐溶液(0.01M)。
(5)底物A：2mol/L的过氧化氢，含0.1％(v/v)ProClin 950。
(6)底物B：0.63mol/L的鲁米诺，含0.1％(v/v)ProClin 950。
(7)清洗液：10mM的磷酸钠(pH 7.4)。
上述试剂盒的使用方法，具体包括以下步骤：
(1)将40μL捕获试剂(生物素化FcεRI蛋白)和10μL磁分离试剂(包被有链霉亲和素的荧光磁珠)混合，37℃下孵育3min，形成中间体1；中间体1即固相载体-抗原复合物；
在反应容器侧壁施加磁场，使得溶液中的中间体1吸附到反应容器的侧壁上，去除溶剂；
加入200μL清洗液，清洗一次，除去清洗液；
去除反应容器侧壁施加的磁场。
(2)将56μL稀释液(磷酸盐缓冲盐溶液)加入4μL待测样本中，将待测样本稀释15倍，然后将稀释后的溶液60μL加入反应容器中，与中间体1混合，37℃下孵育13min，加入150μL清洗液中止反应，形成中间体2；中间体2即固相载体-抗原-IgE复合物；
在反应容器侧壁施加磁场，使得溶液中的中间体2吸附到反应容器的侧壁上，去除溶剂；
加入200μL清洗液，清洗一次，除去清洗液；重复清洗一次；
去除反应容器侧壁施加的磁场。
(3)向反应容器中加入结合试剂(酶标二抗)，与中间体2混合，37℃下孵育13min，加入150μL清洗液中止反应，形成固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物；
在反应容器侧壁施加磁场，使得溶液中的复合物吸附到反应容器的侧壁上，去除溶剂；
加入200μL清洗液，清洗一次，除去清洗液；重复清洗两次；
去除反应容器侧壁施加的磁场。
(4)向反应容器中加入50μL发光底物(底物A与底物B的混合物，混合的体积比为1：1)，与固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物混合，37℃下孵育3.5min，利用酶标仪测量溶液的相对发光强度(RLU)，再根据实施例23提供的标准曲线，计算待测样本中游离IgE的浓度。
表1实施例1-19提供的试剂盒—捕获试剂中防腐剂与FcεRI蛋白的添加情况
实施例14-19
实施例14-19分别提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：上述试剂盒的捕获试剂中，FcεRI蛋白与防腐剂的重量比，具体如表1所示。其余均与实施例3相同。
实施例20
本实施例提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：上述试剂盒的捕获试剂中的FcεRI蛋白，FcεRI蛋白包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列，该序列通过委托第三方公司合成。其余均与实施例3相同。
实施例21
本实施例提供了一种利用检测游离lgE含量的试剂盒制备的标准曲线。该实施例与实施例3的不同之处在于，待测样本为不同浓度的标准品。其余均与实施例3相同。
其中，标准品包括含1％BSA和0.1％(v/v)ProClin 950的Tirs缓冲液(0.05M，pH7.4)，添加的游离IgE抗体的浓度如表2所示。
检测获得不同浓度标准品的相对发光强度(RLU)，检测结果如表2所示。以标准品中游离lgE的浓度为横坐标，以测得的相对发光强度为纵坐标，制备标准曲线。制得的标准曲线如图1所示。
表2标准品中游离lgE的浓度及测得的相对发光强度
| 序号 | 标准品中游离lgE的浓度(u/mL) | 测得的相对发光强度(RLU) |
| 1 | 0.07 | 6947 |
| 2 | 0.08 | 7972 |
| 3 | 0.32 | 26555 |
| 4 | 0.37 | 30740 |
| 5 | 0.70 | 57855 |
| 6 | 0.71 | 58475 |
| 7 | 3.46 | 291314 |
| 8 | 3.53 | 297481 |
| 9 | 16.99 | 1410439 |
| 10 | 18.02 | 1490657 |
| 11 | 94.22 | 5626765 |
| 12 | 106.07 | 6046636 |
结合表2和图1可知，实施例21制备的标准曲线符合Y＝A×X2+B×X+C的方程。其中，A为285.16，B为86980，C为313.72，R2＝0.9999。说明本申请提供的标准曲线具有较好的拟合度。
对比例1-6
对比例1-6分别提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：上述试剂盒的捕获试剂中，防腐剂中各组分的添加量，具体如表3所示。其余均与实施例3相同。
表3对比例1-6提供的试剂盒—捕获试剂中防腐剂与FcεRI蛋白的添加情况
对比例7-12
对比例7-12分别提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：上述试剂盒的捕获试剂中，防腐剂中各组分的添加量，具体如表4所示。其余均与实施例3相同。
表4对比例7-12提供的试剂盒—捕获试剂中防腐剂与FcεRI蛋白的添加情况
对比例13
本对比例提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：本对比例中，捕获试剂中的防腐剂为1％Proclin 950。其余均与实施例3相同。
对比例14
本对比例提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：本对比例中，捕获试剂中的防腐剂为1％NaN3。其余均与实施例3相同。
对比例15
本对比例提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：本对比例中，捕获试剂中的防腐剂为1％Proclin 950，结合试剂中的防腐剂与实施例3中捕获试剂所用的防腐剂相同。其余均与实施例3相同。
对比例16
本对比例提供了一种检测游离lgE含量的试剂盒。其与实施例3的不同之处在于：本对比例中，捕获试剂中的防腐剂为1％Proclin 950，磁分离试剂中的防腐剂与实施例3中捕获试剂所用的防腐剂相同。其余均与实施例3相同。
性能检测试验
一、试剂盒的准确性检测
利用实施例1-20以及对比例1-16提供的试剂盒对已知lgE抗体含量的参考品进行检测，试验时间为试剂盒制备完成后的15天内。通过计算检测结果的相对偏差，来获悉试剂盒的准确性。检测结果具体如表5所示。
