具体实施方式
以下结合具体实施例,对本发明的技术方案做进一步的描述,但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照这类反应的常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。下列实施例中未注明手性中心构型时,意味着可以以单独的对映异构体或对映体混合物形式存在,且本领域技术人员能够确定化合物的稳定和可行的异构体形式。除非另外说明,否则百分比和份数分别是重量百分比和重量份数。除非另外说明,否则液体的比为体积比,本发明使用的温度均为摄氏度℃。
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得、依据现有技术的方法制得或根据与本申请公开的类似的方法制得。除非另有说明,本发明使用的原料都是市售原料,无需进一步纯化可以直接使用,其中以下实施例中使用的5,7-二氯吡唑并[1,5-A]嘧啶购自上海皓鸿生物医药科技有限公司(乐研,CAS:57489-77-7,批次号:Ld102321002),8-溴-6-氯咪唑并[1,2-B]哒嗪购自韶远科技(上海)有限公司(CAS:933190-51-3,批次号:J140-1157-27),8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷盐酸盐购自上海毕得医药科技有限公司(CAS:54745-74-3,批次号:BGX458)。
本申请使用的缩写具有本领域通常理解的含义,除非说明书中另外清楚定义。在下面列出说明书中使用的缩写的含义:
Pd<sub>2</sub>(dba)<sub>3</sub> |
三二亚苄基丙酮二钯 |
Pd(dtbpf)Cl<sub>2</sub> |
二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II) |
DPPF |
1,1'-双(二苯基膦)二茂铁 |
RuPhosPdG2 |
氯(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II) |
HATU |
2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’,-四甲基脲六氟磷酸盐 |
DIEA |
N,N-二异丙基乙胺 |
DCM |
二氯甲烷 |
EA |
乙酸乙酯 |
PE |
石油醚 |
NIS |
N-碘代丁二酰亚胺 |
DMF |
N,N-二甲基甲酰胺 |
ACN |
乙腈 |
DHP |
3,4-二氢-2H-吡喃 |
NMP |
N-甲基吡咯烷酮 |
LC-MS |
液相色谱质谱联用 |
ESI |
电喷雾离子化 |
m/z |
质荷比 |
HPLC |
高效液相色谱 |
合成实施例
本发明提供的目标化合物制备方法中,柱层析色谱采用乳山太阳干燥剂有限公司生产的硅胶(300-400目);薄层色谱采用GF254(0.25毫米);核磁共振色谱(NMR)使用Varian-400核磁共振仪测定;液质联用(LC/MS)使用Agilent TechnologiESI 6120液质联用仪。
此外,凡涉及易氧化或易水解的原料的所有操作都在氮气保护下进行。。
当本发明化合物结构与化合物名称不一致时,通常以结构式所示为准,除非通过上下文可以确定化合物名称正确。
实施例1:3-(7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-
基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:(R)-4-(5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)-3-甲基吗啉的合成
5,7-二氯吡唑[1,5-a]嘧啶(5.0g,26.6mmol)、(R)-3-甲基吗啉(8.07g,79.8mmol)、DIEA(10.31g,79.8mmol)的NMP(30.0mL)溶液在100℃下搅拌0.5小时后,停止反应。将反应混合物冷却至室温后DCM(150mL)稀释,用饱和食盐水(30.0mL×5)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1-1:2),得到目标化合物(6.50g,收率96.7%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 253.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(d,J=2.3Hz,1H),6.50(d,J=2.3Hz,1H),6.04(s,1H),5.22–5.08(m,1H),4.13–3.95(m,2H),3.89–3.80(m,1H),3.80–3.75(m,1H),3.74–3.68(m,1H),3.67–3.62(m,1H),1.30(d,J=6.8Hz,3H)。
步骤2:3-(7-((R)-3-甲基吗啉代)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向(R)-4-(5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)-3-甲基吗啉(200mg,0.791mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(268mg,1.79mmol)的NMP(15.0mL)溶液中加入DIEA(306mg,2.37mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃微波反应器中反应2小时,停止反应。然后向反应液中加入EA(35.0mL),用饱和食盐水(30.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1),得到目标化合物(120mg,产率46.0%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 330.1[M+H]+。
步骤3:3-(3-碘-7-((R)-3-甲基吗啉代)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3-(7-((R)-3-甲基吗啉代)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(120mg,0.364mmol)的乙腈(5.00mL)溶液中加入NIS(82mg,0.364mmol),反应混合液在室温下搅拌反应0.5小时,停止反应后。然后加水(10.0mL),再用EA(20.0mL×3)萃取,合并有机相,用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1),得到目标化合物(100mg,产率60.3%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 456.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(s,1H),5.38(s,1H),5.10(s,1H),4.51(s,2H),4.08–3.91(m,3H),3.90–3.80(m,2H),3.74(d,J=11.6Hz,1H),3.68–3.57(m,1H),3.40–3.15(m,3H),2.03–1.96(m,2H),1.93–1.83(m,2H),1.25–1.14(m,3H)。
步骤4:3-(7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
氮气保护下,向3-(3-碘-7-((R)-3-甲基吗啉代)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(100mg,0.219mmol)和1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(91.6mg,0.329mmol)的1,4-二氧六环(5.00mL)和水(1.00mL)的溶液中加入Pd(dtbpf)Cl2(14.0mg,0.0219mmol)和磷酸钾(139mg,0.658mmol),反应混合液在60℃下搅拌反应16小时后,停止反应。然后加水(30.0mL),再用EA(20.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(25.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(100mg,收率94.9%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 480.1[M+H]+。
步骤5:3-(7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下,向反应瓶中加入3-(7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(100mg,0.208mmol)和盐酸乙酸乙酯溶液(5.00mL,3M),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(75.8mg,产率91.9%,淡黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 396.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.62(Brs,1H),8.23(s,1H),7.64–7.47(m,1H),6.77–6.63(m,1H),5.77(s,1H),5.15–5.07(m,1H),4.49–4.44(m,2H),4.19–4.10(m,1H),4.09–4.01(m,1H),3.96–3.91(m,1H),3.85–3.80(m,1H),3.70–3.63(m,2H),3.57–3.50(m,1H),3.40–3.34(m,1H),3.14–3.07(m,2H),1.88–1.81(m,2H),1.79–1.72(m,2H),1.10(d,J=6.8Hz,3H)。
实施例2:3-(8-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-
基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:(8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成
向8-溴-6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(500mg,2.15mmol)的三氯甲烷(10.0mL)和三氟乙酸(1.00mL)溶液中加入NIS(484mg,2.15mmol),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。然后加入饱和碳酸氢钠溶液(25.0mL),再用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(500mg,产率64.8%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 357.7,359.7[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07(s,1H),7.56(s,1H)。
步骤2:(R)-4-(6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-基)-3-甲基吗啉的合成
向8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(500mg,1.40mmol)和(R)-3-甲基吗啡啉(211mg,2.09mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入DIEA(541mg,4.19mmol)。反应混合液在氮气保护下100℃搅拌反应2小时,停止反应。然后将反应液加入EA(35.0mL)中,用饱和食盐水(35mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(500mg,产率94.6%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 378.8[M+H]+。
步骤3:(3R)-4-(6-氯-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-基)-3-甲基吗啉的合成
氮气保护下,向(R)-4-(6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-基)-3-甲基吗啉(400mg,1.06mmol)和1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(293mg,1.06mmol)的1,4-二氧六环(10.0mL)和水(2.00mL)的溶液中加入Pd(dtbpf)Cl2(67.3mg,0.105mmol)和磷酸钾(448mg,2.11mmol),反应混合液在室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(25.0mL),再用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(25.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(320mg,收率75.1%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 403.1[M+H]+。
步骤4:3-(8-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑[1,2-b]哒嗪-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
氮气保护下,向(3R)-4-(6-氯-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-基)-3-甲基吗啉(300mg,0.744mmol)和RuPhosPdG2(58.1mg,0.0744mmol)的甲苯(15.0mL)溶液中加入碳酸铯(727mg,2.23mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(168mg,1.12mmol),反应混合液在110℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(25.0mL),再用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(25.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(100mg,收率28.0%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 480.2[M+H]+。
步骤5:3-(8-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下,向反应瓶中加入3-(8-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑[1,2-b]哒嗪-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(100mg,0.208mmol)和盐酸的EA溶液(10.0mL,3M),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(38.7mg,产率47.0%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 396.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.33–12.85(m,1H),7.84–7.72(m,1H),7.14–6.86(m,1H),5.98(s,1H),5.63–5.33(m,1H),4.51–4.43(m,2H),4.15–3.99(m,1H),4.00–3.93(m,1H),3.81–3.71(m,4H),3.66–3.57(m,1H),3.39–3.34(m,1H),3.30–3.25(m,1H),3.07–2.99(m,2H),1.90–1.81(m,4H),1.15(d,J=6.7Hz,3H)。
实施例3:3-(4-((R)-3-甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-
基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:4-溴-3,6-二氯哒嗪的合成
将4-溴-1,2-二氢哒嗪-3,6-二酮(5.50g,28.8mmol)溶于三氯氧磷(35.0mL),反应混合液加热至100℃反应16小时,停止反应。待反应液冷却至室温后,将其慢慢倒入冰水中,然后调节pH至7左右,再用EA(100mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水(50.0mL×3)洗涤后经无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=20:1-5:1),得到目标化合物(5.00g,产率76.2%,淡黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 227.0[M+H]+。
步骤2:(R)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基吗啉的合成
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(2.73g,12.0mmol)和(R)-3-甲基吗啉(2.40g,23.7mmol)的DMF(37.0mL)溶液中加入碳酸钾(6.59g,47.7mmol),氮气保护下,反应混合液在30℃下搅拌反应16小时后,停止反应。加入水(45.0mL),然后用EA(60.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水(45.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-2:1),得到目标化合物(2.36g,收率79.4%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z248.1[M+H]+。
步骤3:3-(6-氯-5-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向(R)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基吗啉(1.44g,5.80mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1.30g,8.68mmol)的NMP(26.0mL)溶液中加入DIEA(2.26g,17.5mmol),反应混合液在145℃下搅拌16小时后,停止反应。将反应混合物冷却至室温后,加入水(25.0mL),用EA(30.0mL×2)萃取,有机相用饱和食盐水(25.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:1),得到目标化合物(1.50g,收率79.6%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 325.2[M+H]+。
步骤4:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.49g,4.59mmol)的水(8滴)和DMF(40.0mL)混合溶液中依次加入氰化锌(1.08g,9.18mmol)、DPPF(510mg,0.918mmol)和Pd2(dba)3(421mg,0.459mmol)。氮气保护下,反应混合液在145℃搅拌反应过夜后,停止反应。待反应液冷却至室温后加入水(30.0mL),然后用EA(35.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水(30.0mL×3)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:2),得到目标化合物(1.10g,收率76.0%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 316.3[M+H]+。
步骤5:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈(1.03g,3.27mmol)的四氢呋喃(30.0mL)溶液中依次加入氨水(5.00mL)和雷尼镍(~1.15g),氢气置换三次后反应混合物在氢气氛围下室温反应过夜,停止反应。将反应混合物过滤除去固体残渣、滤液减压浓缩,得到目标化合物(1.00g,收率95.9%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 320.3[M+H]+。步骤6:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺(1.20g,3.74mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(505mg,4.49mmol)的DMF(28.0mL)溶液中加入HATU(2.85g,7.48mmol)和DIEA(1.19g,9.35mmol),反应混合物在室温下反应4小时,停止反应。将反应混合物加水(15.0mL)稀释,然后用DCM:甲醇=10:1(20.0mL×3)萃取,合并有机相,用饱和食盐水(15.0mL×4)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=50:1-10:1),得到目标化合物(660mg,收率42.7%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 414.2[M+H]+。
步骤7:3-(4-((R)-3-甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑5-甲酰胺(660mg,1.60mmol)溶于三氯氧磷(23.0mL)溶液中,反应混合物在145℃下反应3小时后,停止反应。待反应液冷却至室温后,将反应液减压浓缩除去多余三氯氧磷,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)分离纯化,得到目标化合物(36.8mg,收率5.83%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 396.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.22(brs,1H),7.76–7.54(m,2H),7.11-7.04(m,1H),5.79(s,1H),4.50–4.42(m,2H),4.38–4.30(m,1H),3.99–3.92(m,1H),3.85–3.75(m,3H),3.74–3.68(m,1H),3.65–3.57(m,1H),3.50–3.38(m,2H),3.11–3.00(m,2H),1.90–1.78(m,4H),1.15(d,J=6.6Hz,3H)。
实施例4:3-(3-氯-4-((R)-3-甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒
嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
向N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((R)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑5-甲酰胺(6.50g,15.72mmol)的乙腈(100mL)溶液中加入三氯氧磷(25.0mL),反应混合物在90℃下反应1.5小时后,停止反应。待反应混合液冷却至室温后,将反应液慢慢滴加到0℃的饱和碳酸氢钠溶液中,然后在0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9后,用EA(200mL×3)萃取,合并的有机相用无水硫酸钠干燥,过滤、滤液减压浓缩,所得残留物经两次反相制备色谱(乙腈/水含0.05%氨水)和(乙腈/水含0.05%甲酸)分离纯化,得到目标化合物(1.50g,收率22.2%,绿色固体)。LC-MS(ESI)m/z 430.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.74(s,1H),7.64(s,1H),7.17(s,1H),4.50–4.40(m,2H),4.10–4.01(m,1H),4.00–3.91(m,2H),3.84–3.71(m,3H),3.66–3.60(m,1H),3.42–3.35(m,2H),3.34-3.32(m,1H),2.97(d,J=11.8Hz,1H),2.38–2.31(m,1H),2.16–2.08(m,1H),2.01–1.91(m,2H),1.23(d,J=6.5Hz,3H)。
实施例5:3-(4-((R)-3-甲基吗啉代)-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-
6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
中间体3-肼基-1H-吡唑的合成
将3-氨基吡唑(1.00g,12.0mmol)加入到6mol/L的盐酸水溶液(7mL)中,混合液降温至-5℃,向反应混合物中加入1mol/L的亚硝酸钠水溶液(12mL,12.0mmol),反应液在室温下搅拌反应2小时。向反应混合物中加入氯化亚锡二水化合物(5.43g,24.1mmol)的浓盐酸溶液(24mL),反应液在室温下搅拌1小时后,减压浓缩,得到目标化合物粗产品(9.00g,粗品,亮黄色固体)。
步骤1:2,6-二氟-4-碘-3-吡啶甲醛的合成
将2,6-二氟-4-碘吡啶(5.00g,20.7mmol)加入到装有无水四氢呋喃(75mL)的三口瓶中。所得混合物在氮气保护下降温至-78℃,加入二异丙基氨基锂(2mol/L的四氢呋喃溶液)(12.5mL,24.9mmol),搅拌1小时后,缓慢加入甲酸乙酯(2.31g,31.1mmol),继续在-78℃下搅拌30分钟后,TLC点板检测原料反应完全,向反应液中加入甲酸(1.91g,41.5mmol),在-78℃搅拌10分钟后,加入EA(25mL),然后升温至0℃,加入水(30mL)。停止搅拌,加入额外的EA(25mL)进行萃取,饱和食盐水洗洗涤,无水硫酸钠干燥后,减压除去溶剂,残余物经硅胶柱分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(3.54g,收率63.4%,黄色固体)。
步骤2:3-((2-(1H-吡唑基-3-基)肼基)甲基)-2,6-二氟-4-碘吡啶的合成
将2,6-二氟-4-碘-3-吡啶甲醛(1.00g,3.72mmol)和3-肼基-1H-吡唑(9.00g,粗品)加入到95%乙醇水溶液(20mL)中。所得混合物氮气保护下室温搅拌3小时,减压除去溶剂,残余物加入EA(30mL)并搅拌均匀,向搅拌均匀的悬浊液中缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液并剧烈搅拌,使混合液至碱性,继续搅拌15分钟后,用EA萃取,饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸馏后经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:2),得到目标化合物(1.40g,粗品,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:349.9[M+H]+。
步骤3:6-氟-4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶的合成
将3-((2-(1H-吡唑基-3-基)肼基)甲基)-2,6-二氟-4-碘吡啶(1.40g,4.01mmol)溶解于NMP(19mL)中。反应混合物在加热回流下搅拌反应1小时。LC-MS监测反应结束后,将反应混合物滴加到水(50mL)中,析出棕色固体,混合液在室温下搅拌10分钟后降至0℃,继续搅拌10分钟,悬浊液用抽滤漏斗抽滤,收集固体,水相用EA(10mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩,得到粗产品。经制备板分离纯化(硅胶,EA:PE=1:1)得到目标化合物(838mg,两步收率68.5%,棕黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:329.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.09(s,1H),8.27(s,1H),7.93(t,J=2.0Hz,1H),7.68(d,J=1.2Hz,1H),6.66(t,J=2.2Hz,1H)。
