CN115702009A - 用于放射性标记psma结合配体的方法及其试剂盒 - Google Patents

用于放射性标记psma结合配体的方法及其试剂盒 Download PDF

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CN115702009A CN202180040459.2A CN202180040459A CN115702009A CN 115702009 A CN115702009 A CN 115702009A CN 202180040459 A CN202180040459 A CN 202180040459A CN 115702009 A CN115702009 A CN 115702009A
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Abstract

本发明涉及用放射性同位素，优选地68Ga、67Ga或64Cu标记PSMA结合配体的方法，所述方法包括以下步骤：i.提供单个小瓶，其包含呈干燥形式的具有下式(I)的所述PSMA结合配体：(I)至少一种缓冲剂、氯化钠和抗辐射分解降解的稳定剂，ii.将所述放射性同位素的溶液添加到所述单个小瓶中，从而获得所述具有式(I)的PSMA结合配体与所述放射性同位素的溶液，iii.将在ii.中获得的溶液混合，并孵育持续足以获得用所述放射性同位素标记的所述PSMA结合配体的时间段，以及，iv.任选地，调节所述溶液的pH。

Description

用于放射性标记PSMA结合配体的方法及其试剂盒
技术领域
本披露涉及用于放射性标记PSMA结合配体的方法及其试剂盒。
背景技术
前列腺癌是美国和欧洲最普遍的癌症之一。特别是，转移性前列腺癌(mCRPC)与预后不良和生活质量下降有关。
最近，治疗前列腺癌的新开发流以基于PSMA配体的内放疗为代表，因为PSMA被认为是成像和疗法的合适靶点，这是由于它在原发癌病变和软组织/骨转移性疾病中过度表达。此外，PSMA表达似乎在该疾病最具侵袭性的去势抵抗性变体(这代表了医疗需求未得到满足的患者群体)中更高。(Marchal等人,Histol Histopathol[组织学和组织病理学],2004年7月；19(3):715-8；Mease等人,Curr Top Med Chem[药物化学的当前主题],2013,13(8):951-62)。
在许多靶向PSMA的小分子配体中，基于脲的低分子量药剂是研究最广泛的配体。这些药剂被证明适用于前列腺癌临床评估以及PRRT疗法(Kiess等人,Q J Nucl Med MolImaging[核医学与分子成像季刊],2015；59:241-68)。这些药剂中的一些以谷氨酸-脲-赖氨酸(GUL)作为靶向支架。按照在螯合剂和GUL部分之间附接接头的策略创建了一类分子。这种方法允许脲到达结合位点，同时将金属螯合部分保持在结合位点的外部。该策略在异种移植PSMA阳性肿瘤中取得成功，因为它表现出高摄取和保留以及快速的肾清除(Banerjee等人,J Med Chem[药物化学杂志],2013；56:6108-21)。还有研究表明，这类分子可以用68Ga标记，并将其用于通过PET成像检测前列腺癌病变(Eder等人Pharmaceuticals[药物]2014,7,779-796)。
专利申请US 2016/0256579A1报道了一种PSMA结合剂试剂盒。然而，尚未开发出用于用68Ga、67Ga或64Cu标记PSMA结合配体、从而获得用于人类患者前列腺癌肿瘤成像目的的标记的PSMA结合配体溶液的优化方法。特别地，需要一种快速、有效、稳健和安全的程序，该程序将提供高放射化学纯度的标记的PSMA结合配体，例如[68Ga]PSMA结合配体，用以在有需要的人类受试者中静脉内注射。
发明内容
本披露的一个第一方面涉及一种用放射性同位素，优选地68Ga、67Ga或64Cu标记PSMA结合配体的方法，所述方法包括以下步骤：
i.提供单个小瓶，其包含呈干燥形式的具有下式(I)的所述PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000021
至少一种缓冲剂、氯化钠和抗辐射分解降解的稳定剂，
ii.将所述放射性同位素的溶液添加到所述单个小瓶中，从而获得所述具有式(I)PSMA结合配体与所述放射性同位素的溶液，
iii.将在ii.中获得的溶液混合，并孵育持续足以获得用所述放射性同位素标记的所述PSMA结合配体的时间段，以及
iv.任选地，调节所述溶液的pH。
在另一个方面，本披露涉及包含通过所述方法可获得或获得的用放射性同位素标记的具有式(I)的PSMA结合配体的溶液，其用作可注射溶液，用于通过在需要的受试者中成像来体内检测肿瘤，优选地表达PSMA的肿瘤。
本披露的另一目的在于提供一种注射液用粉剂，其包含呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000031
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；和
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸。
优选地，所述注射液用粉剂包含以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure BDA0003980047260000032
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；以及
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg。
本披露进一步涉及用于实施所述方法的试剂盒，所述试剂盒包含
i.单个小瓶，其包含呈干燥形式的以下组分
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000041
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸；
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
本文披露的另一种试剂盒包含
i.单个小瓶，其具有优选地呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000042
ii.氯化钠；
iii.乙酸钠；
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸；以及
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
优选地，所述试剂盒可以包含单个小瓶，所述单个小瓶包含以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure BDA0003980047260000051
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg；以及
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
具体实施方式
一般而言，本披露涉及一种用放射性同位素，优选地68Ga、67Ga或64Cu标记PSMA结合配体的方法，所述方法包括以下步骤：
i.提供单个小瓶，其包含呈干燥形式的具有下式(I)的所述PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000052
至少一种缓冲剂、氯化钠和抗辐射分解降解的稳定剂，
ii.将所述放射性同位素的溶液添加到所述单个小瓶中，从而获得所述具有式(I)PSMA结合配体与所述放射性同位素的溶液，