本试验中，参考品包括一个低值品参考品和一个高值参考品，低值参考品中lgE浓度为35.50u/mL，高值参考品中lgE浓度为175.50u/mL。
表5试剂盒的准确性检测结果
如表5所示，利用本申请提供的试剂盒对包含游离lgE抗体的参考品或待测样品进行检测，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％。基于上述检测结果可知，利用本申请通过的试剂盒对包含游离lgE抗体的待测样本进行检测，能够有效提高测得待测样本中游离lgE抗体含量的准确性。
通过对比例7-12的检测结果可知，使用咔唑和银杏叶多糖中的任一种或同时使用两种作为捕获试剂中的防腐剂时，获得的检测结果的相对偏差大于10％。而行业内要求相对偏差值小于或等于10％。由此可知，利用咔唑和银杏叶多糖中的任一种或两种作为捕获试剂中的防腐剂，检测结果的准确性较低。当单独使用苯甲酸钠、同时使用苯甲酸钠与咔唑或同时使用苯甲酸钠与银杏叶多糖时，获得的检测结果的相对偏差在8％左右。且单独使用苯甲酸钠与同时使用苯甲酸钠与咔唑或同时使用苯甲酸钠与银杏叶多糖，获得的检测结果的相对偏差之间无明显差别。说明使用苯甲酸钠虽然能够使得检测结果的相对偏差在10％以内，但相对偏差较大，检测结果的准确性依旧较低。且苯甲酸钠与咔唑或银杏叶多糖一起使用，并不能提高检测结果的准确性。
通过对比实施例3与对比例1-6的检测结果可知，同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖作为捕获试剂的防腐剂时，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差为0.7％，说明检测结果的准确性较高。而使用三者中的任意一种或两种作为捕获试剂中的防腐剂时，获得的检测结果的相对偏差在10％左右或大于10％，说明使用三者中的任意一种或两种作为捕获试剂中的防腐剂时，检测结果的准确性较低。因此，本申请选择同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖作为捕获试剂的防腐剂，从而提高检测结果的准确性。
通过对比实施例3与对比例13-16的检测结果可知，同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖作为捕获试剂的防腐剂比相关技术中利用NaN3或Proclin 950作为捕获试剂的防腐剂，更能够降低检测结果的相对偏差，从而提高检测结果的准确性。同时，相对于使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为结合试剂中的防腐剂或磁分离试剂中的防腐剂，本申请中使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为捕获试剂的防腐剂，获得的检测结果的相对偏差更低，从而能够有效提高检测结果的准确性。
通过对比实施例1-5的检测结果可知，同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖时，本申请选择将苯甲酸钠的添加量控制在0.50-1.50份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％，说明将苯甲酸钠的添加量控制在0.50-1.50份的范围内，能够有效提高检测结果的准确性。进一步地，本申请选择将苯甲酸钠的添加量控制在0.75-1.25份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1％，说明将苯甲酸钠的添加量控制在0.75-1.25份的范围内，能够进一步提高检测结果的准确性。
通过对比实施例3、实施例6-9的检测结果可知，同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖时，本申请选择将咔唑的添加量控制在0.10-0.50份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％，说明将咔唑的添加量控制在0.10-0.50份的范围内，能够有效提高检测结果的准确性。进一步地，本申请选择将咔唑的添加量控制在0.25-0.45份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1％，说明将咔唑的添加量控制在0.25-0.45份的范围内，能够再进一步提高检测结果的准确性。
通过对比实施例3、实施例10-13的检测结果可知，同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖时，本申请选择将银杏叶多糖的添加量控制在0.20-0.80份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％，说明将银杏叶多糖的添加量控制在0.20-0.80份的范围内，能够有效提高检测结果的准确性。进一步地，本申请选择将银杏叶多糖的添加量控制在0.35-0.65份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1％，说明将银杏叶多糖的添加量控制在0.35-0.65份的范围内，能够更进一步提高检测结果的准确性。
因此，本申请同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖作为捕获试剂的防腐剂，且将苯甲酸钠的添加量控制在0.50-1.50份的范围内，咔唑的添加量控制在0.10-0.50份的范围内，银杏叶多糖的添加量控制在0.20-0.80份的范围内，从而提高对待测样本中游离lgE含量检测结果的准确性。