步骤4:3-(4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将6-氟-4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(538mg,1.63mmol)溶解到二甲基亚砜(3mL)中。所得混合物氮气保护下室温搅拌均匀,加入8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷盐酸盐(367mg,2.45mmol),反应液升温至120℃搅拌45分钟,LC-MS监测反应结束后,将反应混合物滴加到水(30mL)中,析出棕黄色固体,混合液在室温下搅拌10分钟后降至0℃,继续搅拌10分钟,悬浊液用抽滤漏斗抽滤,收集固体,水相用EA(10mL×2)萃取。残余物经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:2),得到目标化合物(300mg,收率43.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:423.0[M+H]+。
步骤5:3-(4-碘-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(300mg,0.711mmol)、DHP(120mg,1.42mmol)、对甲苯磺酸一水合物(14mg,0.071mmol)依次加入到DCM(5mL)中。反应混合物在室温下搅拌反应16小时。LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(10mL),用EA(10mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品。经制备板分离纯化(硅胶,EA:PE=1:2),得到目标化合物(330mg,收率91.7%,无色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 507.0[M+H]+。
步骤6:3-(4-((R)-3-甲基吗啉代)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(4-碘-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(160mg,0.316mmol)、(R)-3-甲基吗啉(64mg,0.632mmol)、RuPhosPdG2(25mg,0.032mmol)、碳酸铯(309mg,0.948mmol)加入到NMP(2mL)中。所得混合物氮气保护下110℃搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(10mL),用EA(10mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品,经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:2),得到目标化合物(110mg,收率72.6%,无色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:480.2[M+H]+。
步骤7:3-(4-((R)-3-甲基吗啉代)-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
在3-(4-((R)-3-甲基吗啉代)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(110mg,2.4mmol)的甲醇(2mL)溶液中,加入4mol/L的盐酸1,4-二氧六环溶液(2mL)。所得混合物氮气保护下室温搅拌2小时,减压除去溶剂,残余物经prep-HPLC制备柱分离纯化,得到目标化合物(12.2mg,收率13.4%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:396.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),7.80(d,J=2.3Hz,1H),6.80(d,J=2.2Hz,1H),5.82(s,1H),4.52–4.42(m,2H),4.42–4.26(m,1H),4.01–3.84(m,3H),3.80–3.69(m,2H),3.65–3.55(m,2H),3.39–3.27(m,1H),3.07–2.97(m,2H),1.87–1.79(m,2H),1.80–1.70(m,2H),1.16(d,J=6.6Hz,3H).
实施例6:3-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑
[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:3-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(1.00g,4.39mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(745mg,4.98mmol)的DMF(15.0mL)溶液中加入碳酸钾(1.21g,8.78mmol)。反应混合液在氮气保护下室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液加入EA(35.0mL)中,用饱和食盐水(35.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(700mg,产率61.3%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z260.1[M+H]+。
步骤2:3-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯吡啶-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(700mg,2.69mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(609mg,4.07mmol)的NMP(15.0mL)溶液中加入DIEA(1.04g,8.07mmol)。反应混合液在氮气保护下145℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液加入EA(35.0mL)中,用饱和食盐水(25.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(550mg,产率60.7%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 337.0[M+H]+。
步骤3:4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯吡啶-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(550mg,1.63mmol)和氰化锌(383mg,3.27mmol)的DMF(10.0mL)溶液中加入DPPF(181mg,0.326mmol)和Pd2(dba)3(149mg,0.163mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(25.0mL),用饱和食盐水(20.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(350mg,产率65.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 328.2[M+H]+。
步骤4:(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-甲腈(350mg,1.07mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入雷尼镍(~314mg,5.35mmol)。反应混合液在氢气环境下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(300mg,收率84.7%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 332.2[M+H]+。
步骤5:N-((4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)甲胺(300mg,0.905mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(101mg,0.905mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入HATU(413mg,1.09mmol)和DIEA(351mg,2.72mmol)。反应混合液在室温下反应1小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=0:1),得到目标化合物(200mg,收率51.9%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z426.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.27(s,1H),8.30(s,1H),7.83(s,1H),6.65(s,1H),6.46(s,1H),4.60(d,J=5.1Hz,2H),4.46–4.37(m,4H),3.93–3.86(m,2H),3.00–2.96(m,6H),2.05–2.02(m,2H),1.89–1.80(m,4H),1.76–1.73(m,2H)。
步骤6:3-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下向反应瓶中加入N-((4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(200mg,0.470mmol)和三氯氧磷(10.0mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。将反应液慢慢加入到饱和碳酸氢钠水溶液并用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH=7,然后混合液用EA(20.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(21.3mg,产率11.1%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 408.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.39–12.85(s,1H),7.72–7.55(m,2H),7.07(d,J=1.6Hz,1H),5.72(s,1H),4.49-4.42(m,4H),3.81–3.71(m,4H),3.23–3.19(m,2H),3.07–3.01(m,2H),1.91–1.80(m,8H)。
实施例7:3-(4-吗啉代-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-
氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)吗啉的合成
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(700mg,3.07mmol)和吗啉(535mg,6.14mmol)的DMF(15.0mL)溶液中加入碳酸钾(1.69g,12.3mmol),氮气保护下,反应混合液在30℃下搅拌反应12小时后,停止反应。加入水(10.0mL),然后用EA(15.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水(15.0mL×4)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:1),得到目标化合物(700mg,收率97.3%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z234.0[M+H]+。
步骤2:3-(6-氯-5-吗啉代吡啶-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)吗啉(700mg,2.99mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(671mg,4.49mmol)的NMP(10.0mL)溶液中加入DIEA(1.16g,8.97mmol),反应混合液在145℃下搅拌16小时后,停止反应。将反应混合物冷却至室温后,加入水(15.0mL),用EA(20.0mL×3)萃取,合并有机相,然后用水(15.0mL×2)和饱和食盐水(15.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1-1:2),得到目标化合物(800mg,收率86.1%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 311.2[M+H]+。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-吗啉代哒嗪--3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-吗啉代哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(600mg,1.93mmol)的水(5滴)DMF(10.0mL)混合溶液中依次加入氰化锌(453mg,3.86mmol)、DPPF(214mg,0.386mmol)和Pd2(dba)3(177mg,0.193mmol)。氮气保护下,反应混合液在145℃搅拌反应16小时后,停止反应。待反应液冷却至室温后加入水(15.0mL),然后用EA(20.0mL×3)萃取,合并有机相用水(15.0mL×2)和饱和食盐水(10.0mL×2)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:3),得到目标化合物(360mg,收率61.9%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 302.3[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-吗啉代哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-吗啉代哒嗪-3-甲腈(360mg,1.19mmol)的四氢呋喃(20.0mL)溶液中依次加入氨水(2.00mL)和雷尼镍(~300mg),氢气置换三次后反应混合物在氢气氛围下室温反应过夜,停止反应。将反应混合物过滤除去固体残渣、滤液减压浓缩,得到目标化合物(320mg,收率87.7%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z306.1[M+H]+。
步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-吗啉代哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-吗啉代哒嗪-3-基)甲胺(320mg,1.05mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(118mg,1.05mmol)的四氢呋喃(13.0mL)溶液中加入HATU(599mg,1.58mmol)和DIEA(271mg,2.10mmol),反应混合物在室温下反应2小时,停止反应。反应混合物减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=100:1-30:1),得到目标化合物(170mg,收率40.6%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 400.3[M+H]+。
步骤6:3-(3-氯-4-吗啉代-7-(1H-吡唑基-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-吗啉代吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(170mg,0.426mmol)的乙腈(4.00mL)溶液中加入三氯氧磷(1.00mL),反应混合物在90℃下反应1小时后,停止反应。待反应混合液冷却至室温后,将反应液慢慢滴加到0℃的饱和碳酸氢钠溶液中,然后在0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9后,用EA(15.0mL×3)萃取,合并的有机相用无水硫酸钠干燥,过滤、滤液减压浓缩,所得残留物经硅胶板(DCM:甲醇=20:1)分离纯化,得到目标化合物(80.0mg,收率45.2%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 416.1[M+H]+。
步骤7:3-(4-吗啉代-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3-(3-氯-4-吗啉代-7-(1H-吡唑基-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(80.0mg,0.192mmol)的甲醇(3.00mL)和四氢呋喃(3.00mL)混合溶液中加入钯碳(50.0mg),氢气置换三次后反应混合物在氢气氛围下50℃反应过夜后,停止反应。将反应混合物过滤除去固体残渣、滤液减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)分离纯化,得到目标化合物(4.60mg,收率6.27%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 382.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.83–7.64(m,1H),7.60–7.43(m,1H),7.25–7.02(m,1H),5.84(s,1H),4.55-4.45(m,2H),3.94–3.79(m,6H),3.51–3.43(m,4H),3.23–3.14(m,2H),2.03–1.93(m,4H)。
实施例8:8-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑
[1,5-b]哒嗪-4-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:8-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(1.00g,4.39mmol)和3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(985mg,6.58mmol)的DMF(15.0mL)溶液中加入碳酸钾(1.82g,13.2mmol)。反应混合液在氮气保护下室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(45.0mL)稀释,用饱和食盐水(35.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(1.00g,产率87.6%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z259.9[M+H]+,261.9[M+2+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.72(s,1H),4.44–4.33(m,2H),3.91–3.82(m,2H),3.72–3.62(m,2H),2.21–2.12(m,2H),2.06–1.95(m,2H)。
步骤2:8-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯吡嗪-4-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向8-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.00g,3.84mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1.15g,7.69mmol)的NMP(15.0mL)溶液中加入DIEA(1.49g,11.5mmol)。反应混合液在氮气保护下145℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(45.0mL)稀释,用饱和食盐水(35.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(770mg,产率59.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 337.0[M+H]+。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-3-甲腈的合成
向8-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯吡嗪-4-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(750mg,2.23mmol)和氰化锌(523mg,4.45mmol)的DMF(15.0mL)溶液中加入DPPF(247mg,0.445mmol)和Pd2(dba)3(204mg,0.222mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(35.0mL)稀释,用饱和食盐水(30.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(600mg,产率82.3%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 328.0[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-3-甲腈(600mg,1.83mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入雷尼镍(~323mg,5.50mmol)。反应混合液在氢气氛围下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(480mg,产率79.0%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 332.1[M+H]+。
步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)哒嗪-3-基)甲胺(480mg,1.45mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(146mg,1.30mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入HATU(661mg,1.74mmol)和DIEA(562mg,4.34mmol)。反应混合液在室温下反应1小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=0:1),得到目标化合物(400mg,产率64.9%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z426.0[M+H]+。
步骤6:8-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑[1,5-b]哒嗪-4-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下,向反应瓶中加入N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(100mg,0.235mmol)和三氯氧磷(5.00mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。冰浴下将反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液中至pH=7,然后混合液用EA(20.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱法(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(10.5mg,产率11.0%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 408.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.70(s,1H),7.58(s,1H),7.13(s,1H),5.78(s,1H),4.56–4.48(m,4H),3.90–3.80(m,4H),3.67–3.61(m,2H),3.23–3.14(m,2H),2.18–2.09(m,4H),2.01–1.94(m,4H)。
实施例9:3-(4-((R)-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-
2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷甲酸盐
步骤1:(R)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(2.00g,8.78mmol)和(R)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.64g,13.2mmol)的DMF(25.0mL)溶液中加入碳酸钾(2.43g,17.6mmol)。反应混合液在氮气保护下室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(55.0mL)稀释,用饱和食盐水(35.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(1.60g,产率52.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 346.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.83(s,1H),4.25–4.08(m,2H),3.89–3.79(m,1H),3.46–3.28(m,2H),3.23–3.02(m,2H),1.48(s,9H),1.12(d,J=6.6Hz,3H)。
步骤2:(3R)-4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向(R)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.60g,4.61mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1.38g,9.22mmol)的NMP(15.0mL)溶液中加入DIEA(1.79g,13.8mmol)。反应混合液在氮气保护下145℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(55.0mL)稀释,用饱和食盐水(35.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(1.20g,产率61.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 424.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.11(s,1H),4.54–4.49(m,2H),4.14–3.93(m,2H),3.86–3.81(m,1H),3.77–3.65(m,2H),3.44–3.31(m,2H),3.26–3.10(m,3H),2.90–2.84(m,1H),2.03–1.95(m,2H),1.90–1.82(m,2H),1.48(s,9H),1.02(d,J=6.5Hz,3H)。