iii.将在ii.中获得的溶液混合，并孵育持续足以获得用所述放射性同位素标记的所述PSMA结合配体的时间段，以及
iv.任选地，调节所述溶液的pH。
通过所披露的方法获得的放射性标记的PSMA结合配体优选是用作PET/CT、SPECT或PET/MRI成像的造影剂的放射性PSMA结合配体。在优选实施例中，67Ga用于SPECT成像，68Ga和64Cu用于PET成像，例如PET/CT或PET/MRI成像。
通过所披露的方法获得的放射性标记的PSMA结合配体是具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000061
其经适合用作PET/CT、SPECT或PET/MRI成像的造影剂的放射性同位素(优选地68Ga、67Ga或64铜)标记。
本披露的方法可以有利地提供放射性标记的化合物的优异放射化学纯度，例如用68Ga、67Ga或64Cu放射性标记的具有式(I)的PSMA结合配体，优选地在HPLC中测量的放射化学纯度是至少91％，并且任选地，游离68Ga3+、67Ga3+或64Cu2+(HPLC中)的百分比是3％或更少，和/或未络合的68Ga3+、67Ga3+或64Cu2+物质(ITLC中)的百分比是3％或更少。在实例中进一步详细描述了测量在HPLC或ITLC中的放射化学纯度和游离68Ga3+的测定法。
定义
术语“PSMA结合配体”和“PSMA配体”在本披露中可互换使用。它们是指能够与PSMA酶相互作用(优选结合)的分子。
短语“治疗(treatment of和treating)”包括疾病、病症或其症状的改善或停止。特别地，关于肿瘤的治疗，术语“治疗(treatment)”可以是指对肿瘤生长的抑制或肿瘤尺寸的减小。
与国际单位制一致，“MBq”是放射性的单位“兆贝克勒尔(megabecquerel)”的缩写。
如本文所用，“PET”代表正电子发射断层扫描。
如本文所用，“SPECT”代表单光子发射计算机断层扫描。
如本文所用，“MRI”代表磁共振成像。
如本文所用，“CT”代表计算机断层扫描。
如本文所用，术语化合物的“有效量”或“治疗有效量”是指将引起受试者的生物学或医学应答(优选地，改善症状、减轻病症、减缓或延迟疾病进展或预防疾病)的化合物的量。
如本文所用，术语“呈干燥形式”是指已干燥成粉剂的药物组合物，其水分含量低于约10重量％，通常低于约5重量％，优选地低于约3％。
如本文所用，术语“螯合剂”是指具有适于通过非共价键络合放射性同位素的官能团例如胺或羧基的分子。
如本文所用，术语“抗辐射分解降解的稳定剂”是指保护有机分子免受放射性分解降解的稳定剂，例如，当从放射性核素发射的γ射线裂解有机分子的原子与自由基之间形成的键时，那些自由基然后被稳定剂清除，这避免了自由基经历可能导致不希望的、潜在无效的或甚至有毒分子的任何其他化学反应。因此，那些稳定剂也被称为“游离自由基清除剂”或简称“自由基清除剂”。那些稳定剂的其他替代术语是“放射稳定性增强剂”、“辐射分解稳定剂”或简称“猝灭剂”。例如对氨基苯甲酸(PABA)、抗坏血酸、龙胆酸、焦亚硫酸钠、氨基苯甲酸、硫辛酸。
如本文所用，术语“放射化学纯度”是指以所陈述化学或生物形式存在的所陈述放射性核素的百分比。放射色谱法，例如HPLC法或即时薄层色谱法(iTLC)，是核药学中确定放射化学纯度最普遍接受的方法。
如果本文没有另外说明，“约”是指±20％，优选地±10％，更优选地±5％，甚至更优选地±2％，甚至更优选地±1％。术语“约”在本文中与“ca.”同义使用。
如本文所用，当提及乙酸钠的重量时，其意指乙酸钠的无水盐的重量。
步骤(i)提供包含呈干燥形式的所述PSMA结合配体的单个小瓶
PSMA结合配体
所述PSMA结合配体的实例披露于US 2015/110715或Clemens Kratochwil等人“PSMA-Targeted Radionuclide Therapy of Metastatic Castration-ResistantProstate Cancer with 177Lu-Labeled PSMA-617[用177Lu标记的PSMA-617的PSMA靶向放射性核素治疗转移性去势抗性前列腺癌]”,THE JOURNAL OF NUCLEAR MEDICINE[核医学杂志],第57卷,第8期,2016年8月中。
有利地，PSMA结合配体是以下分子，该分子包含a)具有2个氨基酸残基的脲，优选地是谷氨酸-脲-赖氨酸(GUL)部分，和b)可以与放射性同位素配位的螯合剂。
在特定实施例中，PSMA结合配体是具有式(I)的化合物：
Figure BDA0003980047260000081
包含所述PSMA结合配体的单个小瓶
在本发明中，放射性标记方法使用单个小瓶的试剂盒。在该实施例中，所述单个小瓶包含均呈干燥形式的所述PSMA结合配体、至少一种缓冲剂、氯化钠和抗辐射分解降解的稳定剂。
优选地，所述PSMA结合配体，更优选地具有式(I)的PSMA结合配体以5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg的量包含在所述单个小瓶中。
在优选的实施例中，所述至少一种缓冲剂是乙酸钠。优选地，所述乙酸钠以至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg的量存在。
优选地，所述氯化钠以至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg的量存在。
在优选的实施例中，所述抗辐射分解降解的稳定剂是龙胆酸。优选地，所述龙胆酸以至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地1mg的量存在。优选地，抗辐射分解降解的稳定剂基本上由龙胆酸组成。优选地，单个小瓶试剂盒不包含抗坏血酸或乙醇。
在特定实施例中，单个小瓶不含有任何选自由碳水化合物(例如单糖或二糖或多糖)和聚合剂组成的组的填充剂。优选地，单个小瓶不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。
在实例中给出了所述单个小瓶的优选实例。
单个小瓶优选地通过使用本领域熟知的方法冷冻干燥获得。因此，所述单个小瓶可以以冻干或喷雾干燥的形式提供。
如本文所用，缓冲剂是适于在孵育步骤(iii)获得从3.0至6.0之间的pH的缓冲剂。“pH为3.0至6.0的缓冲液”可有利地为乙酸钠缓冲液。
在特定实施例中，单个小瓶不含有任何选自由碳水化合物(例如单糖或二糖或多糖)和聚合剂组成的组的填充剂。特别地，单个小瓶不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物，并且缓冲剂是适于在孵育步骤(iii)获得从3.0至6.0之间的pH的缓冲液。
步骤(ii)将所述放射性同位素的溶液添加到所述单个小瓶中
用于放射性标记方法的放射性同位素包括适合在PET和SPECT成像中用作造影剂的那些，优选地选自由以下组成的组：
111In、133mIn、99mTc、94mTc、67Ga、66Ga、68Ga、52Fe、72As、97Ru、203Pb、62Cu、64Cu、86Y、51Cr、52mMn、157Gd、169Yb、172Tm、177mSn、89Zr、43Sc、44Sc、55Co。
根据优选实施例，放射性同位素是68Ga、67Ga或64Cu。在优选实施例中，67Ga用于SPECT成像，68Ga和64Cu用于PET成像，例如PET/CT或PET/MRI成像。
这类放射性同位素的金属离子能够与螯合剂的官能团(例如HBED-CC螯合剂的羧酸)形成非共价键。
在特定实施例中，所述放射性同位素的所述溶液是从以下步骤获得的洗出液：