通过对比实施例3、实施例14-19的检测结果可知，本申请进一步限定了捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比。本申请将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.20-1.80)：100的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于2％，说明将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.20-1.80)：100的范围内，获得的检测结果相对准确。进一步地，将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.50-1.50)：100的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近1％，说明将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.50-1.50)：100的范围内，能够有效提高检测结果的准确性。再进一步地，将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.75-1.25)：100的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近1.7％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近1％，说明将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.75-1.25)：100的范围内，能够进一步提高检测结果的准确性。
通过对比实施例3、实施例20的检测结果可知，本申请通过选择不同的FcεRI蛋白来提高检测结果的准确性。由检测结果可知，相对于包含如SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，选择包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近0.6％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近0.2％，获得的检测结果的相对偏差更低，说明本申请提供的试剂盒选择包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，更能够提高检测检测的准确性。
综上所述，本申请提供的试剂盒选择苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖三者的组合作为捕获试剂的防腐剂，从而提高检测结果的准确性。并进一步对三者的配比进行了优化，从而进一步提高了检测结果的准确性。此外，还对捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比以及FcεRI蛋白的类型进行了筛选，从而更进一步提高了检测结果的准确性。
二、试剂盒的重复性检测
利用实施例3提供的试剂盒和对比例13提供的试剂盒对已知lgE抗体含量的参考品进行检测，同一批次的10个参考品，每个参考品检测一次，通过计算检测结果的相对偏差，来获悉试剂盒的重复性。检测结果具体如表6所示。
本试验中，参考品包括一个低值品参考品和一个高值参考品，低值参考品中lgE浓度为35.50u/mL，高值参考品中lgE浓度为175.50u/mL。
上述试验过程为试剂盒制备完成后的15d内。
表6试剂盒的重复性检测结果
由表6可知，利用本申请实施例3提供的试剂盒对包含游离lgE抗体的参考品或待测样品进行检测，对低值参考品的检测结果显示相对偏差在1.0-1.37％的范围内，对高值参考品的检测结果显示相对偏差接近0.7％。而利用对比例13提供的试剂盒对包含游离lgE抗体的参考品或待测样品进行检测，对低值参考品的检测结果显示相对偏差大于5.0％，且最高可达到9.46％，对高值参考品的检测结果显示相对偏差大于4％，且最高可达到5.67％。基于上述检测结果可知，本申请提供的试剂盒具有较好的重复性，且利用本申请通过的试剂盒对包含游离lgE抗体的待测样本进行检测，检测结果的准确性较好。
三、试剂盒的稳定性检测
利用实施例1-20以及对比例1、4-5、7、10-11、13-16提供的试剂盒对已知lgE抗体含量的参考品进行检测，试验时间为试剂盒制备完成后的第24个月内(2-8℃密封储存)。通过计算检测结果的相对偏差，来获悉试剂盒的稳定性。检测结果具体如表7所示。
本试验中，参考品包括一个低值品参考品和一个高值参考品，低值参考品中lgE浓度为35.50u/mL，高值参考品中lgE浓度为175.50u/mL。
表7试剂盒的稳定性检测结果
经过“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，使用咔唑和银杏叶多糖中的任一种或同时使用两种作为捕获试剂中的防腐剂时，获得的检测结果的相对偏差大于10％。而行业内要求相对偏差值小于或等于10％。由此可知，利用咔唑和银杏叶多糖中的任一种或两种作为捕获试剂中的防腐剂，检测结果的准确性较低。故稳定性试验中不对相应的对比例进行检测。
通过对比例1、4-5、7、10-11、13-16的检测结果可知，无论是对于低值参考品，还是对于高值参考品，检测结果的相对偏差均大于10％。而行业内的要求是检测结果的相对偏差小于或等于10％。由此可知，上述对比例提供的试剂盒的稳定性较差，在试剂盒制备完成后的第24个月均不能再用于待测样本的检测。
通过对比实施例1-5的检测结果可知，同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖时，本申请选择将苯甲酸钠的添加量控制在0.50-1.50份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差最大值接近3％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于2％；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％。说明将苯甲酸钠的添加量控制在0.50-1.50份的范围内，在第24个月内，对参考品的检测结果的相对偏差仍能够维持在比较低的情况，与对比例13和对比例14相比，本申请提供的试剂盒具有较好的稳定性。
进一步地，本申请选择将苯甲酸钠的添加量控制在0.75-1.25份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1％，说明将苯甲酸钠的添加量控制在0.75-1.25份的范围内，能够进一步提高试剂盒的稳定性。