步骤3:(3R)-4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氰基哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
(3R)-4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯吡嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.20g,2.83mmol)和氰化锌(665mg,5.66mmol)的DMF(20.0mL)溶液中加入DPPF(314mg,0.556mmol)和Pd2(dba)3(259mg,0.283mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(45.0mL)稀释,用饱和食盐水(30.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(1.00g,产率85.2%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 415.0[M+H]+。
步骤4:(3R)-4-(3-(氨基甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向(3R)-4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氰基吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg,1.21mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入雷尼镍(~212mg,3.62mmol,)。反应混合液在氢气氛围下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(400mg,收率79.2%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 419.1[M+H]+。
步骤5:(3R)-4-(3-((1H-吡唑-5-甲酰胺)甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向(3R)-4-(3-(氨基甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg,0.956mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(96.4mg,0.860mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入HATU(436mg,1.15mmol)和DIEA(371mg,2.87mmol)。反应混合液在室温下反应1小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=0:1),得到目标化合物(300mg,收率61.2%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 513.1[M+H]+。
步骤6:3-(4-((R)-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷甲酸盐的合成
室温下,向反应瓶中加入(3R)-4-(3-((1H-吡唑-5-甲酰胺)甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.195mmol)和三氯氧磷(5.00mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。冰浴下将反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液中至pH=7,然后混合液用EA(20.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱法(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(8.50mg,产率11.0%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z395.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.72(s,1H),7.59(s,1H),7.14(s,1H),5.93(s,1H),4.54–4.49(m,2H),3.93–3.86(m,4H),3.84–3.81(m,1H),3.73–3.59(m,2H),3.53–3.44(m,2H),3.23–3.17(m,2H),2.01–1.93(m,4H),1.32(d,J=6.9Hz,3H)。
实施例10:3-(4-(哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-
氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷甲酸盐
步骤1:4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(1.00g,4.39mmol)和叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1.23g,6.58mmol)的DMF溶液(12.0mL)中加入碳酸钾(1.82g,13.2mmol),反应混合液在室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(35.0mL),再用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(30.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(1.50g,产率100%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 334.5[M+2+H]+。
步骤2:4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯哒嗪--4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.48g,4.44mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(997mg,6.66mmol)的NMP溶液(20.0mL)中加入DIEA(1.72g,13.3mmol),反应混合液在145℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(35.0mL),再用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(30.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经层析板分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(1.20g,产率65.9%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 410[M+H]+。
步骤3:4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氰基哒嗪--4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯哒嗪--4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.10g,2.68mmol)和氰化锌(630mg,5.37mmol)的DMF(20.0mL)溶液中加入DPPF(297mg,0.537mmol)和Pd2(dba)3(246mg,0.268mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(30.0mL)稀释,用饱和食盐水(25.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(600mg,产率55.8%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 401.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.89(s,1H),4.54–4.50(m,2H),4.01–3.93(m,2H),3.64–3.61(m,4H),3.35–3.26(m,6H),2.04–1.99(m,2H),1.85–1.79(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤4:4-(3-(氨基甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哒嗪-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氰基哒嗪-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(600mg,1.50mmol)的四氢呋喃(12.0mL)溶液中加入雷尼镍(439mg,7.49mmol)和氨水(5滴)。反应混合液在氢气氛围下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(530mg,产率87.5%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z405.1[M+H]+。
步骤5:4-(3-((1H-吡唑-5-甲酰胺)甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哒嗪-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
氮气保护下,向4-(3-(氨基甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哒嗪-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(480mg,1.19mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(119mg,1.07mmol)的四氢呋喃溶液(10.0mL)中加入HATU(541mg,1.42mmol)和DIEA(306mg,2.37mmol),反应混合液在室温下搅拌反应1小时,停止反应。然后加水(25.0mL),再用EA(20.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经层析板分离纯化(DCM:甲醇=10:1),得到目标化合物(500mg,产率84.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 499.2[M+H]+。
步骤6:3-(4-(哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷甲酸盐的合成
室温下向反应瓶中加入4-(3-((1H-吡唑-5-甲酰胺)甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哒嗪-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.301mmol)和三氯氧磷(15.0mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。冰浴下将反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液中至pH=7,然后混合液用EA(25.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(5.66mg,产率4.94%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 381.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.72(s,1H),7.55(s,1H),7.14(s,1H),5.94(s,1H),4.53–4.48(m,2H),3.88–3.82(m,2H),3.70–3.63(m,4H),3.41–3.36(m,4H),3.23–3.17(m,2H),2.01–1.92(m,4H)。
实施例11:3-(4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]
哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷甲酸盐
步骤1:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-甲腈的合成
室温下,向反应瓶中加入(3R)-4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氰基吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(500mg,1.21mmol)和盐酸EA(10.0mL,3M),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(400mg,产率94.5%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 315.1[M+H]+。
步骤2:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-甲腈的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-甲腈(400mg,1.27mmol)和多聚甲醛(144mg,3.82mmol)的甲醇(10.0mL)溶液中加入硼氢化钠(115mg,3.82mmol),反应混合液在室温下搅拌反应1小时,停止反应。然后加水(20.0mL),再用EA(20.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(400mg,产率95.7%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 329.2[M+H]+。
步骤3:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-甲腈(400mg,1.22mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入雷尼镍(214mg,3.65mmol)。反应混合液在氢气氛围下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(300mg,收率74.1%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 333.1[M+H]+。
步骤4:N-((6-(8-氧基-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)吡嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-基)甲胺(300mg,0.902mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(91.0mg,0.812mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入HATU(412mg,1.08mmol)和DIEA(350mg,2.71mmol)。反应混合液在室温下反应1小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(EA=100%),得到目标化合物(200mg,收率51.9%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 427.2[M+H]+。
步骤5:3-(3-氯-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下向反应瓶中加入N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)吡嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(100mg,0.234mmol)和三氯氧磷(5.00mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。冰浴下,将反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液中至pH=7,然后混合液用EA(20.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,减压浓缩,所得残留即为目标化合物(100mg,产率96.3%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 443.3[M+H]+。
步骤6:3-(4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷甲酸盐的合成
向3-(3-氯-4-((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(100mg,0.226mmol)的甲醇(10.0mL)溶液中加入钯碳(53.5mg,5%)。反应混合液在氢气氛围下60℃反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(12.5mg,产率13.6%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 409.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.72(s,1H),7.63–7.44(m,1H),7.26–6.99(m,1H),5.84(s,1H),4.52–4.49(m,2H),3.95–3.75(m,3H),3.63–3.49(m,2H),3.22–3.11(m,3H),3.06–2.98(m,1H),2.81–2.73(m,1H),2.62–2.54(m,1H),2.52(s,3H),2.00–1.91(m,4H),1.28(d,J=6.4Hz,3H)。
实施例12:3-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1H-吡唑-3-基)-
1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
中间体6-氟-4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶的合成参考实施例5
步骤1:3-(4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将6-氟-4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(718mg,2.18mmol)溶解到二甲基亚砜(7mL)中。所得混合物氮气保护下室温搅拌均匀,加入8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(326mg,2.18mmol),反应液升温至120℃搅拌45分钟,LC-MS监测反应结束后,将反应混合物滴加到水(30mL)中,析出棕黄色固体,混合液在室温下搅拌10分钟后降至0℃,继续搅拌10分钟,悬浊液用抽滤漏斗抽滤,收集固体,水相用EA(10mL×2)萃取,所得粗产物经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:2),得到目标化合物(215mg,收率23.3%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:423.0[M+H]+。
步骤2:3-(4-碘-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(4-碘-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(215mg,0.509mmol)、DHP(86mg,1.02mmol)、对甲苯磺酸一水合物(10mg,0.051mmol)依次加入到DCM(2mL)中。反应混合物在室温下搅拌反应过夜。LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(5mL),用EA(10mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品。经制备板分离纯化(硅胶,EA:PE=1:2),得到目标化合物(210mg,收率81.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:507.1[M+H]+。
步骤3:3-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑基[3,4-b]吡啶-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(4-碘-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(210mg,0.415mmol)、8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(124mg,0.829mmol)、RuPhosPdG2(32mg,0.042mmol)、碳酸铯(405mg,1.24mmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)中。所得混合物氮气保护下110℃搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(10mL),用EA(10mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品,经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(55mg,收率27.0%,棕色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:492.2[M+H]+。
步骤4:3-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
在3-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑基[3,4-b]吡啶-4-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(55mg,0.112mmol)的甲醇(2mL)溶液中,加入4mol/L的盐酸1,4-二氧六环溶液(2mL)。所得混合物氮气保护下室温搅拌2小时,减压除去溶剂,残余物经prep-HPLC制备柱分离纯化,得到目标化合物(3.3mg,收率7.24%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:408.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.31-8.23(m,1H),7.90-7.77(m,1H),6.80(s,1H),4.63–4.49(m,4H),3.92(d,J=12.2Hz,2H),3.81(d,J=11.9Hz,2H),3.48(d,J=11.8Hz,2H),3.35(d,J=12.0Hz,2H),2.09–1.99(m,4H),1.99–1.89(m,4H).
实施例13:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-甲基-3-(1H-吡唑-
3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
中间体1-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)乙烷-1-酮的合成
将8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷盐酸盐(3.20g,32.6mmol)加入到DCM溶液(60mL)中,混合液降温至0℃,向反应混合物中加入碳酸钾(28.2g,204mmol),反应液在0℃下搅拌反应30分钟后,向反应混合物中加入乙酰氯(8mL,114mmol),反应液在室温下搅拌16小时后,TLC点板监测反应完成(EA:PE=1:1,磷钼酸显色),抽滤除去固体后,减压浓缩,得到目标化合物(3.50g,粗品,黄色油状物)。
步骤1:4-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯的合成
将1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(5.00g,27.0mmol)加入到甲醇(200mL)中,向反应混合液中加入10%钯碳(100mg),反应液用氢气置换3次后,在氢气氛围中,室温下搅拌反应过夜,LC-MS监测反应完成,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩,得到粗品目标化合物(4.50g,粗品,蓝紫色固体)。LC-MS(ESI)m/z:156.2[M+H]+.
步骤2:4-((1-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)亚乙基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯的合成
将4-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(3.48g,22.4mmol)加入到1,2-二氯乙烷溶液(35mL)中,混合液降温至0℃,向反应混合物中加入1-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)乙烷-1-酮(3.48g,22.4mmol),反应液在0℃下搅拌反应10分钟后,向反应混合物中加入三氯氧磷(6.25mL,67.3mmol),反应液在80℃下搅拌0.5小时后,LC-MS监测反应完成,减压浓缩并通过硅胶柱分离(PE:EA=1:1),得到目标化合物(3.56g,产率54.3%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:293.1[M+H]+.
步骤3:5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-醇的合成
将4-((1-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)亚乙基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(3.56g,12.2mmol)溶于DMF(70mL)中,于0℃下缓慢加入1M的双三甲基硅基胺基锂四氢呋喃溶液(36.5mL)。所得混合物在氮气保护下0℃搅拌1小时,LC-MS监测反应后,加入适量氯化铵水溶液淬灭,减压蒸馏后经硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH=20:1-10:1),得到目标化合物(2.16g,产率68.1%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:261.2[M+H]+。
步骤4:3-(7-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的
将5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-醇(2.16g,8.30mmol)溶解于乙腈(22mL)中。室温搅拌半小时后,向反应混合物中加入三氯氧磷(2.3mL,24.9mmol),并且在80℃下搅拌反应过夜。LC-MS监测反应结束后,将反应混合物旋干,经硅胶柱分离纯化(硅胶,EA:PE=1:2),得到目标化合物(2.28g,收率98.6%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:279.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89(s,1H),7.10(s,1H),4.43-4.39(m,2H),4.17(s,3H),3.82(d,J=12.2Hz,2H),2.95(d,J=12.2Hz,2H),1.85–1.76(m,2H),1.79–1.69(m,2H).