i.通过放射性同位素发生器或回旋加速器从母体非放射性元素产生放射性同位素，
ii.通过在作为洗脱溶剂的HCl中洗脱将所述放射性同位素与所述母体非放射性元素分离，以及
iii.回收所述洗出液，
从而获得所述放射性同位素在HCl中的溶液。
在特定实施例中，含有所述放射性同位素的溶液是含有金属离子形式的放射性同位素(例如68Ga3+、67Ga3+或64Cu2+)的水溶液。含有所述放射性同位素的溶液可以是包含HCl中的68GaCl3、67GaCl3或64CuCl2的水溶液。
所述包含放射性同位素68Ga的溶液可以是优选地从以下步骤获得的洗出液：
i.通过发生器从母体68Ge产生68Ga，以及
ii.任选地，通过使68Ge/68Ga穿过合适的柱体将生成的68Ga与68Ge分离，并在HCl中洗脱68Ga，
从而获得所述放射性同位素在HCl中的溶液。
从68Ge/68Ga发生器产生68Ga的这类方法在本领域中是众所周知的并且例如在以下中描述：Martiniova L.等人“Gallium-68in Medical Imaging[医学成像中的镓68]”,CurrRadiopharm.[当代放射性药物],2016,9(3),第187-20页；Dash A,Chakravarty,“Radionuclide generators:the prospect of availing PET radiotracers to meetcurrent clinical needs and future research demands[放射性核素发生器：利用PET放射性示踪剂满足当前临床需求和未来研究需求的前景]”,R.Am.J.Nucl.Med.Mol.Imaging.[美国核医学分子成像杂志],2019年2月15日,9(1),第30-66页。
包含放射性同位素68Ga的所述溶液可以是优选从回旋加速器生产中获得的洗出液。此类生产例如描述于Am J Nucl Med Mol Imaging[美国核医学分子成像杂志]2014；4(4):303-310或B.J.B.Nelson等人/Nuclear Medicine and Biology[核医学与生物学]80-81(2020)第24-31页。
优选地，68Ga可以由回旋加速器产生，更优选地使用能量在8和18MeV之间(甚至更优选地在11和14MeV之间)的质子束。68Ga可以使用固体或液体靶标系统通过68Zn(p,n)68Ga反应来生产。靶标由富集的68Zn金属或68Zn液体溶液组成。辐照后，转移靶标进行进一步的化学处理，其中使用离子交换色谱法分离68Ga。68Ga在HCl溶液中洗脱。
可替代地，所述放射性同位素为67Ga。使用锌(富集或天然)或铜或锗靶标以质子、氘核、α粒子或氦(III)作为轰击粒子产生67Ga的各种方法已由以下总结报道：Helus,F.,Maier-Borst,W.,1973.A comparative investigation of methods used to produce67Ga with a cyclotron[使用回旋加速器产生67Ga的方法的比较研究].该文献载于：Radiopharmaceuticals and Labelled Compounds[放射性药物和标记化合物],第1卷,IAEA,Vienna,第317-324页,M.L Thakur Gallium-67and indium-111radiopharmaceuticals[镓-67和铟-111放射性药物]Int.J.Appl.Rad.Isot.[国际放射性同位素应用杂志],28(1977),第183-201页，以及
Figure BDA0003980047260000121
T.,Holtebekk,T.,1993.Production of 67Ga at Oslo cyclotron[奥斯陆回旋加速器生产67Ga].Universityof Oslo Report[奥斯陆大学报告]OUP8-3-1,第3-5页。用中等能量质子(高达64MeV)轰击natGe靶标也是产生67Ga的合适方法，如以下所述：T Horiguchi,H Kumahora,H Inoue,YYoshizawa Excitation functions of Ge(p,xnyp)reactions and production of 68Ge[Ge(p,xnyp)反应的激发函数与68Ge的产生],Int.J.Appl.Radiat.Isot.[国际放射性同位素应用杂志],34(1983),第1531-1535页。
优选地，67Ga可以由回旋加速器生产。这种从68Zn(p,2n)67Ga生产67Ga的方法在本领域中是众所周知的，例如在Alirezapour B等人Iranian Journal of PharmaceuticalResearch[伊朗药物研究杂志](2013),12(2):355-366中描述的。更优选地，该方法使用能量在10MeV至40MeV的质子束。67Ga可以通过67Zn(p,n)67Ga或68Zn(p,2n)67Ga反应使用固体或液体靶标系统来生产。靶标由富集的67Zn或68Zn金属或液体溶液组成。辐照后，转移靶标进行进一步的化学处理，其中使用离子交换色谱法分离67Ga。最后从HCl水溶液中蒸发得到67GaCl3，然后可以将其添加到所述单个小瓶中，用于标记方法。
可替代地，所述放射性同位素是从回旋加速器生产中获得的64Cu。这种生产方法例如描述在WO 2013/029616中。
优选地，64Cu可以由回旋加速器生产，更优选地使用能量在11到18MeV之间的质子束。64Cu可以使用固体或液体靶标系统通过64Ni(p,n)64Cu反应来生产。靶标由64Ni金属或64Ni液体溶液组成。辐照后，靶标被转移以进行进一步的化学处理，其中使用离子交换色谱法分离64Cu。最后从HCl水溶液中蒸发得到64CuCl2，然后可以将其添加到所述单个小瓶中，用于标记方法。
步骤(iii)将步骤(ii)中获得的溶液混合，并孵育持续足以获得用所述放射性同位素标记的所述PSMA结合配体的时间段
在混合包含PSMA结合配体(例如，具有式(II)的PSMA结合配体)的单个小瓶与包含处于如上所述的合适的缓冲剂中的放射性同位素(优选地68Ga、67Ga或64Cu，如上所述)的溶液之后，放射性标记开始。
在一个实施例中，孵育步骤在50℃至100℃的温度进行。在特定实施例中，孵育步骤进行2至25分钟的时间段。
在特定实施例中，孵育步骤在80℃至100℃，优选90℃至100℃，更优选地约95℃的温度下进行。
在其他特定实施例中，孵育步骤在50℃至90℃，优选地60℃至80℃，典型地约70℃的温度进行。
在其他特定实施例中，孵育步骤在室温至80℃，优选地18℃至25℃，更优选地室温的温度进行。
在特定实施例中，孵育步骤进行包括2至20分钟，优选地3至8分钟，更优选地约5分钟的时间段。
在其他特定实施例中，孵育步骤进行5至25分钟，优选地10至20分钟，更优选地12至18分钟，甚至更优选地约15分钟的时间段。
在其他特定实施例中，孵育步骤进行包括10至120分钟，优选地30至60分钟的时间段。
在标记过程结束时，添加对放射性同位素(例如68Ga、67Ga或64Cu)具有特定亲和力的螯合剂以螯合同位素的未反应部分。然后可以丢弃由多价螯合剂(sequestering agent)和未反应的放射性同位素形成的这种络合物，以增加放射性标记后的放射化学纯度。
用68Ga对具有式(I)的PSMA结合配体进行放射性标记的方法的优选实施例
本披露更具体地涉及用于用68Ga对具有式(I)的PSMA结合配体进行标记的方法，该方法包括以下步骤：
i.提供单个小瓶，其包含呈干燥形式的具有下式(I)的所述PSMA结合配体
Figure BDA0003980047260000141
至少一种缓冲剂、氯化钠和抗辐射分解降解的稳定剂，