通过对比实施例3、实施例6-9的检测结果可知，本申请选择将咔唑的添加量控制在0.10-0.50份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于或等于2％，而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％，说明将咔唑的添加量控制在0.10-0.50份的范围内，在第24个月内，对参考品的检测结果的相对偏差仍能够维持在比较低的情况，与对比例13和对比例14相比，本申请提供的试剂盒具有较好的稳定性。
进一步地，本申请选择将咔唑的添加量控制在0.25-0.45份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％，而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1％，说明将咔唑的添加量控制在0.25-0.45份的范围内，能够进一步提高试剂盒的稳定性。
通过对比实施例3、实施例10-13的检测结果可知，本申请选择将银杏叶多糖的添加量控制在0.20-0.80份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于2％；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％，说明将银杏叶多糖的添加量控制在0.20-0.80份的范围内，在第24个月内，对参考品的检测结果的相对偏差仍能够维持在比较低的情况，与对比例13和对比例14相比，本申请提供的试剂盒具有较好的稳定性。
进一步地，本申请选择将银杏叶多糖的添加量控制在0.35-0.65份的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近2％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1.5％；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于1％，说明将银杏叶多糖的添加量控制在0.35-0.65份的范围内，能够进一步提高试剂盒的稳定性。
因此，本申请同时使用苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖作为捕获试剂的防腐剂，且将苯甲酸钠的添加量控制在0.50-1.50份的范围内，咔唑的添加量控制在0.10-0.50份的范围内，银杏叶多糖的添加量控制在0.20-0.80份的范围内，从而提高试剂盒的稳定性。
通过对比实施例3、实施例14-19的检测结果可知，本申请进一步限定了捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比。本申请将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.20-1.80)：100的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近4％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差小于2％，说明将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.20-1.80)：100的范围内，在第24个月内，对参考品的检测结果的相对偏差仍能够维持在比较低的情况，与对比例13和对比例14相比，本申请提供的试剂盒具有较好的稳定性。
进一步地，将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.50-1.50)：100的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于3％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近1.6％；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差小于2.5％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近1％，说明将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.50-1.50)：100的范围内，能够进一步提高试剂盒的稳定性。
再进一步地，将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.75-1.25)：100的范围内，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近2％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近1.5％；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近1.7％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近1％，说明将捕获试剂中FcεRI蛋白与防腐剂的重量比控制在(0.75-1.25)：100的范围内，能够更进一步提高试剂盒的稳定性。
通过对比实施例3、实施例20的检测结果可知，相对于包含如SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，选择包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近1％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近0.7％，获得的检测结果的相对偏差处于较低的水平；而根据“一、试剂盒的准确性检测”的检测结果可知，对低值参考品的检测结果的相对偏差接近0.6％，对高值参考品的检测结果的相对偏差接近0.2％，说明本申请提供的试剂盒选择包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列的FcεRI蛋白，更能够提高试剂盒的稳定性。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1.一种检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括捕获试剂、结合试剂、磁分离试剂；所述捕获试剂中包括FcεＲI蛋白和防腐剂；所述防腐剂包括苯甲酸钠、咔唑和银杏叶多糖。