步骤5:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.20g,4.50mmol)溶解到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中,加入8-氧杂双环[3.2.1]辛烷8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(537mg,3.59mmol),RuphosPdG2(139mg,0.179mmol),以及碳酸铯(1.75g,5.38mmol)。所得混合物氮气保护下110℃搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,将反应混合物加入到水(50mL)中,水相用EA(20mL×2)萃取,饱和食盐水(10mL)洗涤。有机相旋干后经硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH=20:1),得到目标化合物(245mg,收率38.4%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z:356.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.78(s,1H),6.43(s,1H),4.46–4.30(m,4H),4.15(s,3H),3.79(d,J=12.1Hz,2H),3.10(d,J=11.4Hz,2H),2.99(d,J=11.4Hz,2H),2.90(d,J=11.7Hz,2H),2.13–2.03(m,2H),1.94–1.86(m,2H),1.83–1.71(m,4H)。
步骤6:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(95mg,0.267mmol)溶到DCM(5mL)中。反应混合物在氮气保护下加入N-溴代丁二酰亚胺(48mg,0.267mmol),反应液在室温下搅拌10分钟。LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(5mL),用DCM(5mL×3)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品。经制备硅胶板分离纯化(EA:PE=1:2)目标化合物3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(67mg,收率57.7%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:434.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.49(s,1H),4.46–4.36(m,4H),4.12(s,3H),3.87(d,J=12.3Hz,2H),3.10(d,J=11.5Hz,2H),3.04–2.89(m,4H),2.11–2.02(m,2H),1.97–1.85(m,2H),1.83–1.71(m,4H)。
步骤7:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛基)-1-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑基[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(67mg,0.154mmol)溶于1,4-二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中,加入1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑(215mg,0.772mmol)、Pd(dtbpf)Cl2(10mg,0.015mmol)和磷酸钾(98mg,0.463mmol)。所得混合物氮气保护下110℃搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(5mL),用EA(10mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品,经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:2),得到目标化合物(53mg,收率67.9%,棕色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:506.2[M+H]+。
步骤8:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-甲基-3-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
在3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛基)-1-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑基[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(53mg,0.105mmol)的甲醇(2mL)溶液中,加入4mol/L的盐酸1,4-二氧六环溶液(2mL)。所得混合物氮气保护下室温搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,减压除去溶剂,残余物经prep-HPLC制备色谱柱分离纯化,得到目标化合物(2.9mg,收率6.57%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:422.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.91-7.75(m,1H),6.90-6.77(m,1H),6.41(s,1H),4.67–4.57(m,2H),4.57–4.49(m,2H),4.27(s,3H),3.81(d,J=11.8Hz,2H),3.58(d,J=12.3Hz,2H),3.48(d,J=11.8Hz,2H),3.37(d,J=12.2Hz,2H),2.22–2.04(m,4H),2.04–1.91(m,4H)。
实施例14:3-(4-(4,4-二氟哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-
2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:3,6-二氯-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪的合成
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(1.00g,4.39mmol)和4,4-二氟哌啶(797mg,6.58mmol)的DMF(15.0mL)溶液中加入碳酸钾(1.82g,13.2mmol),氮气保护下,反应混合液在室温下搅拌反应16小时后,停止反应。加入水(20.0mL),然后用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相用水(20.0mL×2)和饱和食盐水(20.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=10:1-3:1),得到目标化合物(1.10g,收率93.5%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 268.0[M+H]+。
步骤2:3-(6-氯-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3,6-二氯-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪(1.10g,4.10mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(921mg,6.16mmol)的NMP(23.0mL)溶液中加入DIEA(1.59g,12.3mmol),反应混合液在145℃下搅拌16小时后,停止反应。将反应混合物冷却至室温后,加入水(25.0mL),用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相,然后用水(30.0mL×2)和饱和食盐水(30.0mL×2)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=10:1-1:1),得到目标化合物(1.20g,收率84.8%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z345.0[M+H]+。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(700mg,2.03mmol)的水(3滴)的DMF(15.0mL)混合溶液中依次加入氰化锌(476mg,4.05mmol)、DPPF(225mg,0.406mmol)和Pd2(dba)3(186mg,0.203mmol)。氮气保护下,反应混合液在145℃搅拌反应16小时后,停止反应。待反应液冷却至室温后加入水(20.0mL),然后用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相用水(20.0mL×2)和饱和食盐水(20.0mL×2)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1-1:3),得到目标化合物(450mg,收率66.1%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 336.3[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-甲腈(450mg,1.34mmol)的四氢呋喃(20.0mL)溶液中依次加入氨水(2.00mL)和雷尼镍(400mg),氢气置换三次后反应混合物在氢气氛围下室温反应过夜,停止反应。将反应混合物过滤除去固体残渣、滤液经减压浓缩、真空干燥,得到目标化合物(450mg,收率98.8%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 340.2[M+H]+。
步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲胺(450mg,1.33mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(134mg,1.20mmol)的四氢呋喃(20.0mL)溶液中加入HATU(605mg,1.60mmol)和DIEA(343mg,2.66mmol),反应混合物在室温下反应1小时后,向反应液中加入氢氧化钠(1.60mL,1M)溶液,继续搅拌反应1小时,停止反应。将反应混合物加水(25.0mL)稀释,然后用(DCM:甲醇)=10:1(30.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水(30.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=100:1-30:1),得到目标化合物(330mg,收率57.4%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 434.3[M+H]+。
步骤6:3-(4-(4,4-二氟哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(330mg,0.761mmol)溶于三氯氧磷(12.0mL)溶液中,反应混合物在120℃下反应1小时后,停止反应。待反应混合液冷却至室温后,将反应液慢慢滴加到0℃的饱和碳酸氢钠溶液中,然后在0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9后,用EA(40.0mL×3)萃取,合并的有机层用无水硫酸钠干燥,过滤、滤液减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)分离纯化,得到目标化合物(127.46mg,收率40.3%,灰色固体)。LC-MS(ESI)m/z 416.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.16(Brs,1H),7.71–7.64(m,1H),7.62(s,1H),7.12-7.03(m,1H),5.93(s,1H),4.47(s,2H),3.82(d,J=12.2Hz,2H),3.65–3.59(m,4H),3.06(d,J=11.1Hz,2H),2.22–2.11(m,4H),1.87–1.81(m,4H)。
实施例15:3-(4-((S)-3-甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-
基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:(S)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基吗啉的合成
向3,4,6-三氯哒嗪(2.00g,10.9mmol)和(S)-3-甲基吗啉(1.65g,16.3mmol)的NMP(20.0mL)溶液中加入碳酸钾(4.52g,32.7mmol),氮气保护下,反应混合液在室温下搅拌反应16小时后,停止反应。加入水(25.0mL),然后用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相用水(20.0mL×2)和饱和食盐水(20.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=10:1-3:1),得到目标化合物(1.70g,收率62.8%,淡黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 247.9[M+H]+。
步骤2:3-(6-氯-5-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向(S)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基吗啉(900mg,3.63mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(814mg,5.44mmol)的NMP(15.0mL)溶液中加入DIEA(1.41g,10.9mmol),反应混合液在145℃下搅拌16小时后,停止反应。将反应混合物冷却至室温后,加入水(20.0mL),用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相,然后用水(20.0mL×2)和饱和食盐水(20.0mL×2)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:1),得到目标化合物(770mg,收率65.4%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z325.3[M+H]+。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(770mg,2.37mmol)的水(3滴)和DMF(15.0mL)混合溶液中依次加入氰化锌(557mg,4.74mmol)、DPPF(263mg,0.474mmol)和Pd2(dba)3(217mg,0.237mmol)。氮气保护下,反应混合液在145℃搅拌反应16小时后,停止反应。待反应液冷却至室温后加入水(20.0mL),然后用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相用水(20.0mL×2)和饱和食盐水(20.0mL×2)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1-1:4),得到目标化合物(670mg,收率89.6%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 316.1[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈(670mg,2.12mmol)的四氢呋喃(15.0mL)溶液中依次加入氨水(1.50mL)和雷尼镍(500mg),氢气置换三次后反应混合物在氢气氛围下室温反应过夜,停止反应。将反应混合物过滤除去固体残渣、滤液经减压浓缩、真空干燥,得到目标化合物(630mg,收率92.8%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 320.3[M+H]+。
步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺(330mg,1.03mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(116mg,1.03mmol)的四氢呋喃(15.0mL)溶液中加入HATU(471mg,1.24mmol)和DIEA(267mg,2.06mmol),反应混合物在室温下反应1小时后,向反应液中加入氢氧化钠(1mol/L)溶液,继续搅拌反应1小时,停止反应。将反应混合物加水(20.0mL)稀释,然后用(DCM:甲醇)=10:1(25.0mL×2)萃取,有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=100:1-20:1),得到目标化合物(275mg,收率64.4%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 414.3[M+H]+。
步骤6:3-(4-((S)-3-甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑5-甲酰胺(275mg,0.665mmol)溶于三氯氧磷(12.0mL)溶液中,反应混合物在120℃下反应1小时后,停止反应。待反应混合液冷却至室温后,将反应液慢慢滴加到0℃的饱和碳酸氢钠溶液中,然后在0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9后,用EA(30.0mL×3)萃取,合并的有机层用无水硫酸钠干燥,过滤、滤液减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)分离纯化,得到目标化合物(112.12mg,收率42.6%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 396.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.20(Brs,1H),7.72–7.61(m,2H),7.08(s,1H),5.78(s,1H),4.49–4.43(m,2H),4.38–4.31(m,1H),3.99–3.92(m,1H),3.84–3.75(m,3H),3.74–3.68(m,1H),3.65–3.57(m,1H),3.49–3.39(m,2H),3.10–3.02(m,2H),1.88–1.80(m,4H),1.15(d,J=6.6Hz,3H)。
实施例16:3-(4-顺-2,6-二甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-
2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-顺-2,6-二甲基吗啉的合成
向3,4,6-三氯哒嗪(3.00g,16.4mmol)和顺-2,6-二甲基吗啉(3.01g,26.1mmol)的NMP(30.0mL)溶液中加入碳酸钾(6.78g,49.1mmol),氮气保护下,反应混合液在室温下搅拌反应16小时后,停止反应。加入水(35.0mL),然后用EA(40.0mL×3)萃取,合并有机相用水(30.0mL×2)和饱和食盐水(30.0mL×2)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=10:1-3:1),得到目标化合物(3.70g,收率86.3%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 262.2[M+H]+。
步骤2:3-(6-氯-5-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向4-(3,6-二氯哒-4-基)-顺2,6-二甲基吗啉(1.00g,3.81mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(913mg,6.10mmol)的NMP(15.0mL)溶液中加入DIEA(1.48g,11.4mmol),反应混合液在145℃下搅拌16小时后,停止反应。将反应混合物冷却至室温后,加入水(25.0mL),用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相,然后用水(25.0mL×2)和饱和食盐水(25.0mL×2)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:1),得到目标化合物(1.00g,收率77.3%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z339.3[M+H]+。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.00g,2.95mmol)的水(5滴)的DMF(20.0mL)混合溶液中依次加入氰化锌(695mg,5.92mmol)、DPPF(328mg,0.592mmol)和Pd2(dba)3(271mg,0.295mmol)。氮气保护下,反应混合液在145℃搅拌反应16小时后,停止反应。待反应液冷却至室温后加入水(20.0mL),然后用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL×4)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:3),得到目标化合物(860mg,收率88.5%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 330.3[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈(860mg,2.61mmol)的四氢呋喃(20.0mL)溶液中依次加入氨水(2.00mL)和雷尼镍(~600mg),氢气置换三次后反应混合物在氢气氛围下室温反应过夜,停止反应。将反应混合物过滤除去固体残渣、滤液经减压浓缩、真空干燥,得到目标化合物(710mg,收率81.6%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z 334.3[M+H]+。
步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺(350mg,1.05mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(118mg,1.05mmol)的四氢呋喃(15.0mL)溶液中加入HATU(479mg,1.26mmol)和DIEA(271mg,2.10mmol),反应混合物在室温下反应1小时后,向反应液中加入氢氧化钠(1mol/L)溶液,继续搅拌反应1小时,停止反应。将反应混合物加水(20.0mL)稀释,然后用(DCM:甲醇)=10:1(25.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水(20.0mL×2)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(甲醇:DCM=5%),得到目标化合物(280mg,收率62.4%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z428.4[M+H]+。
步骤6:3-(4-(顺-2,6-二甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-4-(顺-2,6-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(150mg,0.351mmol)溶于三氯氧磷(6.00mL)溶液中,反应混合物在120℃下反应1小时后,停止反应。待反应混合液冷却至室温后,将反应液慢慢滴加到0℃的饱和碳酸氢钠溶液中,然后在0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9后,用EA(30.0mL×3)萃取,合并的有机层用无水硫酸钠干燥,过滤、滤液减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)分离纯化,得到目标化合物(54.42mg,收率37.9%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 410.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(Brs,1H),7.68-7.62(m,2H),7.07(d,J=1.8Hz,1H),5.85(s,1H),4.47(s,2H),3.90–3.74(m,6H),3.09–3.02(m,2H),2.66–2.57(m,2H),1.88–1.81(m,4H),1.19(d,J=6.2Hz,6H)。
实施例17:3-(4-(哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-
氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:3,6-二氯-4-(哌啶-1-基)哒嗪的合成
向3,4,6-三氯哒嗪(2.00g,10.9mmol)和哌啶(1.39g,16.4mmol)的NMP(25.0mL)溶液中加入碳酸钾(3.01g,21.8mmol)。反应混合液在氮气保护下室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(45.0mL)稀释,用饱和食盐水(45.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(2.30g,产率90.9%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 232.1[M+H]+。