ii.将所述放射性同位素的溶液添加到所述单个小瓶中，从而获得所述具有式(I)PSMA结合配体与所述放射性同位素的溶液，
iii.将在ii.中获得的溶液混合，并孵育持续足以获得用所述放射性同位素标记的所述PSMA结合配体的时间段，以及
iv.任选地，调节所述溶液的pH。
在所述方法的特定实施例中，所述68Ga在HCl中的所述溶液是从以下步骤获得的洗出液：
i.通过发生器从母体元素68Ge产生68Ga元素，以及
ii.任选地，通过使元素68Ga/68Ge穿过合适的柱体将生成的68Ga元素与68Ge元素分离，并在HCl中洗脱68Ga，
从而获得所述放射性同位素在HCl中的溶液。
优选地，所述缓冲剂由至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg乙酸钠组成。
优选地，所述氯化钠由至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg组成。
优选地，所述抗辐射分解降解的稳定剂由0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg龙胆酸组成。
有利地，在特定实施例中，PSMA结合配体的简单标记可以用来自可商购的68Ge/68Ga发生器的在HCl中的68Ga洗出液获得，而无需洗出液的任何处理或任何另外的纯化步骤。
注射液用粉剂
本披露还涉及一种注射液用粉剂，其包含呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000151
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；和
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸。
优选实施例包括以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure BDA0003980047260000152
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；以及
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg。
在特定实施例中，注射液用粉剂不含有任何选自由碳水化合物(例如单糖或二糖或多糖)和聚合剂组成的组的填充剂。优选地，单个小瓶不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。在特定实施例中，抗辐射分解降解的稳定剂基本上由龙胆酸组成。优选地，注射液用粉剂不包含抗坏血酸或乙醇。
本披露的放射性标记试剂盒
本披露还涉及一种用于实施上述标记方法的试剂盒，所述试剂盒包含
i.单个小瓶，其包含呈干燥形式的以下组分
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000161
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸；
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
在优选的实施例中，所述至少一种缓冲剂是乙酸钠。
在优选的实施例中，所述抗辐射分解降解的稳定剂是龙胆酸。在优选的实施例中，所述抗辐射分解降解的稳定剂基本上由龙胆酸组成。
优选地，所述单个小瓶包含以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure BDA0003980047260000171
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg；以及
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
所述单个小瓶可包含用于保持pH在3.0和6.0之间的缓冲剂。优选地，所述单个小瓶包含乙酸钠作为缓冲剂。
在特定实施例中，单个小瓶不含有任何选自由碳水化合物(例如单糖或二糖或多糖)和聚合剂组成的组的填充剂。优选地，单个小瓶不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。
优选地，单个小瓶、第一小瓶或第二小瓶不包含抗坏血酸或乙醇。
优选地，所述第一、第二或单个小瓶的所有组分都呈干燥形式。
用于标记PSMA结合配体的放射性同位素可以作为即用型产品随试剂盒提供，即用于与试剂盒提供的单个小瓶混合和孵育，或者可替代地可以在与所述单个小瓶混合和孵育之前或之前不久从放射性同位素发生器洗脱，特别是在所述放射性同位素具有相对短的半衰期的情况下，例如68Ga、67Ga和64Cu。
优选地，将组分插入可以与用于执行根据本披露的方法的说明书一起包装的密封容器中。
该试剂盒可以特别适用于下一节中披露的方法。
在特定实施例中，试剂盒不含有任何选自由碳水化合物(例如单糖或二糖或多糖)和聚合剂组成的组的填充剂。优选地，试剂盒不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。
在特定实施例中，试剂盒不含有任何选自由碳水化合物(例如单糖或二糖或多糖)和聚合剂组成的组的填充剂。优选地，试剂盒不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物，并且所述单个小瓶包含用于保持pH在3.0和6.0之间的缓冲剂。
在特定实施例中，PSMA结合配体是如上定义的具有式(I)的PSMA结合配体。
根据本披露的试剂盒的用途
如上定义的试剂盒可以特别适用于前面节段中披露的标记方法。
有利地，包含用放射性同位素(例如68Ga、67Ga或64Cu)标记的PSMA结合配体(例如具有式(I)的PSMA结合配体)的溶液通过前面部分中披露的标记方法可获得或获得。
此类溶液可以是即用型可注射溶液，优选地用于通过在有需要的受试者中成像来体内检测肿瘤。
在某些方面，受试者是哺乳动物，例如但不限于啮齿动物、犬、猫、或灵长类动物。在优选的方面，受试者是人。
对可注射组合物的有效药物载剂的要求是本领域普通技术人员众所周知的(参见，例如，Pharmaceutics and Pharmacy Practice[药剂学与药学实践],J.B.利平科特公司(Lippincott Company),费城,宾夕法尼亚州，Banker和Chalmers,编辑,第238-250页(1982),和SHP Handbook on Injectable Drugs[SHP注射用药物手册],Trissel,第15版,第622-630页(2009))。
优选地，用作可注射溶液的所述溶液提供单剂量每千克体重1.0-3.0MBq，更优选地每千克体重1.8-2.2MBq的具有式(I)的[68Ga]-PSMA结合配体用于向有需要的受试者施用。
在特定实施例中，所述有需要的受试者是患有具有表达PSMA的肿瘤或细胞的癌症的受试者。表达PSMA的肿瘤或细胞可以选自由以下组成的组：前列腺肿瘤或细胞、转移的前列腺肿瘤或细胞、肺肿瘤或细胞、肾肿瘤或细胞、胶质母细胞瘤、胰腺肿瘤或细胞、膀胱肿瘤或细胞、肉瘤、黑色素瘤、乳腺肿瘤或细胞、结肠肿瘤或细胞、生殖细胞、嗜铬细胞瘤、食道肿瘤或细胞、胃肿瘤或细胞，以及其组合。在一些其他实施例中，表达PSMA的肿瘤或细胞是前列腺肿瘤或细胞
优选地，可以在将放射性标记的PSMA结合配体静脉内施用至受试者后20至120分钟，更优选地50至100分钟，并且甚至更优选地在向受试者施用放射性标记的PSMA结合配体后约1小时，获得PET/MRI、SPECT或PET/CT成像。开始PET/MRI、SPECT或PET/CT成像前的最短建议等待时间为静脉施用后50分钟。
具有式(I)的化合物的合成