2.根据权利要求1所述的检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述防腐剂包含以下重量份的组分：苯甲酸钠0.50-1.50份、咔唑0.10-0.50份和银杏叶多糖0.20-0.80份。
3.根据权利要求2所述的检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述防腐剂包含以下重量份的组分：苯甲酸钠0.75-1.25份、咔唑0.25-0.45份和银杏叶多糖0.35-0.65份。
4.根据权利要求1所述的检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述FcεＲI蛋白和所述防腐剂的重量比为（0.50-1.50）：100。
5.根据权利要求4所述的检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述FcεＲI蛋白和所述防腐剂的重量比为（0.75-1.25）：100。
6.根据权利要求1所述的检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述FcεＲI蛋白包含如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加后的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述捕获试剂中所述FcεＲI蛋白的浓度为0.10-0.18ug/mL。
8.根据权利要求1所述的检测游离lgE含量的试剂盒，其特征在于，所述FcεＲI蛋白需固定于固相载体上，固定方式为通过物理吸附、非共价键结合或化学结合将FcεＲI蛋白直接固定于固相载体上。
9.一种权利要求1-8中任一项所述的检测游离lgE含量的试剂盒的使用方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
将所述捕获试剂和所述磁分离试剂混合，孵育，形成中间体1；
将待测样本稀释后与所述中间体1混合，孵育，形成中间体2；
将所述结合试剂与所述中间体2混合，孵育，形成固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物；
将所述固相载体-抗原-IgE-二抗的复合物与反应底物混合，孵育，检测相对发光强度。
10.一种权利要求1-9中任一项所述的检测游离lgE含量的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒在检测血清中游离lgE含量中的应用。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100209947A1 (en) * | 2005-05-13 | 2010-08-19 | The Johns Hopkins University | Free human serum IgE immunoenzymetric assay and methods of use |
| US20220034883A1 (en) * | 2020-07-29 | 2022-02-03 | Sysmex Corporation | Method for measuring viral antigen in sample, antibody set, and reagent kit |
| WO2022032497A1 (zh) * | 2020-08-11 | 2022-02-17 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 用于检测冠状病毒中和抗体的试剂盒、方法 |
| CN114487433A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-05-13 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 一种游离IgE化学发光免疫检测试剂盒 |
| WO2022121151A1 (zh) * | 2020-12-10 | 2022-06-16 | 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒 |
-
2022
- 2022-09-03 CN CN202211074566.XA patent/CN115718197B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100209947A1 (en) * | 2005-05-13 | 2010-08-19 | The Johns Hopkins University | Free human serum IgE immunoenzymetric assay and methods of use |
| US20220034883A1 (en) * | 2020-07-29 | 2022-02-03 | Sysmex Corporation | Method for measuring viral antigen in sample, antibody set, and reagent kit |
| WO2022032497A1 (zh) * | 2020-08-11 | 2022-02-17 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 用于检测冠状病毒中和抗体的试剂盒、方法 |
| WO2022121151A1 (zh) * | 2020-12-10 | 2022-06-16 | 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒 |
| CN114487433A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-05-13 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 一种游离IgE化学发光免疫检测试剂盒 |
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| CN115718197B (zh) | 2023-07-04 |
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