步骤2:3-(6-氯-5-(哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3,6-二氯-4-(哌啶-1-基)哒嗪(3.00g,12.9mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(3.87g,25.8mmol)的NMP溶液(60.0mL)中加入DIEA(6.75mL,38.7mmol),反应混合液在145℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(50.0mL),再用EA(40.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(30.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经层析柱分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(1.20g,产率30.1%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 309.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.12(s,1H),4.52–4.46(m,2H),3.82–3.75(m,2H),3.20–3.18(m,1H),3.18–3.15(m,1H),3.13–3.07(m,4H),2.01–1.94(m,2H),1.88–1.82(m,2H),1.76–1.71(m,4H),1.66–1.58(m,2H)。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-(哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.20g,3.89mmol)和氰化锌(912mg,7.77mmol)DMF(25.0mL)溶液中加入DPPF(431mg,0.777mmol)和Pd2(dba)3(356mg,0.388mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(40.0mL)稀释,用饱和食盐水(35.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(1.20g,产率100%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 300.2[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)哒嗪-3-甲腈(1.2g,4.01mmol)的四氢呋喃(20.0mL)溶液中加入雷尼镍(~1.18g,20.0mmol)和氨水(5滴)。反应混合液在氢气氛围下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(1.10g,收率90.4%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 304.1[M+H]+。
步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲胺(500mg,1.65mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(166mg,1.48mmol)的四氢呋喃溶液(12.0mL)中加入HATU(752mg,1.98mmol)和DIEA(639mg,4.94mmol),反应混合液在室温下搅拌反应45分钟,停止反应。向反应液中滴加氢氧化钠溶液搅拌2分钟,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=10:1),得到目标化合物(300mg,产率45.8%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z398.2[M+H]+。
步骤6:3-(4-(哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下向反应瓶中加入N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(150mg,0.327mmol)和三氯氧磷(9.00mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。将反应液滴加到饱和碳酸氢钠水溶液中并调节pH=7,然后混合液用EA(20.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(51.7mg,产率36.1%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 380.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.69(s,1H),7.47(s,1H),7.10(s,1H),5.77(s,1H),4.51–4.48(m,2H),3.83–3.79(m,2H),3.52–3.48(m,4H),3.21–3.16(m,2H),1.99–1.95(m,4H),1.79–1.74(m,6H)。
实施例18:3-(4-(2-甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑基-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-
基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-2-甲基吗啉的合成
向3,4,6-三氯哒嗪(2.00g,10.9mmol)和2-甲基吗啉(1.32g,13.1mmol)的NMP(25.0mL)溶液中加入碳酸钾(3.01g,21.8mmol)。反应混合液在氮气保护下室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(45.0mL)稀释,用饱和食盐水(45.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(2.30g,产率85.0%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 248.1[M+H]+。
步骤2:3-(6-氯-5-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-2-甲基吗啉(2.30g,9.27mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(2.08g,13.9mmol)的NMP(25.0mL)溶液中加入DIEA(2.40g,18.5mmol)。反应混合液在氮气保护下145℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(45.0mL)稀释,用饱和食盐水(45.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(2.00g,产率76.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 225.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.13(s,1H),4.55–4.48(m,2H),4.01–3.94(m,1H),3.89–3.80(m,4H),3.50–3.43(m,2H),3.25–3.19(m,2H),2.89–2.80(m,1H),2.57–2.49(m,1H),2.04–1.96(m,2H),1.91–1.82(m,2H),1.24(d,J=6.3Hz,3H)。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.80g,5.54mmol)和氰化锌(1.30g,11.1mmol)DMF(35.0mL)溶液中加入DPPF(614mg,1.11mmol)和Pd2(dba)3(507mg,0.554mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(55.0mL)稀释,用饱和食盐水(40.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(1.50g,产率85.8%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 316.0[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈(1.50g,4.76mmol)的四氢呋喃(30.0mL)溶液中加入雷尼镍(~1.40g,23.8mmol)。反应混合液在氢气氛围下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=10:1),得到目标化合物(1.50g,收率98.7%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 320.0[M+H]+。步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺(500mg,1.57mmol)和1H-吡唑-5-甲酸(158mg,1.41mmol)的四氢呋喃(10.0mL)溶液中加入HATU(714mg,1.88mmol)和DIEA(607mg,4.70mmol)。反应混合液在室温下反应1小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=0:1),得到目标化合物(500mg,收率77.2%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 414.0[M+H]+。
步骤6:3-(4-(2-甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑基-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下,向反应瓶中加入N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(2-甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(200mg,0.484mmol)和三氯氧磷(6.00mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。将反应液滴加到饱和碳酸氢钠水溶液中并调节pH=7,然后混合液用EA(30.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,减压浓缩,所得残留物经反相制备色谱(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(82.0mg,产率42.9%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 396.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.86–7.63(m,1H),7.62–7.41(m,1H),7.13(s,1H),5.84(s,1H),4.54–4.47(m,2H),4.04–3.98(m,1H),3.87–3.78(m,6H),3.22–3.16(m,2H),3.13–3.04(m,1H),2.79–2.70(m,1H),2.01–1.93(m,4H),1.25(d,J=6.1Hz,3H)。
实施例19:3-(1-甲基-7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[4,
3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
中间体3-(7-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成参考实施例13
步骤1:3-(3-溴-7-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(200mg,0.718mmol)溶到DCM(5mL)中。反应混合物在氮气保护下加入N-溴代丁二酰亚胺(128mg,0.718mmol),反应液在室温下搅拌10分钟。LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(5mL),用DCM(5mL×3)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品。经硅胶柱分离纯化(EA:PE=1:4),得到目标化合物(241mg,收率93.9%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:357.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.20(s,1H),4.45–4.36(m,2H),4.20(s,3H),3.87(d,J=12.4Hz,2H),2.99(d,J=12.4Hz,2H),1.86–1.76(m,2H),1.75–1.69(m,2H).
步骤2:3-(7-氯-1-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(3-溴-7-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(201mg,0.562mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)中,加入1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑(313mg,1.12mmol)、Pd(dtbpf)Cl2(36.3mg,0.056mmol)和磷酸钾(358mg,1.69mmol)。所得混合物氮气保护下40℃搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,向反应混合物中加入水(5mL),用EA(10mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品,经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:2),得到目标化合物(102mg,收率42.3%,棕色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:429.2[M+H]+。
步骤3:3-(1-甲基-7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-氯-1-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(80mg,0.187mmol)溶解到N-甲基吡咯烷酮(1mL)中,加入(3R)-3-甲基吗啉(37.7mg,0.373mmol),RuphosPdG2(14.5mg,0.019mmol),碳酸铯(182mg,0.560mmol)以及碘化亚铜(35.5mg,0.187mmol)。所得混合物氮气保护下110℃搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,将反应混合物加水(10mL)中,水相用EA(20mL×2)萃取,饱和食盐水(10mL)洗涤。有机相干燥旋干后经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(39mg,收率42.4%,棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z:494.3[M+H]+。
步骤4:3-(1-甲基-7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
在3-(1-甲基-7-((R)-3-甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(39.0mg,0.079mmol)的甲醇(2mL)溶液中,加入4mol/L的盐酸1,4-二氧六环溶液(2mL)。所得混合物氮气保护下室温搅拌2小时,LC-MS监测反应结束后,减压除去溶剂,残余物经prep-HPLC制备色谱柱分离纯化,得到目标化合物(4.2mg,收率13.0%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:410.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.82-7.73(m,1H),6.89-6.85(m,1H),6.50(s,1H),4.26(s,3H),4.07–3.94(m,2H),3.91–3.78(m,4H),3.74–3.64(m,1H),3.65–3.55(m,1H),3.51–3.37(m,3H),3.17–3.02(m,2H),2.09–2.00(m,2H),2.02–1.93(m,2H),1.17(d,J=6.4Hz,3H).
实施例20:3-(4-(3,3-二甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-
基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3,3-二甲基吗啉的合成
向3,4,6-三氯吡啶(7.64g,41.7mmol)的N-甲基吡咯烷酮溶液(30.0mL)中加入3,3-二甲基吗啉(4.00g,34.7mmol)和DIEA(13.5g,104mmol),反应混合液在氮气保护下100℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(70.0mL)稀释,用饱和食盐水(50.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1)得到目标化合物(2.00g,产率22.0%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 262.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13(s,1H),3.90–3.86(m,2H),3.47(s,2H),3.32–3.29(m,2H),1.32(s,6H)。
步骤2:3-(6-氯-5-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3,3-二甲基吗啉(2.50g,9.54mmol)和(1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(2.14g,14.3mmol)的N-甲基吡咯烷酮(30.0mL)溶液中加入DIEA(3.70g,28.6mmol)。反应混合液在氮气保护下145℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用水(50.0mL)稀释,用乙酸乙酯(40.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(30.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经层析柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯=1:1)得到目标化合物(2.50g,产率77.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z339.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.49(s,1H),4.54–4.51(m,2H),3.87–3.84(m,2H),3.79(d,J=12.1Hz,2H),3.47(s,2H),3.26–3.24(m,1H),3.23–3.19(m,3H),2.04–1.99(m,2H),1.90–1.85(m,2H),1.27(s,6H)。
步骤3:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.40g,4.13mmol)和氰化锌(970mg,8.26mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(30.0mL)溶液中加入2-(二苯基膦酰基)环戊二烯基铁(458mg,0.826mmol)和三二亚苄基丙酮二钯(378mg,0.413mmol)。反应混合液在氮气保护下135℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用乙酸乙酯(50.0mL)稀释,用饱和食盐水(30.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(800mg,产率58.8%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 330.2[M+H]+。
步骤4:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-甲腈(800mg,2.43mmol)的四氢呋喃(15.00mL)溶液中加入雷尼镍(428mg,7.29mmol)和氨水(1.00mL)。反应混合液在氢气环绕下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合(500mg,收率61.7%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 334.1[M+H]+。
步骤5:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲胺(500mg,1.50mmol)和1H-吡唑-5-羧酸(151mg,1.35mmol)的四氢呋喃溶液(15.0mL)中加入2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲(684mg,1.80mmol)和DIEA(581mg,4.50mmol),反应混合液在室温下搅拌反应1小时,停止反应。然后加水(30.0mL),再用乙酸乙酯(25.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=10:1)得到目标化合物(300mg,产率46.8%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 428.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.16(s,1H),7.60–7.56(m,1H),6.81–6.77(m,1H),6.65(s,1H),5.29(s,1H),4.91–4.78(m,2H),4.55–4.50(m,2H),3.97–3.89(m,2H),3.84–3.76(m,2H),3.55(s,2H),3.26–3.21(m,2H),3.19–3.09(m,2H),2.04–1.99(m,2H),1.91–1.85(m,2H),1.16(s,6H)。
步骤6:3-(4-(3,3-二甲基吗啉代)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下向N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(3,3-二甲基吗啉代)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(250mg,0.585mmol)的乙腈(5.00mL)溶液中加入三氯氧磷(6.00mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。将反应液减压浓缩,所得残留物经反相制备(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化得到目标化合物(58.9mg,产率24.6%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 410.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75–7.69(m,1H),7.44(s,1H),7.09–7.05(m,1H),5.99(s,1H),4.60–4.54(m,2H),3.94–3.89(m,2H),3.67–3.62(m,2H),3.52(s,2H),3.50–3.46(m,2H),3.36–3.31(m,2H),2.09–2.02(m,2H),1.96–1.89(m,2H),1.35(s,6H)。
实施例23:4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1H-吡唑-
5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇
步骤1:3-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(5.00g,32.6mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(7.31g,48.8mmol)的N-甲基吡咯烷酮(60.0mL)溶液中加入DIEA(12.6g,97.7mmol)。反应混合液在氮气保护下100℃搅拌反应1小时,停止反应。然后将反应液用乙酸乙酯(85.0mL)稀释,用饱和食盐水(55mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1)得到目标化合物(3.60g,产率48.0%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 231.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(d,J=7.8Hz,1H),7.88(d,J=2.0Hz,1H),6.26(d,J=7.8Hz,1H),6.13(d,J=1.9Hz,1H),4.57–4.47(m,2H),3.92(d,J=12.5Hz,2H),3.27(dd,J=12.6,2.4Hz,2H),2.06–1.94(m,2H),1.87–1.74(m,2H).
步骤2:4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇的合成
氮气氛围下,将(1R,5S)-3-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.50g,6.51mmol)的四氢呋喃(20.0mL)溶液降温至-78℃。然后滴加正丁基锂(8.14mL,13.0mmol,1.6M),反应混合液在-78℃搅拌反应1小时,再缓慢滴加四氢-4H-吡喃-4-酮(1.30g,13.0mmol),反应液室温搅拌过夜,停止反应。加入氯化铵水溶液(45.0mL)稀释,再用EA(45.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(35.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(500mg,收率23.2%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 331.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.86(d,J=2.3Hz,1H),6.21(d,J=2.2Hz,1H),6.15(s,1H),4.56–4.50(m,2H),4.31–4.27(m,2H),4.23–4.19(m,2H),3.77–3.76(m,2H),3.33–3.26(m,2H),2.27–2.20(m,2H),2.12–2.07(m,2H),2.03–1.96(m,2H),1.88–1.82(m,2H).