具有式(I)的化合物可以使用Matthias Eder,Martin Schafer,Ulrike Bauder-Wust,William-Edmund Hull,Carmen Wangler,Walter Mier,Uwe Haberkorn,和MichaelEisenhut“68Ga-Complex Lipophilicity and the Targeting Property of a Urea-Based PSMA Inhibitor for PET Imaging[用于PET成像的基于脲的PSMA抑制剂的68Ga络合物亲脂性和靶向性质]”-Bioconjugate Chem.[生物缀合化学]2012,23,688-697中披露的方法合成，或者可以经由ABX高级生物化学化合物商购获得。
实施例
披露了以下特定实施例：
1.一种用放射性同位素，优选地68Ga、67Ga或64Cu标记PSMA结合配体的方法，所述方法包括以下步骤：
i.提供单个小瓶，其包含呈干燥形式的具有下式(I)的所述PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000201
至少一种缓冲剂、氯化钠和抗辐射分解降解的稳定剂，
ii.将所述放射性同位素的溶液添加到所述单个小瓶中，从而获得所述具有式(I)PSMA结合配体与所述放射性同位素的溶液，
iii.将在ii.中获得的溶液混合，并孵育持续足以获得用所述放射性同位素标记的所述PSMA结合配体的时间段，以及
iv.任选地，调节所述溶液的pH。
2.如实施例1所述的方法，其中所述至少一种缓冲剂是乙酸钠。
3.如实施例1或2中任一项所述的方法，其中所述单个小瓶不含有任何选自由碳水化合物和聚合剂组成的组的填充剂，优选地该单个小瓶不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物，并且缓冲剂是适于在孵育步骤(iii)获得从3.0至6.0之间的pH的缓冲液。
4.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中所述具有式(I)的PSMA结合配体以5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg的量包含在所述单个小瓶中。
5.一种通过如实施例1-4中任一项所述的方法可获得或获得的包含用放射性同位素标记的具有式(I)的PSMA结合配体的溶液，所述溶液用作可注射溶液用于通过在有需要的受试者中成像来体内检测肿瘤，优选地表达PSMA的肿瘤。
6.如权利要求5所述的溶液，其中所述放射性同位素选自由以下组成的组：111In、133mIn、99mTc、94mTc、67Ga、66Ga、68Ga、67Ga、52Fe、72As、97Ru、203Pb、62Cu、64Cu、86Y、51Cr、52mMn、157Gd、169Yb、172Tm、177mSn、89Zr、43Sc、44Sc、55Co。
7.如实施例1-6中任一项所述的方法，其中具有所述放射性同位素的所述溶液进一步包含HCl。
8.如实施例1-7中任一项所述的方法，其中所述放射性同位素是68Ga并且在HPLC中测量的放射化学纯度是至少91％，并且任选地，游离68Ga3+(HPLC中)的百分比是3％或更少，并且/或者未络合的68Ga3+物质(ITLC中)的百分比是3％或更少。
9.如实施例1-7中任一项所述的方法，其中所述放射性同位素是64Cu并且在HPLC中测量的放射化学纯度是至少91％，并且任选地，游离64Cu2+(HPLC中)的百分比是3％或更少，并且/或者未络合的64Cu2+物质(ITLC中)的百分比是3％或更少。
10.如实施例1-7中任一项所述的方法，其中所述放射性同位素是67Ga并且在HPLC中测量的放射化学纯度是至少91％，并且任选地，游离67Ga3+(HPLC中)的百分比是3％或更少，并且/或者未络合的67Ga3+物质(ITLC中)的百分比是3％或更少。
11.如实施例1-10中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤在50℃至100℃的温度进行。
12.如实施例1-11中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤进行2至25分钟的时间段。
13.如实施例1-12中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤在80℃至100℃，优选地90℃至100℃，更优选地约95℃的温度进行。
14.如实施例1-13中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤进行2至20分钟，优选地3至8分钟，更优选地约5分钟的时间段。
15.如实施例1-12中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤在50℃至90℃，优选地60℃至80℃，更优选地约70℃的温度进行。
16.如实施例1-13中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤进行5至25分钟，优选地10至20分钟，更优选地12至18分钟，甚至更优选地约15分钟的时间段。
17.如实施例1-16中任一项所述的方法，其中所述放射性同位素的所述溶液是从以下步骤获得的洗出液：
i.通过放射性同位素发生器或回旋加速器从母体非放射性元素产生放射性同位素，
ii.通过在作为洗脱溶剂的HCl中洗脱将所述放射性同位素与所述母体非放射性元素分离，以及
iii.回收所述洗出液，
从而获得所述放射性同位素的溶液。
18.如实施例1-17中任一项所述的方法，其中所述放射性同位素是68Ga、67Ga或64Cu。
19.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中所述包含放射性同位素68Ga的溶液是从以下步骤获得的洗出液：
i.通过放射性同位素发生器从母体68Ge产生68Ga，
ii.通过使68Ge/68Ga穿过合适的柱体将生成的68Ga元素与68Ge分离，并在HCl中洗脱68Ga，
从而获得所述放射性同位素的溶液。
20.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中所述包含放射性同位素68Ga的溶液是从以下步骤获得的洗出液：
i.通过回旋加速器从母体68Zn产生68Ga，
ii.通过使68Zn/68Ga穿过合适的柱体将生成的68Ga元素与68Zn分离，并在HCl中洗脱68Ga，
从而获得所述放射性同位素的溶液。
21.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中所述包含放射性同位素67Ga的溶液是从以下步骤获得的洗出液：
i.通过回旋加速器从母体67Zn或68Zn产生67Ga，
ii.通过使67Zn或68Zn/67Ga穿过合适的柱体将生成的67Ga元素与67Zn或68Zn分离，并在HCl中洗脱67Ga，
从而获得所述放射性同位素的溶液。
22.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中所述包含放射性同位素64Cu的溶液是从以下步骤获得的洗出液：
i.通过回旋加速器从母体64Ni产生64Cu，
ii.通过使64Ni/64Cu穿过合适的柱体将生成的64Cu元素与64Ni分离，并在HCl中洗脱64Cu，
从而获得所述放射性同位素的溶液。
23.一种通过如实施例1-22所述的方法可获得或获得的包含用68Ga、67Ga或64Cu标记的具有式(I)的PSMA结合配体的溶液，所述溶液用作可注射溶液用于通过在有需要的受试者中成像来体内检测肿瘤，优选地表达PSMA的肿瘤。
24.一种注射液用粉剂，所述注射液用粉剂包含呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000231
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；和
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸。
25.如实施例24所述的注射液用粉剂，所述注射液用粉剂包含以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure BDA0003980047260000241
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；以及
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg。
26.如实施例24或25中任一项所述的注射液用粉剂，其中所述粉剂不含有任何选自由碳水化合物和聚合剂组成的组的填充剂，优选地其不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。
27.一种用于实施实施例1-22所述的方法的试剂盒，所述试剂盒包含
i.单个小瓶，其包含呈干燥形式的以下组分
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000242
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸；
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
28.一种用于实施实施例1-22所述的方法的试剂盒，所述试剂盒包含
i.单个小瓶，其具有优选地呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure BDA0003980047260000251
ii.氯化钠；
iii.乙酸钠；
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸；以及
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
29.如实施例27或28中任一项所述的试剂盒，其中所述单个小瓶包含优选地呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure BDA0003980047260000261
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg；以及
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
30.如实施例27-29中任一项所述的试剂盒，其中所述单个小瓶包含适于保持pH在3.0和6.0之间的缓冲剂。
31.如实施例27-30中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒不含有任何选自由碳水化合物和聚合剂组成的组的填充剂，优选地其不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。
实例
在下文中，将更详细地并且具体地参考实例来描述本披露，但是这些实例并不意在限制本发明。
放射化学纯度：非络合68镓物质(ITLC)
iTLC条件
Figure BDA0003980047260000262
Figure BDA0003980047260000271
根据HPLC的68GaPSMA-11放射化学纯度和鉴定
色谱条件
Figure BDA0003980047260000272
实例1：使用单个小瓶试剂盒开发用68Ga对PSMA-11进行放射性标记的方法
1.单个小瓶试剂盒的描述和组成
申请人开发了无菌单个小瓶试剂盒，其由以下组成：
·单个小瓶：PSMA-11，25μg；氯化钠，40mg；乙酸钠缓冲液，47mg；龙胆酸抗氧化剂，1mg。将全部呈干燥形式的注射液用粉剂与从68Ge/68Ga发生器中洗脱出来的氯化镓-68(68GaCl3)在HCl中的溶液进行重构。
所述试剂盒与从68Ge/68Ga发生器洗脱的68Ga在稀HCl中的溶液组合使用，以制备68Ga-PSMA-11作为用于静脉内注射的经放射性标记的成像产品。
注射用68Ga-PSMA-11溶液的体积(对应于要施用的放射性剂量)是根据估计的注射时间、基于发生器提供的当前活度和放射性核素的物理衰变(半衰期＝68min)来计算的。
单个小瓶是注射液用粉剂，含有25μg PSMA-11作为活性成分，装在10mL超惰性I型Plus玻璃小瓶中。
单个小瓶的组成提供在表1中。
表1-单个小瓶注射液用粉剂的组成
Figure BDA0003980047260000281
*当前版本
如上所述，单个小瓶(PSMA-11，25μg，注射液用粉剂)是放射性药物试剂盒的一部分。所述试剂盒必须与68Ge/68Ga发生器提供的68Ga在HCl中的溶液组合使用，以获得注射用68Ga-PSMA-11溶液，其是经放射性标记的成像产品，可直接注射到患者体内。
2.药物产品的组分
药物产品含有PSMA-11(作为活性成分)以及氯化钠、乙酸钠和龙胆酸(作为赋形剂)。
2.1原料药
活性物质是PSMA-11肽，通过间隔子分子在赖氨酸末端与螯合剂HBED-CC(N,N′-双[2-羟基-5-(羧乙基)苄基]-乙二胺-N,N′-二乙酸)共价结合的Lys-脲基-Glu序列。具有式(I)的PSMA-11如下：
Figure BDA0003980047260000291
HBED-CC是可以螯合68Ga并允许PSMA-11作为前列腺癌成像的示踪剂的API的部分。具有式(II)的68Ga-PSMA-11如下：
Figure BDA0003980047260000292
2.2赋形剂
添加针对单个小瓶的组成选择的赋形剂以保持最终配制品中活性物质的稳定性，以确保药物产品的安全性和有效性，并获得68Ga-PSMA-11溶液在重构过程中所需的放射化学纯度。所选择的赋形剂产生具有所需药学技术特性的药物产品。
每种赋形剂的简要说明如下：
·乙酸钠
乙酸钠用作缓冲剂。缓冲液在化学上被定义为含有弱酸及其共轭盐或弱碱及其共轭盐的溶液。缓冲液通常用于将pH维持在一定范围内，因为它们可以中和少量添加的酸或碱。
在PSMA-11试剂盒配制品中包含缓冲剂的原因是具有能够将pH维持在允许HBED部分中的68Ga完全络合的范围内的一个小瓶试剂盒。
·氯化钠
氯化钠用于溶解性、饼状物的完整性和产品稳定性。在PSMA-11试剂盒配制品中包含氯化钠的原因是允许在冷冻干燥期间操作极端条件而不影响配制品的性质。
·龙胆酸
在此已发现龙胆酸(2,5-二羟基苯甲酸)是对抗辐射分解降解的高度有效的抗氧化剂或自由基清除剂或稳定剂。这种物质用于通过延缓活性物质的氧化来延长药物的保质期。具体地，其包含在放射性药物中，因为其允许保护API免受辐射分解。
3.药物产品
3.1配制品开发
进行配制品开发的目的是确定反应混合物组成，该反应混合物组成能够允许：
-在冷冻干燥后产生可接受的饼状物，和
-基于用来自可商购68Ge/68Ga发生器的洗出液直接重构而无需洗出液的任何处理或任何另外的纯化步骤进行HBED-CC-分子的简单标记。
该项目的目标是开发PSMA-11小分子，用作检测前列腺肿瘤的放射性示踪剂。
单个小瓶是含有肽作为活性成分的冻干粉剂，在放射性标记程序中用68Ga进行了放射性标记。
为PSMA-11开发合适配制品的最初努力涉及液体形式的测试。