步骤3:4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-碘吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇的合成
向4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇(400mg,1.21mmol)的乙腈(10.0mL)溶液降中加入N-碘代丁二酰亚胺(272mg,1.21mmol),反应混合液在室温下搅拌反应1小时,停止反应。然后加水(35.0mL)稀释,再用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(30.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(400mg,产率72.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 457.1[M+H]+。
步骤4:4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇的合成
氮气保护下向4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-碘吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇(400mg,0.877mmol)和1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯并呋喃-2-基)-1H-吡唑(366mg,1.31mmol)的1,4-二氧六环(10.0mL)和水(2.00mL)的溶液降中加入二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(55.9mg,0.0877mmol)和磷酸钾(558mg,2.63mmol),反应混合液在100℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(35.0mL)稀释,再用EA(35.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(35.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(150mg,收率35.6%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 481.4[M+H]+。
步骤5:4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇的合成
室温下向反应瓶中加入4-(5-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-7-基)四氢-2H-吡喃-4-醇(150mg,0.312mmol)和盐酸乙酸乙酯(10.0mL,3M),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。减压浓缩,所得残留物经反相制备(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化得到目标化合物(66.6mg,产率53.8%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 397.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(s,1H),7.64(s,1H),6.56(s,1H),6.20(s,1H),4.59–4.55(m,2H),4.11–4.05(m,2H),4.04–3.93(m,2H),3.93–3.87(m,2H),3.40–3.34(m,2H),2.26–2.20(m,2H),2.13–2.02(m,4H),1.88–1.80(m,2H).
实施例26:3-(7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧
啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:5-氯-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的合成
室温下,在氮气保护下向5,7-二氯吡唑[1,5-a]嘧啶(1.00g,5.32mmol)和1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.33g,6.38mmol)的水(1.00mL)和二氧六环(4.00mL)混合溶液中加入碳酸钠(1.69g,16.0mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(340mg,0.532mmol)。反应混合液在氮气保护下90℃搅拌反应10小时后,停止反应。待反应液冷却后,加入水(20.0mL),再用EA(30.0mL×2)萃取,合并有机相用,饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥、减压浓缩,所得残留物经正相层析柱分离纯化(EA:PE=1:1),得到粗产品(370mg,产率29.7%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 233.9[M+H]+。
步骤2:3-(7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下向5-氯-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(370mg,1.58mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(358mg,2.39mmol)的NMP(15.0mL)溶液中加入DIEA(613mg,4.75mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃微波反应器中反应2小时,停止反应。然后将反应液用EA(35.0mL)稀释,用饱和食盐水(30.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(260mg,产率52.9%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 311.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(d,J=2.2Hz,1H),7.61(d,J=1.9Hz,1H),6.63(d,J=1.9Hz,1H),6.30(s,1H),6.23(d,J=2.2Hz,1H),4.55–4.50(m,2H),3.97–3.90(m,2H),3.88(s,3H),3.33–3.27(m,2H),2.04–1.98(m,2H),1.90–1.82(m,2H)。
步骤3:3-(3-碘-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3-(7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(260mg,0.837mmol)的乙腈(10.0mL)溶液中加入NIS(188mg,0.837mmol),反应混合液在室温下搅拌反应3小时,停止反应。然后加水(15.0mL),再用EA(20.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(15.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(300mg,产率82.1%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 436.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(s,1H),7.62(d,J=1.9Hz,1H),6.61(d,J=1.9Hz,1H),6.30(s,1H),4.57–4.52(m,2H),4.11–3.89(m,2H),3.85(s,3H),3.37–3.30(m,2H),2.05–1.99(m,2H),1.90–1.82(m,2H)。
步骤4:3-(7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
氮气保护下向3-(3-碘-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(300mg,0.687mmol)和1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(286mg,1.03mmol)的1,4-二氧六环(10.0mL)和水(2.00mL)的溶液中加入Pd(dtbpf)Cl2(43.8mg,0.0687mmol)和磷酸钾(437mg,0.2.06mmol),反应混合液在60℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(30.0mL)稀释,再用EA(30.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(25.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(150mg,收率47.3%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 461.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),7.68(d,J=1.5Hz,1H),7.64(d,J=1.9Hz,1H),6.71–6.63(m,2H),6.38(s,1H),5.51–5.39(m,1H),4.60–4.51(m,2H),4.09–3.95(m,2H),3.93(s,3H),3.72–3.61(m,1H),3.39–3.30(m,2H),2.72–2.59(m,1H),2.16–2.09(m,1H),2.02–1.96(m,2H),1.88–1.77(m,3H),1.64–1.55(m,2H)。
步骤5:3-(7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下向反应瓶中加入3-(7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(150mg,0.325mmol)和盐酸的EA溶液(5.00mL,3M),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。减压浓缩,所得残留物经反相制备(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(82.68mg,产率67.4%,淡黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 377.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89–12.58(m,1H),8.38–8.19(m,1H),7.80–7.45(m,2H),6.89–6.68(m,3H),4.52–4.46(m,2H),4.31–4.03(m,2H),3.85(s,3H),3.23–3.15(m,2H),1.89–1.74(m,4H)。
实施例27:3-(8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒
嗪-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成
向8-溴-6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(2.00g,8.60mmol)的乙腈(30.0mL)溶液中加入NIS(1.94g,8.60mmol),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。然后加水(45.0mL),再用EA(40.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(40.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1),得到目标化合物(3.00g,产率97.3%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 357.8[M+H]+,359.8[M+2+H]+。
步骤2:8-溴-6-氯-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成
氮气保护下,向8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(2.00g,5.58mmol)和1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.55g,5.58mmol)的1,4-二氧六环(20.0mL)和水(4.00mL)的溶液中加入四三苯基膦钯(644mg,0.558mmol)和磷酸钾(3.55g,16.7mmol),反应混合液在室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(45.0mL),再用EA(45.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(45.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=3:1),得到目标化合物(400mg,产率18.7%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 382.0[M+H]+,384.0[M+2+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(s,1H),7.73(s,1H),7.46(s,1H),6.91(s,1H),5.32–5.27(m,1H),4.11–4.06(m,1H),3.68–3.62(m,1H),2.65–2.56(m,1H),2.02–1.97(m,2H),1.77–1.70(m,1H),1.63–1.57(m,2H)。
步骤3:6-氯-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑[1,2-b]哒嗪的合成
氮气保护下,向8-溴-6-氯-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(400mg,1.05mmol)和1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(217mg,1.05mmol)的1,4-二氧六环(10.0mL)和水(2.00mL)的溶液中加入1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(76.5mg,0.105mmol)和磷酸钾(666mg,3.14mmol),反应混合液在60℃下搅拌反应2小时,停止反应。然后加水(25.0mL),再用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(150mg,产率37.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z384.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(s,1H),7.73(s,1H),7.46(s,1H),6.91(s,1H),5.32–5.27(m,1H),4.11–4.06(m,1H),3.68–3.62(m,1H),2.65–2.56(m,1H),2.02–1.97(m,2H),1.77–1.70(m,1H),1.63–1.57(m,2H)。
步骤4:3-(8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
氮气保护下,向6-氯-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑[1,2-b]哒嗪(150mg,0.391mmol)和(2-氨基-2-[1,1'-联苯]-2-基)(二环己基(2,6-二异丙氧基-2-[1,1'-联苯]-2-基)-膦酰基)钯(II)氯化物(39.1mg,0.0391mmol)的甲苯(6.00mL)的溶液中加入碳酸铯(382mg,1.17mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(66.3mg,0.443mmol),反应混合液在110℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(15.0mL),再用EA(15.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1),得到目标化合物(60.0mg,产率33.3%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 461.2[M+H]+。
步骤5:3-(8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下,向反应瓶中加入3-(8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(60.0mg,0.130mmol)和盐酸的EA溶液(5.00mL,3M),反应混合液在室温下搅拌反应2小时,停止反应。减压浓缩,所得残留物经反相制备(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化,得到目标化合物(18.0mg,产率36.7%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 377.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.98(s,1H),7.82–7.74(m,1H),7.63(d,J=1.9Hz,1H),7.24–7.18(m,1H),7.17(s,1H),6.71(d,J=1.9Hz,1H),4.58–4.52(m,2H),3.93(s,4H),3.90–3.88(m,1H),3.30–3.28(m,1H),3.28–3.25(m,1H),2.04–1.97(m,4H).
实施例28:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)吡
唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
5,7-二氯吡唑[1,5-a]嘧啶(1.00g,5.32mmol)和(1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(2.39g,16.0mmol)的N-甲基吡咯烷酮(15.0mL)溶液中加入DIEA(2.06g,16.0mmol),反应混合液在145℃下搅拌反应16小时,停止反应。待反应混合物冷却至室温后,加入水(20.0mL)稀释,用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相并用水(20.0mL×3)和饱和食盐水(20.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=10:1-1:1)得到目标化合物(550mg,收率30.3%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 342.3[M+H]+。
步骤2:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-碘吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(550mg,1.61mmol)的乙腈(20.0mL)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(399mg,1.77mmol)。反应混合液在室温下搅拌反应2小时后,停止反应。将反应混合物减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:1)得到目标化合物(500mg,收率66.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 468.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90(s,1H),5.70(s,1H),4.45–4.38(m,4H),4.08–3.98(m,4H),3.09–3.00(m,4H),2.07–1.98(m,2H),1.90–1.78(m,4H),1.75–1.65(m,2H).
步骤3:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-碘吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(300mg,0.642mmol)和1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯并呋喃-2-基)-1H-吡唑(268mg,0.963mmol)的水(1.00mL)和1,4-二氧六环(5.00mL)混合溶液中加入碳酸钾(177mg,1.28mmol)、[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁]二氯化钯(42.0mg,0.0642mmol)。反应混合液在氮气保护下60℃搅拌反应8小时后,停止反应。待反应液冷却至室温后加入水(10.0mL),然后用EA(15.0mL×3)萃取,有机相用饱和食盐水(15.0mL×2)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1-1:3)得到目标化合物(150mg,收率47.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 492.4[M+H]+。
步骤4:3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
3-(7-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(120mg,0.244mmol)的氯化氢甲醇溶液(3.0M,3.00mL)在室温下搅拌反应1小时,停止反应。将反应混合物减压浓缩,所得残留物经反相制备(乙腈/水含0.05%甲酸)分离纯化得到目标化合物(33.96mg,收率34.1%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 408.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.64(Brs,1H),8.23(s,1H),7.55(s,1H),6.69(s,1H),5.72(s,1H),4.49–4.41(m,4H),4.16–4.04(m,4H),3.09(d,J=10.9Hz,4H),2.11–2.01(m,2H),1.92–1.80(m,4H),1.77–1.68(m,2H)。
实施例29:1-((R)-4-(2-((1R,S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-
(1H-吡唑-3-基)咪唑[1,5-b]哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮
步骤1:(R)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向(R)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.00g,24.9mmol)的N-甲基吡咯烷酮(35.0mL)溶液降中加入3,4,6-三氯哒嗪(5.49g,29.9mmol)和DIEA(9.68g,74.9mmol),反应混合液在氮气保护下室温搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(60.0mL)稀释,再用乙酸乙酯(50.0mL×3)萃取,再用饱和食盐水(40.0mL)洗涤有机相后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯=5:1)得到目标化合物(3.50g,产率40.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 346.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.83(s,1H),4.21–4.16(m,1H),4.14–4.08(m,1H),3.83(d,J=13.1Hz,1H),3.42–3.29(m,2H),3.13–3.09(m,2H),1.47(s,9H),1.12(d,J=6.6Hz,3H).
步骤2:(R)-3,6-二氯-4-(2-甲基哌嗪-1-基)哒嗪的合成
向反应瓶中加入叔丁基(R)-4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯(3.50g,10.1mmol)和盐酸/乙酸乙酯(8.00mL,4M),反应混合液在室温下搅拌反应5小时,停止反应。将反应液减压浓缩,得到目标化合物(2.30g,产率80.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 247.0[M+H]+。
步骤3:(R)-1-(4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的合成
向(R)-3,6-二氯-4-(2-甲基哌嗪-1-基)哒嗪盐酸盐(2.30g,8.11mmol)的二氯甲烷(20.0mL)溶液中加入乙酰氯(0.955g,12.2mmol)和三乙胺(2.46g,24.3mmol),反应混合液在室温下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(50.0mL)稀释,再用乙酸乙酯(45.0mL×3)萃取,再用饱和食盐水(30.0mL)洗涤有机相后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经层析板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯=5:1)得到目标化合物(2.00g,产率85.2%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 288.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.85(s,1H),4.75–4.49(m,1H),4.36–4.15(m,2H),3.47–3.30(m,2H),3.23–2.94(m,2H),2.17–2.10(m,3H),1.19–1.12(m,3H)。
步骤4:1-((3R)-4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的合成
向(R)-1-(4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.00g,6.92mmol)的N-甲基甲吡咯烷酮(25.0mL)溶液降中加入(1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1.55g,10.4mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.68g,20.7mmol),反应混合液在145℃下搅拌反应16小时,停止反应。然后加水(50.0mL)稀释,再用乙酸乙酯(45.0mL×3)萃取,再用饱和食盐水(40.0mL)洗涤有机相后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(1.80g,产率71.1%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 366.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.15–6.08(m,1H),4.54–4.44(m,3H),3.97–3.82(m,2H),3.78–3.64(m,2H),3.58–3.47(m,2H),3.25–3.18(m,2H),2.20–2.13(m,2H),2.13–2.10(m,2H),2.02–1.97(m,2H),1.89–1.81(m,3H),1.06–1.01(m,3H)。
步骤5:4-((R)-4-乙酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-甲腈的合成
向1-((3R)-4-(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氯哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(1.8g,4.92mmol)和氰化锌(1.16g,9.84mmol)的DMF(30.0mL)溶液中加入2-(二苯基膦酰基)环戊二烯基铁(546mg,0.984mmol)和三二亚苄基丙酮二钯(450mg,0.492mmol)。反应混合液在氮气保护下135℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用EA(40.0mL)稀释,用饱和食盐水(35mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=10:1)得到目标化合物(1.05g,产率59.9%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 357.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.95–5.84(m,1H),4.74–4.61(m,1H),4.53(s,2H),4.30–4.18(m,1H),4.07–3.83(m,2H),3.66(s,1H),3.54–3.41(m,1H),3.36–3.17(m,4H),3.03–2.89(m,1H),2.18–2.10(m,3H),2.03–1.98(m,2H),1.87–1.79(m,2H),1.19–1.12(m,3H)。
步骤6:1-((3R)-4-(3-(氨基甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的合成
向4-((R)-4-乙酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-甲腈(1.10g,3.09mmol)的四氢呋喃(15.0mL)溶液中加入雷尼镍(543mg,9.26mmol)和氨水(1.00mL)。反应混合液在氢气环绕下室温反应5小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(660mg,收率59.3%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 361.0[M+H]+。
步骤7:N-((4-((R)-4-乙酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向1-((3R)-4-(3-(氨基甲基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(360mg,0.999mmol)和1H-吡唑-5-羧酸(101mg,0.899mmol)的四氢呋喃溶液(10.0mL)中加入2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲(0.456mg,1.20mmol)和DIEA(387mg,3.00mmol),反应混合液在室温下搅拌反应1小时,停止反应。然后加水(30.0mL),再用EA(25.0mL×3)萃取,合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)洗涤后经无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(DCM:甲醇=10:1)得到目标化合物(170mg,产率37.4%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z455.0[M+H]+。
步骤8:1-((R)-4-(2-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑[1,5-b]哒嗪-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的合成
室温下,向反应瓶中加入N-((4-((R)-4-乙酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(170mg,0.374mmol)和三氯氧磷(6.00mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。将反应液减压浓缩,所得残留物经反相制备(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化得到目标化合物(6.68mg,产率4.09%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 437.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.83–7.51(m,2H),7.13(s,1H),5.80(s,1H),4.55–4.48(m,3H),3.87–3.80(m,2H),3.74–3.42(m,4H),3.30–3.05(m,4H),2.24-2.12(m,3H),2.04–1.93(m,4H),1.26-1.13(m,3H)。
实施例30:3-(4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-
b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:1-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-2-甲基哌啶-4-酮的合成
向2-甲基哌啶-4-酮盐酸盐(3.00g,20.1mmol)和3,4,6-三氯哒嗪(4.41g,24.1mmol)的N-甲基吡咯烷酮(50.0mL)溶液中加入DIEA(6.09g,60.2mmol)。反应混合液在氮气保护下60℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释,用饱和食盐水(60.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=5:1)得到目标化合物(3.00g,产率57.5%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z260.0[M+H]+。
步骤2:3,6-二氯-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪的合成
0℃且氮气保护下向1-(3,6-二氯哒嗪-4-基)-2-甲基哌啶-4-酮(2.8g,10.7mmol)的二氯甲烷(50.0mL)溶液中加入二乙胺基三氟化硫(2.60g,16.2mmol)。反应混合液在氮气保护下0℃下搅拌反应1小时,停止反应。然后将反应液减压浓缩,所得残留物即为目标化合物(1.80g,产率59.3%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 281.9[M+H]+。
步骤3:3-(6-氯-5-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
向3,6-二氯-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪(1.80g,6.38mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1.43g,9.57mmol)的N-甲基吡咯烷酮(50.0mL)溶液中加入DIEA(2.47g,19.1mmol)。反应混合液在氮气保护下145℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用乙酸乙酯(85.0mL)稀释,用饱和食盐水(55.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(1.80g,产率78.6%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 359.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.23(s,1H),4.54–4.50(m,2H),4.09–3.96(m,1H),3.86–3.74(m,2H),3.47–3.37(m,1H),3.26–3.19(m,2H),3.13–2.99(m,1H),2.32–2.23(m,1H),2.23–2.08(m,2H),2.04–1.97(m,3H),1.90–1.84(m,2H),1.14(d,J=16.6,6.7Hz,3H)。
步骤4:6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-甲腈的合成
向3-(6-氯-5-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.8g,5.02mmol)和氰化锌(1.18g,10.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(30.0mL)溶液中加入2-(二苯基膦酰基)环戊二烯基铁(556mg,1.00mmol)和三二亚苄基丙酮二钯(459mg,0.501mmol)。反应混合液在氮气保护下140℃搅拌反应16小时,停止反应。然后将反应液用乙酸乙酯(65.0mL)稀释,用饱和食盐水(40.0mL×3)洗涤后用无水硫酸钠干燥、过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(1.50g,产率85.6%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 350.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.93(s,1H),4.53–4.50(m,2H),4.42–4.33(m,1H),4.01–3.90(m,2H),3.51–3.42(m,2H),3.31–3.26(m,2H),2.29–2.15(m,2H),2.11–1.99(m,4H),1.84–1.80(m,2H),1.24(dd,J=6.9,1.7Hz,3H)。
步骤5:(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲胺的合成
向6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-甲腈(1.50g,4.29mmol)的四氢呋喃(30.0mL)溶液中加入雷尼镍(1.26g,21.5mmol)。反应混合液在氢气环绕下室温反应16小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物即为目标化合(1.20g,产率79.1%,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z 354.0[M+H]+。
步骤6:N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向(6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲胺(1.20g,3.40mmol)和1H-吡唑-5-羧酸(342mg,3.06mmol)的四氢呋喃(30.0mL)溶液中加入2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲(1.55g,4.07mmol,)和DIEA(1.32g,10.2mmol)。反应混合液在室温下反应1小时,停止反应。然后将反应液过滤,减压浓缩,所得残留物经柱层析分离纯化(EA)得到目标化合物(1.00g,产率65.8%,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z 448.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),7.59(d,J=2.1Hz,1H),6.80(d,J=2.2Hz,1H),6.44(s,1H),4.87–4.72(m,2H),4.55–4.50(m,2H),3.86–3.77(m,2H),3.49(s,2H),3.38–3.31(m,1H),3.26–3.21(m,2H),2.35–2.22(m,2H),2.03–1.99(m,2H),1.90–1.84(m,2H),1.50–1.47(m,2H),1.02(d,J=6.2Hz,3H)。
步骤7:3-(4-(-4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
室温下向反应瓶中加入N-((6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-(4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(200mg,0.447mmol)、三氯氧磷(685mg,4.47mmol)和乙腈(5mL)。反应混合液在100℃下反应1小时,停止反应。将反应液减压浓缩,所得残留物经反相制备(乙腈/水含0.05%甲酸)纯化得到目标化合物(110mg,产率57.3%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z 430.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.81–7.59(m,2H),7.10(s,1H),5.92(s,1H),4.71–4.59(m,1H),4.47(s,2H),3.88–3.79(m,3H),3.47–3.40(m,1H),3.07(d,J=11.1Hz,2H),2.44–2.28(m,1H),2.22–2.04(m,3H),1.89-1.81(m,4H),1.21(d,J=5.6Hz,3H)。
实施例31和32:3-(4-((R)-4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷,和3-(4-((S)-4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
取50mg 3-(4-(-4,4-二氟-2-甲基哌啶-1-基)-7-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷消旋体进行(Waters SFC 150(室温,100bar,214nm)和250*25mm10mm DAICELCHIRALPAKIG(超临界二氧化碳:MEOH(+0.1%7.0mol/lAmmonia in MEOH),45:55,3.2min,100mL/min))手性拆分,分别得到先洗脱出来(保留时间较小)的P1(14.40mg,e.e.100.00%),和后洗脱出来(保留时间较大)的P2(14.37mg,e.e.99.07%)。LC-MS(ESI)m/z 430.2[M+H]+。
LC-MS(ESI)m/z 430.2[M+H]+。(P1):1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.71(s,1H),7.55(s,1H),7.13(s,1H),5.88(s,1H),4.71–4.63(m,1H),4.50(s,2H),3.87–3.76(m,3H),3.58–3.50(m,1H),3.24–3.16(m,2H),2.44–2.28(m,1H),2.24–2.08(m,3H),2.01–1.94(m,4H),1.30(d,J=6.9Hz,3H);
(P2):1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.70(s,1H),7.54(s,1H),7.13(s,1H),5.88(s,1H),4.71–4.63(m,1H),4.50(s,2H),3.86–3.76(m,3H),3.58–3.46(m,1H),3.22–3.17(m,2H),2.44–2.27(m,1H),2.25–2.08(m,3H),2.02–1.94(m,4H),1.30(d,J=7.3Hz,3H)。
实施例34:1-((R)-4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-
(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮
步骤1:1-((R)-4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑基[3,4-b]吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的合成
将(1R,5S)-3-(4-碘代-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(1g,1.97mmol)、(R)-1-(3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(561mg,3.95mmol)、RuphosG2(155mg,0.2mmol)、碳酸铯(1.93g,5.91mmol)依次加入到NMP(10mL)中,反应液在微波150度反应1小时,反应毕,待反应液冷却后,加入水(20mL),用EA(20mL×3)萃取,合并有机相用水和饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩得到粗产品,粗产品经反相柱分离纯化(MeOH:H2O=5%:95%-95%:5%)得到目标化合物(60mg,收率6.0%)。LC-MS(ESI)m/z 521.2[M+H]+。
步骤2:1-((R)-4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的合成
1-((R)-4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑基[3,4-b]吡啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(60mg,0.12mmol)加入到6M盐酸水溶液/四氢呋喃(1mL/2mL)中,室温搅拌过夜。反应结束后,用饱和碳酸氢钠水溶液调pH>8,用EA(20mL×3)萃取,合并有机层,减压浓缩得到粗产品,粗产品用EA(2mL)洗涤,所得固体为目标产物(7mg,收率14.0%,绿色固体)。LC-MS(ESI)m/z 437.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(s,1H),7.66(s,1H),6.82(s,1H),5.63(s,1H),4.62–4.49(m,2H),4.46–4.33(m,1H),4.01–3.81(m,2H),3.74(s,2H),3.66–3.45(m,2H),3.46–3.34(m,1H),3.34–3.18(m,2H),3.18–3.03(m,1H),2.24–2.10(m,3H),2.05–1.95(m,2H),1.92–1.83(m,2H),1.25–1.17(m,3H).
实施例35:(4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1H-吡
唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇
步骤1:(4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇的合成
将(1R,5S)-3-(4-碘代-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(300mg,0.6mmol)、吗啉-3-基甲醇(144mg,1.2mmol)、RuphosPdG2(48mg,0.06mmol)、碳酸铯(582mg,1.8mmol)依次加入到NMP(12mL),微波150℃搅拌反应1小时。反应结束后,用EA(20mL×3)萃取,合并有机层,水(20mL×5)洗涤,饱和食盐水(30mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩得到粗产品,粗产品经硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH=30:1)得到目标化合物(29mg,收率9.7%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:496.3[M+H]+。
步骤2:(4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇的合成
将(4-(6-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(29mg,0.06mmol)加入到6M盐酸水溶液/四氢呋喃(2mL/4mL),50℃搅拌过夜。反应结束后,用饱和碳酸氢钠水溶液调pH>8,用EA(20mL×3)萃取,合并有机层,用饱和食盐水(30mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品。硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH=15:1)得到目标产物(10mg,收率40.5%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:412.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.02(s,1H),7.61(d,J=1.5Hz,1H),6.80(s,1H),5.69(s,1H),4.57–4.47(m,2H),4.21(d,J=11.7Hz,1H),4.17–4.09(m,1H),4.10–3.98(m,2H),3.91–3.79(m,4H),3.80–3.69(m,1H),3.53(d,J=5.8Hz,2H),3.28–3.18(m,2H),2.06–1.91(m,3H),1.91–1.79(m,2H).