药品制造商将开发工作重点放在选择与PSMA-11特性相关的适当赋形剂上，以获得符合放射性药物制剂通常要求的规格的成品。
·68Ga-PSMA-11(HPLC)：≥91％
·游离68Ga3+(HPLC)：≤3％
·非络合68Ga3+物质(ITLC)：≤3％
从活性成分量和适当赋形剂的选择开始，描述了包括相关进行的研究在内的开发工作。
3.1.1PSMA-11量的选择
使用不同量的API进行测试以选择药物产品的PSMA-11的量。
初步测试的基本原理基于镓(68Ga)PSMA-11注射专著草案(3044)。尽管本专著尚未被纳入当前的欧洲药典，但其可在Pharmeuropa上获得，Pharmeuropa是一个免费在线EDQM(欧洲药品质量管理局)出版物，提供关于欧洲文本草案的公开咨询。在专著3044中，最大推荐剂量为30μg PSMA-11；因此，使用该量的API进行初步测试。这些测试的目的是证实30μgPSMA-11足以一致地产生具有高放射化学纯度的[68Ga]镓PSMA-11。一旦证明30μg是使用三种不同的发生器(Gallipharm、GalliAd、ITG)放射性标记PSMA-11的可靠量，则测试较低的量，以了解是否可能降低API含量而对产物的放射化学纯度没有任何影响。具体地，最低量的PSMA-11(20μg和10μg)仅在更稀释的条件(Galliapharm-5mL)下测试，因为更高浓度的试剂促进和有助于反应。
为开发PSMA-11试剂盒选择的最终API量为25μg。即使较低的量(20μg)被证明足以用68Ga一致地放射性标记PSMA-11，并且远高于放射化学纯度预期，25μg被保守作为用于未来使用具有来自回旋加速器的68Ga的产物的安全量。
表2-PSMA-11量-PSMA-11量对RCP％的影响
Figure BDA0003980047260000311
Figure BDA0003980047260000321
我们的开发研究也集中于关键赋形剂的选择。
3.1.2赋形剂
·缓冲剂的选择
缓冲液通常用于将pH维持在一定范围内，因为它们可以中和少量添加的酸或碱。pH范围被定义为缓冲剂起作用并且能够发挥其缓冲能力之内的pH空间。pH范围与缓冲液的弱酸或弱碱的化学实体严格相关。
因为螯合剂HBED代表涉及放射性标记反应的化合物部分，所以目标pH范围设定为4.0-6.0。根据HBED的文献和68Ga PSMA-11的先前工作选择后者。
能够在所选范围内实现其缓冲能力的药物可注射溶液中常用的缓冲剂的列表是柠檬酸盐缓冲液、乳酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液和甘氨酸缓冲液。
然而，最终产品必须冷冻干燥。实际上，大量文献描述了哪些赋形剂更适合冻干工艺并且更容易冷冻干燥。基于先前工作和产品中收集的数据和经验，适用于冻干产品的缓冲剂为甘氨酸、柠檬酸钠、乳酸钠和磷酸钠。
用适量的每种盐放射性标记25μg PSMA-11并洗脱E&Z发生器(5mL HCl 0.1M)以模拟放射性标记的最低pH条件来进行测试。
表3-缓冲剂测试
Figure BDA0003980047260000322
Figure BDA0003980047260000331
收集的数据显示唯一符合放射性标记程序的钠盐是乙酸钠。
研究不同的量以评估在不同量的乙酸钠下放射化学纯度的稳健性。用不同量的乙酸钠放射性标记25μg PSMA-11来进行测试。
表4-缓冲剂量测试
Figure BDA0003980047260000332
基于收集的数据，47mg是能够产生放射化学纯度高于预期的68Ga PSMA-11的最小量的乙酸钠。
·抗氧化剂的选择
用于提高68Ga-PSMA-11的放射化学稳定性的自由基清除剂，根据各种方法进行测试，以考虑可能影响产物放射化学纯度的所有参数(活性、pH、体积、龙胆酸的量)。
基于收集的数据，1000μg龙胆酸是能够在所有测试的放射化学稳定性条件下保护68GaPSMA-11免于辐射分解的合适量的抗氧化剂。即使较低的量(400μg)证明允许68Ga-PSMA-11以高放射化学纯度结果稳定长达4小时，但1000μg被保守作为用于未来使用具有来自回旋加速器的68Ga的产物的安全量。
表5-龙胆酸的放射化学稳定性数据
Figure BDA0003980047260000341
Figure BDA0003980047260000351
·氯化钠的选择
冷冻干燥工艺的目的之一是获得药学上优良的最终产品，同时保持API的活性。该目标通常通过加入赋形剂例如填充剂来实现，这些填充剂是能够提供坚固基质从而可以在高温下进行初级干燥的结晶材料。
一旦确定了开发PSMA-11试剂盒所需的API和乙酸钠的合适量，进行测试以评估是否需要添加填充剂以改善最终饼状物的精致性。
通过最保守的工艺条件，实施广泛方法对含有相同量的乙酸钠(47mg)和不同浓度(30和90mg/mL)的不同填充剂(甘露醇、海藻糖和PVP)的不同配制品进行冷冻干燥。API不包括在这些广泛的测试中，因为其量与乙酸钠相比太低以至于被忽略。通过使用和不使用甘露醇的广泛方法制造产品。
使用其他填充剂如海藻糖、麦芽糖、蔗糖、PVP和它们的组合进行了其他测试。然而，从研究中收集的结果表明，当冷冻干燥工艺更极端时，测试的填充剂不能防止饼状物坍塌。
应用另一种方法第一次测试乙酸钠与结晶盐(如KCl和NaCl)的组合。含有氯化钠的配制品产生非常精致的饼状物。
考虑到用40mg氯化钠制造的饼状物的外观，测试这些产品的放射性标记。从对68Ga放射性标记的产品进行的质量控制中收集的数据示出于表6中。
表6-用25μg PSMA-11、47mg乙酸钠、40mg氯化钠制造的试剂盒的放射性标记测试。
Figure BDA0003980047260000352
Figure BDA0003980047260000361
在开发阶段期间生产的批次表明，当在配制品中包括填充剂时，预期作为用于制备[68Ga]镓PSMA-11的试剂盒的冻干产品的制造是不可实现的。添加填充剂的限制有多个：溶解度、饼状物的完整性和产品稳定性。然而，当将结晶氯化钠添加到配制品中时，克服了所有的限制问题。基于初步批次期间获得的经验，不包括填充剂作为配制品组分，但包括氯化钠。
根据用结晶盐制造的产品，观察到当47mg乙酸钠与氯化钠混合时制造的最终产品的缺陷是饼状物从小瓶底部抬升。由于这种缺陷出现的百分比在仅含有20mg NaCl的试剂盒中比在含有40mg NaCl的试剂盒中更频繁，因此有必要了解能够防止或减少饼状物抬升的氯化钠的量。然后制造另一批以研究四种水平的氯化钠：
1. 20mg
2. 40mg
3. 60mg
4. 80mg
在这种情况下，设定冷冻干燥循环以通过极端条件制造产品。收集的数据非常有前景。尽管工艺参数苛刻，但是大多数饼状物保持了在先前批次中观察到的精致性，并且清楚的是，氯化钠超过40mg时，降低产物抬升的积极效果变得不相关。
4.放射性标记程序
基于单个试剂盒设计，开发了如下2步标记程序：
1.用68Ge/68Ga E&Z发生器提供的在HCl中的68Ga溶液直接重构粉剂小瓶。
2.在室温(18℃至25℃)下孵育反应5分钟。
此时68Ga-PSMA-11溶液已准备好进行施用。
5.最终配制品和详细组成
基于对上述配制品进行的所有开发，最终选择的单个小瓶配制品如下：
表7-最终配制品
组分 质量标准(和等级，如果适用) 目的 数量/小瓶
PSMA-11 内部 活性物质 25μg
氯化钠 Ph.Eur/USP* 结晶盐 40mg
乙酸钠 Ph.Eur/USP* 缓冲剂 47mg
龙胆酸 Ph.Eur/USP* 抗氧化剂 1mg
*当前版本
对含有最终配制品的冻干产品进行稳定性测试。收集的数据表明在药物产品的保质期方面具有非常有前景的结果。实际上，用最终配制品制造的试剂盒储存在不同的稳定性条件(2℃-8℃；25℃和40℃)下，并在不同时间点测试放射性标记产品的API测定、放射性化学纯度和放射性化学稳定性。仅评估洗脱IRE发生器的放射性化学纯度和稳定性，其代表放射性浓度(体积活性)方面的最应激条件。
表8-制造日期的API测定稳定性数据
Figure BDA0003980047260000371
表9-制造日期的放射化学纯度和放射化学稳定性数据
Figure BDA0003980047260000381
表10 -2℃-8℃下的API测定稳定性数据
Figure BDA0003980047260000382
表11 -2℃-8℃下的放射化学纯度和放射化学稳定性数据
Figure BDA0003980047260000383
Figure BDA0003980047260000391
表12 -25℃下的API测定稳定性数据
Figure BDA0003980047260000392
表13 -25℃下的放射化学纯度和放射化学稳定性数据
Figure BDA0003980047260000393
表14 -40℃下的API测定稳定性数据
Figure BDA0003980047260000401
表15 -40℃下的放射化学纯度和放射化学稳定性数据
Figure BDA0003980047260000402

Claims (15)

1.一种用放射性同位素，优选地68Ga、67Ga或64Cu标记PSMA结合配体的方法，所述方法包括以下步骤：
i.提供单个小瓶，其包含呈干燥形式的具有下式(I)的所述PSMA结合配体：
Figure FDA0003980047250000011
至少一种缓冲剂、氯化钠和抗辐射分解降解的稳定剂，
ii.将所述放射性同位素的溶液添加到所述单个小瓶中，从而获得所述具有式(I)PSMA结合配体与所述放射性同位素的溶液，
iii.将在ii.中获得的溶液混合，并孵育持续足以获得用所述放射性同位素标记的所述PSMA结合配体的时间段，以及
iv.任选地，调节所述溶液的pH。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种缓冲剂是乙酸钠。
3.如权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述单个小瓶不含有任何选自由碳水化合物和聚合剂组成的组的填充剂，优选地其不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物，并且所述缓冲剂是适于在孵育步骤(iii)获得从3.0至6.0之间的pH的缓冲液。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述具有式(I)的PSMA结合配体以5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg的量包含在所述单个小瓶中。
5.一种通过如权利要求1-4中任一项所述的方法可获得或获得的包含用放射性同位素标记的具有式(I)的PSMA结合配体的溶液，所述溶液用作可注射溶液用于通过在有需要的受试者中成像来体内检测肿瘤，优选地表达PSMA的肿瘤。
6.如权利要求5所述的溶液，其中所述放射性同位素选自由以下组成的组：111In、133mIn、99mTc、94mTc、67Ga、66Ga、68Ga、67Ga、52Fe、72As、97Ru、203Pb、62Cu、64Cu、86Y、51Cr、52mMn、157Gd、169Yb、172Tm、177mSn、89Zr、43Sc、44Sc、55Co。
7.一种通过如权利要求1-4所述的方法可获得或获得的包含用68Ga、67Ga或64Cu标记的具有式(I)的PSMA结合配体的溶液，所述溶液用作可注射溶液用于通过在有需要的受试者中成像来体内检测肿瘤，优选地表达PSMA的肿瘤。
8.一种注射液用粉剂，所述注射液用粉剂包含呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure FDA0003980047250000021
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；和
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸。
9.如权利要求8所述的注射液用粉剂，所述注射液用粉剂包含以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure FDA0003980047250000031
和
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；以及
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg。
10.如权利要求8或9中任一项所述的注射液用粉剂，其中所述粉剂不含有任何选自由碳水化合物和聚合剂组成的组的填充剂，优选地其不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。
11.一种用于实施如权利要求1-4所述的方法的试剂盒，所述试剂盒包含
i.单个小瓶，其包含呈干燥形式的以下组分
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure FDA0003980047250000032
和
ii.氯化钠；
iii.至少一种缓冲剂，优选地乙酸钠；
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸；
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
12.一种用于实施如权利要求1-4所述的方法的试剂盒，所述试剂盒包含
i.单个小瓶，其具有优选地呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体：
Figure FDA0003980047250000041
和
ii.氯化钠；
iii.乙酸钠；
iv.抗辐射分解降解的稳定剂，优选地龙胆酸；以及
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
13.如权利要求11或12中任一项所述的试剂盒，其中所述单个小瓶包含优选地呈干燥形式的以下组分：
i.具有式(I)的PSMA结合配体，其量是5μg至60μg，优选地10μg至40μg，更优选地15μg至30μg，甚至更优选地约25μg；
Figure FDA0003980047250000042
和
ii.氯化钠，其量是至少10mg，优选地10mg至100mg，更优选地30mg至50mg，甚至更优选地约40mg；
iii.乙酸钠，其量是至少20mg，优选地20mg至80mg，更优选地42mg至52mg，甚至更优选地约47mg；
iv.龙胆酸，其量是至少0.2mg，优选地0.5mg至2mg，更优选地0.8mg至1.2mg，甚至更优选地约1mg；以及
v.任选地，用于洗脱由放射性同位素发生器或回旋加速器产生的放射性同位素的附件盒。
14.如权利要求11-13中任一项所述的试剂盒，其中所述单个小瓶包含适于保持pH在3.0和6.0之间的缓冲剂。
15.如权利要求11-14中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒不含有任何选自由碳水化合物和聚合剂组成的组的填充剂，优选地其不含有任何以下填充剂：甘露醇、麦芽糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。
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