实施例36:3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-
基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷
步骤1:4-(5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)-3,3-二甲基吗啉的合成
将5,7-二氯吡唑[1,5-a]嘧啶(540mg,2.9mmol)、3,3-二甲基吗啉盐酸盐(1.0g,8.6mmol)、DIEA(1.1g,8.6mmol)加入到NMP(15mL)中。所得混合物氮气保护下微波100℃反应0.5小时。反应毕,向反应混合物中加入水(15mL),用EA(20mL×3)萃取。合并有机相用水(30mL×5)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品,粗产品经硅胶柱分离纯化(PE:EA=7:3),得到目标化合物(0.9g,收率116.3%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:267.0[M+H]+。
步骤2:3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将4-(5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)-3,3-二甲基吗啉(200mg,0.8mmol)、(1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(225mg,1.5mmol)、DIEA(290mg,2.3mmol)依次加入到NMP(10mL)中。反应混合物在微波仪内140℃下反应2小时。反应毕,向反应混合物中加入水(15mL),用EA(20mL×3)萃取,合并有机相用,水洗(30mL×5)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩得到粗产品。硅胶柱分离纯化(PE:EA=57%:43%)得到目标产物(202mg,收率78.6%,白色固体)。
步骤3:3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)-3-碘吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(202mg,0.6mmol)、N-碘代丁二酰亚胺(135mg,0.6mmol)加入到乙腈(5mL),室温搅拌0.5小时。反应结束后,减压浓缩得到粗产品,粗产品经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:1)得到目标化合物(224mg,收率79.7%,白色固体)。
步骤4:3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)-3-碘吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(172mg,0.4mmol)、1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯并呋喃-2-基)-1H-吡唑(153mg,0.6mmol)、磷酸钾(233mg,1.1mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(24mg,0.04mmol)依次加入到二氧六环/水(10mL/2mL)中。反应混合物在80℃油浴下反应1小时。反应结束后,向反应混合物中加入水(15mL),用EA(20mL×3)萃取,合并有机相用水(30mL×5)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤。滤液减压浓缩得到粗产品,粗产品经硅胶柱分离纯化(PE:EA=1:4)得到目标化合物(68mg,收率37.2%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:494.0[M+H]+。
步骤5:3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)-3-(1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
将3-(7-(3,3-二甲基吗啉代)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-5-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(68mg,0.1mmol)加入到6M盐酸水溶液/四氢呋喃(2mL/4mL)中,50℃搅拌反应1小时。反应结束后,用饱和碳酸氢钠水溶液调pH>8,用EA(20mL×3)萃取,合并有机层,用饱和食盐水(30mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩得到粗产品,粗产品经硅胶柱分离纯化(DCM/MeOH=30/1)得到目标化合物(38mg,收率67.9%,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:410.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),7.57(s,1H),6.70(s,1H),5.97(s,1H),4.54-4.40(m,2H),4.05(d,J=11.3Hz,2H),3.88-3.75(m,2H),3.59-3.50(m,2H),3.45(s,2H),3.12(d,J=10.4Hz,2H),1.90-1.69(m,4H),1.32(s,6H).
活性实施例
如无特别说明,以下活性实施例中所用的实验材料、试剂、操作和方法均可从市售渠道获得或基于现有技术容易地获知或制备。
活性实施例1:激酶ATR抑制测定
本实验采用Cisbio公司的均相时间分辨荧光技术
进行检测。
实验方法:如下配制缓冲液:
名称 |
来源 |
终浓度 |
母液浓度 |
体积(uL) |
HEPES(mM) |
Gibco,Cat#15630-080 |
25 |
1000 |
75 |
Brij35 |
Sigma,Cat#9002-92-0 |
0.01% |
1% |
30 |
BSA(mg/mL) |
Sigma,Cat#B2064-50G |
1 |
100 |
30 |
DTT(mM) |
Sigma,Cat#D0632-10G |
5 |
1000 |
15 |
甘油 |
Sigma,Cat#G5516-500ML |
1% |
50% |
60 |
MnCl<sub>2</sub>(mM) |
Sigma,Cat#7773-01-5 |
10 |
1000 |
30 |
H<sub>2</sub>O |
|
|
|
2760 |
共计(uL) |
|
|
|
3000 |
配制供试化合物溶液。将下表所示实施例化合物用DMSO作为溶剂配制溶液,母液通常为10mM。本实验中最大起始浓度为3μM,DMSO 3倍系列稀释,共10个浓度,加入至相应的384孔板(geriner bio-one,Cat#784075)的孔中,终浓度分别为3000、1000、333、111、37、12.3、4.12、1.37、0.457、0.152nM,在另外的孔中添加相应量的DMSO,待分别用作阴性对照孔或阳性对照孔。
将酶与底物用上述制备的缓冲液分开溶解并稀释于两管中,浓度如下表:
名称 |
来源 |
加入平板后的终浓度 |
配制浓度 |
母液浓度 |
ATR(A管) |
eurofins,Cat#14-953M |
30nM |
60nM |
410.26nM |
p53(B管) |
eurofins,Cat#14-953M |
40nM |
80nM |
9720nM |
ATP(B管) |
Sigma,Cat#R0441 |
150nM |
300nM |
10000nM |
使用电动多通道移液器以每孔5uL的体积将A管的ATR溶液添加至实验板的化合物孔以及阴性对照孔中,在阳性对照孔中添加同等体积的上述制备的缓冲液(仅介质,不加酶)。使用离心机以1000转每分钟的转速离心一分钟,随后将实验板置于恒温孵育箱中以25℃孵育15分钟。之后用同样的方法将B管的底物混合溶液添加5uL至实验板的阳性对照、阴性对照以及化合物孔中,离心并以25℃孵育90分钟。
反应过程中,当ATR将底物p53磷酸化以后加入两种抗体,其中anti-phospho-p53-Eu作为能量供体能与p53上的磷酸化位点特异性结合,而anti-GST-d2作为能量受体能与p53上携带的GST标签特异性结合。若使用一定波长的激光(本实验的激发光波长为340nm)激发,能量供体能发射出615nm波长的发射光,同时当能量供体与能量受体的空间距离足够接近时(即两个抗体同时连接在p53上),能量供体与能量受体之间能发生能量转移,使得能量受体发射出665nm波长的发射光。使用读板机对两个发射光进行检测并求出665nm与615nm两种信号的比值,通过作图和计算即可求出待测样品的IC50。
检测时,将两种抗体稀释于HTRF检测缓冲液(Cisbio,Cat#62SDBRDF,Lot#17A)中,如下表:
检测试剂 |
来源 |
稀释倍数 |
母液浓度 |
anti-phospho-p53-Eu |
Cisbio,Cat#61P08KAZ |
400 |
400单位 |
anti-GST-d2 |
Cisbio,Cat#61GSTDLB |
200 |
200单位 |
使用电动多通道移液器以每孔10uL的体积将检测溶液添加至实验板的阳性对照、阴性对照以及化合物孔中,离心并以4℃孵育过夜,使用读板机Envision 2104读数。
使用内插法计算化合物抑制率:分别计算阳性对照和阴性对照的平均值,使用公式:
单孔抑制率=1-(单孔信号值-阳性对照信号平均值)/(阴性对照信号平均值-阳性对照信号平均值)
即可计算出化合物孔的抑制率。使用四参数罗吉斯方程曲线作出化合物抑制曲线:将化合物浓度转化成以10为底的对数,将浓度和抑制率导入XLfit软件中,公式为:
抑制率=最低响应+(化合物浓度^曲线坡度)*(最高响应-最低响应)/(化合物浓度^曲线坡度+半抑制浓度^曲线坡度)
从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。
表1 ATR激酶抑制活性
活性实施例2:细胞增殖试验
采用CellTiter-GloTM活细胞检测试剂盒,测试了本发明化合物对细胞增殖的抑制作用。该试剂盒采用萤光素酶作检测物,发光过程中萤光素酶需要ATP的参与,向细胞培养基中加入CellTiter-GloTM试剂,测量发光值,光信号和体系中ATP量成正比,而ATP又和活细胞数正相关,由此确定细胞的增殖活性。
细胞培养和接种:收获处于对数生长期的细胞LOVO(人结肠癌细胞)(ATCC CCL-229),并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力,确保细胞活力在90%以上。分别添加90μL细胞悬液(RPMI1640+10%胎牛血清)至96孔透明平底黑壁板(Thermo,165305)中,调整细胞浓度到3000/孔/90ul。将96孔板中的细胞置于37℃、5%CO2、95%湿度条件下培养过夜(Thermo,Model 3100Series)。
先用DMSO作为溶剂配制10mM的待测化合物母液,然后用PBS稀释100倍,配制成10倍终浓度的溶液,最高浓度为100μM,在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL待测化合物溶液,即又稀释10倍,浓度达到最终终浓度10μM。将待测化合物终浓度从10μM开始,3倍系列稀释,共9个浓度,每个3个复孔。将已加入待测化合物和细胞的96孔板置于37℃、5%CO2、95%湿度条件下继续培养96小时,之后进行CellTiter-Glo分析。
融化CellTiter-Glo试剂(CellTiter-
Luminescent Cell ViabilityAssay,Promega,G7572)并平衡细胞板至室温30分钟。每孔加入等体积的CellTiter-Glo溶液,在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温20分钟以稳定冷光信号,用SpectraMax多标记微孔板检测仪(MD,M3)读取冷光值。
使用GraphPad Prism 7.0软件分析数据,利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线,并由此计算IC50值。
细胞存活率(%)=(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100%
表2细胞增殖实验结果
化合物编号. |
LOVO IC<sub>50</sub>(μM) |
化合物编号. |
LOVO IC<sub>50</sub>(μM) |
1 |
0.304 |
16 |
0.310 |
2 |
0.479 |
19 |
0.620 |
3 |
0.067 |
20 |
0.039 |
4 |
0.140 |
26 |
1.268 |
5 |
0.384 |
29 |
0.488 |
6 |
0.097 |
31 |
0.158 |
8 |
0.243 |
32 |
0.156 |
9 |
0.592 |
34 |
0.424 |
11 |
2.642 |
35 |
0.522 |
14 |
0.419 |
36 |
0.148 |
15 |
0.186 |
|
|
活性实施例3:人和小鼠肝微粒体代谢稳定性实验
根据本领域常规的体外代谢稳定性研究的标准方法,例如(Kerns,Edward H.andDi Li(2008).Drug-like Properties:Concepts,Structure Design and Methods:fromADME to Toxicity Optimization.San Diego:Academic Press;Di,Li等人,Optimizationof a Higher Throughput Microsomal Stability Screening Assay for ProfilingDrug Discovery Candidates,J.Biomol.Screen.2003,8(4),453.)中所述的方法,类似地如下进行本发明化合物的肝微粒体代谢稳定性试验。
将肝微粒体(蛋白浓度为0.56mg/mL)加入1μM化合物工作液(由10mM DMSO储备液用100%乙腈稀释到100μM,有机相含量:99%ACN,1%DMSO),37℃预孵育10min后,加入辅助因子(NADPH)(由氯化镁溶液配制)启动反应。孵育适当时间(如5、10、20、30和60分钟)后取样,加入适当终止液(含有200ng/mL甲苯磺丁脲和200ng/mL拉贝洛尔的冰乙腈(即4℃的乙腈)),终止反应。
样品处理(n=1):各加合适样品,涡旋后高速离心,取上清液,采用HPLC-MS/MS对底物进行检测。把0min时间点峰面积作为100%。其他时间点的峰面积转换为百分剩余量,各时间点的百分剩余量的自然对数对孵育时间作图,求算出斜率(-k),然后按固有清除率(Clint)=(k*孵育液体积)/肝微粒体质量,计算出Clint(μL/min/mg)及化合物半衰期(T1/2,min)。结果见表3。
表3.人和小鼠肝微粒体代谢稳定性实验结果
活性实施例4:本发明化合物在小鼠中的药代动力学(PK)测定
每个化合物的PK测定方法如下:6只CD-1小鼠(上海灵畅生物科技有限公司)分为两组,每组3只。其中一组通过静脉(IV)给药,剂量为1mg/kg,溶媒为5%DMSO/95%(20%Captisol);一组通过口服(Po)灌胃给药,剂量为5mg/kg,溶媒为1%HPMC。每一组在给药后0、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24h分别通过小腿隐静脉采血。将约40μL血液收集到含EDTA-K2的抗凝管中。在收集完成后迅速将采血管倒置至少5次,以确保混合均匀,然后放置在冰上。采集到的各时间点血液在4℃/8000rpm离心5分钟以获得血浆。另取1.5mL离心管,标记化合物名称,动物编号,时间点,将血浆转移至该管中。血浆保存在-80℃直至分析。
采用UPLC-MS/MS方法测定血浆中化合物浓度,用Phoenix WinNolin 6.4药代动力学软件对所得数据进行药代动力学参数计算。
具体实验结果如下,结果表明化合物药代吸收较好,具有药代动力学优势。
表4.实施例化合物体内PK结果
活性实施例5:本发明化合物在FaSSIF中平衡溶解度测定
根据本领域技术人员熟知的、本领域常规的溶解度测定标准方法,例如(Kerns,Edward H.and Di Li(2008).Drug-like Properties:Concepts,Structure Design andMethods:from ADME to Toxicity Optimization.San Diego:Academic Press)中所述的方法,以FaSSIF(pH6.5)(模拟人餐前饥饿状态下的小肠肠液)为试验系统,如下考察本发明化合物的溶解性质。
将每种化合物的样品粉末分别在容量瓶中称重,加入450μL pH值6.5FaSSIF溶液得到过饱和混悬液,对样品进行至少2分钟的涡流,在振动筛上以800转/分的速度将容量瓶摇24小时。然后4000rpm离心20分钟。将压缩后的滤液加入高效液相色谱系统中,用标准曲线法计算其浓度,结果见表5。
快速模拟肠液FaSSIF的组成是:0.056%(w/v)卵磷脂,0.161%(w/v)牛磺胆酸钠,0.39%(w/v)磷酸钾,0.77%(w/v)氯化钾,去离子化H2O,pH 6.5。
表5.本发明化合物在FaSSIF中的溶解度
实施例 |
FaSSIF pH=6.5(μg/mL) |
1 |
1140.8 |
3 |
1144.7 |
BAY-1895344 |
33.4 |
上述实验结果表明,与对照相比,本发明的实施例化合物出乎意料地具有显著更高的溶解性,从而具有更好的成药性。
上述实验中使用的参比化合物BAY-1895344的结构式是
(购自上海前衍生物科技有限公司,CAS NO.1876467-74-1),或可按照WO2016020320实施例111的方法制备和表征。
本领域技术人员将了解,上文描述本质上为示例性及说明性的,且欲说明本发明及其优选实施方案。通过常规实验,技术人员将了解可作出明显修正及变化而不悖离本发明的精神。在随附申请专利范围内的所有此类修正欲包括于其中。因此,本发明意欲并非由上述描述而是由以下权利要求范围及其等效物定义。
本说明书中所引用的所有公开出版物以引用方式并入本文中。